Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят

Размещено на http://www.allbest.ru/

Оглавление

Введение

1. Краткое определение болезни

2. Характеристика вируса-возбудителя

3. Данные

4. Дополнительные сведения о признаках болезни

5. Дифференциальная диагностика болезни

6. Патологический материал. Его отбор и транспортировка

7. Подготовка материала для вирусологического исследования

8. Лабораторная диагностика

9. Лечение

10. Ветеринарно-санитарная экспертиза и оценка продуктов после убоя

Список литературы



Введение

На свиноферме заболели поросята-сосуны и отъемыши. Клинические признаки: угнетение, сонливость, повышение температуры тела до41-42С,слизистые истечения из носа и глаз, кашель, одышка.

Внешне здоровые поросята внезапно впадают в состояние возбуждения, совершают манежные движения, судорожно двигают конечностями, появляются судороги шейных и жевательных мышц, затем паралич конечностей. Болезнь длится от нескольких часов до 3-х суток. Гибель среди поросят до 60%.

У взрослых свиней (некоторых) отмечались признаки ринита и конъюнктивита, повышение температуры тела. Через 3-4 дня все взрослые свиньи выздоравливали.

На вскрытии павших поросят установлено: слизистые оболочки носовой полости и гортани гиперемированы, отечны ,отек легких, очаги острой катаральной бронхопневмонии, катаральный гастроэнтерит. Оболочки головного и спинного мозга воспалены, с кровоизлияниями.



1. Краткое определение болезни

На основании приведенных данных можно предполагать наличие болезни Ауески.

Болезнь Ауески (лат. Morbus Aujeszky,англ. Pseudorabies, Aujeszky's Disease), псевдобешенство, инфекционный бульбарный паралич, инфекционный менингоэнцефалит -- остро протекающая болезнь многих видов домашних и диких животных, проявляющаяся расстройством ЦНС, сильным зудом и расчёсами (у всех животных, кроме свиней и пушных зверей). У свиней болезнь обычно протекает в виде лихорадки, а у молодняка сопровождается судорогами, параличами, гибелью животных. Зафиксировано заболевание человека.

Историческая справка. Болезнь Ауески впервые описана в 1813 г. в США как заболевание телят, а в 1902 г. венгерский ученый А. Ауески установил небактериальную природу возбудителя этого заболевания и дифференцировал её от бешенства, определенного позже как герпесвирус. Заболевание встречается на всех континентах, протекает в форме энзоотии, и наибольший экономический ущерб приносит свиноводству и пушному звероводству. Открытие Ауески было подтверждено другими венгерскими учеными-- Ф. Гутирой и Й. Мареком, которые описали болезнь у собак и кошек. В 1938 г. на Международном ветеринарном конгрессе было принято решение назвать болезнь в честь ее первооткрывателя. В России впервые болезнь была описана у крупного рогатого скота (1909--1911), а затем у овец (1915).

В настоящее время болезнь Ауески встречается во всех частях света. В России широкого распространения не получила, но регистрируется повсеместно. Экономический ущерб складывается из прямого убытка от гибели животных, вынужденного убоя, выбраковки туш, снижения живой массы больных животных, абортов, а также из огромных затрат на обеззараживание кожи, мяса, лечение, профилактическую вакцинацию, вынужденную дезинфекцию, выполнение карантинных мероприятий. [10]
Вирус устойчив во внешней среде: солнечные лучи инактивируют за 5-6ч; в разлагающихся трупах сохраняются 10-28 дней; в мумифицированных трупах-до года. Дезинфицирующие средства-осветленный раствор хлорной извести, содержащий 3% активного хлора, 3%-ный едкий натр убивает вирус за 5-12мин.

Источник возбудителя больные и переболевшие животные, выделяющие возбудителя с мочой, молоком, истечениями из глаз, носа, влагалища, и их трупы. Основной путь распространения- алиментарный, возможно заражение через кожу, видимый слизистые оболочки, внутриутробно. Не исключает возможность заражения через дыхательные пути.[1, 6]

2. Характеристика вируса-возбудителя

Вирус относится к семейству Herpesviridae, содержит двуспиральный линейный ДНК-нуклеоид. Нуклеоид окружен икосаэдрическим капсидом диаметром 100--110 нм, содержащим 162 частично-полых капсомера. Капсид покрыт содержащей липиды оболочкой и наружной оболочкой с выступами (шипами). Диаметр вириона 150--180 нм. В составе вириона определено до 32 белков. (Рис.1) Установлена роль отдельных белков в вирулентности и индукции иммунного ответа. [1]

Вирус обуславливает образование в организме вируснейтрализующих, преципитирующих, комплементсвязующих антител. Вирус обладает нейротропизмом, пневмотроизмом, миотропизмом и пантропизмом. Он выявляется в верхних дыхательных путях, легких, головном мозге, селезенке, печени, почках, миндалинах, лимфатических узлах, мышцах и коже, больных и погибших животных.

Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Вирус чувствителен к эфиру и хлороформу. Быстро (за 15--20 мин) инактивируется дезинфицирующими растворами: горячим 3%-ным раствором гидроксида натрия, 20%-ной взвесью свежегашеной извести, 1%-ным раствором формальдегида. Растворы креолина и карболовой кислоты обладают слабым вирулицидным действием. В навозной жиже летом вирус сохраняет активность в течение 1 месяца, зимой -- около 3 месяцев, в гниющих трупах -- до 1 месяца. Ультрафиолетовые лучи обезвреживают ВБА за 1 мин.

Антигенная активность вируса. В оболочке вируса болезни Ауески различают 3 основных гликопротеина, на которые при инъекции свиньям образуются антитела. Их обнаруживают в PH, РСК и РДП. Комплементсвязывающие антитела появляются в сыворотке крови через 3 дня после заражения, и титр их удерживается до 30-- 40 дней. Вируснейтрализующие антитела появляются на 5--7-й день, количество их достигает максимума через 3--4 недель, титр их сохраняется до 1,5 лет.

Антигенная вариабельность. Не установлена. Установлено антигенное родство вируса болезни Ауески с вирусом простого герпеса.

Гемагглютинирующие свойства. Гемагглютинин вируса сорбируется на мышиных эритроцитах при температуре 4, 22 и 37 °С.

Культивирование вируса. Вирус болезни Ауески успешно пассируется на кроликах, молодых белых мышах, в первичных культурах клеток куриных эмбрионов, почек крупного рогатого скота, свиней, перевиваемых клетках HeLa, КЭМ-Ла, L, ПЭС с образованием некротических фокусов -- бляшек. Наиболее чувствительна к вирусу болезни Ауески первичная культура клеток куриных эмбрионов, в которой вирус вызывает ЦПЭ с округлением клеток, образованием гигантских клеток и телец-включений. После предварительной адаптации вирус удается культивировать в куриных эмбрионах при инокуляции на ХАО. Эмбрионы гибнут через 24--96 ч, на ХАО наблюдаются специфические фокусы поражения. [9]



3. Данные

Эпизоотические данные, позволяющие предположить наличие болезни Ауески, болеющие животные -поросята, распространение по всей свиноферме, выявлен падеж в 60% поросят.

Клинические признаки, позволяющие предположить наличие псевдобешенства. Инкубационный период болезни колеблется от1,5сут до 15-20 дней,что зависит от метода заражения, вирулентности вируса и устойчивости животного. Течение болезни всегда острое. У свиней болезнь Ауески не сопровождается зудом. Клинические признаки у свиней в зависимости от возраста проявляются по разному. Более злокачественно болезнь протекает у поросят-сосунов и отъемышей. У поросят до 10 дней болезнь протекает в форме острой септицемии. Заражение поросят происходит внутриутробно или же сразу после рождения от свиноматок через инфицированное молоко. Наблюдается повышение температуры тела до 41?С и выше градусов, поросята не могут двигаться, сосать, происходит спазм глотки, икота, слюнотечение, больные поросята не издают никаких звуков. Смерть поросят наступает через 4-12 часов, иногда через сутки.

У поросят -сосунов старше 10-дневного возраста, поросят-отъемышей и молодых подсвинков болезнь Ауески протекает с поражением центральной нервной системы, проявляясь судорогами, эпилептическими припадками со скрежетом зубами, слюнотечением, выделением пены из рта, прогрессирующей афонией. У поросят в возрасте от 10 дней до 3-4месяцев заболевание начинается с повышения температуры тела до 41-42градусов, угнетения, сонливости и слабой подвижности. В дальнейшем у поросят появляются признаки поражения центральной нервной системы. В зависимости от того какие процессы преобладают в центральной нервной системе -- возбуждение или торможение принято различать энцефалитную (эпилептическую) и оглумоподобную и смешанные формы болезни.

Эпилептическая форма. Совершенно здоровые при внешнем осмотре поросята вдруг внезапно впадают в возбужденное состояние, беспокойства, все время неудержимо стремятся вперед, при этом натыкаются на препятствия, лезут на стену клетки, совершают манежные движения, у поросят нарушается зрение, зрачки расширены. Появляются судороги шейных и жевательных мышц, а также мышц спинной мускулатуры(наблюдаем прогибание позвоночника), слышим скрежет зубами. Повышается кожная чувствительность, при дотрагивание до кожи поросята визжат, часто падают, запрокинув голову назад совершая при этом плавательные движения конечностями. У поросят появляется коньюктивит, наблюдаем истечения из носа и глаз.

