Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля

Размещено на http://www.allbest.ru/

Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

КОСЕНКО ЮРИЙ МИХАЙЛОВИЧ

Воронеж - 2009



Работа выполнена в отделе клинической биохимии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН.

Научные консультанты: доктор ветеринарных наук, профессор Шабунин Сергей Викторович доктор биологических наук Востроилова Галина Анатольевна

Официальные оппоненты: Заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Бузлама Виталий Соломонович

доктор ветеринарных наук, профессор Мерзленко Ольга Валерьевна

доктор биологических наук, профессор Шапошников Андрей Александрович

Ведущая организация: ФГОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины

Защита состоится «10» декабря 2009 года в 10 часов на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.01 при Всероссийском научно-исследо-вательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии РАСХН (394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114б).

Автореферат разослан «__» __________200_ г.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ.

Ученый секретарь

диссертационного совета, к.биол.н.,

доцент Т.И. Ермакова



ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Снижение эффективности химиотерапии и химиопрофилактики, наблюдаемое в различных областях инфекционной патологии человека и животных, объясняется, прежде всего, селекцией лекарственно-устойчивых, полирезистентных форм возбудителей, обусловленной более чем полувековым применением антибиотиков, нарастающими явлениями иммунодепрессии и иммунодефицитов у восприимчивых организмов (Г.И. Истомина с соавт., 1990; А.А. Адарченко с соавт., 1991; А.А. Буяков, 1993; Ю.Н. Федоров с соавт., 1996; А.Г. Шахов с соавт., 2000, 2003; Л.Е. Бояринцев, 2003). Сложившаяся ситуация усугубляется резко возросшей ролью ассоциированных инфекций, L-трансформацией многих видов бактерий, отсутствием средств и методов иммунопрофилактики и иммунотерапии при ряде заболеваний (В.А.Мищенко с соавт., 2002; О.П. Татарчук., 2004; О.В. Распутина, 2007). Следствием этого стало преобладание в этологии многих болезней более устойчивых форм и видов возбудителей (Н.А. Шкиль с соавт., 2003; Ю.Г. Попов, 2004; Г.Н. Кузьмин, 2006; А.Г. Шахов, 2008).

Развивающиеся патологические процессы характеризуются нарушением обмена веществ, снижением локального и общего иммунного статуса животных, активацией свободнорадикальных механизмов и перекисного окисления липидов, развитием интоксикационных процессов (А.Г. Нежданов, 2005; Н.И. Полянцев с соавт., 2006; М.И. Рецкий с соавт., 2008).

Актуальность проблемы терапии инфекционных болезней, вызванных полирезистентными штаммами бактерий, не вызывает сомнения. Возможными путями решения этой проблемы может явиться либо синтез новых антибактериальных средств, либо оптимизация применения уже имеющихся препаратов. Обусловленным является поиск новых фармакологических субстанций, обладающих антимикробными свойствами широкого спектра действия против микроорганизмов с минимальными побочными эффектами и выгодными токсикогенными характеристиками. Кроме этого лекарственные средства необходимо разрабатывать с учетом механизмов патогенеза болезни. Компоненты препарата должны сочетать многосторонний фармакологический эффект и этиопатогенетическую направленность.

Относительно новым и перспективным направлением в разработке новых препаратов для терапии инфекционных болезней являются препараты неантибиотической природы, как, например, соли четвертичных аммониевых соединений, гуанидиновой кислоты и др. (В.И. Стручков с соавт., 1991; М.И. Кузин, 1990; М.М. Астраханова, 1997; С.Ф. Антонов, 1999; К.В. Алексеев с соавт., 2000; В.В. Бобкин, 1999; А.Г. Миляновский, 2000; Ю.Г. Попов, 2003; D.R. Harris, 1994).

Несмотря на значительные успехи ветеринарной фармации, выбор субстанций с указанными свойствами ограничен, а их применение не обеспечивает должный лечебно-профилактический эффект.

Указанными свойствами, в частности, обладает циминаль - пара-нитро-б-хлоркоричный альдегид, используемый в медицине в составе препаратов цимезоль и цидипол для лечения и профилактики гнойных осложнений при повреждении мягких тканей, для профилактики и лечения болезней мочеполовых путей, вызванных трепонемами, гонококками, трихомонадами. В ветеринарии указанная субстанция имеет ограниченное применение (М.Д. Машковский, 1994-2008).

В тоже время производители сельскохозяйственной продукции, использующие в соответствии со своим технологическим регламентом антибиотики, пестициды и стимуляторы роста, должны гарантировать безопасность продукции для здоровья человека. Для этого остаточное содержание этих потенциально опасных химических соединений в готовой продукции должно быть ниже предельно допустимых уровней, определенных законодательством.

Разработка и утверждение гигиенических критериев для лекарственных веществ, применяемых в ветеринарной практике, должно сопровождаться разработкой соответствующей правовой базы для обеспечения контроля за качеством продукции животноводства. Контроль за остаточными количествами действующих веществ в продуктах животноводства является специфической задачей ветеринарной службы, требующей для своего решения значительных материальных затрат и высококвалифицированных кадров (О.И. Кальницкая, 2005; І.Я. Коцюмбас с соавт., 2007).

Новый технологический подход расширяет перечень лекарственных препаратов с использованием в качестве исходного сырья циминаля (пара-нитро--хлоркоричного альдегида). Однако практически нет сведений по экспериментальной и клинической фармакологии препаратов, получаемых с использованием циминаля и эффективности применения таких препаратов в ветеринарной медицине.

С учетом выше изложенного, были определены направленность исследований, их методическое и материальное обеспечение, объем, разнообразие, широта и глубина экспериментальных разработок и клинической апробации новых препаратов.

Цель и задачи исследований. Разработать, провести экспериментальную оценку и клинико-биохимическое изучение препаратов на основе циминаля. Сформулировать теоретические и методологические принципы получения ветеринарных лекарственных средств на основе циминаля и внедрить их в ветеринарную практику

В соответствии с поставленной целью решены следующие задачи:

- научно обосновать необходимость применения субстанции циминаль в различных областях ветеринарии;

- разработать новые химиотерапевтические средства на основе циминаля;

- дать фармако-токсикологическую характеристику разработанных препаратов;

- обосновать безопасность применения препаратов циминаля;

- разработать показания к применению новых препаратов и провести их клинические испытания;

- подготовить нормативно-техническую документацию на новые препараты.

