Получение пунктатов кроветворных органов

Размещено на http://www.allbest.ru/

"Получение пунктатов кроветворных органов"

Выполнила: Маймакова Зауре

Введение

Костномозговое кроветворение у человека до конца XIX в. изучали в основном па мазках костного мозга больных, умерших от различных заболеваний крови и кроветворных органов. Впервые прижизненное изучение костного мозга произвел русский ученый М. Афанасьев, резекцировавший для этой цели кусочки ребра у собаки. Он впервые применил подсчет ядерных элементов в единице объема (1 мкл) костного мозга для суждения о состоянии его функции.

Исходя из того, что у взрослого человека активный костный мозг содержится в губчатом веществе плоских костей, проф. А. Зейфарт применил метод получения костномозгового вещества путем трепанации грудной кости и ребер кюветкой. Такой метод позволял получать костный мозг без примеси крови. Ho сложность методики, связанная со значительным травмированием больных и последующим кровотечением из губчатой части кости, затруднила использование его в клинической практике. Нужен был простой и безопасный метод получения костного мозга. Этим требованиям отвечал предложенный академиком М.И. Арникиным в 1927 г. оригинальный метод прижизненной пункции грудной кости иглой Бира. Пункция, по мнению автора, технически проста и наиболее удобна, полученный пунктат является показателем изменении не только костного мозга грудины, но и активного костного мозга позвонков и ребер, бедра, большеберцовой кости. Недостаток этого метода - наличие в костномозговом пунктате примеси периферической крови, опасность прохождения иглой через заднюю компактную пласт пику грудины, неудачи пункции при склерозе, аплазии и т. д. В связи с чтим И.А. Кассирский внес техническое усовершенствование мглы, в которой предохранительный щиток ограничивает введение иглы в костномозговую полость дальше выбираемого расстояния. При этом исключается опасность осложнений. Игла выпускается медицинской промышленностью, се успешно применяют в клинической практике, и она может быть использована для пункции грудной кости мелких животных. В ветеринарии прижизненное изучение костного мозга начато значительно позже. Каждый исследователь, изучающий костномозговой пунктат у определенного вида животных (лошадей, овец, крупного рогатого скота), разрабатывал свою методику (с рассечением кожи и трепанацией кости у лошадей, пробным троакаром у овец, модифицированными иглами Бира или Боброва у лошадей, при помочит дрели и др.).

Инструментарий для пункции костного мозга. Несовершенство инструментария для получения пунктата костного мозга, рекомендация зачастую повала животного или местной анестезии, а также неопределенность места пункции ограничили использование существующих методов в практике. В 1962 г. Г.А. Симоняном и Г.С. Петровским был сконструирован более удобный и безопасный инструментарий и разработана доступная в производственных условиях методика прижизненной костномозговой пункции у крупного рогатого скота. Предложенный инструмент изготовлен из нержавеющей стали, которая хромирована или покрыта никелем, состоит из рукоятки и ввинчивающегося мандрена с собственной иглой (стальная трубка диаметром 2 мм). Ввиду разной толщины жировой прослойки грудной кости к инструменту прилагаются мандрены с собственно иглой трех размеров. Эта позволяет использовать инструмент для получения пунктата костного мозга у разных видов животных. Особенность данного инструмента заключается в том, что конец собственно иглы достигают канюли вставленного шприца, куда непосредственно попадает пунктат. Поэтому одним инструментом можно получить пунктат у нескольких животных, меняя после каждой пункции только стерильные собственно иглы. Данный инструмент выпускается зооветеринарной промышленностью и находит свое применение для пункции как костного мозга у разных видов животных, так и селезенки, лимфатических узлов и печени.

Способ прижизненного забора костного мозга у животных

Изобретение относится к области животноводства и ветеринарии. Способ заключается в том, что осуществляют нейролептоаналгезию, помещают животное в боковое положение и фиксируют его с обеспечением свободного доступа к внутренней поверхности голени, на которой готовят операционное поле в области дистального отдела большеберцовой кости в средней трети диафиза. После обнажения большеберцовой кости выполняют трепанацию, формируют отверстие через первый кортикал, не нарушая целостности второго, отбирают костный мозг, ушивают операционную рану послойно и дезинфицируют наружный шов. Животные легко переносят операцию и сохраняют высокий уровень продуктивности.

