Белки вируса африканской чумы свиней

Размещено на http://www.allbest.ru/

1

Научный журнал КубГАУ, №77(03), 2012 год

Белки вируса африканской чумы свиней

Середа Алексей Дмитриевич

д.б.н., профессор

В обзоре литературы представлены данные о структурных, неструктурных, регуляторных белках и ферментах вируса африканской чумы свиней (АЧС). Изменчивость биологических свойств вируса в значительной мере обусловлена белками мультигенных семейств. Сделано предположение, что формирование защиты при АЧС обеспечивается не только мембранными, но и регуляторными белками

Ключевые слова: ВИРУС АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ, СТРУКТУРНЫЕ, ТРАНСМЕМБРАННЫЕ, РЕГУЛЯТОРНЫЕ, ПРОТЕКТИВНЫЕ БЕЛКИ

Введение

АЧС является одной из наиболее значимых и трудноконтролируемых болезней домашних свиней. Неудачи в создании средств специфической профилактики стимулировали проведение фундаментальных исследований структуры и функции его генома и многочисленных белков вируса АЧС, механизмов его высокой генетической и антигенной вариабельности, ускользания от иммунной системы хозяев [64].

Вирус АЧС, как правило, высокопатогенен для домашних свиней, но не является фатальным для аборигенных кистеухих свиней и бородавочников в Африке. Выделены в природе и получены в лабораторных условиях в результате аттенуации в культурах клеток или направленного изменения генома вируса множество авирулентных изолятов, вариантов, штаммов, клонов, которые при экспериментальном заражении не вызывают гибели домашних свиней и в ряде случаев способны формировать защиту от болезни после заражения исходным вирулентным изолятом или штаммом [3].

Очевидно, что существуют материальные носители протективности, которые индуцируют развитие механизмов штаммо- или сероиммунотипоспецифической защиты. Поэтому самым тщательным образом изучаются структурные и неструктурные белки вируса АЧС, определяются их свойства и функции.

Общие сведения о белках вируса АЧС

Сиквенс полного генома изолята вируса АЧС Ba71V свидетельствует, что вирус может кодировать 150 мажорных рамок считывания из 60 или более аминокислот и около 160 - минорных [28]. В инфицированных вирусом АЧС клетках идентифицировано 95 полипептидов с молекулярными массами от 10 до 220 кДа [49, 37]. Исследования электронной и конфокальной микроскопией, генетическими и биохимическими методами анализа позволили идентифицировать в составе вириона не менее 54 полипептидов с м.м. от 10 до 150 кДа, включая те, которые выполняют структурную роль, а также упакованные в вирусный кор ферменты [49].

Эксперименты по радиомаркированию и иммунопреципитации показали, что в инфицированных клетках, по меньшей мере, пятнадцать вирусных полипептидов фосфорилированы и пять, с м.м. 13, 33, 34, 38, 220 кДа, гликозилированы [33, 66]. Методами биоаффинной хроматографии на сорбентах с лектинами различной углеводной специфичности с последующим электрофорезом и иммуноблотингом в лизатах зараженных вирусом АЧС адгезивных клеток (А-клеток) костного мозга свиней (КМС) обнаружено до 19 полипептидов, входящих в состав вирусных гликопротеинов. Маркирование белков инфицированных вирусом АЧС А-клеток КМС ³Н-глюкозамином с последующей иммунопреципитацией гипериммунными сыворотками позволило идентифицировать 14 гликозилированных полипептидов с м.м. 14, 19, 23, 25, 32, 34, 40-42, 54, 60, 69, 76, 110-140, 220 кДа и один ацелированный - с м.м. 14 кДа, в состав которого включались ³Н-пальмитиновая и ³Н-стеариновая кислоты [5]. Имеющиеся ныне данные о белках вириона вируса АЧС представлены в таблице.

Таблица - Белки, кодируемые изолятом BA71V вируса АЧС [28].

Структурные белки

В результате процессинга полипротеина рр220 образуются дискретные интермедиаты от 90 до 55 кДа и зрелые структурные белки р150, р37, р34 и р14, которые вместе с р10 и р14.5 формируют кор вириона с нуклеоидом внутри [41, 52]. У белков вируса АЧС р10 и р14.5 обнаружены нуклеотидные последовательности, гомологичные сигналам ядерной локализации Т-антигена SV40. Установлено, что эти белки обеспечивают активный импорт в цитоплазму синтезированных фрагментов вирусспецифической ДНК из ядра клетки, где происходит инициация ее синтеза [21]. В нуклеоиде локализован сходный с бактериальными гистон-подобными белками продукт гена LMW5-AR, который, вероятно, участвует в упаковке ДНК в вирусные частицы [10].