Научная новизна. Теоретически и экспериментально обоснованно использование циминаля в качестве субстанции для разработки новых ветеринарных лекарственных средств. Изучены фармакологические свойства и определены параметры токсичности циминаля. Установлено, что субстанция относится к IV классу опасности, имеет слабо выраженные кумулятивные свойства, эмбриотоксическое, тератогенное, мутагенное, раздражающее и аллергенное действия отсутствуют.

Впервые на основе циминаля разработан ряд лекарственных форм, представляющих собой сложные многокомпонентные системы, состоящие из активных и дополнительных ингредиентов, обеспечивающих, в совокупности, высокую терапевтическую эффективность и изучены основные фармако-токсикологические свойства разработанных лекарственных средств. Установлено, что новые препараты относятся к малотоксичным соединениям, не обладают кумулятивным эффектом, аллергенными и сенсибилизирующими свойствами, не оказывают отрицательного влияния на воспроизводительную функцию животных.

Показано, что препараты циминаля при применении их больным животным оказывают нормализующее влияние на морфологические и иммунологические показатели крови, интенсивность течения процессов свободнорадикального окисления липидов, состояние антиоксидантной системы и иммунного статуса.

Даны фармакокинетические характеристики и оценено влияние разработанных лекарственных средств на морфологические и биохимические показатели крови, неспецифическую резистентность организма животных. Научно аргументировано, экспериментально и клинически доказана перспективность использования этих препаратов в ветеринарной медицине. Разработаны максимально допустимые уровни содержания циминаля в продукции животного происхождения и определены сроки ожидания. Научная новизна исследований подтверждена патентом.

Практическая значимость и реализация результатов исследований. Обоснована перспективность использования циминаля в качестве субстанции. На основании результатов исследований разработаны технические условия и ТР, регламентирующие технологический процесс производства препаратов: циминаль (ТУ У «24.4.31293151.035-03); палочки внутриматочные с циминалем (ТУ У 24.4-31293151-042-2004); цидисепт раствор для инъекций (ТУ У 24.4.31293151.041:2005); цидисепт-аэро (ТУ У 24.4.31293151.029:2005) и цидисепт-гель (ТУ У 24.4.31293151.030:2005, СТО 10590965-0004-2006). Департаментом ветеринарной медицины Министерства аграрной политики Украины утверждены временное наставление по применению - циминаля и палочек внутриматочных с циминалем (протокол № 8 от 1.09.2003). Департаментом ветеринарной медицины Министерства аграрной политики Украины зарегистрированы препараты - цидисепт раствор для инъекций (№ 1863-02-672-06 от 31.05.2006.), цидисепт-аэро (№ 2033-02-719-06 от 06.10.2006) и цидисепт-гель (№ 1743-02-640-06 от 04.05.2006). Инструкция по применению цидисепт-геля, утверждена заместителем руководителя Россельхознадзора РФ за № ПВР-2-1.6/01688 от 11.12. 2006 г. циминаль химиотерапевтический ветеринария

Широкие производственные испытания цидисепта-о разрешены Главным государственным ветеринарным инспектором Воронежской области (Временное наставление на цидисепт-о от 11.01.2005). Нормативно-техническая документация на препарат цидисепт-о представлена на регистрацию в Федеральную службу ветеринарного и фитосанитарного надзора РФ.

Материалы диссертации вошли в Методические рекомендации: «Токсикологический контроль кормов и кормовых добавок» (Львов, 1999), «Установление мутагенности средств защиты животных» (Киев, 2003) и Отраслевой стандарт Украины. «Препараты ветеринарные. Методы изучения безвредности» (Киев, 2003).

Апробация работы. Основные результаты исследований представлены на заседаниях Ветфармсовета Украины (Львов, 2003, 2006); методической комиссии ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (Москва, протокол №1 от 25.01.2006 года); международных научно-практических конференциях «Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных» (Воронеж, 2004); «Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у животных» (Воронеж, 2005); «Актуальные проблемы токсикологии. Безопасность жизнедеятельности людей» (Киев, 2005); международной научно-производственной конференции, посвящённой 100-летию со дня рождения профессора Авророва А.А.(Воронеж, 2006); междунар. науч.- практ. конф., посвящ. 65-летию Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2008); «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Курск, 2008); «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел» (Москва, 2008); «Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных» (Воронеж, 2009), ІІ международном конгрессе специалистов ветеринарной медицины (Киев, 2004), VI Национальном съезде фармацевтов Украины (Харьков, 2005) и V национальном съезде фармацевтов Украины (Харьков, 1999), на 1 съезде фармакологов России (Воронеж, 2007).

Публикации. Основные материалы диссертации изложены в 40 статьях, опубликованных в различных изданиях, в том числе 7 в журналах, рекомендованных ВАК РФ («Ветеринария и кормление», «Ветеринария», «Ветеринарный врач», «Аграрный вестник Урала»), 2 Методических рекомендациях, 1 Отраслевом стандарте Украины, 1 монографии.

Основные положения, выносимые на защиту.

- теоретическое и экспериментальное обоснование использования субстанции циминаль в составе новых ветеринарных лекарственных средств;

- разработка новых химиотерапевтических средств на основе циминаля;

- фармако-токсикологические свойства циминаля и лекарственных средств на его основе;

- влияние разработанных препаратов на клиническое состояние, морфологические и биохимические показатели крови и неспецифическую резис-тентность организма больных животных, полученных на основе циминаля;

- изучение остаточных количеств препаратов на основе циминаля в продуктах животноводства и установление периодов их выведения;

- эффективность применения ветеринарных лекарственных средств на основе циминаля в клинической практике.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 330 страницах и включает введение, обзор литературы, материал, объем и методы исследований, результаты собственных исследований, их обсуждение, выводы, предложения, список литературы и приложения. Диссертационная работа проиллюстрирована 86 таблицами и 46 рисунками. Список литературы включает 510 источников, в том числе 154 на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛ, ОБЪЕМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 1995-2008 г.г. в отделе клинической биохимии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН в соответствии с планом научно-исследовательских работ по заданию 08.04.01. «Разработать методы ранней диагностики, эффективные средства и способы профилактики и лечения массовых незаразных и вызываемых условно-патогенными микроорганизмами заболеваний у молодняка высокопродуктивных животных» (№ гос. рег. 15070.3666026906.06.8.001.2), программа фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации Россельхозакадемии на 2001-2005 и 2006-2010 г.г.