Авторы патента:

Мамолина Юлия Викторовна (RU)

Васильев Алексей Алексеевич (RU)

Забелина Маргарита Васильевна (RU)

Коробов Александр Петрович (RU)

Изобретение относится к области животноводства и ветеринарии, может быть использовано для морфологических, гистологических, цитологических и других исследований.

Одной из причин контроля костного мозга у животных является изучение влияния уровня кормления и окружающих условий на продуктивность сельскохозяйственных животных. Параметрами, информирующими о полноценности питания и здоровье животных, являются показатели крови и костного мозга. Костно-мозговое кроветворение - одна из наиболее рано возникающих функций организма. Согласно унитарной теории кроветворения все форменные элементы крови имеют общее происхождение. Их родоначальником является крупная клетка - гемоцитобласт. Во внутриутробный период образование и развитие эритроцитов, зернистых лейкоцитов и мегакариоцитов происходит в печени. В конце внутриутробного периода кроветворение в печени прекращается и единственным органом образования этих клеток становится костный мозг. Качество кормов и кормление животных в целом, а также экологические аспекты ведения животноводства требуют проводить детальное изучение организма животного, в частности его иммунной системы при проведении комплексных исследований. Поэтому изучение морфологического состава костного мозга крайне необходимо и важно, так как способствует диагностике и прогнозированию последовательного формирования иммунного статуса организма животных. Знание возрастных иммунобиологических особенностей животных помогает в профилактике болезней и повышении продуктивности животных за счет организации научно-обоснованного кормления и экологического благополучия среды обитания.

Известные в качестве изобретения способы забора костного мозга из туш животных с разным привлечением тех или иных технических средств не предъявляют требований к малой травматичности донора и не пригодны для применения к животным, которым следует жить, развиваться и быть и в последующем объектами подобных экспериментов. Поэтому из всех способов отбора проб они исключаются как неподходящие аналоги для использования в материале данной заявки.

Известен также способ прижизненного получения трепаната костного мозга из грудной кости крупных животных [Светличный С.И. - Ветеринария, 1976, №2, с.77-78 и Светличный С.И. "Модификации иглы-трепана и некоторые приемы получения костного мозга" - приложение №1]. Прижизненное получение костного мозга производится с целью определения функциональной способности кроветворных органов. В настоящее время методика получения костного мозга разработана для всех животных. В основу положен принцип стернальной пункции по М.И. Аринкину (1927), разработанный им для получения костного мозга у человека. Для получения костного мозга у крупного рогатого скота и овец А.М. Колесов (1933) использовал троакар. После прокола грудины стилет извлекался и костный мозг получали через инъекционную иглу, вставляемую в гильзу троакара. А.В. Васильев (1939) костный мозг у лошади получал с помощью стернального прокола иглой Вира. А.И. Федотов (1941) для получения костного мозга у лошади использовал обычную инъекционную иглу, укрепленную другой иглой большего диаметра. С.А. Хрусталев (1939) и С.И. Ламкин (1940) разработали методику получения костного мозга у коз, С.И. Смирнов (1943)--у свиней, М.С. Шкаева (1943)--у кур и т. д. Все они использовали для получения костного мозга инъекционные иглы, внося в них те или иные конструктивные усовершенствования, придающие игле прочность и предотвращающие скольжение по ней пальцев во время прокола.

Стернальная пункция у крупных животных производится в стоячем положении, а у коз, овец и свиней в боковом или спинном положении. При проведении стернальной пункции требуется соответствующая фиксация животных. Пункция производится без анестезии. Шерсть в области грудины выстригается или выбривается безопасной бритвой. Грязная кожа вымывается водой с мылом, а чистая протирается спиртом, а затем смазывается йодной настойкой. Место пункции определяется по гребню грудины и ребрам. Прокол делается кпереди от мечевидного отростка и в сторону от гребня грудины. Первые 3--4 сегмента грудины от мечевидного отростка прокалываются иглой сравнительно легко. Передние сегменты иглой не прокалываются.

Прокол кожи, мышц и надкостницы вызывает незначительную болезненность и беспокойство животного. Костная пластинка грудины прокалывается с некоторым усилием, а затем, когда игла проникает в губчатую ткань, напряжение уменьшается, но ощущения полости нет. У мелких животных проникновение иглы в губчатую ткань ощущается совершенно ясно. Прокол грудины у молодняка производится очень легко, а у старых животных требует некоторого усилия.

