Ветеринарная вирусология

3. Быстрая заморозка до минус 196С жидким азотом. Вирусы, чувствительные к низким значениям рН, следует замораживать в жидкостях, не содержащих однозамещенных фосфатов.

4. Лиофилизация - высушивание в замороженном состояние в условиях вакуума - очень хороший способ консервирования. В лиофилизированном виде вирусы могут храниться несколько лет.

15. Правила работы в вирусологической лаборатории. Техника безопасности при работе с вируссодержащим материалом

Весь персонал лаборатории проходит инструктаж и обучение безопасным методам труда, обеспечивается спецодеждой, спецобувью, средствами санитарной защиты и защитными приспособлениями в соответствии с действующими нормами. Основные правила работы следующие: 1) вход в производственные помещения посторонних лиц, а также вход сотрудников в лабораторию без халата и сменной обуви категорически запрещен; 2) запрещено выходить за пределы лаборатории в халатах и спецобуви или надевать верхнюю одежду на халат, курить, есть и хранить в лаборатории продукты питания. В боксе работают в стерильном халате, маске, шапочке, при необходимости надевают резиновые перчатки и очки. Обязательно меняют обувь. 3) весь материал, поступающий в лабораторию на исследование, должен рассматриваться как инфицированный. С ним надо обращаться очень осторожно, при распаковке его банки следует обтирать снаружи дезинфицирующим раствором и ставить их на поднос или в кюветы. Рабочее место на столе покрывают несколькими слоями марли, увлажненной 5%-ным раствором хлорамина. При работе с пипетками пользуются резиновыми грушами. Пипетки, предметные и покровные стекла и другую посуду, бывшую в употреблении, обеззараживают, погружая в 5% хлорамин, фенол, лизол, серную кислоту. 4) по окончании работы рабочее место приводят в порядок и тщательно дезинфицируют. Вируссодержащий материал, необходимый для дальнейшей работы, ставят на хранение в холодильник и опечатывают. 5) руки тщательно промывают 5% хлорамином, перчатки снимают обеззараживают вторично, дезинфицируют и моют. При работе в вирусологической лаборатории сотрудники должны строго соблюдать методы и правила асептики и антисептики. Асептика - система мероприятий и приемов работы, предупреждающих попадание МО и вирусов из окружающей среды в организм человека, а также исследуемый материал. Она предусматривает использование стерильных инструментов и материалов, обработку рук сотрудников, соблюдение особых санитарно-гигиенических правил и приемов работы. Антисептика - комплекс мероприятий, направленных на уничтожение МО и вирусов, способных вызвать инфекционный процесс при попадании на поврежденные или интактные участки кожи и слизистых оболочек. В качестве антисептиков используют этиловый спирт (70%), спиртовой раствор йода, зеленка и другие. Дезинфекция - обеззараживание объектов окружающей среды путем уничтожения патогенных для человека и животных МО и вирусов физическими способами и с помощью химических веществ. Стерилизация - обеспложивание, полное уничтожение МО и вирусов в различных материалах. Ее проводят физическими и химическими методами.

16. Схема лабораторной диагностики вирусных инфекций

Лабораторная диагностика - это система мер по обнаружению, индикации вируса. В нее входят: получение посланного патологического материла, исследование патологического материала методом быстрой диагностики, исследование длительными методами (ретроспективная диагностика, исследование парных сывороток в серореакциях).

Лабораторные исследования. I.Индикация вируса в патологическом материале. 1.Обнаружение - световая микроскопия крупных вирусов (Poxviridae), электронная микроскопия. 2.Обнаружение телец-включений. (тельца Бабеша-Шенегри при бешенстве) 3.Обнаружение вирусных антигенов: серологические реакции. 4.Обнаружение вирусных НК (ДНК-зонды и ПЦР - полимеразно-цепная реакция). 5.Обнаружение активной формы вируса путем биопробы (лабораторные животные, куриные эмбрионы, культура клеток). 6.Обнаружение гемаглютининов у гемаглютинирующих вирусов (в настоящее время практически не используется по причине наличия более точных методов). II.Изоляция (выделение) вируса из патологического материала. Проводится не менее трех слепых пассажей, делается биопроба. А)Лабораторные животные (клиника, гибель, пат. изменения) Б)Куриные эмбрионы (гибель, пат. изменения, РГА) В)Культура клеток (ЦПД, РГАд, метод бляшек) III.Идентификация выделенного вируса - серологические реакции. IV.Доказательство этиологической роли. Иногда требуется доказать этиологическую роль выделенного вируса. Для этого используют парные сыворотки крови в серологических реакциях. В качестве АГ используют выделенный вирус, а в качестве АТ - парные сыворотки. Повышение титра антител во второй сыворотке в 4 и более раз свидетельствует о этиологической роли выделенного вируса.

17. Клинико-эпизоотологическая диагностика вирусных болезней животных, сущность, значение

Клинико-эпизоотологическая или до-лабораторная диагностика - проводится в хозяйствах и позволяет поставить лишь предварительный диагноз, проводится распознавание на основе сбора, сопоставления анализа о больных животных (клинические симптомы болезни, Патологоанатомические изменения в органах). Сбор эпизоотологических данных очень важен, позволяет получить данные о том, как протекает заболевание, сведения о хозяйствах. Если хозяйства неблагополучны, то это лишний раз подтверждает диагноз. Клинический осмотр ориентирует ветеринара только на несколько видов болезней. Основное значение все же у лабораторной диагностики.

