Структурно-функциональная и клиническая оценка влияния иммуномодуляторов природного происхождения на организм животных

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ ПРИРОДНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ НА ОРГАНИЗМ ЖИВОТНЫХ

Топурия Л.Ю.

ОРЕНБУРГ - 2008

Работа выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы, фармакологии и зоогигиены ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет»

Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, заслуженный работник высшей школы РФ, доктор биологических наук, профессор Стадников Александр Абрамович

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Шевченко Борис Петрович доктор биологических наук, профессор Исмагилова Асия Фахретдиновна доктор биологических наук, профессор Мирошников Сергей Александрович

Ведущая организация: ГНУ Уральский научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук

Защита диссертации состоится декабря 2008 г. в часов на заседании диссертационного совета ДМ220.051.01 при ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет» (460795, г.Оренбург, ул.Челюскинцев, 18).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет».

Автореферат разослан ноября 2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор Р.Ш. Тайгузин

1. Общая характеристика

Актуальность темы. Иммунная система выполняет важную функцию по сохранению постоянства внутренней среды организма, осуществляемую путем распознавания и элиминации из организма чужеродных веществ антигенной природы (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2003; Черешнев В.А. и др., 2006).

Проблема иммунокоррекции нарушенного гомеостаза является центральной в клинической практике. Она включает в себя как поиск, так и создание эффективных иммунокорригирующих средств, а также разработку эффективных методов иммунодиагностики и лечения. Актуальность фармакокоррекции иммунологической недостаточности прежде всего обусловлена широким распространением иммунодефицитных состояний у животных, являющихся причиной различных заболеваний, успех лечения которых во многом зависит от выбора адекватных средств и методов иммунокоррекции. Известно, что иммунодепрессивным свойством обладают многие факторы и воздействия: неадекватные условия содержания и кормления животных, стрессы, бактерии и вирусы, токсические вещества, ионизирующая радиация (Серых М.М. и др., 2000; Смирнов П.Н. и др., 2000; Шахов А.Г. и др., 2001; Воронин Е.С. и др., 2002; Федоров Ю.Н., 2005, 2006; Федоров Ю.Н., Верховский О.А., 2007; Донник И.М., Шкуратова И.А., 2007). Стратегия современных научных исследований в данном русле прежде всего направлена на детальное изучение механизмов иммунодепрессии и поиска эффективных средств коррекции нарушенного иммунного гомеостаза (Черешнев В.А., Юшков Б.Г., Климин В.Г., 2002).

Широкое распространение иммунодефицитов у животных ставит исследователей перед необходимостью разработки обоснованной и доказательной методологии раннего выявления недостаточности иммунной системы с целью профилактики и своевременной ее коррекции (Кончугова Т. В., 1997; Жаров А.В., 1998; Жаров А.В. и др., 2001; Донник И.М., 2003; Уша Б.В. и др., 2003).

В настоящее время ветеринарный фармацевтический рынок предлагает разнообразные лекарственные средства. Большинство из них являются синтетическими и нередко вызывают осложнения, включая усугубление иммуносупрессивных состояний, загрязняют сырье и продукты питания, окружающую среду (Антипов В.А., 2006). Данное обстоятельство обусловливает необходимость дальнейшей разработки и внедрения в ветеринарную практику препаратов природного происхождения, которые лишены указанных недостатков и их можно применять как в отдельности, так и в комплексе с другими средствами. Большинство из этих препаратов имеют ряд преимуществ перед синтетическими препаратами: многоплановость влияния на организм, иммуномодулирующее действие, низкая токсичность, активация функций нейроэндокринной системы, стимуляция процессов регенерации, ослабление действия стресс-факторов, повышение иммунного ответа при вакцинации, снижение кратности применения химиотерапевтических средств и повышение их лечебного действия (Соколов В.Д. и др., 1997).

Значительную перспективу в этом плане имеют растительные средства, препараты, полученные из органов и тканей животных, хитинового покрова ракообразных и др. (Воронин Е.С. и др., 1990; Морозов В.Г. и др., 2000; Горлов И.Ф. и др., 2002; Тетерев И.И., 2004; Таирова А.Р., Мещерякова Г.В., 2005; Албулов А.И. и др., 2006; Новых Н.Н., 2006; Самуйленко А.Я., 2006).

Несмотря на некоторую изученность проблемы применения препаратов природного происхождения с иммуностимулирующей активностью, многие аспекты их клинического использования требуют дальнейшей разработки, обоснования и внедрения в ветеринарную практику. Особенно это касается установления закономерностей развития типовых гисто- и органотипических реакций с позиций оценки динамики нейроэндокринной (и в частности гипоталамической нонапептидергической) регуляции иммунного статуса животных. Данный аспект проблемы к настоящему времени недостаточно изучен, в том числе и в отношении обоснования патогенетической терапии иммунодефицитных состояний.

Цель и задачи исследования. Цель работы - экспериментально-гистологически и клинически обосновать целесообразность и эффективность использования препаратов природного происхождения для коррекции иммунного статуса и повышения резистентности организма животных.

Для решения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1) исследовать морфофункциональные изменения органов иммуногенеза животных в условиях экспериментального моделирования иммуносупрессии;

2) установить роль гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы (ГГНС) при структурно-функциональной реорганизации органов иммунологической защиты в условиях экспериментального иммунодефицита;

3) на светооптическом и ультраструктурном уровнях в эксперименте оценить эффективность применения препаратов природного происхождения для лечебной коррекции иммуносупрессии;

4) изучить иммуномодулирующую активность и лечебно-профилактические свойства препаратов рибав, олетим и хитозан при заболеваниях телят;

5) оценить влияние препаратов на репродуктивную функцию коров и свиноматок;

6) обосновать лечебно-профилактические свойства препаратов хитозана (хитомаст, хитомаст-2, хитомаст-3, хитомаст-4) при гнойно-катаральном эндометрите коров;

7) изучить влияние рибава на состояние обмена веществ, иммунного статуса и продуктивность цыплят-бройлеров;

8) клинически обосновать эффективность применения препарата рибав при парвовирусном энтерите собак.

Научная новизна. Проведен сравнительный анализ влияния новых отечественных препаратов природного происхождения на иммунный статус и состояние обмена веществ у животных. Впервые изучена иммуностимулирующая активность рибава, олетима и хитозана при экспериментальной иммуносупрессии лабораторных животных.

