Аллельные варианты и экспрессия генов-кандидатов массы абдоминального жира у кур

Размещено на http://www.allbest.ru/

АЛЛЕЛЬНЫЕ ВАРИАНТЫ И ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ МАССЫ АБДОМИНАЛЬНОГО ЖИРА У КУР

Ларкина Татьяна Александровна, аспирантка SPIN-код: 2296-8896 tanya.larkina2015@yandex.ru

ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных»

196601, Санкт-Петербург, г. Пушкин, Московское шоссе 55A

Экспрессия 9 генов-кандидатов для количественных признаков масса и содержание абдоминального жира была исследована в жировой ткани, печени, толстом кишечнике, мышцах, гипофизе и головном мозге кур мясного направления (бройлеров) при помощи ПЦР в реальном времени. Выявлены достоверные различия по уровню экспрессии гена высокой мобильности AT hook1 (НМGA1) отношение средних значений уровней экспрессии составляет 2,90 (Р ? 0,01) в группах высоким (3,5 ± 0,18%) и низким (1,9 ± 0,56 %) содержанием абдоминального жира. Уровень экспрессии этого гена коррелирует с содержанием абдоминального жира (0,70, P ? 0,01) и массой абдоминального жира (0,70, P ? 0,01). Установлено, что в тех же группах птиц достоверно различается экспрессия гена PPARG в печеночной ткани, отношение средних значений уровней экспрессии составляет 3,34 (P ? 0,01). Коэффициент корреляции экспрессии этого гена с содержанием абдоминального жира составил 0,55 (P ? 0,05), а с массой абдоминального жира равен 0,57 (P ? 0,01). Исходя из этих данных, и данных литературных источников можно сделать вывод о возможном участии генов HMGA1, PPARG и FABP2 в депонировании абдоминального жира у кур. Поиск мононуклеотидных полиморфных сайтов (SNP) в регуляторных областях этих генов может позволить найти маркеры для генной селекции бройлеров по массе и содержанию абдоминального жира

Ключевые слова: ЭКСПРЕССИЯ, АБДОМИНАЛЬНЫЙ ЖИР, МАССА, ГЕН, АНАЛИЗ, СЕЛЕКЦИЯ, КУРИЦА

Мясное птицеводство занимает одно из ведущих мест в обеспечении населения продуктами питания в большинстве стран мира. Доля рынка мясной продукции, занимаемая, птицей постоянно растет и по оценке специалистов к 2020 году этот продукт выйдет на первое место. Интерес потребителя к мясу птицы объясняется высокими вкусовыми и диетическими свойствами при относительно низкой стоимости. Современное птицеводство - высокотехнологичная отрасль промышленности, основанная на использовании узкоспециализированных организмов с многократно увеличенной конверсией потребленных питательных веществ в мышечную ткань или яичную массу. Расходы протеина корма на производство 1 кг белка мяса птицы в 2 раза ниже, чем свинины, и в 5 раз ниже, чем говядины. В условиях ограниченных зерновых ресурсов в птицеводстве, как наиболее "скороспелой" отрасли животноводства достигается наибольшая отдача мясом в расчете на единицу затраченного корма.

Более половины производимого на сегодняшний день мяса птицы составляют бройлерные кроссы домашней курицы. Селекция бройлеров по признаку высокой скорости роста параллельно привела к увеличению жирности тушки, что значительно снижает эффективность кормления, не несет коммерческой целесообразности, и снижает потребительскую ценность. Для борьбы с излишней жирностью тушки птиц требуется пристальное изучение факторов участвующих в депонировании жира и разработка методик ослабляющих этот процесс.

Основываясь на функциональных характеристиках генов, связанных с похожими признаками у других животных (различные формы ожирения у человека и лабораторных грызунов, толщина шпига у свиней), мы отобрали 9 генов, являющихся функциональными кандидатами массы абдоминального жира - FABP1, FABP2, FABP3, HMGA1, MC4R, PPARG, PPARGС1А, POMC и PTPN1.