Кор окружен вирусным капсидом или внутренней вирусной оболочкой, основным компонентом которого является белок р72 [32]. На его долю приходится 35 % массы белков вириона, поэтому рекомбинантный р72 используют в диагностических реакциях [23]. Помимо р72 в состав капсида входят вирусные белки p12, p17 и продукт гена j18L [24, 29].

Вокруг капсида располагается внутренняя мембрана вириона, включающая р22, р54 и р30/32 (фосфопротеин, представленный в гексамерной форме), р12 (димер) и CD2v [24]. Белки р12, р30 и р54 функционально важны в прикреплении ВАЧС к клетке-мишени, р12 находится на поверхности вирусной частицы, формируя связанные дисульфидными мостиками димеры с относительной молекулярной массой 17 кДа. Кодирующий р12 ген содержит последовательности трансмембранного домена и богатого цистеином участка на С-конце, который, вероятно, обеспечивает димеризацию. Сравнение аминокислотной последовательности этого белка у одиннадцати изолятов ВАЧС показало высокую степень его консервативности. Антитела к р54 блокируют связывание вириона с макрофагом, тогда как антитела к р30 ингибируют проникновение вириона в клетку [57]. Внеклеточные вирионы имеют внешнюю оболочку, которую приобретают при почковании через плазматическую мембрану клетки.

В состав вириона входят еще ряд белков, точная локализация и функциональная роль которых исследуется. Это р49, р11.5, белок с м.м. 25-27 кДа, а также р35 и р15, которые образуются в результате процессинга рр62 [31, 48]. вирус африканской чумы белок

Белок CD2v обусловливает гемадсорбирующие свойства вируса и кодируется геном EP402R. CD2v не существенен для вирусной репликации в культурах клеток, у выделенных в природе негемадсорбирующих изолятов ген EP402R отсутствует. Его экстрацеллюлярный домен сходен с белком связывания CD2 хозяина и содержит два Ig-подобных домена и 15 потенциальных сайтов для N-гликозилирования, по сравнению с тремя-четырьмя, имеющимися у CD2 [34, 13, 51]. Цитоплазматический домен CD2v длиной 150 аминокислот не имеет сходства с цитоплазматическим доменом CD2 хозяина. Он варьирует у изолятов из-за наличия различного числа повторов последовательности KPCPPP.

Вирусная частица приобретает CD2v при почковании через плазматическую мембрану клетки [51]. У свиней, инфицированных мутантным штаммом, с делецией CD2v, снижалась виремия и диссеминация вируса. Считают, что CD2v является ответственным за конкурентную ингибицию взаимодействия между лимфоцит/CD2 и макрофаг/LFA3 [34]. Также сообщалось, что внутрицитоплазматическая часть белка CD2v взаимодействует с актинсвязывающим адаптатором SH3P7, который, возможно, играет большую роль в транслокации белков в и из аппарата Гольджи и, таким образом, модулирует белковый транспорт внутри инфицированных клеток [59].

По-видимому, белку CD2v соответствует обнаруженный в оболочке зараженных А-клеток КМС сероиммунотипоспецифический гликопротеин с м.м. 110-140 кДа (ГП 110-140) [5]. На радиоавтографах электрофореграмм иммунопреципитатов белков он проявлялся в виде мажорной гантелеобразной полосы, когда в качестве антигенов брали лизаты ³Н-глюкозаминмеченных А-клеток КМС, зараженных гемадсорбирущими референс-штаммами ВАЧС, а источника антител - гомологичные каждому из них по серотипу, высокоактивные в реакции задержки гемадсорбции (РЗГАд) антисыворотки. ГП 110-140 не обнаруживали, когда использовали негемадсорбирующие штаммы вируса АЧС или не активные в РЗГАд гомологичные антисыворотки. Методом количественной радиоиммунопреципитации с использованием очищенного изоэлектрофокусированием в гранулированном геле ГП 110-140 и высокоактивных в РЗГАд антисывороток установлено, что показатели специфичности связывания препаратов ГП 110-140 в гетерологичных реакциях находятся в пределах 20-45 % от значений в гомологичных реакциях, что свидетельствует о наличии на ГП 110-140 серологически гетерологичных и гомологичных эпитопов [6]. С использованием ингибиторов гликозилирования и тримминга гликопротеинов было продемонстрировано, что около 50 % его массы приходится на углеводные цепи [5]. Они могут являться значительным препятствием для иммунологического распознавания протективно значимых эпитопов, о чем косвенно свидетельствовали данные о повышении процента опосредованного вирусспецифическими ЦТЛ цитолиза зараженных гемадсорбирубщими штаммами вируса АЧС А-клеток КМС в присутствии ингибитора гликозилирования - туникамицина По-видимому, высокоманнозные углеводы ГП 110-140 и определяют феномен гемадсорбции, поскольку обработка зараженных гемадсорбирующим штаммом вируса АЧС А-клеток КМС маннозидазой или внесение в среду культивирования альфа-метилманнопиранозида временно подавляли феномен гемадсорбции [1, 4, 7]. Не следует сбрасывать со счетов и возможные стерические препятствия для клеточно-опосредованных механизмов специфической защиты (ЦТЛ, АЗКЦ), возникающих в результате адсорбции эритроцитов свиньи на циркулирующие в крови лейкоциты зараженных свиней.