В проведении ряда исследований принимали участие сотрудники ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии Л.В. Ческидова, А.В. Топольницкая, М.Ю. Нижегородов, А.А. Михайлов, А.Л. Индюков, А.Г. Шахов, Ю.Н. Бригадиров, Л.Ю. Сашнина, С.М. Сулейманов, В.И. Шушлебин, Ю.Н. Алёхин, сотрудники «Зооветеринарного центра» Курило Н.Ф., Гребенщиков В.Е., Галкин А.В. и другие, которым автор выражает искреннюю признательность за оказанную помощь и плодотворное сотрудничество.

Лабораторные и опытные образцы препаратов на основе циминаля изготовлены в ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии и «Зооветеринарном центре»(г.Харькова, Украина).

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствие с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведения работы и учета результатов (Фролов И.Т., 1965). Перед экспериментом животные выдерживались в течение 2 недель в карантинных условиях на стандартном пищевом рационе (И.П. Западнюк с соавт., 1983). Для опыта животных брали в эксперимент после внутригрупповой адаптации. Доступ к воде и корму был свободным, световой режим естественным.

В проведении экспериментальных и научно-производственных работ использовали: самцов и самок мышей белых беспородных и линейных СВА с массой тела 20,0±3,0 г (n=3500); самцов и самок белых крыс беспородных и линии Wistar с массой тела 180,0±25,0 г (n=750); 4 - морские свинки (n=340); кроликов разного пола породы шиншилла с массой тела от 1,1 до 2,5 кг (n=120); телят черно-пестрой породы (n=180); коров симментальской породы (n=100); свиней крупной белой породы и помесей разного возраста и пола (n=800); 8 - цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкерс (n>60000). Подробнее схемы опытов и дозировки препаратов представлены в соответствующих разделах диссертации.

Острую и хроническую токсичность оценивали в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР (1991), аллергенную в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке аллергенных свойств фармакологических средств» (1988), эмбриотоксическую и тератогенную активность в соответствии с «Методическими рекомендациями по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств» (1997), мутагенную активность препаратов оценивали в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке мутагенности новых лекарственных средств»(1994) и иммунотоксические свойства в соответствии с «Методическими рекомендациями по изучению иммуномодулирующих свойств фармакологических средств» (1992).

Изучение антимикробной активности циминаля и препаратов на его основе в опытах in vitro проводились методом серийных разведений (Антонов В.И. с соавт., 1986; Ковалев В.Ф. с соавт., 1988; Сидоров М.А. с соавт., 1995). В качестве тест-культур использовали референтные и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов - возбудителей желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят, типированных по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам.

Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) изучаемых препаратов определяли методом серийных разведений в мясо-пептонном бульоне (МПБ); минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) - путем высева из пробирок с прозрачной средой на плотные питательные среды (МПА), не содержащие препарат. В качестве жидкой питательной среды применяли мясо-пептонный бульон. При определении чувствительности стрептококков к среде добавляли 1% глюкозы. Содержание микробных клеток в одном мл среды составляло 500 тысяч. Посевы инкубировали при 37^оС в течение 18-24 часов. По истечении срока инкубации учитывали результат.

Изучение острой токсичности препаратов проводили общепринятыми методами (М.П. Беленький, 1963; И.В. Саноцкий, 1970; О.Н. Елизарова, 1971) на белых мышах и белых крысах. Препараты применяли внутрь, внутримышечно, подкожно. Группы животных формировали по принципу парных аналогов по массе тела, развития и клинического состояния. Перед началом опытов животных выдерживали на карантине в течение 12 дней, а перед введением препарата не кормили в течение 12 часов. После введения препаратов за опытными животными вели непрерывное наблюдение на протяжении первого дня. В последующем состояние животных отмечали дважды в сутки в течение 14 дней. Регистрировали общий статус и поведение животных, состояние нервно-мышечных и вегетативных функций, шерстного покрова, поедание корма, потребление воды и времени наступления токсикоза и гибели. Среднелетальную дозу - LD₅₀ - определяли аналитическим способом Спирмена-Кербера (Лакин Г.Ф., 1990) и с помощью пробит-анализа с использованием прикладной программы «Статистика +2003». Величины LD₁₆ и LD₈₄ препаратов для белых мышей и белых крыс определяли графически на основании соответствующих пробитов и доз в мг/кг массы тела, показатель ошибки средней дозы эффекта - SLD₅₀ - аналитически и графически.

Хроническую токсичность препаратов на основе циминаля изучали на белых крысах и мышах при длительном накожном, парентеральном и аэрозольном введении. Общетоксическое действие препарата оценивали по динамике массы тела животных при взвешивании 1 раз в неделю, гематологическим показателям крови и состоянию системы гемостаза - при исследовании крови у крыс 1 раз в 10 дней и через неделю восстановительного периода. Для исследования внутренних органов животных (тимус, печень, почки, легкие, сердце, селезенка, надпочечники) часть грызунов из каждой группы подвергали эвтаназии в те же сроки исследования (В.М. Гацура, 1974).

Вегетативный статус оценивали по состоянию слизистых, шерстного покрова, ширины глазных щелей, наличию саливации, диареи, опрятности животных.

Для выявления возможного токсического действия препарата на организм животных на 10, 20 и 30 сутки от начала опыта на 10 мышах каждой группы проводили определение детоксицирующей функции печени с помощью гексеналовой пробы (С.В. Сперанский, 1980). Гексенал вводили внутрибрюшинно в дозе 60,0 мг/кг массы тела в виде 0,2% водного раствора. Тест проводили в условиях тишины и теплового комфорта (23⁰С). Эффект гексенала оценивали по длительности утраты гравитационного рефлекса (бокового положения головы). В эти же сроки на других 10 мышах каждой группы изучали общекомпенсаторные реакции организма с помощью функциональной пробы плаванием (В.И. Гацура, 1974).

Влияние препаратов на моторно-эвакуаторные функции желудка и кишечника изучали на самцах белых крыс (160-210 г) - по 6 крыс на группу. Во всех экспериментах препараты вводили животным внутрижелудочно за 1 час до постановки тестов. контрольным животным вводили физиологический раствор (В.С. Бузлама с соавт., 2007).