Данные эпилептоформные припадки, начинают повторятся все чаще и чаще, доводят животное до полного изнемождения. Отдельные больные поросята могут принимать позу сидячей собаки, совершая при этом круговые или кивающие движения головой, другие поросята-все время бегают по клетке, натыкаются друг на друга, лезут на препятствия. Вначале болезни поросята при дотрагивании сильно визжат, потом у поросят вследствие паралича гортани развивается афония.

По мере развития болезни у больных поросят появляются признаки паралича зрительного центра, голосовых связок, мышц глотки и гортани, а затем развивается прогрессирующий паралич мышц тела.

Оглумоподобная форма. При данной форме болезни больные поросята часами могут стоять неподвижно, опустив голову или упираясь пятачком в землю, стену. При движении у таких поросят наблюдается шаткая походка, ноги подтянуты под живот; в результате развивающихся параличей поросята становятся на запястья и упираются головой в землю. Нередко наблюдаем искривление головы и изменения в положении ушных раковин. При обеих формах болезни отмечаем учащение дыхания и сердцебиения. Всегда происходит поражение легких, а наступающих их отек к резко нарастающей одышке. Болезнь продолжается от нескольких часов до 2-3суток.

При смешанной форме болезни возбуждение сменяется угнетением. Для стертой формы Ауески характерна общая слабость, сонливость, отсутствие аппетита, иногда может появляться кашель. Болезнь продолжается от 2 до 7дней и очень редко до 10-14дней.

У поросят-сосунов и отъемышей встречается еще желудочно-кишечная форма болезни, сопровождающаяся повышением температуры тела до 40-41 градуса, отсутствием аппетита, рвотой, иногда развитием кровавого поноса и быстрой гибелью животного.

Нередко на свинарниках встречается легочная (инфлуэнцоподобная) форма, которая протекает без признаков поражения центральной нервной системы. Легочная форма болезни начинается с отказа свиней от корма, повышением температуры до 41-42градусов, появляется сильный кашель, слизисто-гнойное истечение из носа, коньюктивит, учащенное дыхание. У больных поросят развивается пневмония. Смерть животного наступает через 1-2дня.

Заболеваемость у поросят 2-недельного возраста может доходить до 70-100%, при летальности до 80-100%. У более старших поросят летальность составляет 40-80%. Оставшиеся в живых поросята имеют различного рода осложнения (слепота, парезы и параличи конечностей), что делает их непригодным к дальнейшему откорму и такие поросята в хозяйствах сдаются на санитарную бойню.

Взрослые свиньи и подсвинки болезнь переносят значительно легче и часто заболевание со стороны обслуживающего персонала проходит незамеченным. Персонал отмечает у таких свиней появление неспецифических признаков в виде -- вялости, повышения температуры, кашля, признаков ринита или коньюктивита. Болезнь длится 3-5дней и только в некоторых случаях до 12-14дней. У подсвинков часто приходится наблюдать легочную форму болезни вплоть до развития тяжелой пневмонии, изредка желудочно-кишечную форму. Поражение центральной нервной системы у подсвинков бывает довольно редко (в2-10% случаев), но сопровождается оно злокачественным течением и падежом животного.(Рис.3,4) У свиноматок при болезни нарушается лактация, происходят аборты и рождение мертворожденных и мумифицированных плодов.[5]

4. Дополнительные сведения о признаках болезни

Перенесшие заболевание свиньи приобретают невосприимчивость на два года и более. Появившиеся от перенесших заболевание свиноматок поросята, приобретают невосприимчивость на 45-50 суток, некоторые - до одного года.

Сыворотка крови перенёсших заболевание свиней хранят специфические антитела, нейтрализующие вирус. Источником возбудителя инфекции являются больные животные, выделяющие вирус с истечениями из носа, глаз и влагалища, с мочой и молоком. У животных наиболее чувствительных видов (крупный рогатый скот, овцы, козы, собаки, кошки) болезнь протекает тяжело, почти всегда заканчивается летально, а поэтому среди них нет широкого носительства, эпизоотические вспышки не имеют тенденции к распространению и быстро обрываются. Свиньи и синантропные грызуны менее чувствительны к вирусу, среди них болезнь нередко заканчивается выздоровлением с длительным носительством вируса (у свиней до 2,5 года и более). Поэтому грызуны и свиньи -- носители вируса Ауески -- являются не менее опасными источниками возбудителя, чем больные животные.