Когда игла войдет в спонгиозную часть, мандрен из иглы вынимается и с помощью шприца производится насасывание костного мозга. По окончании получения костного мозга, игла вместе со шприцем извлекается и кожа дезинфицируется настойкой иода. Стернальная пункция должна проводиться строго асептично. мозг костный пунктат

Клеточный состав костного мозга здоровых животных приведен в табл.1.

Большинство исследователей, дозировало костный мозг с помощью шприца. С.И. Смирнов предложил для дозирования специальную трубочку, с помощью которой костный мозг набирается в количестве 1 мм 3. А.С. Калинин и М.И. Маточкин дозируют костный мозг иглой. В последнем случае костномозгового вещества получается меньше, чем у С.И. Смирнова, и мазки получаются более насыщенными клеточными элементами.

Костномозговой пунктат представляет собой густую, вязкую красную жидкость, в которой находится не чистый костный мозг, а его элементы, частично смешанные с форменными элементами циркулирующей крови. Чем меньшее количество получается пунктата, тем меньше бывает примеси циркулирующей крови, хотя прямая зависимость получается не во всех случаях. Все зависит от места, из которого получается пунктат.

Для предотвращения свертывания пунктата необходимо иглу и шприц предварительно овлажнить 2,1% раствора лимоннокислого натрия.

Первые 2--3 капли пунктата могут быть использованы для посева на питательные среды. Остальная часть идет для приготовления мазков и подсчета форменных элементов. Мазки из костномозгового пунктата фиксируются и окрашиваются так же, как и мазки циркулирующей крови.

Однако данный способ травматичен и сложен в силу большого объема хирургии грудного отдела животного, требует длительного времени выздоровления животного, которое и после выздоровления не может быть сравнимым со здоровыми животными, и поэтому целесообразнее таких животных подвергнуть убою. Последнее не желательно, если здоровые животные участвуют в научно-хозяйственном опыте по изучению влияния кормления на продуктивность животных в течение длительного времени, находясь в естественных экологических условиях пастбищ или ферм. При исследовании вопросов, связанных с новыми кормами, новыми их соотношениями, а также с введением в рацион биологически активных добавок и наблюдением за их влиянием на уровень продуктивности животных в процессе их жизни, необходимо, чтобы животные были клинически здоровыми как можно дольше, чтобы на протяжении длительных исследований у них можно было взять несколько проб костного мозга, например у свиней, с периодичностью 2 месяца. Взятие проб костного мозга из грудной кости несколько раз за жизнь у животных проблематично, потому что с возрастом костная ткань твердеет, происходит увеличение мышечной массы и избыточное развитие подкожно-жировой клетчатки, которая осложняет доступ к кости и попадает в пробу при отборе костного мозга.

Исследование костномозгового пунктата

Чтобы определить процентное соотношение клеточных элементов в костном мозге (вывести миелограмму), подсчитывают 500-1000 клеток (лучше в той части, где мазок не очень густой). Количество гемоглобина определяют по общепринятой методике. Чтобы подсчитать эритроциты в 1·10-3 мл пробы в пробирку, содержащую 4 мл изотонического раствора хлорида натрия, пипеткой от гемометра Сали добавляют 0,2 мл пунктата (разведение 1:200). Чтобы определить количество миелокариоцитов (всех ядросодержащих клеток стернального пунктата) в другую пробирку с 2 мл жидкости Тюрка вносят 0,02 мл пунктата (разведение 1:100). Клетки подсчитывают обычным методом в счетной камере Горяева.

Исследование морфологического состава периферической крови не всегда в достаточной мере отражает характер изменений в органах гемопоэза. Это имеет отношение к дифференциальной диагностике гемобластозов. В частности, при алейкемических вариантах гемобластозов, когда клеточный состав крови не изменен или эти изменения незначительны, в костном мозге находят существенные изменения.

В костном мозге находятся стволовые клетки, из которых развиваются все виды форменных элементов крови. Исследование костного мозга позволяет определить его функциональное состояние.

Усиление костномозгового кроветворения проявляется поступлением в кровь незрелых клеток и возникает при кровопотерях, повышенном разрушении эритроцитов, нарушении газообмена, инфекциях, инвазиях и отравлениях.