Причастным к гемадсорбции оказался и кодируемый геном EP153R белок, сходный с лектином С-типа. Он увеличивает связывание инфицированных вирусом АЧС клеток с эритроцитами, но самостоятельно гемадсорбцию не вызывает. Этот белок несущественен для репродукции вируса в культурах клеток свиных макрофагов in vitro и не влияет на его вирулентность для домашних свиней [27].

Ферменты и регуляторные белки

Вирус АЧС содержит гены, кодирующие ферменты, вовлечённые в нуклеотидный метаболизм (рибонуклеотидредуктаза, тимидинкиназа, тимидилаткиназа, дезоксиуридинтрифосфатаза), репликацию, репарацию и транскрипцию ДНК (ДНК-полимераза, ДНК-лигаза, топоизомераза II, гуанилтрансфераза, метилтрансфераза, РНК-трифосфотаза, нуклеозид дифосфат Х гидролаза (Nudix), три члена суперсемейства II ДНК-геликаз, 8-гидрокси-ГТФ-аза, апуриновая/апиримидиновая эндонуклеаза, ДНК-зависимая-РНК-полимераза). Имеются ферменты посттрансляционной модификации белков (убиквитин-конъюгирующий фермент и серин/треонин протеинкиназа), а также ферменты, участвующие в синтезе изопреновых соединений (пренилтрансферазы) [14-16, 30, 35, 39, 55, 58, 61, 65, 67]. Активной цистеиновой протеазой, способной процессировать рр62 и рр220 в месте последовательности Gly-Gly-X, является вирусспецифическая цистеиновая протеиназа pS273R [46].

Вирус АЧС кодирует вирусный гомолог клеточных убиквитин конъюгированных ферментов (pI215L, UBCs), белков катализирующих промежуточные шаги в процессе, при котором белок убиквитин присоединяется к другим белкам для переноса их в протеосомы с целью деградации или других регуляторных функций. UBC или vUBC1 вируса АЧС активен in vitro, формирует тиоловые связи с активированным убиквитином, который затем переносит конъюгаты к другим субстратам (включая vUBC1), что свидетельствует, что вирус АЧС может управлять убиквитин-зависимыми ответами клетки-хозяина и/или модифицировать вирусные или хозяйские белки [11].

Макрофаги являются высокодифференцированными и неделящимися клетками, они не способны синтезировать нуклеотиды, и, следовательно, имеют ограниченный пул доступных нуклеотидов, особенно низко содержание TTP и dCTP. Предполагается, что присутствие вирусной dUTPазы в цитоплазме инфицированных клеток обеспечивает высокое соотношение TTP/dUTP, чтобы минимизировать неправильное включение урацила в вирусную ДНК. Несмотря на отсутствие вирусного фермента в клеточном ядре, его раннее присутствие в цитоплазме достаточно эффективно, чтобы поддерживать целостность синтезируемой вирусной ДНК [50]. Делеция гена, кодирующего dUTPазу, снижает репликацию вируса в макрофагах [12].

Делеция гена B119L, вовлеченного в вирусный морфогенез как компонент окислительно-восстановительной цепи, снижает репликацию вируса в макрофагах в 100 раз, а также его вирулентность для свиней [22].

Делеция гена тимидинкиназы приводит к снижению репродукции вируса АЧС в свиных макрофагах (0,1-1 % от уровня исходного вируса). Делеционный мутант по ТК-гену вызывал скоротечную лихорадку у свиней и характеризовался пониженными показателями титров виремии и смертности животных. Таким образом, было показано, что ТК-ген необходим вирусу АЧС для репродукции в макрофагах свиньи in vitro и является фактором, влияющим на его вирулентность для свиней [64].

Неструктурный белок pB602L играет важную роль в сборке двадцатигранного капсида вириона. Репрессия pB602L приводит к ингибированию процессинга рр220 и рр62 и снижению образования р72. pB602L рассматривают как молекулярный шейперон, вовлеченный в правильную укладку р72 [54]. Аналогично, репрессия белка pB438L приводит к нарушению формирования двадцатигранной структуры капсида [38]. В отсутствии р17 блокируются ранние стадии вирусного морфогенеза - сборка икосаэдрических частиц [56].