Тест на эвакуаторную функцию желудка проводили на крысах-самцах методом Brodie. Для этого крысам после 18-часового голодания (с исключением копрафагии) в желудок вводили по 1 мл 35% суспензии сульфата бария на 15% водном растворе ПВП. Через 18 минут после введения индикатора животных умерщвляли, извлекали желудок, его содержимое смывали на предварительно взвешенный фильтр и после высушивания его до постоянного веса определяли массу остатка. По разнице между введенным количеством индикатора и остатком оценивали моторно-эвакуаторную функцию желудка.

Тест проводили по той же методике. Индикатор вводили внутрь в дозе 1мл. Убой животных проводили через 18 минут после введения индикатора. Извлекали кишечник. Измеряли расстояние от пилоруса до переднего фронта индикатора и длину всего кишечника. Величину транзита определяли по процентному соотношению первой длины ко второй. Кроме этого взвешивали содержимое слепой и толстой кишок.

Раздражающее действие изученных препаратов на кожу изучали в опытах на кроликах. Площадь нанесения составляла для кроликов 80-82 см² (5% от общей поверхности тела животных). За два дня до эксперимента тщательно выстригали шерсть на спине, избегая механических повреждений кожных покровов. Экспозиция препаратов составляла 4 часа, после чего кожу аккуратно протирали ватным тампоном, смоченным дистиллированной водой. Реакцию кожи на воздействие препаратов оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения.

Учитывали функциональные нарушения кожи, характеризующиеся появлением различной степени выраженности эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменением температуры. Оценку раздражающего действия препарата проводили по балльной системе.

Для изучения влияния циминаля и препаратов на его основе на глаз кролика в конъюнктивальный мешок левого глаза закапывали пипеткой по 2 капли подогретого до 37С препарата. Правый глаз у кроликов служил контролем, на него препарат не наносили.

Через 0,5, 1, 2, 3, 4, 5 и 6 часов после инстилляции препаратов учитывали клиническое состояние организма животных (температуру тела, частоту пульса, количество дыхательных движений), а также изменение кровенаполнения конъюнктивы, наличие лакримации и выделений, состояние роговицы и век.

Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия проведено по методике А.П. Шицковой с соавт. (1977) на самках белых крыс массой 220,020,0 г. Фазу полового цикла устанавливали путем исследования вагинального содержимого. Первым днем беременности считали день обнаружения спермиев после подсадки самцов к самкам. На 19-20 день беременности оценивали состояние матки, плацент и плодов, подсчитывали количество желтых тел беременности, оценивали равномерность расположения плодов в рогах матки. Раннюю и позднюю резорбцию, общую эмбриональную смертность, выживаемость подсчитывали по формулам, предложенным А.М. Малашенко и И.К. Егоровым (1977). В целях выявления патологии внутренних органов эмбрионов материал фиксировали в жидкости Боуэна и 70 спирте. Аномалии скелета выявляли по методу Даусона (1984). Критериями оценки эмбриотоксического и тератогенного действия препарата служили показатели гибели зародышей на пред- и постимплантационных стадиях развития (эмбриотоксический эффект), наличие аномалий развития внутренних органов и скелета (тератогенный эффект), уровень плодовитости, масса зародышей.

Исследование аллергенных свойств препаратов проводили путем постановки кожных реакций, конъюнктивальной пробы у сенсибилизированных морских свинок-аналогов массой тела 270-310 г, обоего пола, белого цвета или имеющих крупные белые пятна на боках туловища, а также путем постановки реакции дегрануляции тучных клеток (РДТК), используя белых крыс в соответствии с Методическими рекомендациями, разработанными в НИИ медицины труда АМН РФ по единой схеме постановки токсикоаллергических экспериментов.

Влияние препаратов на качество мясопродуктов проведено с использованием слепого метода по 9-ти бальной шкале для органолептической оценки качества вареного мяса и бульона разработанного ВНИИМП (1985).

Репаративные свойства препаратов изучены на моделях лоскутных кожных ран и ожогов. Нанесение ожоговой травмы, взятие биологического материала от экспериментальных животных проводили в соответствии с существующими требованиями проведения экспериментов на животных. Исследования проводили на белых беспородных крысах массой от 180 до 200 г. Для воспроизведения лоскутной раны на боковой поверхности тела крысы удалялся шёрстный покров и участок кожи площадью 10Ч10 мм².

Два дозированных симметричных ожога IIIA степени площадью по 300 мм² наносили под хлороформным ингаляционным наркозом на обе стороны предварительно выбритой заднебоковой части тела с помощью специального приспособления при t =100С в течении 10 секунд. Общая площадь ожогов при этом составляла около 5% поверхности тела. Спустя 5, 10, 15, 20, 25, 30 дней рассчитывают индекс заживления раны (ожога).

Физическую нагрузку создавали методом плавания мышей в обезвоздушенной водопроводной воде при 20С. Мышам на корень хвоста закрепляли груз в 5 % от массы тела. Учитывали продолжительность плавания до полного утомления. Не допуская гибели, мышей извлекали из воды, высушивали, отогревали и при необходимости использовали для повторных нагрузок.

С целью характеристики общего состояния животных при проведении модельных опытов общепринятыми методами, описанными в соответствующих руководствах (В.Г. Предтеченский, 1964; И.П. Кондрахин с соавт., 1983; И.М. Карпуть, 1986) в крови определяли количество эритроцитов (10¹²/л); гемоглобина (г/л); СОЭ (мм/ч); лейкоцитов (10⁹/л); тромбоцитов (10⁹/л); концентрацию мочевины (мМ/л), фосфора (мМ/л), холестерина (мМ/л), глюкозы (мМ/л), креатинина (мМ/л), кальция (мМ/л), активность аспартат- и аланинаминотрасфераз (Ед/л), щелочной фосфатазы (Ед/л) и г-глутамилтрансферазы (Ед/л) - на биохимическом анализаторе «Hitachi-902»; концентрацию общего белка (г/л), липидов (г/л) и билирубина (мкМ/л) наборами фирмы «Витал» (Санкт-Петербург); в-липопротеидов (мг%) турбодиметрическим методом (М. Ледвина, 1960); белковые фракции электрофорезом на агарозе (Ю.Б. Филиппович с соавт., 1975); содержание каротина и витамина А в яйце (Л.И. Войтов с соавт., 1989). Определение содержания средних молекул, сорбционную способность эритроцитов проводили по Ю.Н. Алехину и др. (2000-2007).