18. Методы обнаружения вируса в патматериале

I.Индикация вируса в патологическом материале. 1.Обнаружение - световая микроскопия крупных вирусов (Poxviridae), электронная микроскопия. 2.Обнаружение телец-включений (тельца Бабеша-Шенегри при бешенстве) 3.Обнаружение вирусных антигенов: серологические реакции. 4.Обнаружение вирусных НК (ДНК-зонды и ПЦР - полимеразно-цепная реакция). 5.Обнаружение активной формы вируса путем биопробы (лабораторные животные, куриные эмбрионы, культура клеток). 6.Обнаружение гемаглютининов у гемаглютинирующих вирусов (в настоящее время практически не используется по причине наличия более точных методов). Для идентификация выделенного вируса - серологические реакции. 1.РИФ - реакция иммунофлюорисценции. АГ + АТ меченные флюорохромом. Дают контакт 30 минут при 37 С, затем производят тщательный отмыв в ИХН. Метод обнаружения - флюоресцентное свечение под микроскопом. 2.ИФА - иммуно-ферментный анализ. АГ + АТ с ферментом. Контакт, отмыв, затем добавляют субстрат, который при контакте с АТ-ферментным комплексом дает цветную реакцию. 3.РСК - реакция связывания комплемента. АГ + АТ + комплемент. Контакт. Затем добавляют гем-систему (гемолизин + эритроциты барана). Контакт. Если гемолиза не происходит, значит АГ и АТ связали комплемент. Задержка гемолиза - реакция положительная. Если произошел гемолиз, значит комплемент связан гем-системой - реакция отрицательная. 4.РДП - реакция диффузной преципитиции. АГ + АТ (диффузия в агаровом геле). Метод обнаружения - образование контура преципитации. 5.РНГА - реакция непрямой гемаглютинации. Эритроциты нагружают АГ и при образовании комплекса АГ-АТ происходит агглютинация эритроцитов. 6.РТГА - реакция торможения гамаглютинации 7.РТГАд - реакция торможения гемадсорбции 8.РН - реакция нейтрализации. Вирус + АТ. Контакт. Ввод в чувствительную к вирусу систему. Метод обнаружения - нейтрализация инфекционной активности вируса.

19. Принцип ретроспективной диагностики, плюсы и минусы ее

Ретроспективная диагностика - преследует цель обнаружить динамику прироста АТ, основана на исследовании парных сывороток, которые берут дважды, в начале болезни и в конце. Их проверяют в одной из серореакций. Если прирост АТ в 4-5 раз больше - 100% постановка диагноза.

+ роль - метод позволяет достоверно поставить диагноз в большинстве случаев.

- роль - длительность ретроспективной диагностики.

20. Вирус болезни Ауески

Болезнь Ауески (псевдобешенство, зудящая чума, бешеная чесотка, инфекционный бульбарный паралич) - остро протекающая болезнь всех видов сельскохозяйственных животных, пушных зверей и грызунов. Характеризуется признаками поражения головного и спинного мозга, сильным зудом и расчесами.

Особый ущерб БА приносит в свиноводстве и пушном звероводстве. У пушных зверей это острая кормовая инфекция. Причиной является пища, которой нередко служат боенские отходы и субпродукты, полученные от больных животных или животных вирусоносителей.

Клиника. Инкубационный период - 1,5 суток - 10-12 дней в зависимости от метода заражения, вирулентности вируса и устойчивости животного. Вирус пантропен.

У свиней клиника протекает без признаков зуда. Тяжело болеют сосуны и отъемыши. Болезнь носит септический характер. Поросята обычно погибают через 4-12 часов. У поросят от 10 дней до 3-х месяцев первые признаки болезни - лихорадка (40-42), угнетение, слизистые истечения из носа. Позднее появляются признаки поражения ЦНС: беспокойство, манежные движения, потеря ориентации, судороги, прогиб спины, параличи глотки, гортани, конечностей, отек легких, слюнотечение. Болезнь длится от нескольких часов до 3-х дней. Летальность: 70-100%

У свиноматок проявляется в виде гриппоподобного синдрома с выздоровлением через 3-4 дня.

У КРС повышается температура до 42 С, прекращается жвачка, сильный зуд в областе ноздрей, губ, щек, отказ от корма, вялость, беспокойство, страх, учащенное дыхание, потливость, судороги жевательных и шейных мышц. Смерть наступает при нарастающей вялости через 1-2 суток. Выздоровления крайне редки.

У плотоядных животных наблюдается отказ от корма, пугливость, беспокойство, сильный зуд. Иногда у собак и кошек проявляются признаки бешенства. Потом наступает паралич глотки. Смерть через 2-3 суток. Животные не являются источником вируса и не выделяют его, являясь экологическим тупиком.

Заподозрить болезнь Ауески можно по характерным клиническим симптомам и патологоанатомическим изменениям (клинико-эпизоотологическая и патологоанатомическая диагностика).

Материал для исследования: смывы из носовой полости и кровь (лучше парные сыворотки), от трупов - кусочки головного мозга, легких, печени, селезенки.

Экспресс-метод - обнаружение вирусного антигена в РИФ. Вирусологический метод: а) выделение вируса на культуре клеток почек поросят: б) биопроба на кроликах (характерны зуд и расчесы в месте заражения).

Идентификация: РИФ, РН.

Ретроспективная диагностика: по приросту титра антител в парных выворотках.

Следует дифференцировать болезнь Ауески от бешенства, чумы свиней, гриппа, рожи, отравления поваренной солью.

Применятся живая вирусвакцина ВГНКИ, инактивированная культурная вакцина - иммунитет на 6-10 месяцев.За рубежом используются субъединичные и рекомбинантные вакцины.

21. Значение и особенности вирусных белков

Смотри вопрос №7

22. Общие принципы серологических реакций и их использование в диагностике вирусных болезней

В целях определения вида данного вируса при изучении защитных процессов в организме больного человека или зараженного животного применяются серологические методы. Серология (от лат. Serum - сыворотка, жидкая составная часть крови) - это раздел иммунологии, изучающий реакции антигена специфическими защитными веществами, антителами, которые находятся в сыворотке крови. Антитела нейтрализуют действие вируса. Они связываются с определенными антигенными веществами, находящимися на поверхности вирусных частиц. В результате связывания молекул антител с поверхностной структурой вируса последний теряет свои патогенные свойства. Для установления уровня (количества) антител в сыворотке или определения типа данного вируса проводится реакция нейтрализации вируса. Ее можно проводить как на животных, так и на культуре клеток.

Минимальную концентрацию сыворотки, содержащей антитела, достаточную для того, чтобы нейтрализовать вирус, не дать ему проявить ЦПД, называют титром сыворотки, нейтрализующей вирус. Эта концентрация может быть выявлена и с помощью метода бляшек.

Для обнаружения антител используется метод торможения гемагглютинации (склеивания эритроцитов под воздействием вируса) и метод связывания комплемента. Из методов, применяемых в вирусологии для различных исследовательских целей, можно еще упомянуть методы, при помощи которых вирусологический материал подготавливается для физических и химических анализов, которые облегчают изучение тонкого строения и состава вирусов. Эти анализы требуют большого количества совершенно чистого вируса. Очистка вируса - процесс, при котором из суспензии с вирусом устраняются все посторонние, загрязняющие ее частицы. В основном это кусочки и "обломки" клеток - хозяев. Одновременно с очисткой происходит обычно сгущение суспензии, повышение концентрации вируса. Так получается исходный материал для многих исследований.