Основная стратегия, используемая вирусом АЧС для уклонения от защиты хозяина, состоит в модуляции сигнальных путей в инфицированных макрофагах, что приводит к интерференции экспрессии определенных генов, играющих роль во врожденном и приобретенном иммунитете [22]. В составе вирусной частицы содержатся белки, которые могут модулировать ответ хозяина на вирусную инфекцию: сходные с Т-клеточным поверхностным белком CD2, IkB, ингибиторами апаоптоза Bc12 и IAP, фактором нейровирулентности ICP34.5, кодируемым Herpes simplex virus, и белком gadd34 [28].

Продукт гена A179L содержит высококонсервативную центральную область, сходную с ингибиторами апоптоза протоонкогеном bсl-2 человека и IAP бакуловирусов [17, 53]. Вероятно, он предотвращает раннюю гибель инфицированных клеток с помощью контроля над активностью каспазы-3, обеспечивая тем самым продуктивный цикл репродукции вируса [26].

Сходную функцию выполняет продукт гена A224L, который взаимодействует с протеолитическим фрагментом каспазы-3, ингибируя активность этой протеазы во время инфекции. В результате не происходит фрагментации хозяйской ДНК, являющейся признаком ядерного апоптоза [18].

Ген вируса АЧС A238L кодирует белок, играющий критическую роль в контроле за иммунными реакциями. Этот белок имеет IкB-подобный домен, который ингибирует транскрипционный фактор NF-кB (nuclear factor kappa B) хозяина [28]. NF-кB регулирует экспрессию генов, вовлеченных в защитные процессы организма, процессы воспаления, выживания клеток, в частности, генов, кодирующих противовоспалительные цитокины, хемоцитокины и антиапоптозные белки, такие как IAP, Bcl2 и Bcl-IX. Члены семейства IкB связывают транскрипционный фактор NF-кB, что приводит к блокированию генов транскрипции и, в частности, ингибируется индукция синтеза противовоспалительных цитокинов [40, 47]. A238L белок имеет на С-терминальном конце домен PxIxIxT, который связывает каталитическую субъединицу кальценейрина -- серинтреонин фосфатазу. Кальценейрин имеет широкий диапазон действия, как активация транскрипционных факторов, модуляция рецепторной активности и регуляция клеточного апоптоза через активацию проапоптозного Bad белка. До некоторой степени активность A238L сходна с таковой, индуцируемой циклоспорином А, иммунодепрессантом, который также связывает кальценейрин и ингибирует фосфатазную активность. Блокирование активации макрофагов приводит к пониженной регуляции NFAT (ядерный фактор активации Т-клеток) и/или транскрипционного фактора Elk1 и, следовательно, предотвращает активацию лимфоцитов. Кроме того, продукция белка A238L в инфицированных макрофагах уменьшает экспрессию циклооксигеназы-2 и продукцию простагландина Е2 [60].

Белки мультигенных семейств

С появлением рестрикционного анализа были предприняты попытки определить участки генома вируса АЧС, ответственные за изменение фенотипа вируса. Сравнение геномов различных изолятов показало, что 85-92 % закодированных белков идентичны. Наиболее вариабельные из них находятся в мультигенных семействах (MGF): MGF 360, MGF 110, MGF 300, MGF 530 (или 505) и MGF 100, содержащих суммарно 31 открытую рамку считывания [36, 42-44, 63]. MGF -110 и 300 локализованы на левом концевом участке, MGF -100 на правом, а MGF -360 и 505 - на обоих концах генома [42, 52, 62]. Приобретение или утрата фрагментов этих мультигенных семейств приводит к вариациям длины геномной ДНК, наблюдаемой между различными изолятами вируса АЧС. Изменение свойств вируса зачастую происходит при изменении количества аминокислот в тандемных повторах. Они были определены у 14 вирусных белков, среди которых CD2v, ДНК полимераза и белок р54 [13, 28].

Концевые участки генома у разных штаммов сильно варьируют по размеру из-за гомологичной и негомологичной рекомбинации, приводящей к делециям генов нескольких мультигенных семейств. Потеря участков вирусного генома может сопровождаться снижением вирулентности, как это, в частности, обнаружено для вирулентного штамма Ф-32 и его авирулентного делеционного мутанта ФК-135 [2]. Сходные изменения наблюдали в геномах изолятов, при их адаптации на культуре фибробластов обезьян [39].

При изучении штаммов вируса АЧС MS16 и BA71V, адаптированных к культурам клеток MS и Vero обнаружено, что они теряют способность реплицироваться в культурах клеток макрофагов свиньи, вызывая их гибель. В экспериментах по спасению маркера, космида, содержащая фрагмент из левого конца генома патогенного изолята Е70, размером 38 тыс. пар оснований, полностью восстанавливала рост MS16 и BA71V в макрофагах свиньи. Этот фрагмент содержал гены MGF-360 и MGF-530, которые копируют существенные для выживания инфицированных макрофагов белки. Показано, что элиминация MGFs 530 и 360 приводит к снижению вирусной репликации в клещах [19, 20].