Факторами распространения возбудителя болезни Ауески могут быть инфицированные корма, подстилка, помещения, территория лагерей, трупы, в особенности грызунов, мясо и т. д. Большое эпизоотическое значение в распространении и сохранении возбудителя имеют крысы и мыши, среди которых болезнь может приобретать характер эпизоотии. Они являются основным резервуаром вируса болезни Ауески в природе. Оставаясь вирусоносителями в течение ряда месяцев, грызуны способствуют поддержанию эпизоотического процесса, который в их популяции может не прерываться годами и тем самым обусловливать стационарность эпизоотического очага в свиноводческих хозяйствах. Плотоядные животные и свиньи в основном заражаются алиментарно, поедая инфицированных грызунов и их трупы, корма, воду, загрязненные выделениями больных животных и вирусоносителей, а также инфицированные боенские отходы. Поросята-сосуны заражаются главным образом через молоко больных свиноматок. При совместном содержании больных животных со здоровыми заражение возможно через поврежденную кожу и видимые слизистые оболочки. В свиноводческих хозяйствах болезнь Ауески может приобрести стационарный характер, если своевременно не будут применены строгие оздоровительные меры. Стационарности эпизоотических очагов способствуют длительное вирусоносительство, систематический ввод в стадо восприимчивых ремонтных свиноматок и собственное воспроизводство поросят, непрерывно пополняющее восприимчивую часть свинопоголовья. В связи с этим эпизоотии болезни Ауески в свиноводческих хозяйствах могут повторяться в течение пяти лет.

В популяциях грызунов болезнь Ауески обычно проявляется 1ериодически повторяющимися длительными эпизоотиями. Нередко вспышкам болезни среди свиней предшествуют массовая гибель мышей, крыс и связанные с этим случаи заболевания кошек и собак.

5. Дифференциальная диагностика болезни

Болезнь Ауески у свиней следует дифференцировать от болезни Тешена и бешенства.

Болезнь Тешена (энтеровирусный энцефаломиелит свиней) - высококонтагиозная вирусная болезнь свиней, характеризующаяся развитием энцефалита или энцефаломиелита. Проявляется с преобладанием признаков поражения центральной нервной системы: гиперестезия кожи, клонические и тонические судороги, параличи передней или задней частей тела. Болезнь чаще протекает энзоотически и, в основном, поражает молодых свиней, летальность достигает 30-50%. Вирус внедряется через слизистую оболочку носовой полости, проникает по обонятельным нервам в головной мозг, где вызывает воспалительный процесс в мягкой мозговой оболочке и сером веществе мозга; затем поражаются мозжечок и спинной мозг. При поражении мозжечка отмечается шаткая походка, животное падает. При патологоанатомических изменениях, обнаруживаемые при вскрытии животного, весьма незначительны. Находят инъекции сосудов мозга, гиперемию и отек мозговых оболочек, мелкие кровоизлияния. Слизистые оболочки носовой полости и кишечника гиперемированы. При хроническом течение болезни заметны атрофия мышц и воспалительные изменения легких. При гистологическом исследовании устанавливают негнойный менингоэнцефалит. Вокруг мелких артериальных и венозных сосудов коры головного мозга и мозжечка- периваскулиты и глиальная инфильтрация. В отличие от болезни Ауески болезнь Тешена не сопровождается септическими явлениями, не наблюдается гибель грызунов, котов и собак, кролики к вирусу болезни Тешена не чувствительны. [5]

Бешенство свиней - острая вирусная болезнь с тяжелым поражением нервной системы, заканчивающаяся, как правило, летальным исходом. Бешенство свиней в большинстве случаев протекает в буйной форме. Быстро нарастает возбуждение. Свиньи мечутся в станке, хрипло хрюкают, разбрасывают подстилку, становятся агрессивными (иногда свиноматки набрасываются на собственных поросят), появляется сильное слюнотечение. Иногда отмечают рвоту, зуд в местах укусов. Затем развиваются параличи. Общая продолжительность болезни - 1-4, редко - 6-7 дней. Инкубационный период 2-1 неделя. При паралитическом бешенстве возбуждения не отмечают. Больные свиньи становятся вялыми, нарушается координация движений. Вскоре развиваются параличи.

Патологоанатомические изменения неспецифичны и имеют определенное диагностическое значение лишь с учетом клинических наблюдений. При осмотре трупов часто отмечают истощение, находят следы укусов, иногда - расчесов. Шерсть головы и шеи обычно смочена слюной. При вскрытии отмечают застойное полнокровие внутренних органов. Желудок обычно пуст, но у плотоядных в нем могут быть различные несъедобные предметы. У жвачных животных обнаруживают сухие и плотные кормовые массы в сетке и книжке. Нередко слизистые оболочки желудка и тонких кишок катарально воспалены, местами с кровоизлияниями. Головной мозг и его оболочки отечные, часто -- с мелкими кровоизлияниями. Бешенство связано с укусами, характеризуется повышенной агрессивностью больных животных по отношению к другим животным и людям. При бешенстве в отличие от болезни Ауески выделяется тягучая жидкость, а болезни Ауески пенистая слюна. Так же при бешенстве наблюдаются положительные биопробы на мышах, и при гистологическом исследовании обнаруживают в мозге включения в виде телец Бабеше-Негре; [12 ] Окончательно дифференцировать это болезни можно на основании клинико-эпизоотологических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.

