Влияние вирусов на развитие болезни у животных

Размещено на http://www.allbest.ru/

Уральская государственная академия ветеринарной медицины

Контрольная работа

по предмету: Ветеринарная вирусология

Троицк 2010 г.

Содержание

1. Влияние физико-химических факторов на вирусы

2. Первично-трипсинизированная культура клеток, субкультура. Получение, применение в вирусологии, преимущества и недостатки

3. Поксвирусы. Вирус оспы овец и коз

4. Инфекционный бронхит кур

Список литературы.

1. Влияние физико-химических факторов на вирусы

Вирусы в активном состоянии находятся внутри клетки (вирусные частицы) и вне клетки в покоящемся состоянии (вирионы). В период репродукции вирусная частица тесно связана с клеточными элементами, и сохранение ее зависит от устойчивости клетки. Следует отметить, что наиболее полно изучена устойчивость вирионов.

Устойчивость вирусов животных сравнительно хорошо изучена при воздействии внешних факторов: температуры, излучений (ионизирующего, рентгеновского, ультрафиолетового и светового), ультразвука, давления, рН среды, формалина, гидроксиламина, органических растворителей, фенола и др. Для защиты от этих воздействий у вирионов имеется белковая оболочка. Различное строение и химический состав белковых оболочек, характер связей между составными частями вирионов обуславливают неодинаковую устойчивость вирусов. В зависимости от этих особенностей один и тот же фактор может разрушать одни вирионы полностью, другие частично, а на третьи совершенно не оказывать влияния. Например, в кислой среде (рН 3,0…6,0) большая группа миксомирусов проявляет значительную устойчивость, а некоторые вирусы из семейства Picornaviridae быстро инактивируются. Такое же явление наблюдают по отношению к органическим растворителям: те вирионы, в оболочках которых нет липидов, устойчивы к этим веществам, а липидосодержащие вирусы быстро разрушаются при их воздействии.

Избирательная чувствительность вирусов к физико-химическим факторам - это довольно стойкое свойство, которое передается по наследству. Устойчивость вирусов имеет большое практическое значение.

Способность вирусов частично или полностью инактивироваться при воздействии одних факторов и сохранять свои биологические свойства при действии других широко используют в производстве инактивированных вакцин, при дезинфекции, консервации вирусов.

Инактивация вирусов означает полную или частичную утрату их биологической активности (инфекционности и иммуногенности), которая наступает в результате действия физико-химических факторов. При изменении вирусной нуклеиновой кислоты и белка наступает полная инактивация, то есть потеря всех биологических свойств вируса. Когда изменения происходят только в нуклеиновой кислоте или только в белковой оболочке, говорят о частичной инактивации вируса. В первом случае вирус теряет только инфекционные свойства, но сохраняет иммуногенность, во втором случае сохраняется инфекционность.

Все агенты химической и физической природы в той или иной степени вызывают изменения белковой оболочки и нуклеиновой кислоты вызывают изменения белковой оболочки и нуклеиновой кислоты нуклеоида вируса. Характер и степень этих изменений зависят от природы инактивирующего фактора, его дозы, продолжительности действия и от вида вируса.

При инактивации вируса может происходить или расщепление (гидролиз) белков оболочки с последующим распадом ее на отдельные морфологические единицы, или коагуляция и уплотнение белков с сохранением общей структуры оболочки. Расщепление и распад белковой оболочки наблюдают у вирусов при инактивации их в кислой и щелочной среде при продолжительном, но слабом нагревании. При воздействии этих факторов вирусная нуклеиновая кислота обнажается и подвергается разрушительному действию того же фактора, который вызвал распад оболочки или клеточного фермента нуклеазы, постоянно содержащейся в неочищенных тканевых суспензиях вируса. При действии нуклеаз в вирусной нуклеиновой кислоте происходит разрыв связей между остатком фосфорной кислоты и молекулой сахара.

Коагуляция и уплотнение белковой оболочки вирусов происходят при воздействии на них формальдегида, высокой (выше 70⁰С) температуры или фенола. Механизм инактивации вирусов формальдегидом зависит от концентрации и продолжительности воздействия: высокие концентрации вызывают быструю коагуляцию и уплотнение белков, формальдегид не успевает проникнуть внутрь вириона, и вирусная нуклеиновая кислота сохраняет свою инфекционность.