Характеристику системы пероксидное окисление липидов - антиоксидантная защита (ПОЛ-АОЗ) у животных проводили по показателям: содержание в крови конъюгированных диенов (D₂₃₃ /мг липидов) и кетодиенов (D₂₇₈ /мг липидов) определяли спектpoфoтoметpически в гептановой фазе липидного экстракта крови, содержание (мкМ/л) малонового диальдегида - по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (В.С. Бузлама с соавт., 1997); содержание в сыворотке крови флуоресцирующих оснований Шиффа в усл.ед./мл сыворотки на спектроколориметре «Спекол-10» с флуоресцентной приставкой при длине волны возбуждения 365 нм и испускания - 435-440 нм. За 1 условную единицу принимали интенсивность флуоресценции раствора хинин-сульфата с концентрацией 1 мкг/мл в 0,1 Н серной кислоте (W.R. Bidlack, A.L. Tappel, 1973; V.G. Malshet, A.L. Tappel, 1973); содержание в сыворотке крови витамина Е в мкМ/л (Р.Ш. Кисилевич, С.И. Скварко, 1972). Для повышения чувствительности метода вместо 2,2-дипиридила использовали батофенантролин (I.D. Desai, F.E. Martinez, 1986); активность глутатионпероксидазы (К.Ф. 1.11.1.9.) в крови с использованием в качестве субстрата гидроперекиси изопропилбензола (Г.О. Кругликова, И.М. Штутман, 1976). Активность фермента выражали в мМ восстановленного глутатиона/л.мин; активность глутатионредуктазы (К.Ф. 1.6.4.2.) в крови в мМ окисленного глутатиона/л.мин; (Г.О. Кругликова, И.М. Штутман, 1976); активность каталазы по способности перекиси водорода образовывать с молибдатом аммония стойкий окрашенный комплекс с максимумом поглощения при 410 нм (М.А. Королюк, 1988).

Для характеристики состояния гуморального звена неспецифической иммунологической резистентности организма определяли: бактерицидную активность (%) сыворотки крови (О.В. Смирнова, Т.А. Кузьмина, 1966); лизоцимную активность (мкг/мл) сыворотки крови (О.В. Бухарин, Н.В. Васильев, 1974); комплементарную активность (% гемолиза) сыворотки крови (Г.Ф. Вагнер, 1966); содержание суммарных иммуноглобулинов (отн.ед.) в сыворотке крови с помощью цинк-сульфатного теста (М.А. Воловенко, 1975).

Определение остаточного содержания циминаля в органах, тканях и биологических жидкостях проводили спектрофотометрическим методом, измеряя оптическую плотность полученных растворов при длине волны 313 нм.

Терапевтическую эффективность применения препаратов на основе циминаля определяли по снижению заболеваемости и падежа, повышению сохранности животных, их продуктивности, воспроизводительных показателей и качества животноводческой продукции. Клиническое наблюдение за опытными животными и диагностические исследования проведены совместно с ветеринарными специалистами.

Статистическая обработка результатов проведена с пользованием пакетов прикладных программ «Microsoft Excel», «Statistica 5.0» на PC «Pentium III». Достоверность отличий оценивали методом парных сравнений, используя t-критерий Стъюдента (Г.Ф. Лакин, 1990).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Антимикробная активность циминаля

Изучение антимикробной активности циминаля в опытах in vitro показало, что соединение обладает выраженными антимикробными свойствами. Бактериостатическая концентрация для кокковой микрофлоры составила 3,9 - 15,6 мкг/мл. Активность препарата в отношении как музейных, так и полевых штаммов эшерихий была достаточно высокой - 7,8 - 32,25 мкг/мл. Минимальное ингибирующее действие циминаля в отношении музейных и полевых штаммов сальмонелл установлено в концентрации 6,25-15,6 мкг/мл. Активность препарата в отношении пастерелл также была высокой - 7,8-15,6 мкг/мл, proteus vulgaris и вordetella bronchisepticа - 15,6 мкг/мл. Бактерицидное действие циминаля в отношении изученных культур превышало бактериостатическое - в 2 раза.

3.2. Острая токсичность циминаля

При определении острой токсичности установлено, что ЛД₅₀ циминаля при пероральном способе введения белым мышам и белым крысам равна соответственно 12280,2 и 12417,7 мг/кг массы тела, а при подкожном введении соответственно - 3188,6 и 4055,1 мг/кг (табл. 1). Эти данные позволяют отнести циминаль к IV классу опасности - малоопасным веществам (ГОСТ 12.1.007-76).

Таблица 1. Параметры острой токсичности циминаля при однократном внутрижелудочном и подкожном введении для лабораторных животных (мг/кг)

Вид животных	Параметры токсичности	SLD50
	МПД	LD16	LD50	LD84	LD100
внутрижелудочное введение
Белые мыши	9000,0	10168,0	12280,2 (11400-13100)	14513,3	15599,6	±424,5
Белые крысы	8500,0	10552,3	12417,7 (11400-13400)	14329,3	15273,6	±479,6
подкожное введение
Белые мыши	1500,0	1913,0	3188,6 (2780-3600)	4449,7	5083,9	±204,0
Белые крысы	2000,0	2862,4	4055,1 (3670-4430)	5247,8	5844,1	±190,6

3.3. Хроническая токсичность циминаля

Многократное пероральное введение циминаля в дозах 248,0 мг/кг (1/50 ЛД₅₀), 621,0 мг/кг (1/20 ЛД₅₀) и 1242,0 мг/кг (1/10 LD₅₀) и подкожное - в дозах 81,0 мг/кг (1/50 ЛД₅₀), 203,0 мг/кг (1/20 ЛД₅₀) и 406,0 мг/кг (1/10 LD₅₀) не вызывало существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, груминг, аппетит, частота дыхания крыс. Случаев гибели подопытных животных не было установлено.

Результаты изучения хронической токсичности циминаля при разных способах введения в опытах на лабораторных животных показали, что неблагоприятное влияние циминаля на организм крыс носит дозозависимый характер. Двадцатиоднодневное введение циминаля в дозах 248,0 мг/кг (пероральное) и 81,0 мг/кг (подкожное) не вызывает функциональных изменений в организме крыс, следовательно, эти дозы можно считать недействующими. Опытные крысы, которым применяли циминаль в дозах 621,0 и 203,0 мг/кг не отличались от контрольных по приросту массы тела и относительной массе внутренних органов, но у них отмечена тенденция повышения в сыворотке крови активности ферментов печени, а также повышения количества лейкоцитов, что указывает на первые признаки токсического действия циминаля. Следовательно, данные дозы можно считать пороговыми.