Впервые на светооптическом и ультраструктурном уровнях дана комплексная оценка клеточного состава нейросекреторных центров гипоталамуса, тимуса и периферических органов иммунной системы в условиях экспериментальной модели иммунодефицита, а также при медикаментозной коррекции нарушенного иммунного статуса. Установлена существенная адаптивная роль гипоталамической нейросекреции в регуляции иммуногенеза животных (в частности, рассинхронизация нейросекреторного цикла является усугубляющим фактором в развитии иммуносупрессии).

Впервые показана иммуностимулирующая активность и лечебно-профилактическая эффективность нового отечественного ветеринарного препарата олетим. Разработаны показания к применению олетима в ветеринарной медицине.

Установлена эффективность применения препаратов олетим, рибав и хитозан для повышения иммунного статуса сельскохозяйственных животных и птиц, определены дозы и схемы их применения в лечебно-профилактических целях, доказана эффективность применения хитозана, олетима и рибава для повышения продуктивного потенциала сельскохозяйственных животных.

Практическая значимость и реализация результатов исследований. Полученные данные дают объективное представление о глубине и характере изменения иммунобиохимического статуса животных при различных физиологических и патологических состояниях.

Экспериментально-гистологические и клинические исследования показали целесообразность эффективного использования в ветеринарной медицине препаратов рибав, олетим и хитозан. Внедрение их в ветеринарную практику позволит снизить заболеваемость животных за счет нормализации обмена веществ и повышения иммунобиологического статуса.

Результаты производственных испытаний лекарственных препаратов природного происхождения внедрены в сельскохозяйственных предприятиях Оренбургской области (справка о внедрении в производство научно-технической разработки управления ветеринарии Министерства сельского хозяйства Оренбургской области № 04-01-12/13 от 04.09.2006 г.).

Полученные данные вошли в три учебные и методические пособия. По результатам исследований изданы четыре монографии. По материалам диссертации разработаны и внедрены в производство четыре рекомендации, утвержденные управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства Оренбургской области.

Результаты исследований вошли в «Методические рекомендации по оценке и коррекции иммунного статуса животных» (рассмотрены, одобрены и рекомендованы к изданию секцией «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (протокол №3 от 21 сентября 2005 г.) и «Методические рекомендации по оценке и коррекции неспецифической резистентности животных» (рассмотрены, одобрены и рекомендованы к изданию секцией «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (протокол №2 от 8 июня 2005 г.)

На основании испытаний разработано и утверждено Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации «Временное наставление по применению препарата олетим для регуляции иммунной системы животных» (№ 13-4-03/1014).

Автор удостоен звания «Лауреат премии Правительства Оренбургской области в сфере науки и техники» в 2007 году за разработку научно-практического обоснования применения препаратов природного происхождения для коррекции иммунодефицитных состояний у животных.

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе факультетов ветеринарной медицины и биоэкологических факультетов вузов Минсельхоза России по цитологии, гистологии, эмбриологии, физиологии животных и этологии, клинической диагностике с рентгенологией, акушерству, гинекологии и биотехнике размножения, внутренним незаразным болезням животных, что подтверждается Департаментом научно-технологической политики и образования Минсельхоза России (справка №13-03-3/1045 от 30.06.2008 г.).

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на Международных симпозиумах и семинарах (Оренбург, 2004; 2005); Международных научных конференциях (Оренбург, 2001; 2003; 2005; 2006; 2007; Ульяновск, 2003; Санкт-Петербург, 2003; 2004; 2005; 2006; Уфа, 2004; Новосибирск, 2004; Улан-Удэ, 2004; Троицк, 2005; Воронеж, 2005; 2006; Москва, 2006; Боровск, 2006; Казань, 2008); Всероссийских научно-практических конференциях (Новосибирск, 2003; Киров, 2003; 2004; Оренбург, 2005; 2006; Пермь, 2006; Екатеринбург, 2007); Региональных научно-производственных конференциях (Уфа, 2000; Ставрополь, 2001; Киров, 2001; Челябинск, 2002; Троицк, 2003; Омск, 2004; Вологда-Молочное, 2005).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 68 научных работ (из них 13 в журналах, рекомендованных ВАК РФ), в том числе 4 монографии.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 350 страницах текста компьютерного набора, состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Работа содержит 64 таблицы, иллюстрирована 72 рисунками. Список литературы включает 693 источника, в том числе 138 зарубежных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту.

- гипоталамическая нейросекреция и иммунный гомеостаз;

- структурные изменения иммунокомпетентных органов и функциональное состояние организма животных при экспериментальной иммуносупрессии;

- иммуностимулирующая активность и лечебно-профилактическая эффективность рибава, олетима и хитозана;

- влияние иммуностимуляторов на обмен веществ и продуктивность животных;

- эффективность применения препаратов хитозана при эндометритах коров.

2. Материал и методы исследования

Работа выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы, фармакологии и зоогигиены ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет» в 1996-2008 гг. в соответствии с государственным планом научно-исследовательских работ университета (№ государственной регистрации 01200105543). Производственные опыты и клинические испытания препаратов осуществляли в сельскохозяйственных предприятиях Оренбургской области.

Объектом экспериментально-гистологических и клинических исследования служили беспородные крысы-самцы, крупный рогатый скот красной степной породы различного возраста, свиньи крупной белой породы, цыплята-бройлеры кросса «Смена-2», собаки различных пород. Особенности методик отдельных исследований изложены в соответствующих разделах диссертации.

Гистологические и электронно-микроскопические исследования проводили на базе кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия Росздрава».

При выполнении исследований и заборе экспериментально-гистологического материала соблюдались «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ МЗ СССР №755 от 12.08.1977 г). Для светооптического изучения объекты фиксировали в 12%-ном водном растворе нейтрального формалина и смеси Буэна, обезвоживали в этаноле возрастающей концентрации и заливали в парафин-целлоидин. Депарафинированные срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином Майера и эозином, пикрофуксином по Ван Гизон, рибонуклеопротеиды выявляли метиловым зеленым и пиронином по Браше, гликоген и нейтральные гликопротеиды - перйодат ШИК-реакцией по Мак Манусу. Гистохимические реакции сопровождались соответствующими энзиматическими контролями (Э. Пирс, 1962). Идентификацию нейросекрета в гипоталамусе и нейрогипофизе проводили паральдегид-фуксином по Гомори-Габу в модификации А.Л. Поленова (1963). Для электронно-микроскопического исследования материал последовательно фиксировали в 2,5%-ном охлажденном (+4оС) растворе глютарового альдегида и 1%-ном растворе четырехокиси осмия, обезвоживали в ацетоне возрастающей концентрации и заливали в смолу ЭПОН-812 (M.A. Hayat, 1989). С блоков получали полутонкие (1 мкм) и ультратонкие (40-60 нм) срезы при помощи ультратомов УМТП-4 и LKB-5 (Bromma, Sweden). Ультратонкие срезы подвергали двойному контрастированию растворами уранил-ацетата и цитрата свинца по E.S. Reynolds (1979). Анализ ультратонких срезов и их фотографирование производили в электронном микроскопе ЭМВ 100 АК при увеличении хх8000-60000. Количественная информация получена в ходе морфометрических исследований гистологических препаратов с помощью винтового окуляра-микрометра МОВ-1-15ху4.2.