Указанный механизм инактивации вирусов наблюдают и при воздействии высоких температур, а также раствора карболовой кислоты. При низких концентрациях формальдегида уплотнение белковой оболочки наступает не сразу. Вначале формальдегид реагирует не только с белком оболочки, но, проникая в центр вириона, действует и на нуклеиновую кислоту, нарушая ее водородные связи с белком и ковалентные связи аминогрупп пуриновых и пиримидиновых оснований. В результате целостность молекулы нуклеиновой кислоты нарушается, и она теряет свои инфекционные свойства. вирус ветеринария оспа бронхит

Таким образом, в одних случаях коагуляция белковой оболочки сопровождается разрушением нуклеиновой кислоты и у вируса наступает необратимая потеря инфекционности. В других случаях у вирусной нуклеиновой кислоты способность к репродукции сохраняется, однако, при такой инактивации изменения в белковой оболочке часто носят обратимый характер. При соответствующих условиях физико-химические свойства ее восстанавливаются, в результате чего наступает реактивация вируса, то есть восстановление его инфекционности.

В целях инактивации вирусов были испытаны химические и физические агенты, которые действуют преимущественно на нуклеиновую кислоту: I-пропиолактон, гидроксиламин, ультрафиолетовое излучение некоторых красителей (фотодинамическое действие). Эти агенты, проникая через белковую оболочку, не нарушают ее структуру, но сильно повреждают нуклеиновую кислоту, в результате чего вирус теряет свои инфекционные свойства.

Инактивация вирусов во всех случаях представляет собой физико-химический процесс, который происходит в определенной последовательности по законам течения химических реакций. Развитие этого процесса во времени зависит от дозы (или концентрации) инактивирующего фактора, чувствительности вириона, условий инактивации и других причин.

Для уничтожения вирусов используют кипячение, сухой жар, автоклавирование, ультрафиолетовое излучение, растворы фенола, едкого натра, лизола (2…5%), особенно горячие (70…90⁰ С).

К антибиотикам вирусы не чувствительны.

2. Первично-трипсинизированная культура клеток, субкультура. Получение, применение в вирусологии, преимущества и недостатки

Культура клеток - это клетки многоклеточного организма, живущие и размножающиеся в искусственных условиях вне организма (in vitro).

В 1952 г. Дульбекко и Фогт предложили методику трипсинизации тканей и получение однослойных культур клеток.

В вирусологической практике применяют одну из культур клеток - это первично-трипсинизированные культуры клеток - то есть клетки, полученные непосредственно из органов или тканей организма, растущие in vitro в один слой.

Культуру клеток можно получить практически из любого органа или ткани человека или животного (взрослого или эмбриона). Однако лучше это удается сделать из эмбриональных органов, так как клетки эмбрионов обладают более высокой потенцией роста.

Чаще всего для этих целей используют почки, легкие, кожу, тимус, тестикулы эмбрионов или молодых животных.

Для получения первичных клеток от здорового животного не позднее 2-3 ч после убоя берут соответствующие органы или ткани, измельчают их на кусочки (1-4 мм) и обрабатывают ферментами: трипсином, панкреатином, коллагеназой и другими (чаще трипсином).

Ферменты разрушают межклеточные вещества, полученные при этом отдельные клетки суспендируют в питательной среде и культивируют на внутренней поверхности пробирок или матрасов в термостате при 37⁰С.

Клетки прикрепляются к стеклу и начинают делиться. В развитии культур клеток различают несколько фаз: адаптации, логарифмического роста, стационарную и старения (гибель клеток). Размножаясь, клетки размещаются на поверхности стекла и при полном покрытии его в один слой контактируют друг с другом и прекращают делиться (контактная ингибиция). На стекле формируется слой толщиной в одну клетку (поэтому эти культуры клеток называют однослойными или монослойными) (рисунок).

Обычно монослой формируется через 3-5 дней. Скорость его формирования зависит от вида ткани, возраста животного, качества питательной среды, посевной концентрации клеток и других факторов.

Питательную среду меняют по мере загрязнения ее продуктами жизнедеятельности клеток. Монослой сохраняет жизнеспособность в течение 7-21 дня ( в зависимости от вида клеток и состава питательной среды).

Для культивирования вирусов используют молодые культуры клеток (как только сформировался монослой).

Субкультуры. В вирусологической практике часто используют субкультуры, которые получают из первичных клеток, выращенных в матрасах, путем снятия их со стекла раствором версена или трипсина, ресуспендирования в новой питательной среде и пересева на новые матрасы или пробирки. Через 2-3 суток формируется монослой.