Белки FABP - это семейство небольших консервативных цитоплазматических белков, связывающих жирные кислоты. Считают, что белки данного семейства играют заметную роль в транспорте и метаболизме жирных кислот. В опытах, которые проводил Атшавес на мышах, показано, что FABP1 играет огромную роль в утилизации жирных кислот, транспортирует их по клетке, направляя на окисление в митохондрии и пероксисомы. Этот белок соединяет жирные кислоты с коэнзимом А и перетаскивает в аппарат Гольджи для этерификации, секретирует липиды очень низкой плотности в межклеточное пространство, а также участвует в хранение жирных кислот в виде липидных капель [1].

Лопес и соавторы [2] с помощью анализа экспрессии на биочипах показали, что на западной (высококалорийной богатой жирами) диете, у крыс, страдающих ожирением, повышена экспрессия генов этого семейства. Эти авторы также сообщили, что по сравнению с контрольной группой у животных, страдающих ожирением, уровень экспрессии генов гамма - рецептора, активируемого пролифераторамипероксисом (PPARG) и белков связывающих жирные кислоты FABP увеличен в 50 и в 16 раз соответственно.

Ген HMGA1 кодирует негистоновый белок, принимающий участие во многих процессах в клетке, включая регуляцию транскрипции генов, интеграцию в хромосомы ретровирусов и метастатическую активность раковых клеток. Ким и соавторы сообщают о существенном влиянии генов HMGA1 и MC4R на рост и отложение жира у свиней породы дюрок [3].

Ген MC4R кодирует рецептор 4 меланокортина. У бройлеров в гене MC4R обнаружено несколько мутаций. Замена цитозина на тимин в 5'регуляторной области этого гена приводит к появлению дополнительного сайта связывания транскрипционного фактора NF-E2, повыщающего уровень экспрессии гена MC4R. Обнаружена также миссенс-мутация в кодирующей части гена MC4R курицы - замена гуанина на аденин в 61-м положении нуклеотида, в результате которой глицин заменяется на аргинин. Кроме того, в кодирующей части этого гена выявлены еще две синонимических замены - гуанина на тимин в 315-м положении нуклеотида и цитозина на тимин в 336-м положении нуклеотида. В этой же работе сообщается о наличии достоверной корреляции описанных SNP, с весом тушки и массой мышц окорочков, однако связи их с депонированием абдоминального жира не обнаружено [4].

Ген POMC, проопиомеланокортин - прогормон, сложный полипептид, синтезируемый кортикотропными клетками передней доли гипофиза и меланотропными клетками средней доли гипофиза, и состоящий из 241 аминокислоты. Проопиомеланокортин влияет на синтез лептина через рецептор 4 меланокортина (MC4R). Показана связь мутаций в этом гене с развитием ожирения у человека [5].

Ген PPARG экспрессируется в клетках печени и кодирует гамма-рецептор, активируемый пролифераторамипероксисом. Этот энзим регулирует транскрипцию различных генов и играет важную роль в дифференцировке адипоцитов. Исследования показали наличие корреляции гиперэкспрессии гена PPARG у человека с болезненным ожирением [6]. Экспрессия гена гамма-рецептора, активируемого пролифераторами пероксисом, связана с развитием болезненного ожирения, диабета, атеросклероза и злокачественных новообразований [7].

Ген PPARGC1A кодирует альфа 1 коактиватор гамма-рецептора, активируемогопролифераторамипероксисом. Взаимодействие с PPAR-гамма рецептором, позволяет этому протеину работать с большим числом транскрипционных факторов. Этот ген играет значительную роль в развитии ожирения у человека [8], а у свиней влияет на отложение абдоминального жира и толщину шпига [9].

Ген PTPN1 кодирует тирозин-фосфатазу нерецепторного типа 1. Протеиновые фосфатазы являются сигнальными молекулами, которые вовлечены в процессы регуляции большого числа клеточных процессов, таких как рост и дифференцировка клеток, митотический цикл и онкогенная трансформация. У человека в данном гене выявлены мононуклеотидные полиморфные сайты (SNP) IVS5+3666delT и IVS6+G82A, которые ассоциированы с ожирением [10]. Показано, что у здоровых людей наблюдается подавление активности гена PTPN1, который инициирует образование белка, блокирующего распознавание и взаимодействие клеток с инсулином. Примерно у каждого четвертого больного сахарным диабетом 2-го типа данный ген по какой-то причине разблокирован и стимулирует выработку белка, нарушающего процесс взаимодействия инсулина с клетками [11].