Понижение костномозгового кроветворения возникает под воздействием физико-химических факторов, токсинов и характеризуется уменьшением количества клеток миелопоэза (эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов) или снижением числа какого-либо одного вида их.

Извращение костномозгового кроветворения связано с инфекциями и интоксикациями и выражается появлением в крови клеток измененного вида. При исследовании костномозгового пунктата выявляют нарушения кроветворения на основании определения соотношения между количеством клеток разных видов и их зрелостью.

В пунктате устанавливают количество эритроцитов, миелокариоцитов (ядросодержащих клеток) и гемоглобина, а в мазках (после окраски по Паппенгейму) подсчитывают миелограмму.

При анализе миелограммы определяют количественные сдвиги между клетками разной степени зрелости эритропоэза и лейкопоэза, изменение отношения между количеством элементов лейкопоэза и числом ядерных форм эритропоэза.

Увеличение количества клеток костного мозга за счет эритроцитарных элементов свидетельствует о гиперплазии эритроцитарного ростка, что может быть обусловлено кровопотерями, гемолизом, В 12-дефицитной анемией. Если находят одновременное уменьшение количества клеток эритро- и лейкопоэза, то соотношение между ними может остаться без изменения, что бывает при гипопластических и апластических анемиях. При гиперплазии миелоидных элементов костного мозга отмечают выраженный сдвиг лейкоэритробластического соотношения в сторону лейкоцитарного ростка (миелопролиферативные процессы), что может быть при инфекциях, интоксикациях, гемобластозах.

Получение пунктата селезенки и лимфатических узлов.

Для получения пунктата из поверхностных лимфатических узлов и селезенки применяют иглы Симоняна - Петровского или Боброва, с хорошо подогнанными мандренами. Иглу и 10-граммовый шприц с притертым поршнем стерилизуют путем кипячения с последующим тщательным обезвоживанием. Пользование сухими шприцем и иглой исключает отрицательное воздействие влаги па тканевые клетки полученного пунктата.

Прокол производят острой иглой с мандреном, затем извлекают мандрен, соединяют иглу со шприцем и аспирируют пунктат. Нельзя допускать прокол одной и той же иглой двух различных органов. Нарушаются правила асептики, оставшиеся на стенках просвета иглы клетки первого органа могут быть примешаны к клеточному содержимому второго пунктируемого органа. Место прокола кожи выстригают и обрабатывают 5%-ным раствором настойки йода.

При пункции подкожного лимфатического узла его фиксируют левой рукой, правой прокалывают оттянутую кожу и вводят иглу в ткань лимфоузла. Если игла проникла в лимфоузел, то при движении иглой ощущается смещение узла. В противном случае лимфоузел остается неподвижным. Круговыми движениями кончика иглы как бы разминают паренхиму лимфоузла, обрывают кусочки ткани, что обеспечивает аспирацию необходимого количества пунктата. Для исследования достаточно в просвет иглы насасывать незначительное количество пунктата, разъединить его со шприцем, а затем извлечь иглу из лимфоузла. В противном случае содержимое иглы разбрызгивается по стейке шприца, делая невозможным перенесение пунктата на предметное стекло.

Полученный пунктат имеет желтоватый или кровянистый цвет. Клетки органа или новообразования, разбавленные кровью, хорошо сохраняют свою тонкую структуру и доступны цитологическому изучению.

Пункция сильно увеличенной селезенки не безопасна. Беспокойное поведение животного, смещение селезенки при пункции, использование толстой иглы могут привесит к разрыву капсулы органа или крупного сосуда с последующим кровотечением и легальным исходом. Однако при соблюдении определенных правил взятие пунктата селезенки осложнений не вызывает.

Пункцию селезенки производят с левой стороны животного в области последнего межреберья или непосредственно за последним ребром, отступив на 5--8 см вниз от поперечных отростков позвонков. После прокола кожи иглу вводят на 2--4 см по направлению к правому локтю и шприцем быстро аспирируют пульпу селезенки.