В правой вариабельной части генома вируса АЧС была картирована открытая рамка считывания DP71L, очень сходная с генами, ответственными за первичный ответ миелоидной дифференциации MyD116 и нейровирулентности вируса простого герпеса ICP34.5. Это сходство предполагает его возможную роль в определении круга чувствительных хозяев при АЧС [45].

Ген I11L, расположенный в правом вариабельном регионе генома высоковирулентного изолята Мalawi Lil-20/1, кодирует последовательность (2,75 тыс. п.о.), которая отсутствует в непатогенном - ВА71V. Однако делеция этого гена не влияет на репродукцию вируса в культуре клеток свиных макрофагов и на вирулентность для домашних свиней [8].

Делеция гена DP96R в изоляте Е70 не влияла на размножение вируса в макрофагах, но уменьшала виремию у инфицированных свиней от 10 до 1000 раз [9].

Заключение

Вирус АЧС чрезвычайно сложно устроен, как в структурном, так и функциональном отношении. Долгое время его классифицировали как члена семейства иридовирусов, паразитов насекомых, морских беспозвоночных, рыб, лягушек, которые эволюционно появились значительно раньше млекопитающих. Поэтому можно предположить, что в ходе эволюции вирусу АЧС удалось помимо мягких клещей приспособиться к размножению на африканских аборигенных свиньях, проводящих часть жизни в норах, где созданы благоприятные условия для длительного и тесного их контакта с кровососущими. Вероятно, что это стало возможным благодаря приобретению новых генов, большинство из которых сосредоточены в мультигенных семействах на левом и правом концах генома вируса АЧС, являются наименее стабильными и наиболее вариабельными, и в то же время существенными для репродукции в макрофагах свиней.

Можно констатировать, что исследования по изучению структурно-функциональной организации белков вируса АЧС пока однозначно не ответили на основной вопрос, какие из них являются протективными. Исходя из локализации белков в оболочке вирионов и клеток, претендентами на участие в протективных реакциях могут быть р22, р30, р54, CD2v. Вполне возможно, что формирование специфической защиты обеспечивается набором белков, которые обеспечивают полноценный противоклеточный иммунитет, обусловленный как цитотоксическими Т-лимфоцитами, так и антителозависимой клеточной цитотоксичностью. Из всех перечисленных белков только ГП 110-140 (или CD2v) обладает свойством сероиммунотиповой специфичности, определяемой по данным РЗГАд и иммунной пробе на «привитых» свиньях. Но все может быть гораздо запутаннее. Не исключено, что для формирования защиты необходимы и обязательны проявления определенных свойств регуляторных белков, способных влиять на синтез медиаторов иммунитета макрофагами и далее лимфоцитами свиней.

Литература

1. Макаров, В.В. Функциональная роль гликозилирования вирусных компонентов/ В.В. Макаров, А.Д. Середа, А.А. Пиря [и др.] // Вопр. вирусологии. - 1992. - № 5-6. - С. 267-270.

2. Селянинов, Ю.О. Вирус африканской чумы свиней: физическое картирование генома штаммов / Ю. О. Селянинов, В.М. Балышев, С.Ж. Цыбанов // Вестн. РАСХН. - 2000. - № 5. - С. 75-76.

3. Середа, А.Д. Антигенное разнообразие вируса африканской чумы свиней / А.Д. Середа, В.И. Балышев // Вопр. вирусологии. - 2011. - № 4. - С. 38-42.

4. Середа, А.Д. Гликопротеины вируса африканской чумы свиней / А.Д. Середа, Е.Г. Анохина, В.В. Макаров // Вопр. вирусологии. - 1994. - Т.39. - № 6. - С. 278-281.

5. Середа, А.Д. Идентификация изолятоспецифического гликополипептида вируса африканской чумы свиней / А.Д. Середа, В.В. Макаров // Ветеринария. - 1992. - № 1. - С. 22-24.

6. Середа, А.Д. Количественное определение антигенного родства гемадсорбирующих штаммов вируса АЧС / А.Д. Середа // Ветеринария. - 2011. - № 6. - С. 26-28.

7. Серологические и физико-химические свойства ГП 110-140 вируса африканской чумы свиней / А.Д. Середа, Е.Г. Анохина, Л.Г. Фугина [и др.] // Ветеринария. - 1993. - Т. 1. - С.26-28.

8. A conserved african swine fever virus right variable region gene, I11L, is non-essential for growth in vitro and virulence in domestic swine / S.B. Kleiboeker, G.F. Kutish G.F., J.G. Neilan [et al.] // J. Gen. Virol. - 1998. - № 79 (Pt 5). - Р. 1189-1195.

9. A nonessential African swine fever virus gene UK is a significant virulence determinant in domestic swine / L. Zsak , E. Caler, Z. Lu [et al.] // J. Virol. - 1998. - № 72. - P. 1028-1035.

