Удосконалення технологічних прийомів підвищення спермопродукції баранів-плідників і відтворювальних якостей вівцематок різного напрямку продуктивності

Размещено на http://www.allbest.ru/

ДЕРЖАВНИЙ ВИЩИЙ НАВЧАЛЬНИЙ ЗАКЛАД

“ХЕРСОНСКИЙ ДЕРЖАВНИЙ АГРАРНИЙ УНІВЕРСИТЕТ”

БОЛОТОВ ЮРІЙ ІГОРОВИЧ

УДК 636.32/.38.082.453

УДОСКОНАЛЕННЯ ТЕХНОЛОГІЧНИХ ПРИЙОМІВ ПІДВИЩЕННЯ СПЕРМОПРОДУКЦІЇ БАРАНІВ-ПЛІДНИКІВ І ВІДТВОРЮВАЛЬНИХ ЯКОСТЕЙ ВІВЦЕМАТОК РІЗНОГО НАПРЯМКУ ПРОДУКТИВНОСТІ

06. 02. 04 - технологія виробництва продуктів тваринництва

АВТОРЕФЕРАТ

дисертації на здобуття наукового ступеня

кандидата сільськогосподарських наук

Херсон - 2010

ДИСЕРТАЦІЄЮ Є РУКОПИС

Робота виконана в Інституті тваринництва степових районів ім. М.Ф. Іванова “Асканія-Нова” - Національному науковому селекційно-генетичному центрі з вівчарства, НААНУ

Науковий керівник:

доктор сільськогосподарських наук, професор

Нежлукченко Тетяна Іванівна,

ДВНЗ «Херсонський державний аграрний університет», декан БТФ, завідувач кафедри технології виробництва продукції тваринництва

Офіційні опоненти:

доктор сільськогосподарських наук, професор

Китаєва Алла Павлівна,

Одеський державний аграрний університет, професор кафедри технології виробництва і переробки продукції тваринництва

кандидат сільськогосподарських наук, доцент

Похил Володимир Іванович,

Дніпропетровський державний аграрний університет, завідувач кафедри технології виробництва продуктів тваринництва

Захист відбудеться “1 ” липня 2010 року о 10 ⁰⁰ годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 67.830.02 у ДВНЗ “Херсонський державний аграрний університет” (73006, м. Херсон 6, вул. Р. Люксембург 23, ХДАУ, ауд. 92 головного навчального корпусу).

З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці ДВНЗ “Херсонський державний аграрний університет” за адресою: 73006, м. Херсон 6, вул. Р. Люксембург 23.

Автореферат розісланий “ 31 ” травня 2010 року

Вчений секретар спеціалізованої вченої ради Н.М. Корбич

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Актуальність теми. Відродження галузі вівчарства на новій якісній основі вимагає удосконалення технологічних прийомів відтворення високопродуктивних генотипів. До шляхів, що сприяють цьому, відносяться: упровадження методу глибокого заморожування сперми, який дає змогу накопичувати і зберігати сперму протягом тривалого часу, збільшення спермопродуктивності баранів-плідників за рахунок введення у їх раціон різноманітних кормових добавок і біологічно активних речовин (Наук В.,1972, Полянцев Н., 1990).

Ефективність указаних методів залишається недостатньою, що пояснюється неповнотою знань закономірностей біохімічних та біофізичних процесів у статевих клітинах і органах під час дозрівання, охолодження, заморожування, відтавання, осіменіння і запліднення (Милованов В., Варнавский А. 1970, Наук В. 1972, Шинкаренко І. 1991)

Асептичність сперми плідників у процесах її одержання та зберігання є однією з умов штучного осіменіння. Мікробна контамінація шкідливо впливає як на життєдіяльність сперміїв, зменшуючи їх активність і відповідно запліднюючу здатність, так і на збереженість ембріонів, оскільки мікроорганізми можуть викликати запальні процеси у статевих шляхах самки і навіть призвести до її безпліддя. Нативна і кріоконсервована сперма баранів-плідників повинна відповідати стандарту, тобто характеризуватися певними показниками мікробіологічного забруднення. Тому питання удосконалення технології кріоконсервації, тривалого зберігання і відтаювання сперми баранів-плідників, а також розробки способів зменшення мікробної контамінації нативної і кріоконсервованої сперми баранів-плідників є актуальними.

Зв'язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційну роботу виконано відповідно до тематичних планів лабораторії відтворення сільськогосподарських тварин інституту тваринництва степових районів ім. М.Ф. Іванова "Асканія-Нова" - Національного наукового селекційно-генетичного центру з вівчарства, зокрема: "Розробити і впровадити у племінному вівчарстві систему інтенсивного відтворення якісних генотипів тварин на основі удосконалення біотехнологічних методів", 1991 - 1995 рр. (номер державної реєстрації ІА 010009798), "Удосконалити біотехнологічні прийоми інтенсивного відтворення овець, розробити профілактику безпліддя тварин у південному регіоні України" , 1996 - 2000 рр. (номер державної реєстрації 0197U013643), "Розробити систему раціонального використання племінних баранів-плідників і вівцематок на основі нових біотехнологічних розробок", 2000 - 2005 рр. (номер державної реєстрації 0101U007383), "Розробити методи прискореного створення та впровадження нових генотипів овець на основі вивчення закономірностей оо-, спермато- та раннього ембріогенезу", 2006 - 2010 рр. (номер державної реєстрації 0107U003471).