Практически субкультуру можно получить из всех первичных культур клеток. (Хуже субкультивируются куриные фибробласты.) Субкультуры по чувствительности к вирусам не уступают первичным культурам клеток, кроме того, они более экономичны, и есть возможность выявления контаминации клеток вирусами. Субкультуры получают от 2-5 пассажей (перевивок) и очень редко до 8-10. Последующие пассажи приводят к изменению морфологии клеток и их гибели. Если клеточные культуры прошли более 10 пассажей, они уже на стадии перехода к перевиваемым культурам клеток.

3. Поксвирусы. Вирус оспы овец и коз

Классификация возбудителя. Вирусы оспы образуют обширное семейство

поксвирусов (Poxviridae), семейство ДНК-содержащих вирусов, вызывающих у животных и человека оспенные и оспоподобные болезни. Семейство подразделяется на 2 подсемейства: Chordopoxvirinae (позвоночных) и Entomopoxvirinae (насекомых). Поксвирусы позвоночных включают 6 родов:

1) Orthopoxvirus (возбудители оспы человека, обезьян, оспы коров, осповакцины, инфекц. эктромелии, оспы кроликов, верблюдов, буйволов, лошадей);

2) Avipoxvirus (возбудители оспы птиц отр. куриных, голубиных и воробьиных);

3) Capripoxvirus (возбудители оспы овец, коз и кожной бугорчатки кр. рог. скота типа Нитлинг);

4) Leporipoxvirus (возбудители фибромы Шопа у кроликов, миксомы кроликов, фибромы зайцев, белок и калифорнийской миксомы);

5) Parapoxvirus (вирусы ОРФ, эктимы овец, контагиозной эктимы антилоп, папулёзного стоматита и псевдооспы коров, оспы морских львов и др.);

6) Suipoxvirus (вирус оспы свиней).

Строение. Морфология вируса оспы коз, характеризуется в препаратах-отпечатках с поверхности свежего разреза папул обнаруживают небольшие одиночно разбросанные скопления оспенных вирионов первого и второго типов. Вирионы первого типа кирпичеобразной формы с закругленными краями, их размер 250-300 х 150-200 х 100 нм. Оболочка состоит из коротких трубчатых филаментов диаметром 9 нм. Вирионы второго типа имеют размер 320 х 200 нм, у них хорошо выражены две мембраны. Белковая оболочка филаментов вирионов оспы очень хрупкая.

При электронно-микроскопическом исследовании ультратонких срезов эпидермиса и собственно кожи оспенные вирионы были обнаружены в макрофагах и фибробластах, редко (в небольших количествах) - в нейтрофильных клетках и эндотелии, а также в межклеточном пространстве. В кератиноцитах эпидермиса кожи животных вирус оспы коз не обнаруживался. В цитоплазме макрофагов, пораженных вирусом, находят паракристаллические скопления. Ядра пораженных макрофагов слегка набухшие. Внешняя мембрана оболочки их выпячивается. Ни в одном случае не было найдено внутриядерных вакуолей, характерных для действия вируса оспы овец и вируса генуинной оспы свиней ( Е. И. Скалинский, Ю. Ф. Борисович, 1976).

Морфология вируса оспы овец - размер вириона 194 х 115 нм (по Е. И. Скалинскому (1966)), 310 х 240 нм (по Кохеру (1971)). В центре вириона находится электронноплотное, устойчивое к пепсину тельце - нуклеоид. В нем различают гранулярную и фибриллярную структуру. ( Кохен, 1971).

Особенности репродукции. В отличие от большинства других ДНК-содержащих вирусов, вирусы оспы размножаются в цитоплазме клеток. Размножение их начинается с транскрипции вирусной ДНК вирионной ДНК-зависимой РНК-транскриптазой. Размножение этих вирусов сопровождается образованием включений типа В и А. вирусы содержат нуклео-протеидный антиген (NP-антиген), выявляемый в реакциях связывания комплемента и иммунофлюоресценции. Для вирусов оспы характерен феномен негенетической реактивации.

Спектр патогенности и антигенная вариабельность. Спектр патогенности вируса оспы коз в естественных условиях протекает как самостоятельная болезнь и поражает только этих животных. У овец, вирус поражает только овеу, но наиболее восприимчивы мериносы и менее - животные грубошерстных пород. Антигенная вариабельность вируса оспы коз иммунизирует коз против пустулезного дерматита (контагиозной эктимы), но не наоборот. Установлено, что антисыворотки против оспы коз нейтрализуют вирус пустулезного дерматита. Обратная же реакция нейтрализации не происходит. Вирус оспы коз защищает крупный рогатый скот против бугорчатки (нодулярного дерматита). Вирус оспы овец - все выделенные в разных странах штаммы вируса оспы овец в антигеном отношении идентичны. Иммунологические варианты не найдены. Методами двойной диффузии в агаре и иммуноэлектрофореза обнаружена неоднородность и различная иммуноэлектрофоретическая подвижность компонентов растворимого антигена вирусов оспы.