С помощью серологической реакции можно: определять титр АТ к гемагглютинирующему вирусу в сыворотке; идентифицировать неизвестный гемагглютинирующий вирус по известным сывороткам; установить степень АГ родства 2 вирусов, определять титр вируснейтрализующих АТ в сыворотке, или индекс нейтрализации, идентифицировать неизвестный вирус путем испытания его с различными заведомо известными сыворотками.

Серологические реакции.

1. РИФ - реакция иммунофлюорисценции.

АГ + АТ меченные флюорохромом. Дают контакт 30 минут при 37 С, затем производят тщательный отмыв в физрастворе. Метод обнаружения - флюоресцентное свечение под микроскопом.

2. ИФА - иммуно-ферментный анализ.

АГ + АТ с ферментом. Контакт, отмыв, затем добавляют субстрат, который при контакте с АТ-ферментным комплексом дает цветную реакцию.

3. РСК - реакция связывания комплемента.

АГ + АТ + комплемент. Контакт. Затем добавляют гем-систему (гемолизин + эритроциты барана). Контакт. Если гемолиза не происходит, значит АГ и АТ связали комплемент. Задержка гемолиза - реакция положительная. Если произошел гемолиз, значит комплемент связан гем-системой - реакция отрицательная.

4. РДП - реакция диффузной преципитиции.

АГ + АТ (диффузия в агаровом геле). Метод обнаружения - образование контура преципитации.

5. РНГА - реакция непрямой гемаглютинации.

Эритроциты нагружают АГ и при образовании комплекса АГ-АТ происходит агглютинация эритроцитов.

6. РТГА - реакция торможения гамаглютинации

7. РТГАд - реакция торможения гемадсорбции

8. РН - реакция нейтрализации.

Вирус + АТ. Контакт. Ввод в чувствительную к вирусу систему. Метод обнаружения - нейтрализация инфекционной активности вируса.

23. РТГА и ее использование в вирусологии. Достоинства и недостатки

Одной из простейших серологических реакции является реакция торможения гемаглютинации. Она основана на том, что АТ при встрече с гомологичным АГ нейтрализуют не только его инфекционную, но и гемагглютинирующую активность, т.к. блокируют рецепторы вирионов, ответственные за гемагглютинацию, образуя с ними комплекс "АГ+АТ". Принцип РТГА состоит в том, что в пробирке смешивают равные объемы сыворотки крови и суспензии вируса и после экспозиции определяют, сохранился ли в смеси вирус, путем добавления суспензии эритроцитов. Агглютинация эритроцитов указывает на наличие, а отсутствие гемагглютинации - на отсутствие вируса в смеси. Исчезновение вируса из смеси вирус + сыворотка расценивается как признак взаимодействия АТ сыворотки и вируса. РТГА позволяет решать следующие задачи: определять титр АТ к гемагглютинирующему вирусу в сыворотке; идентифицировать неизвестный гемагглютинирующий вирус по известным сывороткам; установить степень АГ родства двух вирусов. Достоинства РТГА: простота техники, быстрота, не требуется стерильной работы, специфичность, дешевизна. Недостаток РТГА: возможна только с гемагглютинирующими вирусами.

Принцип титрования АТ в РТГА состоит в следующем: готовят ряд последовательных (обычно 2-х кратных) разведений исследуемой сыворотки в одинаковых объемах (чаще по 0,25 или 0,2 мл); к каждому разведению добавляют такие же объемы гомологичного вируса в титре 4 ГАЕ; смеси выдерживают определенное время при определенной температуре, ко всем смесям добавляют равные объемы 1-% суспензии отмытых эритроцитов; после экспозиции оценивают гемагглютинацию в каждой смеси в крестах.

24. РДП. Иммунологическая основа меода, постановка и учет результатов. Достоинства и недостатки

РДП в геле основана на способности к диффузии в гелях АТ и растворимых АГ и отсутствие такой способности у комплекса "АГ+АТ". Этот комплекс образуется при контакте диффундирующих навстречу друг другу гомологичных АГ и АТ. Он осаждается на месте образования в толще геля в виде полосы преципитации. В качестве геля используют крахмал, желатин, агар-агар и другое. В лабораторной практике очень часто используют агаровый гель. АТ сыворотки представляют собой молекулы Ig, которые, несмотря на довольно крупные размеры. Способны диффундировать в агаровом геле. АГ вирусов - это вирусные белки. Они могут находится в составе вирионов, представляя так называемые корпускулярные АГ. Крупные размеры которые не позволяют им диффундировать в агаровом геле. Но белки вирусов могут быть и в виде свободных молекул, образующихся в результате деструкции вирионов и (или) разрушения клеток, в которых они образовались. Это растворимые АГ. Они способны к диффузии в агаровом геле. Методика постановки РДП в геле состоит в том, что в слое агарового геля делают несколько углублении и в них наливают АГ и сыворотки так. Чтобы АГ и сыворотка были в соседних лунках. Из лунок АГ и сыворотки начинают диффундировать в слой геля. Диффузия направлена во все стороны от каждой лунки. В пространстве между лунками, содержащими АГ и сыворотку, последние диффундируют навстречу друг другу. Если они окажутся гомологичными, то образуется комплекс "АГ+АТ", который к диффузии не способен вследствие более крупных размеров. Он оседает на месте образования в виде беловатой полосы преципитации. РДП решает задачи: 1) обнаружение в сыворотке крови АТ, гомологичных АГ; 2) обнаружение в материале АГ, гомологичного известным АТ сыворотки;3) идентификация неизвестного вируса; 4) титрование АТ сыворотки. Здесь высшее разведение сыворотки, еще дающее преципитацию с гомологичным АГ, служит показателем титра АТ в сыворотке. РДП часто используют для диагностики лейкоза КРС и инфекционной анемии лошадей. Реакция м\б поставлена в чашках Петри, на предметных стеклах, капиллярах (редко). Для осуществления РДП на предметных стеклах нужны: обезжиренные предметные стекла, градуированные пипетки (2-5 мл), пастеровские пипетки; трубка диаметром 5мм или штамп, влажная камера, инструмент для извлечения из лунок геля, агар, АГ, сыворотки. Постановка РДП: Предметные стекла кладут на холодную поверхность. Из пипетки наливают агар (слой 1,5-2 мм), дают остыть 5-10 минут. Вырезают лунки, запаивают их. В лунки заливают компоненты РДП, помещают во влажную камеру (где оставляют при комнатной температуре или ставят в термостат). Препарат РДП на предметных стеклах можно через 48-72 часа высушить и окрасить раствором амидного черного. Это позволяет сохранить препарат неопределенно долго и улучшает возможность фотографировать полосы преципитации. Плюсы РДП: простота техники постановки, быстрота получения ответа, нетребовательность к чистоте компонентов, не требуется стерильной работы, минимальная потребность в компонентах, пригодность для работы с любыми растворимыми АГ, возможность документирования результата путем фотографирования. Минусы РДП: низкая чувствительность. Реакцию ставят для обнаружения в патматериале вирусов бешенства, инфекционного ринотрахеита КРС, африканской чумы свиней, чумы собак, других; А также для идентификации вирусов инфекционной анемии лошадей, аденовирусов, респираторно-синцитиального вируса, вируса диареи КРС, для обнаружения в сыворотках крови АТ к вирусам инфекционной анемии лошадей, респираторно-синцитиального вируса КРС и во многих других случаях.