Мета і завдання дослідження. Мета досліджень - удосконалення системи раціонального використання племінних баранів-плідників і вівцематок на основі розробки технологічних прийомів кріоконсервації сперми тварин різних генотипів та застосування біологічно-активних речовин в їх годівлі.

Для реалізації цієї мети ставилися завдання:

- вивчити відтворювальну здатність овець таврійського типу асканійської тонкорунної та асканійської каракульської порід;

- розробити прийоми підвищення спермопродуктивності і запліднювальної здатності сперми баранів-плідників залежно від рівня їх ліпідного живлення, а також при використанні біологічно-активних речовин;

- дослідити негативний вплив забруднюючих речовин у кормах на патогенність сперми баранів-плідників;

- удосконалити методику глибокого заморожування і тривалого зберігання сперми баранів-плідників;

- розробити прийоми зменшення мікробної контамінації сперми баранів-плідників.

- визначити економічну ефективність отриманих досліджень.

Об'єкт дослідження. Формування відтворювальних якостей овець різного напрямку продуктивності залежно від спадкових, паратипових факторів і технологічних прийомів.

Предмет дослідження. Барани-плідники та вівцематки і отримане від них потомство асканійської каракульської породи та таврійського типу асканійської тонкорунної породи, кількісні та якісні показники нативної сперми баранів-плідників та сперми після кріоконсервації.

Методи дослідження. Зоотехнічні (відтворювальна здатність вівцематок та баранів-плідників), біологічні (морфологія сперміїв, морфометрія сім'яників та їх придатків), лабораторні (оцінка якості спермопродукції), біометричні (середні значення та їх похибка, рівень вірогідності), аналітичні (огляд літератури, узагальнення результатів власних досліджень).

Наукова новизна одержаних результатів. Уперше встановлено вплив на спермопродуктивність баранів-плідників таврійського типу асканійської тонкорунної та асканійської каракульської порід використання біологічно-активних речовин.

Уперше на вівцях асканійської тонкорунної породи доведено, що кріоконсервація і подальше зберігання сперми у пайєтах має суттєву перевагу над методом заморожування і зберігання сперми у відкритих гранулах.

Розроблено нове лактозо-трис-жовтково-гліцеринове середовище для кріоконсервації сперми баранів-плідників у герметичних упаковках, що забезпечує підвищення рівня життєздатності сперміїв після відтавання на 45 - 50%.

Розроблено і апробовано шприц-катетер для штучного осіменіння вівцематок відталою спермою, що була заморожена в пайєтах. Використання такої сперми, при двохкратному осіменінні вівцематок в одну охоту з інтервалом у 10-12 годин, забезпечує підвищення рівня запліднюваності на 12,5% та одержання додатково 18,3% ягнят на 100 осіменених вівцематок.

Практичне значення одержаних результатів. Включення до раціону баранів-плідників вітамінно-мінеральної добавки морського походження в кількості 15% за масою, замість зерна ячменю та пшениці, сприяє збільшенню об'єму еякуляту на 19-22% і кількості сперміїв в еякуляті на 33-36%. Забезпечується запліднення вівцематок таврійського типу асканійської тонкорунної породи і їх багатоплідність на рівні 175%. Включення до раціону баранів спеціального пробіотичного препарату "Біо-Мос" у кількості 0,2% від даванки концкормів сприяє підвищенню об'єму еякуляту на 11-13% і кількості активних сперміїв в еякуляті на 38 - 42%. Включення до раціону плідників щоденно 3г комплексного пробіотичного препарату целобактерину забезпечує підвищення об'єму еякуляту на 24% і загальної кількості сперміїв на 40%, а також заплідненню за один статевий цикл до 80% вівцематок при багатоплідності 128%.

Використання розробленого шприца-катетера, при двократному осіменінні вівцематок в одну охоту з інтервалом 10-12 годин, забезпечує підвищення запліднюваності на 12,5% та одержання додатково 18,3% ягнят на 100 осіменених вівцематок.

Особистий внесок здобувача. Автором дисертації особисто виконано весь об'єм експериментальних робіт, проведено аналіз отриманих результатів та їх узагальнення, документування висновків, оформлення рукопису дисертації. На підставі проведених досліджень зроблено висновки і запропоновано пропозиції.

Апробація результатів дисертації. Результати досліджень та основні положення дисертації доповідалися на міжнародній науково-практичній конференції молодих вчених і спеціалістів “ Селекційно - біотехнологічні методи використання генетичного потенціалу сільськогосподарських тварин ” (Інститут розведення і генетики тварин, Київ, 1994), на міжнародній конференції з вівчарства і козівництва, присвяченій 65-річчю ВНДІВК (Ставрополь, 1997) , на міжнародній науково-практичній конференції «Наукові основи розвитку галузі тваринництва в сучасних умовах» (ІТСР «Асканія-Нова» Асканія-Нова, 2006), на засіданнях Вченої Ради інституту “Асканія-Нова” (1993-2008).