Устойчивость во внешней среде. Вирус оспы коз при температуре ниже 0⁰ сохраняется не снижая своих вирулентных свойств свыше 2 лет, в кошарах - до 6 месяцев, в шерсти переболевших коз - до 2 месяцев. Довольно долго (до 9 месяцев и дольше) вирус выживает в высушенном состоянии и в соединении с белками, устойчив к эфиру (отдельные штаммы чувствительны). Что же касается овец, то в лимфе при температуре 2-4⁰ вирус выживает не менее 2 лет. Быстро погибает он при высокой температуре (при 55⁰ за 20 мин) и в гниющем материале. Долго выживает в сухих оспенных корочках, в лимфе при минус 5-10⁰ в течение 4-5 лет. Вирус чувствителен к хлороформу и диэтиловому эфиру.

Основные признаки болезни вызываемые возбудителем вируса оспы овец характеризуется кратковременным повышением температуры тела на 1-2⁰, снижением аппетита, далее сопровождается катаральным конъюнктивитом, ринитом и отеками подкожной клетчатки (предвестниковая стадия, длительность 1-2 дня). Затем опухают веки и появляются истечения из глаз и носа. Оспенная экзантема чаще и более четко выступает на малошерстных участках головы, внутренних частях конечностей, хвоста и вымени, а у баранов - на мошонке. Сначала появляются розеолы, которые затем превращаются в темно-красные быстро некротизирующие папулы. Эти так называемые пеликулированные папулы имеют вид серо-белых или желтоватых плотных припухлостей с красноватыми ободками. Покрывающий их тонкий слой эпидермиса некротизируется и легко снимается. Обнажается влажная воспаленная поверхность кожи. Иногда папулы сливаются, и, когда подсыхают, образуются корочки, после отпадения которых остаются белые или розовые пятна. Если некротизируются глубокие слои кожи, образуются толстые струпья, которые отпадают через 5-6 дней или позже. Края рано некротизировавшихся папул слегка приподняты, а центр немного запавший - сплюснутые. Иногда развиваются везикулезные папулы размером 4-6 мм. Они представляют собой многокамерные пузырьки с натянутыми серо-белым некротизированным эпидермисом с запавшей серединой.

Иногда у овец образуются так называемые веррукоидные (бородавкоподобные) папулы. Это плотные сухие, цвета кофе образования, которые сверху покрыты чешуйками; при этом эпидермис кожи может быть сильно утолщен и перерожден. Особенно тяжело протекают сливная и геморрагическая формы оспы.

Вирус вызывает ряд типичных изменений в коже: гиперплазию эпителия и пролиферацию клеток эндотелия, выстилающего капилляра, формированию микрососудов эпидермы, образование элементарных телец, возникновение цитоплазматических включений на месте размножения. Многочисленные овальные цитоплазматические включения располагаются рядом с ядром и сходны с тельцами Гварниери. Они служат местом репликации вируса и окружены его зрелыми частицами.

Что же касается вируса оспы коз, то протекает примерно так же, как у овец. Оспенный процесс локализуется на вымени. У козлят-сосунов, заразившихся после рождения, болезнь протекает атипично, процесс локализуется на слизистой оболочке рта, чаще в сычуге. У больных наблюдают кашель, учащение дыхания и гнойные истечения из носа (позже образуются корки возле ноздрей и губ).

4. Инфекционный бронхит кур

Инфекционный бронхит кур (Bronchitis infectiosa avium) - высококонтагиозная, остро протекающая болезнь, главным образом кур, вызываемая вирусом сем. Coronaviridae (Коронавирус) и сопровождающаяся поражением органов дыхания у цыплят и репродуктивных органов со снижением яйценоскости у кур.

Эпизоотологические данные

К вирусу восприимчивы куры всех возрастов, но чаще 20-30-дневные цыплята. Источник болезни - больные куры и цыплята, выделяющие вирус с секретом дыхательных органов, пометом. Установлено вирусоносительство кур. В естественных условиях вирус распространяется аэрогенным (воздушным) путем больной и переболевшей птицей.