Для дифференциации от бешенства проводят биопробу на мышах и РИФ, а так же микроскопию для выяления телец Бабеша-Негри. Для исключения болезни Тешена ставят биопробу на кроликах.

Существует схема дифференциальной диагностики болезни Ауески по Петте и Манелю с использованием культуры клеток.С этой целью исследуют суспензию, одна часть которой обработана хлороформом, вносят в культуру клеток почек свиней и эмбрионов кур. Во всех культурах, зараженных не обработанной хлороформом взвесью, ципопатический эффект наблюдается уже через 16-20ч,а к 3-му дню 70-90% клеток подвергаются деструкции. В культурах ниокулированных материалом, обработанным хлороформом, цитопатические изменения отсутствуют. [8]



6. Патологический материал. Его отбор и транспортировка

При выборе материала учитывают тропизм вирусов и клиническое проявление болезни, вид и возраст животного, стадию болезни, наличие видимых изменений в органах и тканях и т.д.

В лабораторию для исследования направляют свежий труп мелкого животного целиком или патологический материал (голову, кусочки головного, спинного или продолговатого мозга, заглоточные и бронхиальные лимфатические узлы, кусочки миндалин, слизистые оболочки носа, легких, печени, селезенки, почек). При жизни в качестве вируссодержащего материала слизь и смывы со слизистых, истечения, кровь, мочу.

Материал берут по возможности стерильно с помощью стерильного инструмента и в стерильную посуду. Если лаборатория рядом, материал отправляют неконсервированным и обычно в термосах со льдом. Если же материал нужно транспортировать далеко, то его обычно консервируют и тщательно упаковывают (особенно, если отправляют по почте или самолетом). Кусочки органов консервируют в 50% стерильном глицерине или насыщенном растворе хлористого натра и дополнительно помещают в термос со льдом. Жидкий материал консервируют замораживанием и сохраняют при-20?С(в термосе с сухим льдом). Пересылка материала сопровождается направлением(Приложение1,2), в котором сообщаются эпизоотические и клинические данные, картина патолого-анатомических изменений, сведения о проведении иммунизации животных и применяемой вакцине. [7 ]

7. Подготовка материала для вирусологического исследования

Присланный в лабораторию материал принимают и, по возможности, сразу же начинают исследовать, а, если это невозможно, то материал хранят до исследования в холодильнике при -20?С (в морозилке). Подготовка материала к вирусологическим исследованиям заключается в следующем. После осмотра органов, их отмывают стерильным физраствором от консерванта. инфекционный паралич ветеринарный экспертиза

Если труп поступил целый, его осматривают и затем проводят вскрытие, извлекают в стерильные баночки или чашки Петри. Жидкий материал проверяют на бактериальную загрязненность микроскопией мазков и посев на среды (МПБ,МПА,среду Китта-Тароцци и среду Сабуро) и при необходимости обрабатывают антибиотиками(пенициллин и стрептомицин по 500-2000 ЕД на мл среды в зависимости от степени загрязненности)

Из кусочков органов готовят суспензию. Для этого из присланных органов и тканей берут небольшие кусочки(1,0-1,5г) и помещают в стерильную ступку, где после измельчения ножницами тщательно растирают до кашицеобразной массы со стерильным песком или стеклом. Затем добавляют стерильный физраствор в соотношении 1:10 или 1:5 и получается суспензия. Ее переносят в центрифужные пробирки и туда же вносят вышеуказанные антибиотики в дозе по 500-2000 ЕД на 1 мл суспензии. Суспензию в пробирках 2-3 раза замораживают (при -20-50С) и оттаивают при комнатной температуре или в термостате при 37?С. При этом происходит дополнительное разрушение клеток и освобождение вируса. Затем пробирки с суспензией центрифугируют 15-20 мин при 3000 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость проверяют на стерильность посевом на среды в аэробные и анаэробные условия и затем используют как вируссодержащий материал для заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов или культур тканей и для постановки серологических реакций в качестве антигена. Одновременно из исходного патологического материала готовят мазки или мазки-отпечатки, которые исследует на наличие телец-включений и вируса в клетках после специальной окраски под обычным микроскопом или применяют люминесцентную микроскопию с использованием иммунофлуоресценции (флуоресцирующие антитела).