В стабилизированной гепарином и трилоном Б крови определяли содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина по общепринятым в гематологии методам (Карпуть И.М., 1986; Симонян Г.А., Хисамутдинов Ф.Ф., 1995; Козинец Г.И. и др., 1997; Гильмутдинов Р.Я., Курбанов Р.З., 2000). Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли по методике И.М. Карпуть и др. (1992). Определение количества Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов проводили согласно рекомендациям А.М. Цыбала и др. (1983) и Н.И. Блинова (1985). Бактерицидную, лизоцимную и комплементарную активность сыворотки крови определяли по методике, описанной П.А. Емельяненко и др. (1980). Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови животных определяли методом простой радиальной иммунодиффузии с использованием моноспецифических антисывороток (Бэм Э., 1987).

Определение активности в-лизинов проводили по методу О.В. Бухарина и др. (1972). Циркулирующие иммунные комплексы определяли по методу Ю.А. Гриневич и Н.И. Алферова (1981). Лизосомально-катионные белки у цыплят определяли по В.Н. Чеботкевичу и С.И. Лютинскому (1998).

Уровень общего белка определяли рефрактометрическим методом с использованием рефрактометра RL-2, белковые фракции - нефелометрическим методом (Холод В.М., Ермолаев Г.Ф., 1988). Определение общего кальция в сыворотке крови проводили комплексонометрическим методом по Вичеву и Каракашеву (Кондрахин И.П. и др., 1985). Неорганический фосфор определяли с ванадат-молибденовым реактивом по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой (Кондрахин И.П. и др., 1985). Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови проводили по гидролизу бета-глицерофосфата (метод Бодански). (Кондрахин И.П. и др., 1985). Общую активность аспартатаминотрансферазы (АСТ) и аланинаминотрансферазы (АЛТ) определяли с помощью биотест - наборов «Лахема». Глюкозу определяли в безбелковом фильтрате крови по цветной реакции с ортолуидином, общие липиды сыворотки крови - по Бауман, общий холестерин - по Ильку (Антонов Б.И. и др., 1991).

Для микробиологических исследований отбирали содержимое матки с соблюдением правил асептики в стерильные пробирки с последующим определением состава микрофлоры путем посева на МПА, МПБ, кровяной агар, среды Эндо, Левина, Китта-Тароци и др. Идентификацию изолированных микроорганизмов проводили с учетом их морфологических, культуральных, тинкториальных и биохимических свойства в Оренбургской областной ветеринарной лаборатории. Видовую принадлежность бактерий устанавливали по М.А. Сидорову и др. (1995).

Изучение клинического состояния крупного рогатого скота осуществляли общепринятыми методами (Уша Б.В., Фельдштейн М.А., 1986; Ленец И.А., 1989). Индексы фабрициевой сумки и тимуса цыплят-бройлеров вычисляли по формуле: И = m/M·1000, где m - масса органа, г; M - масса тела, г. (Апатенко В.М., 1992; Джавадов Э.Д., Полежаев Ф.И., 2004). По окончании технологического цикла выращивания проводили убой подопытной птицы для оценки качества мяса. Определяли содержание влаги, сухих веществ, жира, протеина, золы, а также аминокислот триптофана и оксипролина (Куранов Ю.Ф., Хруцкая С.Ф., 1972; Куранов Ю.Ф. и др., 1981; Антипова Л.В. и др., 2001). Через 24 часа созревания и на 5-е сутки хранения осуществляли ветеринарно-санитарную экспертизу продуктов убоя цыплят-бройлеров. Оценивали внешний вид тушек, величину рН, реакцию на аммиак и соли алюминия, количество летучих жирных кислот, результаты микроскопии мазков-отпечатков мяса (Житенко П.В. и др., 2001; Чекмарев А.Д. и др., 2001). Категорию цыплят-бройлеров определяли согласно ГОСТ 18292-85. Диагноз на парвовирусную инфекцию у щенков устанавливали на основании тщательного изучения анамнеза, совокупности клинико-эпидемиологических, бактериологических данных и обнаружения парвовирусного антигена в фекалиях методом непрямой гемагглютинации и иммуноферментного анализа.

Характеристика использованных препаратов.

Рибав - спиртовой экстракт, содержащий сбалансированный, сложный комплекс биологически активных веществ (аминокислот, пептидов, фосфорсодержащих соединений, витаминов, ферментов, пигментов, липидов и др.) продуктов синтеза эндофитных микромицетов.

Олетим - препарат, полученный из тимуса северных оленей методом водно-солевой экстракции. Содержит комплекс пептидов с молекулярной массой 1,0-10 кД и Д-маннит в качестве стабилизатора и наполнителя.

Хитозан - линейный полисахарид, поли[(1-4)-2-амино-2-дезокси-b-D-глюкоза], который получают при дезацетилировании хитина. Хитин входит в состав панцирей морских ракообразных (крабов, креветок, криля), содержится в скелетах насекомых, клеточных стенках грибов и т.д.

Хитомаст - лечебный препарат в состав которого входит хитозан и гелеобразующая основа. Содержание активного хитозана в препарате составляет 3%. Хитомаст-2 - раствор 20 мг гентамицина сульфата в 1 мл 1,5%-го хитозана. Хитомаст-3 - раствор 20 мг цефалексина моногидрата в 1 мл 1,5%-го хитозана. Хитомаст-4 - 0,02%-ный раствор мирасепта-10 в 1,5%-ном хитозане.

Статистическая обработка результатов исследований проводилась на ПЭВМ IBMPC - Pentium-133 с помощью операционной системы Windows, программного комплекса Excel-97 и пакета прикладных программ SPSS.

В проведении ряда экспериментов принимали участие: доктор биологических наук, профессор А.А. Стадников, кандидат ветеринарных наук, профессор Р.А. Ортман, доктор ветеринарных наук, профессор А.П. Жуков, доктор биологических наук, профессор Г.М. Топурия, кандидат биологических наук, доцент В.А. Трутнев, доктор биологических наук, профессор Н.П. Лысенко, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник Е.А. Лебедев, кандидат ветеринарных наук С.В. Мерзляков, за что выражаю им искреннюю благодарность.