Цель и задачи исследований. Целью данной работы является анализ экспрессии и выявление аллельных вариантов генов-кандидатов по признаку массы абдоминального жира, а также изучение связи отдельных аллелей с массой абдоминального жира у кур.

Поставлены следующие задачи:

-дизайн праймеров с помощью on-line программы Primer3;

-выделение тотальной матричной РНК из абдоминальной жировой ткани, головного мозга, печени, толстого кишечника, мышц от 10 особей домашней курицы с высоким уровнем абдоминального жира и десяти особей с низким уровнем;

- синтез кДНК с помощью обратной транскриптазы;

-определение профиля экспрессии генов-кандидатов в пяти тканях с помощью количественной ПЦР;

-статистическая обработка полученных данных;

- выделение геномной ДНК для генотипирования;

- анализ частот встречаемости аллелей выявленного полиморфного сайта гена FABP2 в группе кур с высоким и низким содержанием абдоминального жира.

Материалы и методы. Материалом для данного исследования послужили образцы печени, толстой кишки, жировой и мышечной ткани, гипофиза и головного мозга бройлеров кросса «Isa» в возрасте 35 дней из экспериментального хозяйства ФГБНУ ВНИИГРЖ. Образцы были получены от 10 особей с высоким (3,5 ± 0,18%) и 10 птиц с низким (1,9 ± 0,56 %) содержанием абдоминального жира. Для генотипирования по гену FABP2 взяли образцы печени 150 бройлеров кросса «Хаббард» в возрасте 45 дней.

1. Выделение РНК

Матричную РНК выделяли из печени, головного мозга, кишечника, мышц, и жировой ткани (по 100 мг ткани). РНК выделяли из замороженных биологических образцов, используя набор реактивов для выделения РНК Aurum total RNA Fatty and Fibrous Kit (Bio-Rad, США).

2. Дизайн праймеров

Дизайн геноспецифических олигонуклеотидов-праймеров для генов FABP1, FABP2, FABP3, HMGA1, MC4R, PPARG, PPARGC1A, POMC и PTPN1 проводили на основании информации баз данных сети Интернет (www.nlm.ncbi.nih.gov и www.ensembl.org) с помощью компьютерной программы PRIMER_3 (wwwgenome.wi.mit.edu). Полученные последовательности праймеров и ткани, в которых оценивали экспрессию вышеуказанных генов, представлены в таблице 1.

ген абдоминальный жир куры

Таблица 1? Последовательности праймеров и условия ПЦР

В качестве репортерного гена использовали ген GAPDH. Для оценки экспрессии этого гена методом ПЦР в реальном времени нами были использованы следующие праймеры:

GAPDH FW: CCTCTCTGGCAAAGTCCAAG

GAPDH RV: CATCTGCCCATTTGATGTTG

3. ПЦР в реальном времени

Обратную транскрипцию и ПЦР в реальном времени проводили с помощью набора реактивов iScript One-Step RT-PCR Kit (Bio-Rad, США) в следующем режиме:

50°C - 10 минут; 95 - 5 минут; 95єС - 10 секунд; 60°C - 30 секунд; 72°C - 15 секунд (45 циклов); 7єС - хранение, в амплификаторе IQ5 (Bio-Rad, США).

При температуре от 60°C до 95°C проведён анализ кривой плавления. Для определения уровней экспрессии генов-кандидатов был использован метод 2??Ct (Livak&Schmittgen, 2001). Достоверность различий средних значений уровней экспрессии в 2-х группах оценивали при помощи t-критерия Стьюдента. Все вычисления были выполнены с помощью программы Excel 2003 (Microsoft Corp., Сиэтл, США).

4. Выделение геномной ДНК из печени

500 мг замороженной ткани печени гомогенизировали. К полученному гомогенату добавляли 0,5 мл гомогенизирующего буфера 10мМ Трис, хорошо перемешивали центрифугировали в течение 10 минут и сливали верхнюю фазу с буфером, далее проводили процедуру повторно, тем самым промывая образцы печени. После добавляли к смеси 5 мкл протеиназы, и 10% SDS. Полученную смесь ставили в термостат на 2 часа. Далее добавляли 0,5 мл фенола интенсивно перемешивали в течение 15 минут и центрифугировали в течение 20 минут при 10000 об/мин. Затем аккуратно переносили верхнюю (водную) фазу в новую пробирку и добавляли 25 мкл NaCl и доводили равным объёмом охлажденного 96% спирта. После центрифугирования осадок ополаскивали 70% этанолом и после 10-минутного центрифугирования при 10000 об/мин супернатант удаляли, а осадок подсушивали на воздухе и растворяли в 0,5 мл TE.