Подготовка крови:

Для выделения вируса может быть использована либо цельная дефибринированная, либо «лаковая» кровь, либо кровь с антикоагулянтом. В последующем случае берут 5 мл крови в пробирку с 5-6 каплями гепарин и замораживают. После оттаивания гемолизированную кровь центрифугируют при 2000-3000 об/мин в течение 15 минут, добавляют пенициллин и стрептомицин из расчета 100-200 ЕД/мл и после проверки на стерильность используют для заражения. Для этих целей пригодна и свернувшаяся кровь. Её растирают в ступке и добавляют небольшое количество раствора Хенкса(1:1 или 1:2) [ 3,7]

8. Лабораторная диагностика

Основная схема лабораторной диагностики вирусных болезней включает:

I.Вирусологический метод

1.Обнаружение вируса

1)микроскопией мазков (лучше отпечатков) на тельца-включения (ТВ)

а)Обычная

б) Люминесцентная

-метод флуорохромирования (МФ)

-методы флуоресцирующих антител (МФА)

в) электронная

2) индикация вирусов- РГА,РГАд

2.Выделение вируса заражением чувствительных (3-5пассажей)

А)лаб.животных

Б) куриных эмбрионов (КЭ)

В)культур тканей (КТ)

3.Идентификация вируса (определение вида),типизация (определения типа,варианта) и дифференциация

II.Серологический метод (испытуемые сыворотки на наличие антител-Ат),постановкой реакций с известными биофабричными вирусными антителами: РН,РСК,РИД(РДП), РИЭОФ, МФА, ИФА,РЗГА (РТГА), РНГА, РЗГАд. [7]

Вирусоскопия. Не проводится.

Электронно-микроскопическая диагностика. Метод электронной микроскопии позволяет обнаружить вирус болезни Ауески через сутки после экспериментального заражения в мазках-отпечатках, которые готовят непосредственно на электронно-микроскопических сеточках со слизистой оболочки глаза, носа, ротовой полости и из мочи.[7]

ГОСТ 25753-83 устанавливает методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Рассмотрим метод биологической пробы, сущность которого заключается в воспроизведении болезни у здоровых кроликов путем инокуляции патологического материала. Для проведения биологической пробы используют кроликов массой 2-2,5 кг. Подготовленный материал, надосадочную жидкость вводят двум кроликам внутримышечно в дозе 1-2см2. Биопробу считают положительной, если животные погибают с клиническими признаками болезни Ауески (нервная клиника, зуд, расчесы)через 2-10 сут после инокулирования суспензии патологического материала. Если животные погибают без признаков болезни Ауески, биопробу повторяют, используя патологический материал первого пассажа. Гибель кроликов после введения суспензии патологического материала от свиней без признаков зуда и расчесов может свидетельствовать о выделенных вакцинных штаммов вируса болезни Ауески.

Так же для индикацию вируса в патологическом материале можно проводить с помощью экспресс-методов(ПЦР,РИФ,РНГА,ИФА).

Серологическая идентификация. Для идентификации вируса болезни Ауески используют в основном РН в культуре клеток или на кроликах, метод флюоресцирующих антител, РДП,РНГА,ELISA-метод и др.

РН .Удобный и надежный метод идентификации выделенного вируса. Используют культуру клеток того же вида, на который был изолирован вирус. Реакцию ставят по общепринятой методике, чаще используют вариант: различные разведения сывороткиЙ (10-1-10-7) и постоянную дозу сыворотки. Перед постановкой реакции культуральный вирус размораживают, центрифугируют в течение 30 мин при 2-3 тыс.об/мин и в реакции используют надосадочную жидкость. Положительную и отрицательную сыворотку разводят 1:10 питательной средой для культуры клеток, содержащей антибиотики и прогревают при 56?С 30 мин. Результаты РН учитывают по ЦПД через 2-3 сут.

Готовят двукратное разведение в испытуемых сывороток от 1:2 до 1:16 на питательной среде для культуры клеток с антибиотиками. Затем готовят необходимый объем вируса, содержащего 1000ТЦД50/0,1см3 и добавляют равный объем его в каждую пробирку с последовательными разведениями сывороток. Смесь сывороток и вируса встряхивают, выдерживают при температуре 37?С в течение 30мин. По истечении указанного срока в пробирки вносят по 1,8 см3 поддерживающей питательной среды. Одновременно ставят следующие контроли:

-контроль незараженных культур клеток в 3-4 пробирках, в которых проводят смену питательной среды;

-контроль дозы вируса. Для контроля точности дозы вируса, взятой в реакцию, из рабочего разведения вируса (1000ТЦД50/0,1см3) готовят разведения до 10-4. Для каждого разведения вируса используют 3-4 пробирки с культурой клеток. В пробирки с культурой клеток вносят рабочие разведение вируса и последовательные его разведения в объеме по 0,1 см3.После контакта при температуре 37?С в течение 30 мин в пробирки с культурой клеток добавляют 1,9 см3 поддерживающей питательной среды;

-контроль токсичности сыворотки. Для определения токсичности сыворотки в пробирочные культуры вносят по 0,1см3 разведения сыворотки и по 1,9см3 поддерживающей питательной среды (3-4 пробирки);

-контроль специфичности вируса. Пробирки с культурой клеток инфицируют смесью вируса в рабочей дозе с двухкратном разведением специфической сыворотки до её титра.