3. Результаты собственных исследований

3.1 Структурно-функциональная характеристика органов иммуногенеза и гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы (ГГНС) у животных при экспериментальном иммунодефиците и его коррекции

В целях экспериментального воспроизведения иммунодефицита применен циклофосфан. В экспериментально-гистологических исследованиях было сформировано пять групп животных (крыс-самцов) в возрасте двух месяцев. Крысы первой группы служили контролем. У крыс второй, третьей, четвертой и пятой групп моделировали иммунодефицит путем введения циклофосфана внутрибрюшинно в дозе 40 мкг/кг однократно. Через 5 дней, на фоне иммунодефицитного состояния крысам третьей группы вводили в течение 5 дней олетим подкожно 1 раз в сутки в дозе 3 мкг/кг, животных четвертой группы лечили хитозаном путем введения внутрь 3%-ного гелевого раствора 1 раз в сутки в течение 5 дней в дозе 0,5 мл/гол, у крыс пятой опытной группы проводили лечение рибавом путем введения препарата внутрь в форме раствора (1:5) 1 раз в сутки в течение 5 дней в дозе 0,25мл/кг. Кровь у всех животных забирали через 5, 10, 15 дней после начала введения иммуномодуляторов. В эти же сроки осуществляли забор материала для гистологических и электронномикроскопических исследований (тимус, селезенка, лимфатические узлы брыжейки, печень, гипоталамус, гипофиз, почки, надпочечники).

Структурно-функциональная реорганизация органов иммунологической защиты в условиях экспериментального иммунодефицита

Светооптические и электронно-микроскопические исследования супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса, а также нейрогипофиза показало, что у экспериментальных животных (крысы с иммунодефицитом) отмечалась различная функциональная активность нонапептидергических нейросекреторных клеток (НСК). Это выражалось в возрастании объемов ядер и ядрышек у «светлых» НСК. Одновременно в 2-2,5 раза (по сравнению с интактными животными) увеличивалось содержание биполярных «темных» НСК и пикноморфных клеток. При этом в перикарионах НСК и их аксонах регистрировались крупные секреторные гранулы (рис. 1). Последние имели тенденцию к слиянию и формировали скопления в виде так называемых «липидных озер», представленных липосомами высокой электронной плотности и имеющих узурированные контуры (рис. 2).

Рис. 1 - Нейросекреторные клетки супраоптического ядра гипоталамуса крысы с экспериментальной иммуносупрессией. Фиксация: спирт-формол, окраска: паральдегид-фуксин по Гомари-Габу (в модификации А.Л. Полянова). Ув.об.90, ок.10

Рис. 2 - Скопления липосом в периокарионе НСК супраоптического ядра гипоталамуса крысы (введение циклофосфана; Стадия: 5 сут). Ув. х20500



Рис. 3 - Фрагмент перикариона НСК паравентрикулярного ядра гипоталамуса крысы (введение циклофосфана). Ув. х28000

Рис. 4 - Терминали аксонов НСК крысы (тельца Герринга) в нейрогипофизе (введение циклофосфана). Ув. х 22500

Митохондрии НСК набухают, вакуолизируются (рис. 3). В нейрогипофизе обнаруживались расширенные терминали аксонов НСК (рис. 4), заполненные крупными электронноплотными гранулами (тельца Герринга).

При ультраструктурном изучении особенностей клеточного состава аденогипофиза были получены факты, свидетельствующие о значительной активизации цитофизиологических процессов у кортикотропоцитов (рис. 5). Это проявилось в увеличении числа секреторных гранул в их цитоплазме и гипертрофии диктиосом комплекса Гольджи. При этом отмечалось недостоверное изменение протяженности клубочковой и пучковой зон коры надпочечников с признаками вакуолизации цитоплазмы кортикоцитов (рис. 6). В тимусе развивались акцидентальныхе инволютивныхе процессы. (рис. 7).

В мозговом веществе в 2-3 раза кровеносные сосуды микроциркуляторного русла резко расширены. Отмечаются отек и набухание их стенок, а также дистрофические изменения эндотелиальных клеток (рис. 8). Отмечались явления слущивания эндотелиоцитов, сочетающиеся с усилением процессов микропиноцитоза. В ретикулоэпителиоцитах и тимоцитах (как в корковом, так и мозговом веществе долек) появляются крупные везикулы. Отмечаются набухание митохондрий, просветление матрикса и деструкция крист.

Рис. 5 - Фрагмент кортикотропоцита аденогипофиза крысы (введение циклофосфана). Ув. х 24500

Рис. 6 - Пучковая зона коры надпочечника крысы с экспериментальной иммуносупрессией. Фиксация: жидкость Буэля, окраска: по Мак Манусу, контроль с амилазой. Ув.об.40, ок.10



Рис. 7 - Кортикальная зона дольки тимуса крысы с экспериментальной иммуносупрессией Фиксация: 10%-ный раствор нейтрального формалина, окраска: гематоксилин-эозин. Ув.об.40, ок10

Рис. 8 - Капилляр корковой зоны дольки тимуса крысы с признаками ультраструктурных повреждений и сладжирования эритроцитами (моделирование иммунодефицитного состояния). Ув. х 20500

В селезенке у всех экспериментальных животных отмечалось выраженное полнокровие трабекулярных и пульпарных сосудов. Размеры лимфоидных фолликулов увеличивались в 1,7-2,3 раза за счет возрастания В-зон. Вместе с тем в таких гиперпластических зонах, содержащих плазмоцитарно-макрофагальные элементы, отмечается значительное число дегенерированных и гибнущих клеток. Значимое возрастание Т-зависимых (периартериальных) зон не происходило.

У исследованных животных обнаружено увеличение (в 2-3 раза) размеров как подкожных, так и мезентериальных лимфатических узлов. В них расширяются маргинальные, промежуточные корковые и мозговые синусы, а также кровеносные сосуды в капсуле и трабекулах. При этом в гемокапиллярах отмечены явления сладжирования форменными элементами крови и микротромбы. Плазмоциты имеют признаки гиперплазии органелл и ультраструктурных повреждений цитомембран. Макрофагические клетки регистрируются не только в кортикальной зоне лимфатических узлов, но и в составе мозговых (мякотных) тканей (рис. 9).