25. РСК. Иммунологическая основа и характеристика компонентов реакции

Реакция связывания комплемента (РСК) -- одна из традиционных серологических реакций, применяемых для диагностики многих вирусных болезней. Само название в значительной мере отражает суть метода, состоящего из двух отдельных этапов. На первом этапе участвуют антиген и антитело (один из этих ингредиентов заранее известен), а также определенное количество предварительно оттитрованного комплемента. При соответствии антигена и антитела их комплекс связывает комплемент, что выявляют на втором этапе с помощью индикаторной системы (смесь бараньих эритроцитов и антисыворотки к ним -- гемолизина). Если комплемент связался при взаимодействии антигена и антитела, то лизиса эритроцитов не происходит (положительная РСК). При отрицательной РСК несвязанный комплемент способствует гемолизу эритроцитов (рис. 80).

РСК часто используют в диагностической практике для обнаружения и идентификации вирусов, обнаружения и титрования антител в сыворотках крови.

Основными компонентами РСК служат антигены (известные или выявляемые), антитела (известные антисыворотки или исследуемые сыворотки), комплемент, гемолитическая сыворотка и эритроциты барана; в качестве разбавителя используют изотонический раствор хлорида натрия (рН 7,2--7,4) или различные буферные растворы. Антигены и сыворотки могут обладать антикомплементарностью, т. е. способностью адсорбировать комплемент, что задерживает гемолиз и искажает результаты реакции. Чтобы избавиться от антикомплементарности, антигены очищают различными методами: ацетоном, фреоном, эфиром, хлороформом и т. д. в зависимости от вида ткани, используемой в качестве антигена и вируса. Сыворотки освобождают от антикомплементарности путем прогревания, обработкой комплемента и другими методами.

Антигены для РСК готовят из органов зараженных животных, из аллантоисной или амниотической жидкости зараженных куриных эмбрионов, а также из жидкой среды инфицированных культур клеток.

значительно отличается от его подготовки при бактериальных инфекциях. Это обусловлено рядом специфических свойств вирусов.

Во-первых, для освобождения вирусного антигена из клетки приходится часто дополнительно обрабатывать инфекционный материал с целью разрушения клеток и освобождения антигена.

Во-вторых, большой термолабильностью вирусных антигенов по сравнению с бактериальными. У большинства вирусов комплементфиксирующий антиген связан с инфекционной частицей, и разрушение его идет параллельно с потерей инфекционное™. Поэтому материалы для получения антигена необходимо брать от павших животных только в первые часы после гибели их, а лучше при жизни. Консервирование вируссодержащего материала различными дезинфицирующими средствами часто не дает положительных результатов, так как многие из них вызывают разрушение вирусного антигена.

В-третьих, неравномерностью фиксации комплемента при различном ношениях их; при избытке антител фиксация комплемента резко снижается, так как активный комплекс антиген + антитело представлен в основном в форме антител и активная поверхность комплемента незначительна. То же самое наблюдается и в зоне избытка антигена, где подавление фиксации комплемента происходит еще быстрее. Поэтому для установления оптимальной зоны фиксации комплемента необходимо предварительное титрование антигена и антител.

В-четвертых, незначительным объемом комплекса антиген + антитело. Размер вирусных частиц, вступающих в комплекс, очень ничтожен, и поэтому площадь фиксации комплемента незначительна. С увеличением объема комплекса антиген + антитело путем удлинения периода фиксации комплемента (до 18ч при 4 °С) повышается чувствительность реакции, но снижается ее специфичность, так как при продолжительном периоде фиксации увеличивается фиксация комплемента неспецифическими антигенами (тканевыми).

И наконец, в-пятых, высокой прокомплементарной активностью вирусного антигена. Для исключения неспецифической фиксации комплемента необходима более полная очистка вирусного антигена от тканевых фрагментов.

Большой помехой для использования РСК в диагностике вирусных болезней животных и человека является неравномерное накопление вирусного антигена в различные периоды болезни и особенно при разных инфекциях.

РСК применяют для определения типов и подтипов (вариантов) вируса ящура, вызывающих заболевание животных, для проверки производственных штаммов вируса ящура при изготовлении вакцин и лабораторных штаммов в научно-исследовательской работе.

26. Титр вирусов и принципы его определения в единицах 50%-ого инфекционного действия

Титр - это количество вируса, содержащегося в единице объема материала. Из локальных повреждений, вызываемых вирусами, наиболее известны бляшки и оспины на ХАО КЭ. Если имеются данные обратные то инфекционная активность вируса может быть измерена в бляшкообразующих единицах (БОЕ) или оспообразующих единицах (ООЕ) 1БОЕ = дозе вируса, способной вызвать образование одной бляшки, а одна ООЕ - одной оспины. Методы: заражают несколько КК или КЭ на ХАО. Высчитывают среднеарифметическое количество оспин или бляшек. Оно = БОЕ или ООЕ вируса. Рассчитывают сколько БОЕ или ООЕ приходится на единицу объема вируссодержащего материала. Это и есть титр. Т=n/Va, гдеn-сред арифметическое бляшек или оспин, а -разведение материала,V- введенная доза.