Результат серологического исследования испытуемых сывороток считают положительной при отсутствии цитопатического действия в разведениях сыворотки 1:2 и выше при наличии следующих результатов в контролях:

-в контроле культуры клеток не должно быть изменений монослоя клеток;

-в контроле дозы вируса цитопатическое действие должно быть в рабочем разведении вируса и в разведениях 10-1, 10-2, 10-3, 10-4 ( в последнем разведении не менее двух пробирок);

-в контроле токсичности сывороток в случае положительной сыворотки (переболевшее животное) отсутствует цитопатический эффект, начиная с разведения сыворотки 1:2,при отрицательной сыворотке(отсутствуют специфические антитела) должен быть ципопатический эффект, как и в культурах с контролем дозы вируса(рабочее разведение);

-в контроле специфически вируса отсутствует цитопатический эффект в культурах, инокулированных смесью специфической сыворотки и вируса.

Наличие специфических антител в испытуемых сыворотках крови свидетельствует об инфицировании данной особи, группы животных возбудителем болезни Ауески или возможной вакцинации животных против болезни Ауески. Положительный результат серологического метода исследования сывороток крови невакцинированных животных свидетельствует о подозрении на заболевание, которое подтверждают постановкой биологической пробы.[4,7]

Для обнаружения и титрования антитела ,кроме РН, используется РДП. Сущность реакции заключается в том, что специфические антиген и антитело, помещенные на определенном расстоянии друг от друга в агаровом геле, диффундируют в среду и в местах их встречи образуют полосы преципитации,хорошо видимые при нижнем боковом освещении на темном фоне. В РДП участвуют два компонента - антиген и сыворотка(антитело),проходит реакция в агаровом геле в присутствии в качестве электролита физиологического раствора хлористого натра. Ставят реакцию в чашках Петри или на предметных стенках в микромодификации. При постановки реакции в чашках Петри отбирают чистые,хорошо мытые чашки с ровным дном. В чашку вносят расплавленный в кипящей бане 1%-ный агаровый гель в количестве 25-30 мл с таким расчетом, чтобы слой был 3-4 мм. После застывания агара в нем делают лунки, форма, количество и расположение которых в агаре может быть различное в зависимости от объема и цели исследования. В приготовленные лунки вносят антигены и сыворотки,каждый компанент соответственно в свою лунку по 3-4 капли.После заполнения лунок чашку ставят в термостат при 37?С и, чтобы не было высыхания агара, в чашку кладут кусочек ваты, смоченной водой. Учет реакции проводят через 24-48 и 72 часа. Для этого чашки вынимают из термостата и просматривают на темном фоне при нижнем боковом освещении с помощью осветителя к микроскопу. В положительном случае между лунками со специфическими компанентами появляется за счет образования преципитата серо-белая полоса преципитации. С целью усиления видимости полос, иногда проводят обработку агара с прошедшей реакцией 0,065%-ным раствором серно-кислого кадмия.

РИФ дает возможность видеть при малом увеличении широкие полоски флуоресцирующих нейронов коры головного мозга с отдельными флуоресцирующими клетками. На препараты-отпечатки из патологического материала наносят сыворотку крови, содержащую специфические антитела к данному вирусу и обработанную флуорохромом (веществом, способным светиться при облучении). Если вирусный антиген и меченая сыворотка, содержащая специфические к данному вирусу антитела, соответствуют друг другу, то происходит образование комплекса «антиген + антитело», которое можно обнаружить с помощью люминесцентного микроскопа по специфическому свечению. [3]

В РНГА при использовании эритроцитарного иммуноглобулинового диагностикума обнаруживают вирусный антиген. ИФА прямым иммунопероксидазным методом обнаруживает антиген вируса болезни Ауески в мазках-отпечатках из мозга и слизистой оболочки гортани.[1]

9. Лечение

Что касается лечения, то эффективных средств лечения при болезни Ауески нет. Неэффективным оказалось применение антибиотиков, в том числе в сочетании с сывороткой реконвалесцентов. Слабой эффективностью обладала гипериммунная сыворотка и гамма-глобулин против болезни Ауески. Относительный лечебный эффект достигается при применении в сочетании антибиотиков широкого спектра действия для профилактики развития секундарной бактериальной инфекции, гамма-глобулина против болезни Ауески, хлоралгидрата в дозе 0,2-0,3 г на килограмм массы в виде клизмы, внутримышечного введения 10%-го раствора глюконата кальция и витаминов группы В. Даже комплексное лечение оказывается эффективным только в начале заболевания. Следует также учитывать, что после выздоровления животные могут оставаться вирусоносителями. В связи с этим ведущая роль в профилактике болезни Ауески должна отводиться специфической активной профилактике.