5. Генотипирование

В работе было использовано150 образцов ДНК бройлеров кросса «Хаббард». Для амплификации гена FABP2 были использованы праймеры:

rs 16414509 FW: ACAGAGCATTCACTGAATGG

rs 16414509 RV: TTGGCCATTCTAATTTGGTGA

Амплификацию ДНК при помощи ПЦР проводили с использованием амплификатора IQ-5 (Bio-Rad, США) в следующем режиме:

95є С - 5 минут; 95є С - 30 секунд; 62є С - 30 секунд; 72є С - 1 минута (30 циклов); 72є С - 7 минут; 7є С - хранение.

Ставили рестрикцию на 2 часа при t=65°C, для генотипирования кур по аллелям SNP в гене FABP2 эндонуклеазой рестрикции TaqI.

Разделение полученных фрагментов проводили методом электрофореза в 1,5 % агарозном геле. Статистическую обработку результатов проводили путем сравнения частот аллелей rSNP в группах при помощи критерия ч2 и при помощи критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение С использованием метода ПЦР в реальном времени был исследован уровень экспрессии 9 функциональных генов-кандидатов, оказывающих влияние на массу и содержание абдоминального жира, в жировой ткани, печени, кишечнике, мышцах, гипофизе и головном мозге бройлеров.

Не было выявлено достоверных различий в уровне экспрессии генов FABP1 и PPARGC1A в печени, FABP2 и PTPN1 в кишечнике, MC4R и PTPN1 в мозге, FABP3 в скелетных мышцах, PPARG в жировой ткани и POMC в гипофизе бройлеров, различающихся по содержанию и массе абдоминального жира. Корреляция уровня экспрессии этих генов с изучаемыми признаками также была незначительной (таблица 2).

Таблица 2 ? Профилирование экспрессии генов-кандидатов для признака отложение абдоминального жира у бройлеров

*различия статистически достоверны (P<0.05)

** различия статистически достоверны (P<0.01)

В ходе экспериментов нами было обнаружены достоверные различия экспрессии гена HMGA1 в печени «жирных» и «нежирных» бройлеров. Отношение средних значений уровней экспрессии составляет 2,90 (Р ? 0,01) в группах высоким (3,5 ± 0,18%) и низким (1,9 ± 0,56 %) содержанием абдоминального жира. Уровень экспрессии этого гена коррелирует с содержанием абдоминального жира (0,70, P ? 0,01) и массой абдоминального жира (0,70, P ? 0,01).

Семейство HMGA состоит из четырех белков: HMGA1a, HMGA1b, HMGA1c и HMGA2. Первые три белка являются продуктом одного и того же гена HMGA1, что обусловлено альтернативным сплайсингом. Белки HMGA участвуют в регуляции активности хроматина. В функциональных регионах промоторов многих генов выявлены сайты связывания ДНК с белками HMGA [12]. Показано, что дифференциация адипоцитов в клеточной линии 3T3-L1 связана с увеличением уровня экспрессии гена HMGA1, а прекращение синтеза белков HMGA1 подавляет дифференциацию жировых клеток [13].

Уровень экспрессии гена PPARG в печени также достоверно различается в группах с различным содержанием и массой абдоминального жира. Отношение средних значений уровней экспрессии составляет 3,34 (P ? 0,01). Коэффициент корреляции равен - 0,55, P ? 0,01 (Таблица 2). У млекопитающих, продукт гена PPARG представлен двумя изоформами PPARG1 и PPARG2 которые транскрибируются под регуляцией 2-х альтернативных промоторов. В генах ESR1 и PPARG обнаружены три SNP, которые связаны c ожирением у китайцев этнической группы Хань [14].

Ген PPARG вовлечен в активацию экспрессии генов, связанных с депонированием жира, и запускает программы дифференциации адипоцитов. Ванг и соавторы [15] показали, что трансфекция синтезированной in vitro короткой интерферирующей РНК (siPPARG) в культивируемые преадипоциты 12-дневных цыплят достоверно ингибирует процессы дифференцировки и усиливает пролиферацию преадипоцитов у кур. Интересно, что оба гена-кандидата (HMGA1 и PPARG) ответственны за пролиферацию адипоцитов и до пяти недельного возраста увеличивают количество жировых клеток (гиперплазия), что имеет решающее значение при отложении абдоминального жира у кур [16].