Метод 50%-ного инфекционного действия. За единицу количества вируса принимается доза, которая способна вызвать инфекционный эффект у 50% зараженных. Число таких доз в единице материала и будет выражать титр вируса в этом материале. Готовят 10 кратное разведение исследуемого материала, затем одинаковыми дозами заражают равные группы живых тест объектов. Учитывают результат действия и находят в каком разведение вирус проявил свое действие на 50%. Если сразу такое разведение не найдено то оно рассчитывается по формуле Т=lgB- (b-50)/(b-a) *lgd, где В - разведение дающие инфекционный эффект более 50%,b- процент дающий инфекционный эффект более 50%, а - менее 50%d- кратность разведения. За 1ГАЕ принимается такая доза вируса, которая способна агглютинировать примерно 50% эритроцитов содержащихся в том же, что и вирус объеме 1% суспензии отмытых эритроцитов. Готовят ряд последовательных кратных разведений материала и к каждому разведению добавляют 1% суспензию. Реакция оценивается в крестах. Реакция с 2 крестами содержит 1ГАЕ, которая умножается на кратность разведения.

27. Биологическая характеристика вируса ящура. Принцип диагностики

Ящур - остро протекающая высококонтагиозная болезнь парнокопытных, проявляющаяся лихорадкой, везикулярным поражением слизистых оболочек рта, кожи венчика и вымени, у молодых животных поражением слизистых оболочек рта, кожи венчика и вымени, у молодых животных поражением миокарда и скелетных мышц. Ящур регистрируется во многих странах мира. Инкубационный период продолжается 1-3 дня. Иногда до 7-10 дней.

Самый характерный признак данного заболевания у животных - везикулярное поражение слизистых оболочек рта и кожи венчика и вымени. У КРС - протекает остро, доброкачественно у взрослых. Вначале отмечают ухудшение аппетита, повышенную саливацию, повышение температуры тела. На 2-3 день на внутренней поверхности губ и языке (у некоторых в области межкопытной щели, на вымени) появляются афты. Через сутки образуются эрозии. Через 2-3 недели эрозии заживают и животное выздоравливает. Вирус относится к семейству Picornaviridae, родуAphthovirus, РНК - содержащий, не имеет суперкапсидной оболочки. Вирионы - мелкие частицы икосаэдрической формы. Вирус довольно устойчив к действиям внешней среды. Восприимчивы домашние и дикие парнокопытные.

Выделять вирус можно уже в инкубационный период. Переболевание может сопровождаться длительным вирусоносительством. Около 50% выздоровевшего КРС могут выделять вирус в течение 8 месяцев, а некоторые до 2 лет. Вирус культивируется на естественно восприимчивых и лабораторных животных: новорожденных мышатах, крольчатах морских свинках. Хорошо размножается в КК почек. Гемагглютинирующими свойствами не обладает. Известно 7 АГ-нных типов ящура: А, О, С, Сат-1, Сат-2, Сат-3, Азия-1. В организме естественно восприимчивых животных вирус индуцирует образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и преципитирующих АТ.

Вирус ящура обычно определяют в РСК. Основными компонентами РСК служат АГ, АТ, комплемент, гемолитическая сыворотка и эритроциты барана; в качестве разбавителя используют ИХН или различные буферные растворы. АГ и сыворотки могут обладать антикомплементраностью - способностью адсорбировать комплемент, что задерживает гемолиз и искажает результаты реакции.

Чтобы избавиться от антикомплементраности, АГ очищают различными методами: ацетоном, фреоном, эфиром, хлороформом в зависимости от вида ткани, используемой в качестве АГ и вируса. АГ для РСК готовят из органов зараженных животных, из аллантоисной и амниотической жидкости зараженных КЭ, а также из жидкой среды инфицированных КК. РСК применяют для определения типов и подтипов вируса ящура, вызывающих заболевание животных, для проверки производственных штаммов вируса ящура при изготовлении вакцин и лабораторных штаммов в научно-исследовательской работе.

28. Люминесцентная микроскопия. Основы иммунофлюоресценции

В основе метода лежит явление люминесценции, сущность которого в том, что поглощая различные виды энергии (световую, электрическую) атомы некоторых веществ переходят в возбужденное состояние, а затем, возвращаясь в исходное состояние, выделяют поглощенную энергию в виде светового излучения. Люминесценция наблюдается в виде флуоресценции - свечение, возникающее в момент облучения возбуждающим светом и прекращающееся сразу после его окончания. Фосфоресценция - свечение продолжающееся длительное время и по окончании процесса возбуждения.

29. Вирус бешенства, его свойства. Патогенность. Принципы диагностики

Бешенство - острая инфекционная болезнь, протекающая с тяжелым поражением НС, как правило, с летальным исходом. Восприимчивы человек и все млекопитающие животные. Бешенство распространено повсеместно. Возбудителя передают собаки, кошки, дикие грызуны и хищники, а также кровососущие летучие мыши-вампиры. Продолжительность инкубационного периода зависит от места, силы укуса, количества и вирулентности попавшего в рану вируса, резистентности покусанного животного. Инкубационный период длится от 1-3 недель до года и более. Болезнь протекает остро. Клинические признаки при атипичном течение - потеря аппетита, атония рубца, паралич глотки, слюнотечение. Также может быть буйное и тихое течение болезни. Вирус бешенства (ВБ) обладает выраженной нейропробазией. Проникая с периферии по нервным стволам в центральную НС центростремительно, он распространяется в организме центробежно по периферическим нервам и попадает в разные органы, включая слюнные железы.