В почках наблюдались множественные, локального характера полиморфноклеточные инфильтраты как в корковом, так и мозговом отделах. Они были представлены макрофагами, лимфоцитами (включая лимфобласты), чаще всего располагающиеся по ходу внутриорганных сосудов (дуговых, междольковых, прямых), а также перитубулярно вокруг извитых и прямых канальцев нефронов. В юкстамедулярных отделах почки отмечены интерстициальный отек, разволокнение и дезорганизация стромальных элементов.

Рис. 9 - Фрагмент мозговых тканей лимфатического узла крысы в условиях экспериментального иммунодефицита. Фиксация: 10%-ный раствор формалина. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Ув. об. 40, ок. 10

Гистологическое изучение печени, у экспериментальных животных, не получавших лечебной коррекции, позволило установить гипертрофические и гиперпластические изменения гепатоцитов. Это проявилось в увеличении размеров ядер и ядрышек клеток, деструктивных изменениях гепатоцитов (рис. 10), особенно локализованных в периферических отделах долек печени. Число двуядерных гепатоцитов возрастало на 45% (в сравнении с интактными животными).

Рис. 10 - Периферический отдел дольки печени крысы с экспериментальной иммуносупрессией. Фиксация: спирт-формол, окраска: по Мак Манусу. Ув.об.90, ок.10

Таким образом, морфологический анализ материала, полученного от экспериментальных животных, которым вводили циклофосфан, свидетельствует о содружественной реактивности ГГАКС и органов центрального и периферического звеньев системы иммуногенеза. Данная реактивность может быть оценена как картина разбалансирования нейросекреторного процесса, угнетения клеточного звена (Т-системы) иммунной защиты на фоне активизации В-системы. Последнее обстоятельство со всей очевидностью может свидетельствовать о развитии аутоиммунного процесса.

Это подтверждается лимфоретикулярной гиперплазией и плазмоцитарно-макрофагальной трансформацией лимфатических узлов и селезенки, а также акцидентальной инволюцией тимуса. Особенно важным является то, что фенотипически отслеженные эти реакции «выходят» за пределы тимико-лимфоидной системы и проявляются в структурах почек и печени.

Изменения в гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системе, тимусе, метаболических органах в условиях медикаментозной коррекции нарушенного гомеостаза

Оценивая морфологическое состояние крупноклеточных ядер гипоталамуса и структур гипофиза в данной серии экспериментов, мы также отметили усиление функциональной активности ГГНС (рис. 11) и кортикоцитов надпочечников (рис. 12).

В нейрогипофизе отмечалось значительное (в 5 раз по сравнению с животными, не получавшими медикаментозного воздействия) уменьшение нейросекреторного материала в терминалах аксонов НСК, расширение синусоидных капилляров, возрастание численности фенестр и пиноцитозных пузырьков в эндотелиоцитах.

Аксоны НСК расширены, имеют просветленную аксоплазму с большим количеством «пустых» пузырьков («остаточных гранул») (рис. 13). Вместе с тем, доля элементарных гранул (специфических нонапептидных секреторных включений) остается повышенной по сравнению с интактными животными, что свидетельствует о высокой функциональной активности нонапептидергических НСК.

Рис. 11 - Нейросекреторные клетки супраоптического ядра гипоталамуса крысы с экспериментальной иммуносупрессией в условиях лечебного использования рибава. Фиксация: спирт-формол; окраска: паральдегид-фуксин по Гомари-Габу (в модификации А.Л. Поленова). Ув.об.90, ок.10

У экспериментальных животных по результатам морфологического анализа установлено возрастание функционирования коры надпочечников. На уровне нейрогипофиза наблюдаются ультраструктурные признаки, свидетельствующие о регрессии тех мембранных повреждений терминалей аксонов НСК, которые имелись ранее (у животных предыдущей серии опытов без иммунокоррекции).

Рис. 12 - Пучковая зона коры надпочечника крысы с экспериментальной иммуносупрессией при лечении хитозаном. Фиксация: жидкость Буэля; окраска: по Мак Манусу, контроль с амилазой. Ув.об.40, ок.10

Рис. 13 - Терминали аксонов НСК в нейрогипофизе крысы (иммунокоррекция олетимом). Ув. х 22600



Рис. 14 - Кортикальная зона дольки тимуса крысы с экспериментальной иммуносупрессией в условиях лечения рибавом. Фиксация: 10%-ный раствор нейтрального формалина; окраска: гематоксилин-эозин. Ув.об.40, ок. 10

Исследуя гистоструктуру тимуса экспериментальных животных в условиях применения олетима, хитозана, рибава, мы наблюдали, что состояния ретикулоэндотелиальной стромы, тимоцитов, долек, междольковой соединительной ткани и сосудов укладывались в картину минимальных инволютивных изменений (рис. 14). Ультраструктура тимоцитов характеризовалась развитой сетью шероховатого эндоплазматического ретикулума, состоянием ядерного аппарата, свойственного нормальным клеткам (рис. 15). В печени у крыс с экспериментальной иммуносупрессией в условиях лечения олетимом, хитозаном или рибавом мы установили достоверные регенераторные признаки паренхиматозных элементов органа и холангиол. В 2,5 раза возрастала численность двуядерных гепатоцитов, нормализовалась гемоциркуляция в русле синусоидных капилляров, восстанавливался гликонеогенез (рис. 16).



Рис. 15 - Кортикальные тимоциты в условиях лечения экспериментальных животных рибавом. Ув. х 22600

Рис. 16 - Периферический отдел дольки печени крысы с экспериментальной иммуносупрессией в условиях лечения олетимом. Фиксация: спирт-формол; окраска: по Мак Манусу. Ув.об.90, ок.10

В клетках печеночных балок усиливались внутриклеточные синтетические процессы. Об этом прежде всего свидетельствовала гиперплазия шероховатого эндоплазматического ретикулума и митохондрий.

В селезенке под воздействием использованных иммуномодуляторов происходит уменьшение размеров лимфоидных фолликулов и реактивных (герминативных) центров. Это сопровождалось снижением числа лимфобластов и плазматических клеток. С другой стороны, в периартериальных зонах (Т-зоны) появлялись клетки в состоянии митотической репродукции. Аналогичные изменения прослежены и в лимфатических узлах. Здесь также уменьшались размеры лимфоидных фолликулов за счет снижения площади реактивных центров. Сосуды микроциркуляции не имели признаков сладжирования форменными элементами и микротромбозов. Исследуя гистоструктуры почек, следует отметить позитивные сдвиги организации паренхиматозных и стромальных элементов органа. Снижается количество и площадь периваскулярных лимфоидных инфильтратов (на 43% по сравнению с животными, не получавшими иммуномодуляторы). Подобное уменьшение инфильтратов отмечено нами и в печени.