Эти данные свидетельствуют о том, что гены HMGA1 и PPARG, являются генами-кандидатами, влияющими на депонирование абдоминального жира у кур. Поиск и обнаружение мононуклеотидных полиморфных сайтов в регуляторной и кодирующей областях генов HMGA и PPARG могут стать инструментом для создания системы маркеров для генной селекции бройлеров.

Из литературных источников, стало известно, что китайские учёные выявили замену в регуляторной области гена FABP2, - 561A>C, и проверили ее на двух линиях бройлеров, различающихся по содержанию брюшного (абдоминального) жира. В добавок к этому они исследовали аддитивный механизм работы гена FABP2 и фермента ацетил-коэнзим А карбоксилаза альфа (ACACA). В гене ACACA присутствует замена, в положении 2292G>А. Был проанализирован эпистатический эффект между двумя заменами - 561A>C и 2292G>А в генах FABP2 и ACACA соответственно, что влияет на вес жира (AFW) и процент жира (AFP). Данные результаты, полезны для дальнейшего понимания генетического взаимодействия между генами-кандидатами [17].

По полученным данным мы провели описательную статистику по гену FABP2 кросса «Хаббард», посмотрели связь генотипов с весом жира и содержанием жира. Данные представлены в таблице 3.

Таблица 3 ? Среднее значение и стандартное отклонение по двум параметрам, вес жира и содержание жира генотипов АА, АС, СС

По табличным данным, можно сделать вывод, что показатели в целом укладываются в распределение Гаусса по содержанию жира (диаграмма 1), и по весу жира (диаграмма 2).

Диаграмма 1 - Ранжирование генотипов в пределах распределения Гаусса. Горизонтальная ось? содержание жира (вес жира (гр.)/вес (гр.) особи). Вертикальная ось? частота встречаемости генотипов. АА генотип - синий цвет, АС? красный цвет, СС генотип? зеленый цвет.

Диаграмма 2 ? Ранжирование генотипов в пределах распределения Гаусса. Горизонтальная ось? ? вес жира, в граммах. Вертикальная ось? частота встречаемости генотипов. АА генотип - синий цвет, АС? красный цвет, СС генотип? зеленый цвет.

С помощью дисперсионного анализа были проанализированы данные, по генотипированию кур по признаку масса абдоминального жира, (вес жира (диаграмма 3) и содержание жира (диаграмма 4)).

Диаграмма 3 - Связь генотипов с содержанием жира. Горизонтальная ось? частота встречаемости генотипов АА, АС, СС. Вертикальная ось? содержание жира (вес жира (гр.)/вес (гр.) особи). P = 0,07221.

Диаграмма 4 - Связь генотипов с весом жира (гр.). Горизонтальная ось? частота встречаемости генотипов АА, АС, СС. Вертикальная ось - вес жира в (гр). P = 0,1319.

Медианы всех трех генотипов находятся на разных уровнях, что говорит о незначительных отличиях, возможно для получения более достоверного результата, требуется увеличить выборку и возможно добавить еще группу кур не содержащих абдоминального жира, чтобы нагляднее проследить связь генотипов с депонированием жира.

Выводы

1. В ходе экспериментов нами были обнаружены достоверные различия экспрессии гена HMGA1 в печени «жирных» и «нежирных» бройлеров. Отношение средних значений уровней экспрессии составляет 2,90 (Р ? 0,01) в группах высоким (3,5 ± 0,18%) и низким (1,9 ± 0,56 %) содержанием абдоминального жира. Уровень экспрессии этого гена коррелирует с содержанием абдоминального жира (0,70, P ? 0,01) и массой абдоминального жира (0,70, P ? 0,01).

2. Уровень экспрессии гена PPARG в печени также достоверно различается в группах с различным содержанием и массой абдоминального жира. Отношение средних значений уровней экспрессии составляет 3,34 (P ? 0,01). Коэффициент корреляции равен - 0,55, P ? 0,01.