Патологоанатомические признаки

При патологоанатомическом исследовании павших птиц наиболее часто изменения обнаруживают в органах дыхания (слизь и гиперемия слизистой оболочки носа, подглазничных синусов, трахеи, серозное или серозно-фибриозное воспаление бронхов и воздухоносных мешков).

В верхних дыхательных путях у цыплят наблюдяется прозрачная жидкость. Слизистая оболочка покрасневшая, отечная. Поражения носовой полости, подглазничных синусов более выражены у цыплят младших возрастов. Легкие наполнены кровью, слизистая оболочка бронхов утолщена, развивается пневмония. В некоторых случая у цыплят поражаются воздухоносные мешки. Стенки их местами утолщается, становится непрозрачной

У кур-несушек изменения обнаруживают только в яйцеводе и яичнике. Яйцевод уменьшается в длине, а яичник - в объеме. Фолликулы яичника плохо развиты. Просвет яйцевода может быть полностью или частично закрыт. В этом случае при нормально развитом яичнике яйца складываются в брюшную полость.

Клинические признаки.

Инкубационный период - 2-6 суток.У заболевших цыплят наблюдаются вялость, угнетение, сонливость, одышка, чихание, конъюнктивит, опухание носовых пазух, истощение, потеря аппетита, хриплое дыхание с открытым клювом. У молодых (старше 30 суток) и половозрелых птиц болезнь протекает легче, часто бессимптомно. При ИБК отмечают: 1) респираторный синдром - болезнь протекает остро, летальность среди цыплят 1-3-недельного возраста - 5-33%, у цыплят до 2-х нед внезапная гибель наступает от асфиксии после скопления экссудата в трахее; 2) поражение репродуктивных органов - на любой стадии яйцекладки снижение продуктивности на 30-40%, яйца неполноценные с известковыми наростами и вдавливаниями на скорлупе, выводимость цыплят снижается; 3) нефрито-нефрозный синдром - поражение почек и мочеточников с отложением уратов, диарея, депрессия, летальность 57-70%.

Исследуемый материал

Для диагностики инфекционного бронхита из птицехозяйств, где имеется подозрение на заболевание, в лабораторию направляют 5-10 цыплят с признаками поражения респираторных органов. Одновременно посылают 15-25 проб сыворотки крови от кур, подозрительных по заболеванию. В лаборатории от больных цыплят после убоя берут кусочки трахеи, гортани, легких и используют для выделения вируса на эмбрионах кур и для постановки биопробы на здоровых цыплятах.

Методы лабораторной диагностики

Методы, применяемые в лабораторной диагностике инфекционного бронхита кур:

1. иммуноферментативнный анализ (ИФА) по выделению и идентификации вируса

2. биопроба

3. реакция преципитации в агаровом геле (РПГ)

4. реакция нейтрализации (РН) на эмбрионах кур

5. реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

6. Показатели, по которым диагноз считают положительным

Диагноз ставится на анализе эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.

Лечение и профилактика ИБК.

Меры по предотвращению болезни (лечению) сводятся к изолированию территориального очага болезни, дезинфекции помещений птиц, использованию специальной вакцины. Для профилактики инфекционного бронхита применяют живые и инактивированные вакцины. Живые вакцины обеспечивают более напряженный и более длительный иммунитет, чем инактивированные.В России для специфической профилактики ИБК применяют сухую вирус-вакцину из штамма-«АМ» Так, живая вакцина из голландского штамма Noblis H-52 предохраняет птицу от прямого заражения штаммами Флорида, Хольт, Массачусетс, Коннектикут.

Список литературы

1. Гайдамович С.Я ., Жданов В, М., Новый этап таксономии вирусов, “Вопросы вирусологии”, 1974, №3, с. 370-81.

2. Лихачев Н.В., Борисович Ю.Ф.. Оспа, в кн.: Болезни свиней, 3 изд., М., 1970; их же, Оспа, в кн.: Болезни птиц, 2 изд., М., 1971; их же, Оспа коз, в кн.: Болезни овец и коз, 3 изд., М., 1973; их же, Оспа коров, в кн.: Инфекционные болезни крупного рогатого скота, М., 1974;

3. Сюрин В. И.,Белоусова Р. В., Фомина Н. В. Ветеринарная вирусология Агропромиздат, 1991.

4. Сюрин В.И. и др. Частная ветеринарная вирусология. - М.: Колос, 1979.

5. Троценко Н.И., Белоусова Р.В., Преображенская Э.А. ., Практикум по ветеринарной вирусологии. Учебник для ВУЗов М:. Колос. 1989.

Размещено на Allbest.ru