Лечебное воздействие выбранных препаратов на организм экспериментальных животных вызывает понижение воспалительных реакций со стороны соединительной ткани и иммунокомпетентных клеток. Уменьшается сосудистая реакция, умеряется экстравазация плазмы и форменных элементов крови, предотвращаются деструктивные изменения висцеральных органов, создаются предпосылки к коррекции иммунного гомеостаза (в частности, Т- и В-звеньев иммуногенеза). Относительно механизмов развития указанных процессов можно высказать суждение о том, что они могут быть связаны с состоянием ГГАКС. Лечебная коррекция привела к коррекции функциональной активности этой системы. При этом происходит усиление высвобождения адаптивных гипоталамических нонапептидов и кортикотропных гормонов, поступающих в общий кровоток и оказывающих позитивный эффект на нормализацию нарушенного гомеостаза висцеральных органов.

3.2 Влияние иммуномодуляторов на состояние естественной резистентности и обмен веществ у крыс

Иммуносупрессия циклофосфаном вызвала нарушение гемопоэза у экспериментальных животных, что сопровождалось уменьшением в крови крыс количества гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов. К концу опытов данные показатели у животных третьей, четвертой и пятой групп приближались к контрольным значениям, а у представителей второй группы оставались сниженными.

Рибав, олетим и хитозан способствовали повышению иммунологических показателей крови крыс. Если у животных второй группы большинство показателей оставались сниженными и на 15-й день исследований, то у крыс третьей, четвертой и пятой групп наблюдалось достоверное увеличение количества Т-, В-лимфоцитов, лизоцимной, бактерицидной, комплементарной активности сыворотки крови, фагоцитарного индекса и фагоцитарной активности нейтрофилов крови по отношению к животным второй группы и приближались к значениям животных контрольной группы (табл. 1).

На 5-й день наблюдений у крыс опытных групп наблюдалось достоверное снижение уровня ЦИК на 24,44-27,01%. В ходе дальнейших исследований количество ЦИК в крови животных повышалось и на 15-й день опытов данный показатель у крыс второй группы был выше контрольного уровня на 35,61% (р<0,001), у животных четвертой группы - на 10,28% (р<0,05), пятой группы - на 4,35%, а у крыс третьей группы составил 10,98±2,16 ед., что на 9,70% меньше, чем у интактных животных.

Таблица 1 - Иммунологические показатели крови крыс

Сроки исследования, дни	Группы животных
	I	II	III	IV	V
Лизоцим, мкг/мл
5	7,8±0,54	4,9±0,61***	5,1±0,49***	4,8±0,47***	5,1±0,56***
10	7,6±0,49	5,6±0,49**	6,2±0,39**	5,9±0,49**	6,8±0,46*
15	7,9±0,51	5,9±0,54**	7,4±0,61	7,5±0,36	6,7±0,35*
БАС, %
5	96,4±5,41	39,48±3,14***	41,18±2,98***	41,3±1,69***	38,5±2,04***
10	94,9±4,78	41,39±2,86***	76,15±1,49**	85,4±4,17*	79,86±2,32*
15	97,35±3,86	47,95±3,14***	89,19±2,16*	90,18±4,12*	84,16±3,48*
в-лизины, %
5	56,93±2,18	35,16±2,14***	36,11±3,18***	35,97±4,9***	35,7±3,28***
10	57,82±3,14	50,93±3,08*	54,18±4,01	54,98±2,60	56,28±2,35
15	57,34±3,62	56,94±2,84	55,48±2,19	58,17±1,90	60,35±2,69
Комплемент, ед.
5	83,5±5,90	22,9±6,12***	23,17±5,43***	23,98±6,3***	22,12±7,1***
10	80,16±4,87	39,48±7,12***	52,16±6,25***	67,28±5,45*	60,35±6,01**
15	82,93±6,05	54,40±6,23**	71,35±5,49*	80,12±4,90	68,93±4,41**
ЦИК, ед.
5	12,03±2,54	8,90±1,68**	9,02±2,15**	8,78±1,49**	9,09±1,97**
10	11,95±1,86	13,25±2,16*	9,93±2,11*	10,02±2,43*	12,02±1,68
15	12,16±2,03	16,49±3,12***	10,98±2,16	13,41±3,15*	12,69±2,05
Фагоцитарная активность, %
5	12,33±0,41	9,24±0,44**	9,28±0,56**	9,41±0,52**	9,36±0,61**
10	12,41±0,52	8,17±0,85***	11,25±0,47*	11,95±0,12	10,98±0,74*
15	12,36±0,44	9,23±0,87**	12,09±0,77	12,32±0,14	11,98±0,84
Фагоцитарный индекс
5	4,28±0,18	3,23±0,15***	3,21±0,14**	3,19±0,28**	3,24±0,26**
10	4,22±0,12	3,15±0,21***	3,96±0,45	3,98±0,54	3,87±0,58*
15	4,25±0,16	3,21±0,43**	4,19±0,12	4,21±0,46	4,16±0,44
Т-лимфоциты, %
5	36,8±1,25	28,5±2,15**	27,9±1,16**	28,4±1,61**	28,6±1,45**
10	36,6±2,54	29,6±2,25*	32,5±0,71*	34,5±2,13	31,8±2,74*
15	36,2±2,12	34,4±2,16	36,4±1,89	37,1±2,15	36,6±1,01
В-лимфоциты, %
5	15,8±1,66	9,8±0,66***	9,4±0,78***	9,6±0,45***	9,8±0,32***
10	16,2±1,14	9,6±0,45***	12,8±0,58**	14,8±0,88	11,4±0,51**
15	15,6±2,25	10,1±1,02***	16,4±0,55	16,8±1,02	15,9±0,58

Примечание: * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001

Количество общего белка сыворотки крови у крыс опытных групп на 5-й день наблюдений снижалось на 9,14-9,69%, количество в-глобулинов - на 26,77-38,04%, г-глобулинов - на 19,52-42,55%, на фоне увеличения альбуминов на 9,13-22,34%, б-глобулинов - на 18,22-25,43%. К концу наблюдений происходила нормализация белкового обмена у крыс всех подопытных групп.

Под действием циклофосфана у экспериментальных животных наблюдалось резкое увеличение активности ферментов переаминирования. Так, количество аспартатаминотрасферазы (АСТ) у животных второй - пятой групп возрастало на 40,0-60,0%, а аланинаминотрансферазы (АЛТ) - на 48,0-76,0%. Фармакокоррекция рибавом, олетимом и хитозаном оказало положительной влияние на активность данных ферментов. На 15-й день наблюдений количество АСТ у крыс второй группы было выше значений здоровых животных на 11,76%, АЛТ - на 51,85% (р<0,001), а у животных, которым применяли иммуностимуляторы данные показатели приближались к физиологической норме.