Рис. 1. Влияние циминаля на относительную массу печени и почек в дозах 1242,0 (внутрь) и 406,0 мг/кг (подкожно)

Хроническая интоксикация в максимальных дозах 1242,0 и 406,0 мг/кг (1/10 от ЛД50) сопровождается снижением массы тела, увеличением относительной массы почек и, главным образом, печени. Относительная масса почек через 21 день при подкожном введении увеличивается на 24,9%, а при пероральном - на 17,7%. Относительная масса печени на 21 день при пероральном введении была увеличена на 24,8%, а при подкожном - это увеличение было более значительным - 32,4%. Дозы 1242,0 и 406,0 мг/кг способствовали снижению количества эритроцитов на 9,4 и 18,7%, гемоглобина на 7,2 и 18,7%, тромбоци-тов на 13,7 и 24,5% и увеличению лейкоцитов на 9,3 и 13,2% по отношению к контролю.

На фоне применения препарата в максимальных дозах (1/10 от LD_50,) наиболее характерные изменения произошли в биохимических показателях крови, характеризующих функциональное состояние печени и почек (табл. 2 и 3).

К окончанию опыта (21 день), у крыс данной группы повысился уровень альбуминов на 10,2 и 37,3%, мочевины - на 18,8 и 45,4%, креатинина - на 33,8 и 34,1%, активность ЩФ, АлАТ, АсАТ - на 33,9 и 44,7; 16,9 и 24,1, 24,6 и 36,2 % соответственно и уровень билирубина на 31,6 и 44,7%. Однако среднее значение этих показателей у крыс опытной группы не выходило за верхние границы нормы для данного вида животных.

Через 10 дней после последнего введения препарата, данные показатели у опытных животных практически восстанавливались до физиологических значений.

Таблица 2. Биохимические показатели крови белых крыс при многократном (21 день) пероральном применении циминаля

Показатели	Контроль	Дозы циминаля, мг/кг
		248,0	621,0	1242,0
Общий белок, г/л	68,7±1,50	68,5±1,26	69,4±1,90	71,5±1,58
Альбумины, г/л	32,4±2,11	29,9±1,31	31,1±1,63	35,7±1,08
Мочевина, мМ/л	5,05±0,25	4,92±0,39	5,71±0,41	6,00±0,24*
Глюкоза, мМ/л	5,02±0,37	4,65±0,41	5,12±0,99	5,40±0,32
Холестерин, мМ/л	3,08±0,40	2,99±0,18	2,84±0,31	2,81±0,12
АсАТ, Ед/л	77,9±3,06	79,9±5,15	87,6±7,18	97,1±7,83*
АлАТ, Ед/л	46,7±2,66	45,7±2,27	51,0±3,17	54,6±2,19*
Креатинин, мкМ/л	40,0±5,02	41,9±3,39	44,7±4,07	53,5±3,16*
ЩФ, Ед/л	88,0±7,11	90,7±5,48	110,9±10,6	122,6±7,26*
Билирубин, мкМ/л	3,67±0,36	3,12±0,24	3,32±0,19	4,83±0,31*

* - Р < 0,05 - 0,001 по сравнению с контролем



Таблица 3. Биохимические показатели крови белых крыс при многократном (21 день) подкожном введении циминаля

Показатели	Контроль	Дозы циминаля, мг/кг
		81,0	203,0	406,0
Общий белок, г/л	69,5±1,76	70,4±1,17	71,3±0,85	75,5±1,79*
Альбумины, г/л	29,2±1,17	29,7±1,98	31,9±0,78	40,1±2,18*
Мочевина, мМ/л	4,76±0,25	4,69±0,38	4,70±0,20	6,92±0,65*
Глюкоза, мМ/л	3,86±0,23	3,75±0,23	3,80±0,51	4,40±0,18
Холестерин, мМ/л	1,38±0,21	1,32±0,09	1,43±0,12	1,51±0,15
АсАТ, Ед/л	106,9±3,54	109,1±9,21	121,2±10,2	145,6±5,19*
АлАТ, Ед/л	26,5±2,05	25,9±1,19	30,9±6,10	32,9±3,65
Креатинин, мкМ/л	32,0±1,08	31,2±1,20	34,2±2,11	42,9±4,52*
ЩФ, Ед/л	107,3±9,05	109,0±7,15	133,0±10,1	155,3±11,1*
Билирубин, мкМ/л	2,19±0,18	2,31±0,30	2,51±0,22	3,17±0,20*

* - Р < 0,05 - 0,001 по сравнению с контролем

Результаты проведения гексеналовой пробы показали, что введение циминаля в наивысших дозах на протяжении 21 дня не оказывало существенного влияния на обезвреживающую функцию печени, продолжительность медикаментозного сна животных не отличалась от контрольной группы во все сроки исследования.

3.4. Изучение субхронической токсичности на сельскохозяйственных животных

При изучении субхронической токсичности циминаля в опыте на поросятах при пероральном введении в смеси с кормом в условно-терапевтической дозе 1,5 мг/кг, в пять и десять раз ее превышающей (7,5 и 15,0 мг/кг) и при подкожном введении в условно-терапевтической дозе 0,3 мг/кг, в пять и десять раз ее превышающей (1,5 и 3,0 мг/кг) в течение 20 дней не оказывало существенного влияния на клинический статус, поведение и аппетит поросят. В период всего опыта поросята контрольной и опытных групп были подвижны, аппетит выражен, рефлексы сохранены. Нарушений функций пищеварения и мочеотделения не установлено. Препарат в различных дозах не снижал скорости роста поросят.

Изменения гематологических и биохимических показателей, хотя и отмечались в изучаемые периоды времени, но находились в пределах физиологической нормы, не носили дозозависимый характер. Более выраженные изменения регистрировались в биохимических показателях крови поросят, которым вводили циминаль в наивысших дозах.

Рис. 2. Влияние циминаля на биохимические показатели крови поросят в дозах 10,0 (внутрь) и 3,0 мг/кг (внутримышечно), в % к контролю

Повышение до верхних границ нормы в сыворотке крови показателей, характеризующие функциональное состояние печени (рис.2), а именно, АсАТ (на 15,1 и 26,8%), АлАТ (на 11,7 и 18,8%), а также увеличение активности щелочной фосфатазы (на 19,1 и 37,5%) свидетельствуют о возросшей нагрузке на эти органы. Эти изменения носили обратимый характер и приходили в норму после отмены препарата. Содержание билирубина в сыворотке крови поросят во все сроки исследования соответствовало физиологической норме и не отличалось от контрольной группы, что свидетельствует об отсутствии влияния циминаля на экскреторную функцию печени.