После извлечения иглы ее вновь насаживают па шприц и обратным движением поршня наносят содержимое на предметное стекло. Чем меньше примеси крови, тем ценнее пунктат. При наличии примеси крови, чтобы избежать ее свертывания, быстро готовят мазки обычным методом приготовления препаратов крови. Если полученная масса густая, то ее осторожно размазывают топким слоем по предметному стеклу, предохраняя молодые клетки от раздавливания и деформации. Можно готовить препараты и по принципу отпечатков, прикладывая пинцетом или ватным тампоном комочки ткани на предметное стекло. Аккуратное приготовление препаратов способствует сохранению целостности клеточных элементов. При значительной примеси крови содержимое шприца наносят парафинированное часовое стекло, сверху жидкую часть отсасывают, а из осевших на дне маленьких белесоватых крупинок готовят мазки.

Приготовленные мазки высушивают па воздухе, фиксируют и окрашивают по Паппенгейму. Микроскопическое исследование препаратов проводят с помощью иммерсионной системы. Для определения процентного соотношения клеточных элементов в мазках селезенки (спленограмма) и лимфатических узлах (аденограмма) подсчитывают по 200--500 клеток в зависимости от качества препарата и разновидности клеточных элементов.

Заключение

Исследование морфологического состава периферической крови не всегда в достаточной мере отражает характер изменений в органах гемопоэза. Это имеет отношение к дифференциальной диагностике гемобластозов. В частности, при алейкемических вариантах гемобластозов, когда клеточный состав крови не изменен или эти изменения незначительны, в костном мозге находят существенные изменения.

В костном мозге находятся стволовые клетки, из которых развиваются все виды форменных элементов крови. Исследование костного мозга позволяет определить его функциональное состояние.

Усиление костномозгового кроветворения проявляется поступлением в кровь незрелых клеток и возникает при кровопотерях, повышенном разрушении эритроцитов, нарушении газообмена, инфекциях, инвазиях и отравлениях.

Понижение костномозгового кроветворения возникает под воздействием физико-химических факторов, токсинов и характеризуется уменьшением количества клеток миелопоэза (эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов) или снижением числа какого-либо одного вида их.

Извращение костномозгового кроветворения связано с инфекциями и интоксикациями и выражается появлением в крови клеток измененного вида. При исследовании костномозгового пунктата выявляют нарушения кроветворения на основании определения соотношения между количеством клеток разных видов и их зрелостью.

В пунктате устанавливают количество эритроцитов, миелокариоцитов (ядросодержащих клеток) и гемоглобина, а в мазках (после окраски по Паппенгейму) подсчитывают миелограмму.

При анализе миелограммы определяют количественные сдвиги между клетками разной степени зрелости эритропоэза и лейкопоэза, изменение отношения между количеством элементов лейкопоэза и числом ядерных форм эритропоэза.

Увеличение количества клеток костного мозга за счет эритроцитарных элементов свидетельствует о гиперплазии эритроцитарного ростка, что может быть обусловлено кровопотерями, гемолизом, В 12-дефицитной анемией. Если находят одновременное уменьшение количества клеток эритро- и лейкопоэза, то соотношение между ними может остаться без изменения, что бывает при гипопластических и апластических анемиях. При гиперплазии миелоидных элементов костного мозга отмечают выраженный сдвиг лейкоэритробластического соотношения в сторону лейкоцитарного ростка (миелопролиферативные процессы), что может быть при инфекциях, интоксикациях, гемобластозах.

Список использованной литературы

1. http://www.findpatent.ru/patent/229/2290093.html © FindPatent.ru - патентный поиск, 2012-2017

2. http://veterinarua.ru/svinovodstvo/102-diagnostika-vnutrennikh-boleznej-zhivotnykh-vasilev-a-v-1956/1886-tekhnika-polucheniya-krovi-i-kostnogo-mozga.html

3. http://handcent.ru/veterinarnaya-gematologiya/3189-punkciya-krovetvornyh-organov-tehnika-i-instrumentariy.html

4. http://veterinarua.ru/svinovodstvo/102-diagnostika-vnutrennikh-boleznej-zhivotnykh-vasilev-a-v-1956/1933-issledovanie-selezenki.html

5. Лаура Блэквуд. Костный мозг - аспирация и биопсия // Focus. - 1998. - № 1.

6. Практикум по клинической диагностике болезней животных: Учеб. пособие. Под ред. Е.С. Воронина. - М.: КолосС, 2003.

7. Уша Б.В., Беляков И.И., Кушкарев Ф.П. Клиническая диагностика внутренних незаразных болезней животных. - М.: Колос С. - 487 с.: ил.

Размещено на Allbest.ru