Проведенные исследования свидетельствуют о развитии глубокого иммунодефицита и нарушении обмена веществ у экспериментальных животных под действием циклофосфана. Применение препаратов с иммуностимулирующей активностью (рибав, олетим, хитозан) способствовало коррекции нарушенных звеньев иммунитета, нормализации механизмов обмена веществ у крыс.

3.3 Лечебно-профилактическая эффективность и иммунокорригирующие свойства хитозана

Влияние хитозана на иммунный статус и воспроизводительную способность коров

Для изучения иммуностимулирующей активности хитозана было сформировано две группы стельных коров красной степной породы по 30 голов в каждой. Животные первой группы препарат не получали и служили контролем. Коровам опытной группы хитозан задавали перорально по 150 мл дважды в день в следующие сроки: за два месяца до предполагаемого отела, за месяц и 7 дней до родов в течение трех дней. Кровь для исследований отбирали у 10 животных в указанные периоды, а также сразу после отела и через 10 дней после родов. Оценивали воспроизводительную способность коров, регистрировали у них развитие послеродовых патологий, изучали рост и развитие полученного потомства.

У коров опытной группы наблюдалось достоверное повышение лизоцимной активности сыворотки крови на 4,98-7,04% (р<0,05-р<0,01). Бактерицидность сыворотки крови у коров, которым применяли хитозан, за 30 дней до отёла была на 4,04-9,09% (р<0,05) выше, чем у интактных животных. Активность в-лизинов в ходе опытов у животных опытной группы не претерпевала существенных изменений. Фагоцитарный индекс нейтрофилов у животных опытной группы превышал контрольные значения на 3,45-19,39% (р<0,01). Фагоцитарная активность нейтрофилов крови также повышалась. Хитозан оказал положительное влияние на количество Т- и В-лимфоцитов в крови коров. У животных опытной группы наблюдалось увеличение абсолютного числа Т-лимфоцитов на 17,86-31,63% (р<0,001-р<0,01) и относительного числа на 11,60-16,28% (р<0,05). Количество В-лимфоцитов возрастало на 6,33-17,86%. У коров опытной группы наблюдалось значительное снижение количества циркулирующих иммунных комплексов на 7,92-10,95% (р<0,05). Хитозан способствовал росту количества общего белка в сыворотке крови коров подопытной группы на 5,90-11,55% (р<0,05).

Наряду с нормализацией иммунного статуса препарат оказал положительное влияние на воспроизводительную функцию коров и течение послеродового периода. У коров опытной группы срок отделения последа был на 21,19% (р<0,05) короче, чем у животных контрольной группы. Задержание последа регистрировалось у 43,3% коров из контрольной группы, более чем в 4 раза чаще, чем в опытной группе. Субинвалюция матки наблюдалась у 20% интактных животных. Применение хитозана способствовало снижению данной патологии у животных в 2 раза. Послеродовыми эндометритами заболело 3 коровы из опытной группы и 12 голов в контрольной (40%).

От первого осеменения в контрольной группе оплодотворилось 20% коров, от второго 30% и от третьего 50% коров. Значительно лучшие результаты получены в группе коров, которым применяли хитозан. Так, 50 % животных оплодотворилось от первого осеменения, 20% от второго и 30% от третьего осеменения. Индекс осеменения у коров опытной группы был на 21,7% меньше контрольных значений, сервис-период был короче на 18,17%, количество дней бесплодия уменьшилось на 31,1%.

Результаты взвешивания телят показали, что молодняк коров опытной группы имел живую массу при рождении на 16,23% (р<0,001) больше, чем новорожденные контрольной группы. В месячном возрасте телята, полученные от коров, которым в последний период беременности применяли хитозан, на 13,3% (р<0,001) превосходили контрольных сверстников по живой массе (табл. 2).

Таблица 2 - Результаты взвешивания телят

Показатели	Группы животных
	Контрольная	Опытная
Живая масса при рождении, кг	28,53±0,71	33,16±0,49***
Живая масса в возрасте 30 суток, кг	43,40±0,18	49,16±0,29***
Среднесуточный прирост массы, кг	0,50±0,04	0,53±0,29

Примечание: ***- р<0,001

В опытной группе из 30 телят у 8 регистрировали признаки диареи, что в 2 раза меньше, чем в контроле. У телят опытной группы первые признаки желудочно-кишечных заболеваний наблюдались на 7-8-й день жизни, а у контрольных - на 2-3-й день после рождения. Заболевание у последних характеризовалось более тяжелым течением. Кроме того, в данной группе пало 7 телят (23,3%), а в опытной - один теленок (3,3%). Профилактическая эффективность применения хитозана стельным коровам в отношении острых желудочно-кишечных болезней новорожденных телят составила 73,3% (табл. 3).

Таблица 3 - Заболеваемость и падеж телят

Группы животных	Заболело	Пало	Профилактическая эффективность, %
	гол.	%	гол.	%
Контрольная (п=30)	16	53,3	7	23,3	46,7
Опытная (п=30)	8	26,7	1	3,3	73,3

Таким образом, применение хитозана стельным коровам способствовало стабилизации их иммунного статуса, нормализации послеродового периода, получению более жизнеспособного потомства.

Применение хитозана для коррекции иммунодефицитных состояний и борьбы с желудочно-кишечными болезнями телят

Для улучшения иммунного статуса и профилактики желудочно-кишечных болезней телят, было сформировано три группы новорожденных телят по 20 голов в каждой. Животным первой опытной группы в суточном возрасте задавали хитозан в форме 3%-ного гелевого раствора в течение 3 дней по 30 мл на голову, телятам второй группы - в той же дозе в течение 5 дней. Контрольные телята оставались интактными. Пробы крови для иммунологических исследований брали в возрасте 1, 10, 20 и 30 суток.

Препарат способствовал улучшению ряда иммунологических показателей у телят и обеспечил более высокие показатели гуморальных и клеточных факторов естественной резистентности (табл. 4).