Вирус относится к семейству Rhabdoviridae, родуLyssavirus. Вирионы имеют форму стержня с обрубленным концом. Вирион вируса - РНК-содержащий со спиральным типом симметрии, имеет липопротеидную оболочку. Низкие температуры консервируют вирус. Вирион ВБ содержит гликопротеидный и нуклеокапсидный АГ. Первый индуцирует образование вируснейтрализующих АТ, а второй - комплементсвязывающих и преципитирующих АТ. В организме вирус локализуется главным образом в ЦНС, в слюнных железах, слюне. Культивируется на мышах, кроликах, морских свинках, в первичных культурах клеток. Размножение вируса в КК не всегда проявляется ЦПД. Источников инфекции являются больные животные. Они передают вирус во время укуса. Диагноз на бешенство ставят на основании эпизоотологических, клинических данных и результатов лабораторных исследований, имеющих решающее значение. Для исследования направляют в лабораторию свежие трупы мелких животных целиком, а от крупных и средних животных - голову с 2 шейными позвонками. Трупы мелких животных перед отправкой на исследование обрабатывают инсектицидами. Лабораторная диагностика включает: обнаружение вирусного АГ в РИФ и РДП, телец Бабеша-Негри и биопробы на белых мышатах. РИФ - для данной реакции биопромышленность выпускает флуоресцирующий антирабический гамма-глобулин. Принцип - 1)Делают отпечатки или мазки из различных отделов ГМ левой и правой стороны на предметных стеклах (не менее 2 препаратов из каждого отдела); 2)Их высушивают, фиксируют в охлажденном ацетоне; 3)Высушивают , наносят флуоресцирующий гамма-глобулин; 4)Помещают во влажную камеру; 5)Тщательно промываю ИХН, споласкивают водой, высушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло и просматривают под люминесцентным микроскопом. В препаратах, содержащих АГ ВБ, наблюдаются разной величины и формы флуоресцирующие желто-зеленым цветом гранулы в нейронах, но чаще вне клеток. РДП - 1)Наливают на предметные стекла агаровый гель 2)Делают лунки (Д=4-5 мм); 3)Лунки заполняют пастообразной массой из отделов ГМ. 4)Контроли с "+" и "-" АГ ставят на отдельном стекле по тому же трафарету; 5)После заполнения лунок препараты помещают во влажную камеру и ставят в термостат при 37С на 6 часов, затем при комнатной температуре на 18 часов. Реакцию считают положительной при появлении одной или 2-3 линий преципитации любой интенсивности между лунками, содержащими суспензию мозга и антирабический гамма-глобулин. ВЫЯВЛЕНИЕ ТЕЛЕЦ - на предметных стеклах делают тонкие мазки или отпечатки из всех отделов ГМ и окрашивают по Селлерсу или Муромцеву или Манну или Ленцу. БИОПРОБА - отбирают белых мышей (16-20 грамм), нервную ткань из всех отделов ГМ растирают в ступке со стерильным песком, добавляют ИХН до 10-% суспензии, отстаивают 30-40 минут и для заражения используют надосадочную жидкость для заражения мышат. Заражают 10-12 шт: половину интрацеребрально по 0,03 мл, половину подкожно в область носика или в верхнюю губу по 0,1-0,2 мл. Наблюдают 30 дней. При наличии ВБ в патматериале с 7-10 дня после заражения у мышей наблюдают симптомы: взъерошенность шерсти, своеобразную горбатость спины, нарушение координации движений, паралич задних, затем передних конечностей и гибель. У павших мышей ГМ исследуют в РИФ на обнаружение телец Бабеша-Негри и ставят РДП. Биопробу на бешенство считают положительно, если в препаратах из мозга зараженных мышат обнаруживают тельца Бабеша-Негри или выявляют АГ методами РИФ или РДП. Отрицательный диагноз - отсутствие гибели мышат в течение 30 дней.

30. Современная классификация иммунитета. Структура ат характеристика различных классов иммуноглобулинов и их строение

Иммунитет - состояние невосприимчивости организма к воздействию патогенных микробов, их токсинов и других чужеродных веществ биологической природы.

Иммунная система организма - система органов и клеток, осуществляющая реагирование против чужеродных субстанции.

Врожденный иммунитет - невосприимчивость к инфекционным агентам, расположенная в геноме и проявляемая количеством и порядком расположения ганглиозидов определенного типа на поверхности мембран клеток. Он весьма прочный, но не абсолютный.

Приобретенный иммунитет - устойчивость организма только к определенному возбудителю болезни. Этот иммунитет подразделяют на естественный и искусственный. Естественный делят на 1.активный - образуется после естественного переболевания животного, иногда после попадания многоразовых малых доз возбудителя (иммунизирующая субинфекция). 2.пассивный - иммунитет новорожденных, приобретенный за счет поступления плоду от матери антител через плаценту или после рождения через кишечник с молозивом. Различают естественный и искусственный колостральный иммунитет, в первом случае иммунитет возникает из-за антител, естественно выработанных в организме матери под воздействием различных антигенов окружающей среды. Во втором случае путем направленной иммунизации организма матери. Естественно приобретенный активный иммунитет может сохраняться 2 года, иногда пожизненно, искусственно приобретенный может обеспечивать состояние невосприимчивости от нескольких недель до нескольких месяцев.

Искусственно приобретенный иммунитет подразделяют еще и на 1.активный - возникает в результате иммунизации животных вакцинами (развивается через 7-14 дней и сохраняется до нескольких месяцев до 1 года и больше) и пассивный - создается при введении в организм иммунной сыворотки, содержащей специфические антитела против определенного возбудителя болезни.

Различают также виды иммунитетов: 1.Антибактериальный иммунитет - защитные механизмы направлены против патогенного микроба. 2.Противовирусный - организм вырабатывает противовирусные антитела. 3.Антитоксический иммунитет - при образовании которого бактерии не разрушаются, но вырабатываются антитела, эффективно нейтрализующие токсины в организме больного.

4.Местный иммунитет. 5.Стерильный иммунитет - если после перенесенной болезни организм освобождается от возбудителя, сохраняя при этом состояние невосприимчивости. 6.Нестирильный - когда иммунитет сохраняется только пока в организме находится возбудитель болезни. 7.Гуморальный иммунитет - выработка в зараженном организме специфических антител. 8.Клеточный - обеспечивается за счет образования специфически реагирующих с возбудителем Т-лимфоцитов.

Неспецифические факторы защиты организма.

Они выступают в качестве первого защитного барьера, не нуждаются в перестройке.

Кожа - мощный барьер для проникновения микроорганизмов, при этом имеют значение механические факторы.

Слизистые оболочки - в дыхательных путях с помощью мерцательного эпителия (передвигает пленку слизи вместе с микроорганизмами по направлению к естественным отверстиям), во рту к носовым ходам (кашель и чихание). Эти оболочки выделяют секреты, обладающие бактерицидными свойствами, в частности за счет лизоцима и IgA. Секреты пищеварительного тракта обладают способностью обезвреживать многие патогенные микробы. Слюна содержит лизоцим, амилазу, фосфатазу. Желчь вызывает гибель пастерелл. В слизистой кишечника мощные антимикробные факторы.

Лимфатические узлы - в них развивается воспаление, в его зоне происходит фиксация микробов нитями фибрина. В воспаление участвуют система комплемента, эндогенные медиаторы.

Фагоцитоз - процесс активного поглощения клетками организма попадающих в него патогенных живых или убитых микробов и других чужеродных частиц с последующим перевариванием с помощью ферментов.

АТ - белки, образующиеся в организме на парентеральное введение высокомолекулярных веществ с признаками генетической чужеродности для данного организма. АТ способны вступать во взаимодействие с АГ в ответ на который оно образовалось и нейтрализовать его биологическую активность. Обычный источник АТ - сыворотка крови. При встрече с АГ АТ нейтрализует не только его инфекционную, но и гемагглютинирующую активность, т.к. блокирует рецепторы вирионов, ответственные за гемагглютинацию, в результате образуется комплекс "АГ+АТ".