Пассивная профилактика болезни Ауески с применением гипериммунной сыворотки и гамма-глобулина в последнее время не проводится. Для активной специфической профилактики болезни Ауески используются преимущественно следующие вакцины:

1. Сухая культуральная вирус-вакцина ВГНКИ против болезни Ауески. В неблагополучных по болезни Ауески хозяйствах поросят вакцинируют с двухдневного возраста двукратно с интервалом 20-25 дней. Поросятам-сосунам в возрасте 2-15 дней при первой прививке вакцину вводят под кожу, при второй - внутримышечно. Свиньям других возрастных групп ее вводят внутримышечно. Поросят-сосунов, привитых в возрасте 2-15 дней, ревакцинируют после второй прививки через 2 месяца однократно. В угрожаемых по болезни Ауески хозяйствах свиней вакцинируют с 16-20-дневного возраста. Супоросных свиноматок в угрожаемых по болезни Ауески хозяйствах вакцинируют не позднее чем за месяц до опороса, а в неблагополучных хозяйствах допускается их вакцинация за 7-10 дней до него. Иммунитет у свиней после первой прививки вирус-вакциной наступает через 5-7 дней и сохраняется у двукратно привитых 15-16 месяцев, за исключением привитых в 2-15-дневном возрасте поросят-сосунов, которых ревакцинируют через 2 месяца.

2. Порцилис - это живая маркерная вирус-вакцина против болезни Ауески свиней, изготовлена из штамма Begonia вируса болезни Ауески.

3. Инактивированная культуральная вакцина против болезни Ауески пушных зверей, свиней и овец.

4. Вакцина против болезни Ауески и рожи свиней эмульгированная. Разработаны ассоциированные вакцины: инактивированная концентрированная вакцина против парвовирусной болезни, лептоспироза, болезни Ауески (ПЛА) и хламидиоза свиней (ПЛАХ); инактивированная концентрированная вакцина против парвовирусной болезни, болезни Ауески, коронавирусного (трансмиссивного) гастроэнтерита, ротавирусного гастроэнтерита, лептоспироза и хламидиоза свиней; болезни Ауески и рожи свиней эмульгированная; вакцина инактивированная концентрированная против парвовирусной болезни, лептоспироза, болезни Ауески и репродуктивно-респираторного синдрома свиней и др. [13]

10. Ветеринарно-санитарная экспертиза и оценка продуктов после убоя

Туши и продукты убоя от животных, больных и подозрительных по заболеванию болезнью Ауески, выпускать в сыром виде запрещается.

При наличии дегенеративных или других патологических (абсцессы и др.) изменений в мускулатуре тушу с внутренними органами направляют на утилизацию. При отсутствии патологических изменений в туше и во внутренних органах их принимают после бактериологического исследования на сальмонеллы. При этом в случае обнаружения в мясе или внутренних органах сальмонелл внутренние органы направляют на утилизацию или уничтожают, а туши выпускают после проварки или направляют на изготовление консервов. При отсутствии сальмонелл тушу, шпик и внутренние органы разрешается перерабатывать на вареные, варено-копченые колбасы и консервы или направлять на проварку. Шкуры дезинфицируют. [2]



Список литературы

1) Белоусова Р.В. ,Преображенская Э.А. , Третьякова И.В. Ветеринарная вирусология М.:КолосС,2007.-424с

2) ВетПиН 13.7.1-99 Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов/ ст.3.1.11/

3) Госманов Р.Г., Колычев Н.М. , Плешакова В.И. Ветеринарная вирусология изд.лань,2010-480с.

4) ГОСТ 25753-83 - Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики болезни Ауески

5) Конопаткин А.А., Бакулов И.А., Нуйкин Я.В. и др.Под редакцией Конопаткина А.А.- М.:Колос,1984.-544с

6) Кушнир А.Т. Буреев И.А.Селянинов Ю.О. Боченин Ю.И. Джавадов Э.Д., Коротков О.В Профилактика инфекционных болезней животных аэрозолями химических и биологических препаратов 1-е изд.лань -192с

7) Сонин П.Ф. Лабораторная диагностика вирусных болезней у животных/ уч.пособие 2-ое издание/Ленинградский ветеринарный институт,1989-71с

8) Сюрин В.Н., Белоусова Р.В. ,Фомина Н.В. Справочник: диагностика вирусных болезней животных /М.:Агропромиздат,1991-524с.

Размещено на Allbest.ru