Таким образом, результаты изучения субхронической токсичности показали, что циминаль, как при пероральном, так и при внутримышечном введении в дозах 10 раз превышающих возможные терапевтические дозы препаратов на его основе не оказывает токсического действия на организм животных даже при сроке применения в 2-3 раза превышающем рекомендуемый курс лечения. Учитывая, что наиболее чувствительными органами при передозировке препарата являются печень и почки, в случае патологии этих органов препараты на основе циминаля следует назначать с осторожностью.

3.5. Местнораздражающее действие циминаля

В результате проведенных исследований местнораздражающего действия циминаля установлено, что при однократной аппликации на кожные покровы кроликам при плотности нанесения от 0,020 до 0,10 мл/см² раствор препарата в концентрациях 0,1; 0,5 и 1,0% не вызывает повреждение кожи в виде эритемы или ее отеков.

Изучение раздражающих свойств препарата на слизистые оболочки, проведенное на кроликах, показало, что через 60, 180 минут и 4 часа раздражающее действие препарата в концентрациях 0,1 и 0,5% отсутствовало. Раствор циминаля в концентрации 1% вызывает слабое раздражение конъюнктивы спустя 30 минут после закапывания, которое проходило уже к 1-му часу.

3.6. Аллергенные свойства циминаля

Опыты по изучению аллергенных свойств циминаля проведены на белых беспородных крысах и морских свинках при наружном, конъюнктивальном и внутрикожном способах применения препарата.

Результаты оценки сенсибилизирующего действия циминаля показали отсутствие выраженной реакции иммунной системы подопытных животных на введение препарата. При постановке конъюнктивальной пробы морским свинкам, предварительно сенсибилизированных циминалем, не было отмечено гиперчувствительности животных к препарату, как через 15 минут (быстрая реакция), так и через 24-48 часов (гиперчувствительность замедленного типа) после нанесения препарата на конъюнктиву глаз.

Препарат не вызывал контактного дерматита после многократных накожных аппликаций, при этом реакции непрямой дегрануляции тучных клеток и гиперчувствительности замедленного типа, индуцированной эритроцитами барана были отрицательны. Однако показатель реакции активной кожной анафилаксии (АКА) позволяет сделать вывод о возможности слабовыраженного сенсибилизирующего действия циминаля на отдельных животных (табл. 4), обусловленное, вероятно, их индивидуальной чувствительностью к данному соединению.

Таблица 4. Реакция активной кожной анафилаксии у морских свинок на введение циминаля

Количество животных в группе (n)	Доза, мг/кг	Индекс реакции АКА, мм
10	Контроль	2,11±0,19
10	0,3 мг/кг (в/м)	2,67±0,12
10	3,0 мг/кг (в/м)	3,97±0,69*
10	1,5 мг/кг (внутрь)	2,43±0,16
10	15,0 мг/кг (внутрь)	3,76±0,56*

Полученные данные позволяют сделать вывод об отсутствии аллергенного действия у циминаля.

3.7. Мутагенное действие циминаля

Данные, характеризующие индукцию клеток с хромосомными аберрациями представлены в таблице 5, из которой видно, что как при однократном пероральном введении циминаля в дозе 15,0 мг/кг, а при внутримышечном - 3,0 мг/кг, так и при 4-х кратном в тех же дозах не обнаружено достоверного увеличения хромосомных аберраций при разных экспозициях. Качественный спектр хромосомных нарушений в контрольных и опытных группах включали гепы и одиночные фрагменты. Сходные результаты получены при многократном введении препаратов в тех же дозах.



Таблица 5. Мутагенная активность циминаля

Группа	Кол-во исслед. клеток	Аберрации	Гепы	Кол-во клеток с множеств. аберрац.	Доля аберрантных клеток
		Фрагменты	Обмены
		Одиночные	Парные
Контроль (однократно)
1	100	0,98±0,41	0	0	0,87±0,31	0	0,98±0,41
Контроль (четырёхкратно)
2	100	1,13±0,29	0,11±0,11	0	0,74±0,36	0	1,13±0,29
Циминаль (однократно, внутримышечно)
3	100	1,23±0,56	0	0	1,01±0,45	0	1,23±0,56
Циминаль (четырёхкратно, внутримышечно)
4	100	1,83±0,54	0,25±0,14	0	0,68±0,51	0	1,83±0,54
Циминаль (однократно, перорально)
5	100	1,10±0,60	0	0	0,71±0,44	0	1,10±0,60
Циминаль (четырёхкратно, перорально)
6	100	1,70±0,50	0	0	1,10±0,40	0	1,70±0,50

Обобщая результаты цитогенетических исследований можно заключить, что циминаль в изученных дозах и способах введения не проявляет мутагенную активность в тесте индукции хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей.

3.8. Эмбриотоксическое и тератогенное действие циминаля

В опытах по изучению эмбриотоксического и тератогенного действия циминаля на крысах, которым его вводили внутримышечно и перорально в дозе 1/10 от ЛД₅₀ соответственно 406,0 и 1242,0 мг/кг на пятый день беременности (период имплантации) и десятый день беременности (период органогенеза) установлено отсутствие эффекта действия. Циминаль не оказывает отрицательного влияния на овуляторные процессы.

Существенных различий в плодовитости крыс опытных и контрольной групп не установлено. Среднее количество плодов на самку в контрольной группе составило 9,97±0,43, а у крыс, получавших циминаль в дозе 406,0 и 1242,0 мг/кг массы тела на 5 и 10 дни беременности 10,0±0,39 и 9,95±0,41 - 9,94±0,41 и 9,90±0,52 соответственно.

Крысята, рожденные от самок опытных групп, не отличались от крысят контрольных самок. Проведенные морфологические исследования показали отсутствие аномалий развития внутренних органов и скелета плодов, рожденных от крыс опытных групп.

Таким образом, циминаль в изученных дозах и способах введения не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия.

3.9. Фармакокинетика циминаля в организме поросят

Изучение фармакокинетики циминаля при внутримышечном и пероральном введении и оценка его биологической доступности проведено в двух сериях опытов на кроликах.