10. A structural DNA binding protein of African swine fever virus wish similarity to bacterial histone-like proteins / M.V. Borca, P.M. Irusta, G.F. Kutish [et al.] //Arch. Virol. - 1996. - № 141 (2). - Р. 301-313.

11. A ubiquitin conjugating enzyme encoded by African swine fever virus/ P.M. Hingamp, J.E. Arnold, R.J. Mayer [et al.] // EMBO J. - 1992. - № 11. - P. 361-366.

12. African swine fever virus dUTPase is a highly specific enzyme required for efficient replication in swine macrophages / M. Oliveros, R.Garcia-Escudero, A. Alejo [et al.] // J. Virol. - 1999. - № 73. - P. 8934-8943.

13. African swine fever virus encodes a CD2 homolog responsible for the adhesion of erythrocytes to infected cells / J.M. Rodriguez, R.J. Yanez, F. Almazan [et al.] // J. Virol. - 1993. - № 67. - P. 5312-5320

14. African swine fever virus encodes a gene with extensive homology to type II DNA topoisomerases / S.A. Baylis, L.K. Dixon, S. Vydelingum [et al.] // J. Mol. Biol. - 1992. - № 228(3). - Р. 1003-1010.

15. African swine fever virus encodes a serine protein kinase which is packaged into virions / S.A. Baylis, A.H. Banham, S. Vydelingum [et al.] // J. Virol. - 1993. - № 67 (8). - Р. 4549-4556.

16. African swine fever virus encodes two genes which share significant homology with the two largest subunits of DNA-dependent RNA polymerases / R.J. Yanez, M. Boursnell, M.L. Nogal [et al.] // Nucleic Acids Res. - 1993. - № 21 (10). - Р. 2423-2427.

17. African swine fever virus gene A179L, a viral homologue of bcl-2, protects cells from programmed cell death / A . Brun, C. Rivas, M. Esteban [et al.] // Virology. - 1996. - № 225 (1). - Р. 227-230.

18. African swine fever virus LAP homologue inhibits caspase activation and promotes cell survival in mammalian cells/ M.L. Nogal, G. Buitrago, C. Rodrigues [et al.] // J. Virol. - 2001. - № 75 (6) - Р. 2535-2543.

19. African swine fever virus multigene family 360 and 530 genes are novel macrophage host range determinants / L. Zsak, Z. Lu, T.G. Burrage [et al.] // J. Virol. - 2001. - № 75. - P. 3066-3076.

20. African swine fever virus multigene family 360 genes affect virus replication and generalization of infection in Ornithodoros porcinusticks / T.G. Burrage, Z. Lu, J.G. Neilan [et al.] //J. Virol. - 2004. - № 78. - P. 2445-2453.

21. African swine fever virus p10 protein exhibits nuclear import capacity and accumulates in the nucleus during viral infection/ I. Nunes-Correia, J.M. Rodrнguez, A. Eulбlio [et al.] // Vet. Microbiol. - 2008. - V. 27. - № 130(1-2). - P. 47-59.

22. African swine fever virus proteins involved in evading host defence systems / L.K. Dixon, C.C. Abrams, G. Bowick [et al.] // Vet. Immunol. Immunopathol. - 2004. - № 100. - Р. 117-134.

23. African swine fever virus structural protein p72 contains a conformational neutralizing epitope / M.V. Borca, P. Irusta, C. Carrillo [et al.] // Virology. - 1994. - № 201 (2). - Р. 413-418.

24. Amino acid sequence and structural properties of protein p12, an African swine fever virus attachment protein / А. Alcami, A Angulo, C. Lopez-Otin [et al.] // J. Virol. - 1999. - № 66. - Р. 3860-3868.

25. An african swine fever virus ERV1-ALR homologue, 9GL, affects virion maturation and viral growth in macrophages and viral virulence in swine / Lewis T., Zsak L., Burrage T.G. [et al.] // J. Virol.. - 2000. - № 74. - P. 1275-1285.

26. An african swine fever virus gene with similarity to the proto-oncogene bcl-2 and the Epstein-Barr virus gene BHRF1/ J.G. Neilan, Z. Lu, C.L. Afonso [et al.] // J. Virol. - 1993. - № 67. - Р. 4391-4394.

27. An african swine fever virus ORF with similarity to C-type lectins is non-essential for growth in swine macrophages in vitro and for virus virulence in domestic swine/ J.G. Neilan, M.V. Borca, Z. Lu [et al.] // J. Gen. Virol. - 1999. - № 80 (Pt 10). - Р. 2693-2697.

28. Analysis of the complete nucleotide sequence of African swine fever virus / R. J. Yanez, J. M. Rodrэguez, M. Nogal [et al.] // Virology. - 1995. - № 208. - P. 249-278.