АТ могут существовать в миллионах разновидностей - каждая со своим уникальным участком для связывания АГ. В совокупности называемые иммуноглобулином (Ig), АТ-белки образуют один из основных классов белков крови, составляя по массе примерно 20% суммарного белка плазмы. Когда АГ присоединяется к мембранным антигенспецифическим рецепторам В-клетки, наступает клеточная пролиферация и дифференцировка с образованием клеток, секретирующих АТ. АТ имеют 2 идентичных АГ-связывающих участка. Простейшие молекулы АТ схематически имеют форму буквы гамма с двумя идентичными АГ-связывающими участками - по одному на конце каждой из двух "ветвей". Поскольку таких участков 2, эти АТ называют бивалентными. Защитное действие АТ объясняется не просто их способностью связывать АГ. Они выполняют и целый ряд других функций, в которых участвует "хвост", называются эффекторными функциями и обусловлены не участием в них "хвоста", а структуройFc-фрагмента. Эта область молекулы определяет, что произойдет с АГ, если он оказался связанным. Антитела с одинаковыми АГ-связывающими участками могут иметь весьма разные "хвостовые" области, а поэтому и разные функциональные свойства. МолекулаIgG,D,Eи сывороточногоIgAсостоит из 4 полипептидных цепей - 2 легких и 2 тяжелых. У высших позвоночных существует 5 разных классов антител -IgA,IgD,IgE,IgG,IgMкаждый со своим классом тяжелых цепей.IgG- АТ составляют основной классIgнаходящихся в крови. Они производятся в больших количествах при вторичном ответе, это единственные АТ, которые могут переходить от матери к плоду. Это преобладающий класс АТ, образуемых при большинстве вторичных иммунных ответов, на ранних стадиях первичного иммунного ответа в кровь поступают главным образом АТIgM- они также первый класс АТ, продуцируемых развивающимися В-клетками.IgA- основной класс АТ в секретах молока, слюне слезах, секретах дыхательных путей и кишечного тракта. АТ защищают позвоночных от инфекций, инактивируя вирусы, мобилизуя комплемент и различные клетки, которые убивают и поглощают внедрившиеся МО.

31. Особенности противовирусного иммунитета

1.Противовирусный иммунитет связан с своеобразными защитными механизмами, т.к. вирусы не способны развиваться и размножаться в неживой клетке. Защитное приспособление организма направлено на 2 формы существования вируса. На внеклеточный вирусные неспецифические и специфические факторы иммунитета, на внутриклеточную форму - процесс фагоцитоза. При вирусных инфекциях он всегда незавершенный, интерферон оказывает экзогенное действие на внеклеточную форму, вирусы теряют способность адсорбции, эндогенный интерферон синтезируется в клетках в ответ на вирусный АГ.

2.Средства и методы воздействия на вирусы может быть эффективными только на определенных стадиях существования вируса, что ярче всего проявляется при лечении больных иммунными препаратами, т.к. АТ не способны проникнуть внутрь клеток.

3.Противовирусный иммунитет является более продолжительным по сравнению с бактериальным, а при отдельных вирусных инфекциях он пожизненный (чума КРС, собак, катаральная лихорадка овец, оспа).

32. Роль лимфоидных клеток в противовирусном иммунитете (характеристика Т и В лимфоцитов)

Т-лимфоциты. Тимусзависимые лимфоциты образуются из стволовых клеток кроветворной ткани. Предшественники Т-лимфоцитов поступают в тимус, претерпевают в нем дифференцировку и выходят уже в виде клеток с различными функциями, несущих на себе характерные маркеры. Различают несколько субпопуляций Т-лимфоцитов в зависимости от биологических свойств.

Т-хелперы (помощники) относятся к категории регуляторных вспомогательных клеток. Стимулируют пролиферацию В-лимфоцитов и дифференцировку в антителообразующие клетки (плазматические клетки). Установлено, что ответ В-лимфоцитов на воздействие большинства белковых антигенов полностью зависит от помощи Т-хелперов, которая осуществляется двумя способами. В первом случае требуется прямое воздействие хелперной Т-клетки и реагирующей В-клетки. Полагают, что Т-клетка распознает детерминанты антигенной молекулы которая уже зафиксирована на В-клетке рецепторами клеток: Во втором случае хелперная функция Т-клеток в активации В-лимфоцитов может осуществляться также путем образования растворимых неспецифических хелперных факторов -- лимфокинов (цитокинов).

Т-киллеры (убийцы) выполняют эффекторные функции, осуществляя клеточные формы иммунного ответа. Они распознают и лизируют клетки, на поверхности которых имеются чужеродные для данного организма антигены (опухолевые, вирусные и гистосовместимости). Пролиферация и диференцировка Т-киллеров происходит с участием Т-хелперов действие которых осуществляется в основном с помощью растворимых факторов, в частности интерлеикина. Установлено, Т-киллеры осуществляют реакцию гиперчувствительности замедленного типа.

Т-у с и л и т е л и активизируют иммунный ответ в рамках Т-подсистемы иммунитета, а Т-хелперы обеспечивают возможность его развития в В-звене иммунитета в ответ на тимусзависимые антигены.

Т-супрессоры (подавляющие) обеспечивают внутреннюю саморегуляцию системы иммунитета двумя способами: клетки супрессоры ограничивают иммунный ответ на антигены; предотвращают развитие аутоиммунных реакций. Т-сулрессоры тормозят выработку антител, развитие гиперчувствительности замедленного типа; формирование Т-киллеров обеспечивает становление поддержание иммунологической толерантности.

Т-клетки иммунной памяти обеспечивают иммунный ответ вторичного типа в случае повторного контакта организма с данным антигеном. На мембранах Т-клеток обнаружены антигенсвязывающие рецепторы и Fe-рецепторы, IgA или IgM. Нулевые лимфоциты не имеют отличительных марке ров Т - и В-лимфоцитов. Они способны осуществлять антитело зависимый, не требующий присутствия комплемента, лизис клеток-мишеней при наличии специфических против данных клеток антител. К-лимфоциты являются разновидностью нулевых лимфоцитов. Для них клетками-мишенями являются опухолевые клетки, измененные вирусами Т- и В-лимфоциты, моноциты, фибробласты, эритроциты.