3. Проведен детальный анализ связи частот генотипов АА, АС, СС по мононуклеотидной замене (SNP) гена FABP2 - 561A>C, с массой абдоминального жира (вес и содержание жира) в группе бройлеров кросса «Хаббард».

Список литературы

1. Atshaves, B. Liver Fatty Acid Binding Protein and Obesity. / Atshaves B., Martin G., Hostetler H., McIntosh A., Kier A., Schroeder F. // J Nutr Biochem. 2010. V. 21. P. 1015-1032.

2. Lopez I.P., Marti A., Milagro F.I., et al. DNA microarray analysis of genes differentially expressed in diet-induced (cafeteria) obese rats // Obesity Research. 2003. V. 11. P. 188-194.

3. Newberry E.P., Xie Y., Kennedy S.M., et al. Protection against Western diet-induced obesity and hepatic steatosis in liver fatty acid-binding protein knockout mice // Hepatology. 2006. V. 44. P. 1191-1205.

4. Meidtner K., Wermter A.K., Hinney A., et al. Association of the melanocortin 4 receptor with feed intake and daily gain in F2 Mangalitsa x Piйtrain pigs // Animal Genetics. 2006. V. 37. P. 245-247.

5. Bruun C.S., Jorgensen C.B., Nielsen V.H., et al. Evaluation of the porcine melanocortin 4 receptor (MC4R) gene as a positional candidate for a fatness QTL in a cross between Landrace and Hampshire // Animal Genetics. 2006. V. 37. P. 359-362.

6. Dubern B., Lubrano-Berthelier C., Mencarelli M., et al. Mutational analysis of the pro-opiomelanocortin gene in French obese children led to the identification of a novel deleterious heterozygous mutation located in the alpha-melanocyte stimulating hormone domain // Pediatric Research. 2008. V. 63. P. 211-216.

7. Hindle A.K., Koury J., Mc. Caffrey T., et al. Dysregulation of gene expression within the peroxisome proliferator activated receptor pathway in morbidly obese patients // Surgical Endoscopy. 2009. V. 23. P. 1292-1297.

8. Qi C., Zhu Y., Reddy J.K. Peroxisome proliferator-activated receptors, coactivators, and downstream targets // Cell Biochemistry and Biophysics. 2000. V. 32. P. 187-204.

9. Okauchi Y., Iwahashi H., Okita K., et al. PGC-1alpha Gly482Ser polymorphism is associated with the plasma adiponectin level in type 2 diabetic men // Endocrine Journal. 2008. V. 55. P. 991-997.

10. Stachowiak M., Szydlowski M., Cieslak J., et al. SNPs in the porcine PPARGC1a gene: interbreed differences and their phenotypic effects // Cellular and Molecular Biology Letters. 2007. V. 12. P. 231-239.

11. Kipfer-Coudreau S., Eberle D., Sahbatou M., et al. Single nucleotide polymorphisms of protein tyrosine phosphatase 1B gene are associated with obesity in morbidly obese French subjects // Diabetologia. 2004. V. 47. P. 1278-1284.

12. Cleynen I., Van de Ven W.J. The HMGA proteins: a myriad of functions (Review) // International Journal of Oncology. 2008. V. 32. P. 289-305.

13. Pierantoni G.M., Battista S., Pentimalli F., et al. A truncated HMGA1 gene induces proliferation of the 3T3-L1 pre-adipocytic cells: a model of human lipomas // Carcinogenesis. 2003. V. 24. P. 1861-1869.

14. Chen H.H., Lee W.J., Fann C.S., et al. Severe obesity is associated with novel single nucleotide polymorphisms of the ESR1 and PPARgamma locus in Han Chinese // American Journal of Clinical Nutrition. 2009. V. 90. P. 255-262.

15. Wang Y., Mu Y., Li H., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma gene: a key regulator of adipocyte differentiation in chickens // Poultry Science. 2008. V. 87. P. 226-232.

16. Leenstra F.R. Effect of age, sex, genotype and environment on fat deposition in broiler chickens - a review // World's Poultry Science Journal. 1986. V. 42 P. 12-25.

17. Hu G., Wang S., Tian J., Chu L., Li H. Epistatic effect between ACACA and FABP2 gene on abdominal fat traits in broilers. // J Genet Genomics. 2010. V. 37(8). P. 505-512.

Размещено на Allbest.ru