29. Characterization of the African swine fever virion protein j18L / H. Sun, J. Jenson, L.K. Dixon et al. // J. Gen. Virol. - 1996. - № 77. - P. 941-946.

30. Characterization of an african swine fever virus 20-kDa DNA polymerase involved in DNA repair / M. Oliveros, R.J. Yanez, M.L. Salas [et al.] // J. Biol. Chem. - 1997. - № 272 (49). - Р. 30899-30910.

31. Characterization of the African swine fever virus protein p49: a new late structural polypeptide / I. Galindo, E. Vinuela, L.Angel [et al.] // J. Gen. Virol. - 2000. - № 81. - P. 59-65.

32. Cobbold, C. The major structural protein of African swine fever virus, p73, is packaged into large structures, indicative of viral capsid or matrix precursors, on the endoplasmic reticulum / C. Cobbold, T. Wileman // J. Virol. - 1998. - № 72. - P. 5215-5223.

33. del Val, M. Glycosylated components induced in African swine fever (ASF) virus-infected Vero cells/ M. del Val, E.Viсuela // Virus Res. - 1987. - № 7. - Р. 297-308.

34. Deletion of a CD2-like gene, 8-DR, from African swine fever virus affects viral infection in domestic swine/ M.V. Borca, C. Carrillo, L. Zsak [et al.] // J. Virol. - 1998. - №. 72. - P. 2881-2889.

35. DNA polymerase X of african swine fever virus: insertion fidelity on gapped DNA substrates and AP lyase activity support a role in base excision repair of viral DNA/ R. Garcia-Escudero, M. Garcia-Diaz, M.L. Salas [et al.] // J. Mol. Biol. - 2003. - № 326 (5). - Р. 1403-1412.

36. Duplicated genes within the variable right end of the genome of a pathogenic isolate of African swine fever virus / S. Vydelingum, S.A. Baylis, C. Bristow [et al.] // J. Gen. Virol. - 1993. - № 74. - P. 2125-2130.

37. Estevez, A. Two-dimensional analysis of African swine fever virus proteins and proteins induced in infected cells/ A. Estevez, M.I. Marquez., J.V. Costa // Virology. - 1986. - № 152. - P. 192-206.

38. Generation of Filamentous Instead of Icosahedral Particles by Repression of African Swine Fever Virus Structural Protein pB438L/ C. Epifano, J. Krijnse-Locker, M.L. Salas [et al.] // J. Virol. - 2006. - P. 11456-11466.

39. Genetic variation of African swine fever virus: variable regions near the ends of the viral DNA. / R. Blasco, I. de la Vega, F. Almazan [et al.] // Virology. - 1989. - № 173.- P. 251-257.

40. Inhibition of nuclear factor kappaB activation by a virus-encoded IkappaB-like protein / Y. Revilla , M. Callejo, J.M. Rodriguez [et al.] // J. Biol. Chem. - 1998. - № 273. - P. 5405-5411.

41. Mapping and sequence of the gene encoding protein p37, a major structural protein of African swine fever virus/ C. Lopez-Otin, C. Simon, E. Mendez [et al.] // Virus Genes. - 1988. - № 1. - P. 291-303.

42. Multigene families in African swine fever virus: family 110 / J.M. Almendral, F. Almazan, R. Blasco [et al.] // J. Virol. - 1990. - № 64. - Р. 2064-2072.

43. Multigene families in African swine fever virus: family 360/ A. Gonzalez, V. Calvo, F. Almazan [et al.] // J. Virol. - 1990. - № 64. - P. 2073-2081.

44. Multigene families in African swine fever virus: family 505 / J.M. Rodriguez, R.J. Yanez, R. Pan [et al.] // J. Virol. - 1994. - № 68. - P. 2746-2751.

45. Nuclear and nucleolar localization of an african swine fever virus protein, I14L, that is similar to the herpes simplex virus-encoded virulence factor ICP34.5/ L.C. Goatley, M.B. Marron, S.C. Jacobs [et al.] // J. Gen. Virol. - 1999. - № 80 (Pt 3). - Р. 525-535.

46. Polyprotein processing protease of African swine fever virus: purification and biochemical characterization / D. Rubio , A. Alejo, I. Rodriguez [et al.] // J. Virol. - 2003. - № 77. - P. 4444-4448.

47. Powell, P.P. An IKB homolog encoded by African swine fever virus provides a novel mechanism for downregulation of proinflammatory cytokine responses in host macrophages / P.P. Powell, L.K. Dixon, R.M.E. Parkhouse // J. Virol. - 1996. - № 70. - P. 8527-8533.

48. Proteolytic processing in African swine fever virus: evidence for a new structural polyprotein pp62 / C. Simon-Mateo, G. Andres, F. Almazan [et al.] // J. Virol. - 1997. - № 71. - P. 5799-5804.