В первой серии опытов циминаль вводили внутримышечно в виде раствора, приготовленного на 1,2-пропиленгликоле, в дозе 0,3 мг/кг, вызывающей терапевтический эффект. Во второй серии опытов циминаль вводили перорально в дозе 1,5 мг/кг массы тела в виде пропиленгликолевого раствора. Данная доза была выбрана в ходе предварительных экспериментов. Животным контрольной группы вводили стерильный 1,2-пропиленгликоль внутримышечно или перорально в эквивалентном количестве.

Фармакокинетическими исследованиями установлено, циминаль хорошо всасывается из желудочно-кишечного тракта, достигая терапевтических концентраций в крови в течение 30 минут и максимальных концентраций (12,41±0,23 мкг/мл) через 2-3 часа после введения (рис. 3). Фармакокинетический профиль при внутримышечном введении циминаля был аналогичен: достижение терапевтических концентраций в крови в течение 30 минут и максимальных концентраций (6,70±0,15 мкг/мл) через 2-3 часа после введения.



Рис. 3. Динамика содержания циминаля в крови при пероральном и внутримышечном введении препарата (мкг/мл)

На основании полученных результатов были рассчитаны основные фармакокинетические параметры циминаля с использованием двукамерной модели со всасыванием. Период полуабсорбции препарата при обоих путях введения составил в среднем 0,82 часа. Таким образом, циминаль характеризуется достаточно длительной фазой всасывания, которая сменялась также достаточно длительной фазой элиминации. Объем распределения циминаля, как при внутримышечном, так и при пероральном введении в организме кроликов поддерживается на достаточно высоком уровне (1025 и 5208 мл соответственно), что говорит о способности циминаля накапливаться в тканях в более высоких концентрациях, чем в крови. Период полувыведения (T_1/2) препарата из организма был достаточно продолжительным - 3,51 ч и 5,50 ч соответственно, что скорее всего обусловлено липофильными свойствами циминаля. Большая площадь под фармакокинетической кривой (51,9 и 136,3 мкг/млЧч) также говорит о постепенном всасывании и длительном нахождении циминаля в организме животных.

При сравнении полученных данных установлено, что величины Cl_t (0,09 и 0,33 л/ч) и V_d, (1025 и 5208 мл) описывающие модель фармакокинетики исследуемой субстанции, при внутримышечном введении меньше таковых при пероральном введении, что свидетельствует о более медленной элиминации циминаля из крови при пероральном введении. Что в свою очередь обусловлено более длительным периодом полувыведения (в 1,6 раза) циминаля при пероральном введении по сравнению с внутримышечным.

Исследуемая субстанция длительное время способна циркулировать в крови (MRT_в/м - 4,93 ч; MRT_{перорально} - 9,15 ч).

3.10. Разработка максимально допустимого уровня циминаля в продуктах питания

Отечественные производители сельскохозяйственной продукции, использующие в соответствии со своим технологическим регламентом антибиотики, пестициды и стимуляторы роста, должны гарантировать безопасность продукции для здоровья человека. То есть остаточное содержание этих потенциально опасных химических соединений в готовой продукции должно быть ниже предельно допустимых уровней, определенных законодательством.

Риск загрязнения продовольственного сырья потенциально опасными химическими соединениями может быть снижен только при эффективной системе контроля на всех стадиях - от производства до реализации.

С целью изучения безопасности применения препаратов на основе циминаля нами были разработаны максимально допустимые уровни (МДУ) циминаля в продукции животного присхождения (табл. 6).

Таблица 6. Максимально допустимые уровни циминаля (MRLs)

Фармакологически активная субстанция	Контрольное вещество	Вид животных	MRLs	Контрольная ткань
Циминаль	Циминаль	Все виды животных	140 мкг/кг	мышцы почки жир
			50 мкг/кг	печень
			35 мкг/кг	молоко



3.11. Конструирование препаративных форм антимикробных композиций на основе циминаля

Обобщив разносторонний фармакологический и токсикологический материал, с учетом перспективности широкого использования циминаля в качестве субстанции было сконструировано 6 антибактериальных препаратов.

Жидкая инъекционная форма - цидисепт - представляет собой композицию из циминаля и вспомогательных веществ, взятых в следующих соотношениях,%: циминаль - 0,3; сорбит - 0,3; полиэтиленоксид-400 - 12,5; 1,2-пропиленгликоль - до 100,0.

Жидкая лекарственная форма для орального применения - цидисепт-о - представляет собой композицию из циминаля и вспомогательных веществ, взятых в следующих соотношениях, %: циминаль - 0,3; метилцеллюлоза - 0,8%; полиэтиленоксид-400 - 4,6; стабилизатор - 0,3; вода дистиллированная до 100,0.

Жидкая аэрозольная форма - цидисепт-аэро - представляет собой композицию из циминаля и вспомогательных веществ, взятых в следующих соотношениях,%: циминаль - 0,1; сорбит - 1,0; полиэтиленоксид-400 - 78,9; 1,2-пропиленгликоль - до 100,0.

Мягкая форма - цидисепт-гель - представляет собой композицию из циминаля и вспомогательных веществ, взятых в следующих соотношениях,%: циминаль - 0,3; этиловый спирт - 2,0; глицерин - 2,0; аристофлекс - 0,9; полиэтиленоксид-400 - 5,0; 1,2-пропиленгликоль - 20,0; масло кукурузное - 5,0%; ЛПФП - 0,07%; вода дистиллированная до 100,0.

Твердая форма - суппозитории - палочки внутриматочные с циминалем - представляет собой композицию из циминаля и вспомогательных веществ, взятых в следующих соотношениях, г на одну палочку: циминаль - 0,1; полиэтиленоксид-1500 - 7,5; полиэтиленоксид-400 - 1,5; масло кукурузное - 0,5 г; ЛПФП - 7,5 мг; диметилсульфоксид - 0,4 г.

Цидисепт-присыпка - представляет собой композицию из циминаля и вспомогательных веществ, взятых в следующих соотношениях,%: циминаль - 0,5; метилурацил - 5,0%; тальк - 94,5.

3.12. Токсикологическая характеристика лекарственных форм на основе циминаля

Оценку острой и хронической токсичности изучаемых препаратов проводили на белых мышах, крысах и цыплятах в соответствии с требованиями к доклиническому изучению новых лекарственных средств.

Препараты оказались не токсичными в остром опыте во всех испытанных дозах. Не отмечено и видовой чувствительности. Препараты по степени токсичности относятся к IV классу опасности - малоопасные вещества (ГОСТ 12.1.007-76).