В-лимфоциты. Как и Т-лимфоциты, образуются из стоволовых клеток кроветворной ткани. Предшественники В-лимфоцитов в сумке Фабрициуса претерпевают дифференцировку и затем мигрируют в лимфатические узлы и селезенку, где и выполняют свои специфические функции.

Установлено наличие двух классов В-клеток: В-эффекторы и В-регуляторы. Эффекторными клетками В-лимфоцитов являются антителообразующие клетки (плазматические), синтезирующие антитела одной специфичности, т. е. против одной антигенной детерминанты. В-регуляторы, в свою очередь, делятся на супрессоры и усилители (амплифайеры). Функция регуляторов заключается в выделении медиаторов, угнетающих продукцию ДНК в Т- и В-лимфоцитах только в пределах костного мозга, а также усиление В-эффекторов. В-лимфоциты крупнее Т-лимфоцитов (соответственно 8 и 5 мкм). Благодаря электронной микроскопии выяснено, что поверхность В-лимфоцитов покрыта многочисленными ворсинками и складчатая, а поверхность Т-лимфоцитов гладкая.



33. Роль клеточных факторов в противовирусном иммунитете

Отличается от гуморального тем, что эффекторными элементами клеточного иммунитета являются Т-лимфоциты, а гуморально - плазматические клетки. Он имеет особое значение при инфекциях, вызванных многими вирусами, бактериями, грибами.

Образование цитотоксических Т-клеток (ЦТК) - среди АГ клеточной поверхности, способные вызывать образование ЦТК - продукты МНС (мононуклеарная система), вирусы, опухолеспецифические АГ. ЦТК имеют рецепторы, с помощью которых происходит связывание АГ и запускаются процессы запускающие лизис клетки. Литическая активность Т-клеток начинается с тесного взаимодействия между киллерной клеткой и клеткой-мишенью, происходит изменение мембранной проницаемости клетки-мишени, заканчивающееся разрывом клеточной мембраны.

Способность непосредственно лизировать широкий набор клеток-мишеней, в особенности опухолевых, обладают ПК - они могут лизировать клетки независимо от продуктов МНС (интерферон и ИЛ-2 усиливают литическую активность ПК).

ГЗТ - зависимая от Т-клеток иммунологическая реакция, проявляющаяся в виде воспаления в месте попадания в организм АГ, обычно в коже. Лимфоциты, способные переностить ГЗТ, являются Т-клетками и называются ТГЗТ-лимфоцитами (они могут активизироваться и реагировать на белковые АГ, аллоантигены, антигены опухолей, на АГ вирусов, бактерий, грибов, простейших.

Большую роль в клеточном иммунитете играю макрофаги. Когда возбудители размножаются внутри фагоцитов внутриклеточное уничтожение происходит лишь после того как макрофаги получают стимул от спецсенсибилизированных Т-лимфоцитов. Т-лимфоциты активируют макрофаги за счет выделения лимфокинов.



34. Роль гуморальных факторов в противовирусном иммунитете

Кроме АТ - специфического фактора противовирусного иммунитета - организм вырабатывает особые вирусотропные вещества - ингибиторы, способные взаимодействовать с вирусами и подавлять их активность. Сывороточные ингибиторы обладают широким диапазоном действия: одни подавляют гемагглютинирующие свойства вирусов, другие - их цитопатогенное действие, третьи - их инфекционную активность. Термолабильные ингибиторы содержатся в нормальных сыворотках человека и животных. Они обладают широким диапазоном вируснейтрализующего действия, способны блокировать гемагглютинирующую активность вирусов гриппа, нью-каслской болезни, кори, арбовирусов и других и нейтрализовать инфекционные и иммуногенные свойства ингибиторочувствительных вирусов. Термостабильные гамма-ингибиторы высокоактивны против современных вариантов вируса гриппа. Термостабильные альфа-ингибиторы блокируют гемагглютинирующую, но не инфекционную активность вируса.

35. Противовирусные АТ, их свойства, биологическая роль, методы обнаружения и титрования

АТ - белки, образующиеся в организме на парентеральное введение высокомолекулярных веществ с признаками генетической чужеродности для данного организма. АТ способны вступать во взаимодействие с АГ в ответ на который оно образовалось и нейтрализовать его биологическую активность. Обычный источник АТ - сыворотка крови. При встрече с АГ АТ нейтрализует не только его инфекционную, но и гемагглютинирующую активность, т.к. блокирует рецепторы вирионов, ответственные за гемагглютинацию, в результате образуется комплекс "АГ+АТ".

АТ могут существовать в миллионах разновидностей - каждая со своим уникальным участком для связывания АГ. В совокупности называемые иммуноглобулином (Ig), АТ-белки образуют один из основных классов белков крови, составляя по массе примерно 20% суммарного белка плазмы. Когда АГ присоединяется к мембранным антигенспецифическим рецепторам В-клетки, наступает клеточная пролиферация и дифференцировка с образованием клеток, секретирующих АТ. АТ имеют 2 идентичных АГ-связывающих участка. Простейшие молекулы АТ схематически имеют форму буквы гамма с двумя идентичными АГ-связывающими участками - по одному на конце каждой из двух "ветвей". Поскольку таких участков 2, эти АТ называют бивалентными. Защитное действие АТ объясняется не просто их способностью связывать АГ. Они выполняют и целый ряд других функций, в которых участвует "хвост", называются эффекторными функциями и обусловлены не участием в них "хвоста", а структуройFc-фрагмента. Эта область молекулы определяет, что произойдет с АГ, если он оказался связанным. Антитела с одинаковыми АГ-связывающими участками могут иметь весьма разные "хвостовые" области, а поэтому и разные функциональные свойства. МолекулаIgG,D,Eи сывороточногоIgAсостоит из 4 полипептидных цепей - 2 легких и 2 тяжелых. У высших позвоночных существует 5 разных классов антител -IgA,IgD,IgE,IgG,IgMкаждый со своим классом тяжелых цепей.IgG- АТ составляют основной классIgнаходящихся в крови. Они производятся в больших количествах при вторичном ответе, это единственные АТ, которые могут переходить от матери к плоду. Это преобладающий класс АТ, образуемых при большинстве вторичных иммунных ответов, на ранних стадиях первичного иммунного ответа в кровь поступают главным образом АТIgM- они также первый класс АТ, продуцируемых развивающимися В-клетками.IgA- основной класс АТ в секретах молока, слюне слезах, секретах дыхательных путей и кишечного тракта. АТ защищают позвоночных от инфекций, инактивируя вирусы, мобилизуя комплемент и различные клетки, которые убивают и поглощают внедрившиеся МО.