49. Purifcation and properties of African swine fever virus / A. L. Carrascosa., M. del Val, J. F. Santaren [et al.] // J. Virol. - 1985. - № 54. - P. 337-344.

50. Role of the host cell nucleus in the replication of African swine fever virus DNA/ R. Garcia-Beato, M.L. Salas, E. Viсuela [et al.] // Virology. - 1992. - № 188. - P. 637-649.

51. Ruiz-Gonzalvo, F. Functional and immunological properties of the baculovirus-expressed hemagglutinin of African swine fever virus / F. Ruiz-Gonzalvo, F. Rodrэguez, J. M. Escribano // Virology. - 1996. - № 218. - P. 285-289.

52. Simon-Mateo, C. Polyprotein processing in African swine fever virus: a novel gene expression strategy for a DNA virus / C. Simon-Mateo, G. Andres, E. Viсuela // EMBO J. - 1993. - № 12. - P. 2977-2987.

53. The african swine fever virus IAP homolog is a late structural polypeptide/ M.R. Chacon, F. Almazan, M. Nogal [et al.] // J. Virol. - 1995.- № 214 (2). - P.670-674.

54. The African Swine Fever Virus Nonstructural Protein pB602L Is Required for Formation of the Icosahedral Capsid of the Virus Particle/ C. Epifano, J. Krijnse-Locker, M. L. S. Salas [et al.] // J. Virol. - 2006. - P. 12260-12270.

55. The african swine fever virus prenyltransferase is an integral membrane trans-geranylgeranyl-diphosphate synthase / A .Alejo, G. Andres, E. Vinuela [et al.] // J. Biol. Chem. - 1999. - № 274(25). - Р. 18033-18039.

56. The African Swine Fever Virus Protein p17 is Essential for the Progression of the Viral Membrane Precursors towards Icosahedral Intermediates / C. Suбrez, J. Gutiйrrez-Berzal, G. Andrйs [et al.] // J. Virol. - 2010; DOI: 10.1128/JVI.00600-10.

57. The African Swine Fever Virus Proteins p54 and p30 Are Involved in Two Distinct Steps of Virus Attachment and Both Contribute to the Antibody-Mediated Protective Immune Response/ P. Gomez-Puertas, F. Rodrэguez, J. M. Oviedo [et al.] // Virology. - 1998. - № 243. - P. 461-471.

58. The african swine fever virus thymidine kinase gene is required for efficient replication in swine macrophages and for virulence in swine/ D.M. Moore, L.Zsak, J.G. Neilan [et al.] // J. Virol. - 1998. - № 72 (12). - Р. 10310-10315.

59. The CD2v protein of African swine fever virus interacts with the actin-binding adaptor protein SH3P7 / P.C. L. Kay-Jackson, C. Goatley, L. Cox [et al.] // J. Gen. Virol. - 2004. - № 85. - P.119-130.

60. The viral protein A238L inhibits cyclooxygenase-2 expression through a nuclear factor of activated T cell-dependent transactivation pathway / A.G. Granja, M.L. Nogal, C. Hurtado [et al.] // J. Biol. Chem. - 2004. - № 279. - P. 53736-53746.

61. Three african swine fever virus genes encoding pro-teins with homology to putative helicases of vaccinia virus / S.A. Baylis, S.R.F. Twigg, S. Vydelingum [et al.] // J. Gen. Virol. - 1993. - № 74. - Р. 1969-1974.

62. Transcriptional analysis of multigene family 110 of african swine fever virus / F. Almazan, J.M. Rodriguez, G. Andres [et al.] // J. Virol. - 1992. - № 66. - Р. 6655-6667.

63. Two novel multigene families, 530 and 300, in the terminal variable regions of african swine fever virus genome / T. Yozawa, G.F. Kutish, C.L. Afonso [et al.] // Virology. - 1994. - № 202 (2). - Р. 997-1002.

64. Tulman, E.R. African swine fever virus / E.R. Tulman , G.A. Delhon, B.K. Ku // Curr. top. microbial. and immunol. - 2009. - № 328. - P. 43-87.

65. Two putative african swine fever virus helicases similar to yeast 'DEAH' pre-mRNA processing proteins and vaccinia virus ATPases D11L and D6R/ R.J. Yanez, J.M. Rodriguez, M. Boursnell [et al.] // Gene. - 1993. - № 134 (2). - Р. 161-174.

66. Urzainqui, A. Proteins synthesized in African swine fever virus infected cells analyzed by two-dimensional gel electrophoresis/ A. Urzainqui, E. Tabares, L. Carrasco // Virology. - 1987. - № 160. - P. 286-291.

67. Yanez, R.J. African swine fever virus encodes a DNA ligase / R.J. Yanez, E. Vinuela // Virology. - 1993. - № 193 (1). - Р. 531-536.

Размещено на Allbest.ru