На 10-е сутки экспериментов у телят первой опытной группы лизоцимная активность сыворотки крови превысила контрольные значения на 2,70% (р<0,05), а бактерицидная - на 14,21% (р<0,01). У молодняка второй опытной группы эти различия составили 5,83% (р<0,01) и 16,79% (р<0,001). В возрасте 20 и 30 суток данные факторы естественной резистентности у телят, получавших хитозан, сохранялись на достаточно высоком уровне по сравнению с интактными животными. Кроме того наблюдалось увеличение в-литической активности сыворотки крови и фагоцитарной активности нейтрофилов. К 30-дневному возрасту у молодняка опытных групп количество ЦИК достоверно снижалось.

Под действием хитозана у телят увеличивалось относительное и абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов на 16,49-68,75% (р<0,05-р<0,001). У суточных телят после выпойки молозива количество Ig G в сыворотке крови составляло 18,12 - 18,22 г/л, Ig M - 2,18 - 2,22 г/л, Ig А - 1,48 - 1,60 г/л. Количество Ig G у телят первой опытной группы в 10-дневном возрасте было на 7,05% больше контрольных значений, а у телят второй опытной группы - на 7,94% (р<0,05), на 20-й день - на 6,89% (р<0,01) и в первой и во второй группе. К концу опытов количество Ig G в сыворотке крови опытных животных приближалось к контрольным значениям. Назначение новорожденным телятам хитозана способствовало и значительному повышению количества иммуноглобулинов М класса на 22,62% (р<0,01) и 41,79% (р<0,001). Достоверное увеличение иммуноглобулинов А класса наблюдалось у телят опытных групп лишь в возрасте 20 дней на 28,62% (р<0,05) и 30,43% (р<0,01). К 30-дневному возрасту количество Ig M и Ig A не отличалось от контроля.

Таблица 4 - Иммунологические показатели организма телят

Показатель	Группа
	контрольная	1 опытная	2 опытная
10 суток
Лизоцим, мкг/мл	14,42±0,15	14,81±0,09*	15,26±0,08**
БАС, %	38,70±0,67	44,20±0,73**	45,20±0,68***
в-лизины, %	12,81±0,22	11,94±0,15**	13,05±0,16
ЦИК, усл.ед.	40,50±1,02	40,40±0,45	40,60±0,49
Фагоцитарный индекс	2,67±0,08	3,42±0,12***	3,64±0,05***
Фагоцитарная активность, %	40,20±0,55	46,60±0,83***	49,00±0,37***
20 суток
Лизоцим, мкг/мл	15,24±0,12	16,82±0,21***	16,94±0,19***
БАС, %	39,60±0,52	43,80±0,74**	47,80±0,53***
в-лизины, %	13,16±0,07	13,30±0,09*	13,40±0,09*
ЦИК, усл.ед.	43,00±0,86	42,60±0,88	43,10±0,92
Фагоцитарный индекс	3,14±0,12	3,67±0,08**	3,74±0,08***
Фагоцитарная активность, %	43,00±0,87	53,90±1,01***	58,50±0,83***
30 суток
Лизоцим, мкг/мл	15,82±0,12	16,12±0,11*	16,15±0,08*
БАС, %	45,40±0,98	52,80±0,87***	52,70±0,92**
в-лизины, %	13,49±0,14	13,53±0,15	13,69±0,14*
ЦИК, усл.ед.	44,20±0,90	37,60±0,85***	37,60±0,95***
Фагоцитарный индекс	3,45±0,10	4,09±0,07***	4,23±0,08***
Фагоцитарная активность, %	47,30±0,83	54,40±1,11***	58,50±0,83***

Примечание: * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001

Применение новорожденным телятам хитозана в первые дни жизни способствовало значительному снижению заболеваемости и падежа животных от желудочно-кишечных заболеваний с диарейным синдромом. Так, в первой опытной группе заболело четыре теленка, из которых один пал. Во второй опытной группе падежа не наблюдалось, хотя заболеваемость была несколько выше (20%). В контроле заболело 60% молодняка, а пало 20%. У молодняка контрольной группы заболевание протекало в более тяжелой форме.

Таблица 5 - Профилактическая эффективность хитозана

Показатель	группы
	контрольная	1 опытная	2 опытная
Заболело, гол. %	12 60	3 15	4 20
Пало, гол %	4 20	1 5	- -
Профилактическая эффективность, %	40	85	80

Лечебную эффективность хитозана изучали на 2 группах больных диспепсией телят в возрасте 3-5 суток по 12 голов в каждой.

При первых признаках диареи телятам опытной группы выпаивали раствор хитозана в дозе 50 мл 2 раза в день. Контрольным животным перорально задавали отвар коры дуба (1:10) по 200 мл ежедневно, фталазол по 0,5 два раза в день в течение пяти дней, внутривенно вводили 50 мл 10%-ного раствора глюкозы. Лечение проводили до исчезновения клинических признаков диспепсии.

Таблица 6 - Терапевтическая эффективность хитозана

Показатель	группа
	контрольная	опытная
Продолжительность болезни, сут.	7,9	2,6
Пало, гол. %	4 33,3	2 16,7
Терапевтическая эффективность, %	66,7	83,3

Несмотря на проведенное лечение, в опытной группе пало два теленка, а в контрольной - четыре. Продолжительность болезни составила в опыте - 2-4 дня (в среднем 2,6 дня), в то время как у телят, которых лечили по традиционной схеме - 6-9 дней. Терапевтическая эффективность при применении телятам хитозана составила 83,3%, а в контроле она была на 16,6% ниже.

Результаты опытов свидетельствуют об эффективности применения хитозана для борьбы с желудочно-кишечными заболеваниями новорожденных телят.

Лечебно-профилактическая эффективность хитозана при эндометритах коров

Для изучения терапевтической эффективности препаратов хитозана было сформировано 5 групп больных гнойно-катаральным эндометритом коров. Животным первой группы для лечения эндометритов применяли внутриматочно фуразолидоновые палочки по 3 штуки через день до полного выздоровления. Животных второй группы лечили препаратом хитомаст. Коровам третьей группы применяли препарат хитомаст-2, четвертой группы - хитомаст-3, животным пятой группы вводили хитомаст-4. Все лекарственные средства вводили внутриматочно с помощью полиэтиленового катетера в дозе 30 мл. Дополнительно всем животным внутримышечно однократно инъецировали по 10 мл тривитамина. Кровь для исследований отбирали до лечения, через 10, 20 и 30 дней после начала лечения. Полученные лабораторные данные сравнивали с показателями клинически здоровых животных (контрольная группа).

Бактериологическое исследование экссудата матки больных эндометритом коров показало, что основным этиологическим фактором развития заболевания являются ассоциации микроорганизмов (E.coli, St.aureus, Bac.subtilis, Str.faecalis, Klebsiella pneumoniae, Aspergillus fumigatus, Candida albicans и др.).