Публікації. За матеріалами дисертації опубліковано 11 робіт, із них 8 у фахових виданнях, що входять до переліку, затвердженого ВАК України, де викладено основний зміст результатів наукових досліджень, у тому числі дві статті особисто.

Структура та обсяг дисертації. Дисертаційна робота включає такі розділи: вступ, огляд літератури, матеріал і методика досліджень, результати власних досліджень, аналіз і узагальнення отриманих результатів, висновки, пропозиції виробництву, список джерел літератури і додатки. Загальний обсяг дисертації складає 138 сторінок, ілюстрована одним рисунком, однією фотографією і 31 таблицею. Список літератури включає 160 джерел, із них 42 іноземною мовою.

Матеріал і методика досліджень

За темою дисертаційної роботи в умовах фізіологічного двору інституту тваринництва «Асканія-Нова» ДПДГ «Асканія-Нова» та ДПДГ «Маркеєво» протягом 1993 - 2009рр. проведено дослідження з використанням баранів та вівцематок таврійського типу асканійської тонкорунної породи та асканійської каракульської породи овець.

Схема досліджень наведена на рис.1. Першим етапом дослідів передбачено вивчення відтворювальної здатності вівцематок таврійського типу асканійської тонкорунної породи та асканійської каракульської породи.

Кількісні та якісні показники сперми баранів-плідників досліджували в період осіннього парування за загальноприйнятою методикою у лабораторії відтворення сільськогосподарських тварин ІТСР “Асканія-Нова” (Н.Е.Козло, А.Н. Варнавский, Р.И. Пихооя, 1987).

Потенційні задатки багатоплідності вивчено на 136 різновікових вівцематках асканійської каракульської породи овець шляхом дослідження генеративної функції яєчників, запліднення яйцеклітин, ембріональної смертності на різних стадіях ембріогенезу.

У двох серіях дослідів вивчали генеративну функцію яєчників як постмортально так і лапароскопічно в період статевого сезону (жовтень - листопад) третьої доби після прояву статевої охоти й осіменіння. Постмортально вивчали геніталії, визначали їх проміри і масу, підраховували на обох яєчниках кількість і розміри жовтих тіл статевого циклу, білих тіл від попереднього циклу, атретичних тіл, а також кількість і розміри фолікулів, лапароскопічно - кількість жовтих тіл статевого циклу, наявність і розміри фолікулів на обох яєчниках. Фактичну багатоплідність лапароскопічно досліджених вівцематок визначали за даними їх ягніння.

Протягом п'яти суміжних років нами досліджувалися потенційна і фактична багатоплідність вівцематок асканійської каракульської породи при внутрішньолінійному і міжлінійному підборі на 3398 тваринах, які належать до 5 генеалогічних ліній. Потенційну багатоплідність вивчали на 125 тваринах, а фактичну - на 3273 матках, які ягнилися.

На другому етапі дослідів вивчали ефективність згодовування кормових добавок із відходів насіння багаторічних трав, з аквакультури та преміксу з включенням целобактерину і комплексної вітамінно-мінеральної добавки на спермопродукцію баранів-плідників, а також вплив кормів з різним вмістом забруднюючої речовини (кадмію) на тератогенність сперми.

Третій етап дослідів проведено з метою вивчення впливу сануючих препаратів на мікробну контамінацію сперми. У розмороженій спермі вивчали активність сперміїв залежно від застосованого сануючого препарату і технології заморожування. Досліджували також видовий склад мікроорганізмів сперми.

Четвертим етапом досліджень передбачено удосконалення технології асептичного одержання та кріоконсервації сперми баранів-плідників. На дорослих баранах-плідниках вивчали мікробну контамінацію нативної і кріоконсервованої сперми, що заморожувалася у відкритих, облицьованих гранулах і поліпропіленових соломинках (пайєтах). Визначали загальну кількість бактерій методом посіву на МПА. Ступінь забрудненості кишковою паличкою визначали методом бродильних проб. Наявність збудників інфекційної агалактії, диплококової інфекції, стафілококу визначали методом приготування мазків-відбитків і методом посіву на МПА. Мікробне дослідження сперми на патогенні гриби проводили згідно « Методики микологического исследования и оценки спермы, применяемой при искусственном осеменении сельскохозяйственных животных» (за Антоновим Б.І., 1991).

Визначення економічної ефективності проведено з урахуванням реалізаційної ціни на спермо продукцію, одержану в результаті використаннябіологічно-активних добавок у годівлі баранів-плідників, отриманого додаткового прибутку в грошових одиницях.

Біометричну обробку отриманих даних проводили за алгоритмами Н.А. Плохинского (1969) з використанням комп'ютерної програми Excel.

Результати власних досліджень

Відтворювальна здатність овець таврійського типу асканійської тонкорунної породи. Дослідженнями 229 еякулятів установлено, що з підвищенням частки спадковості баранів-плідників за австралійським мериносом спостерігається тенденція до зниження інтенсивності сперміогенезу, про що свідчать дані загальної кількості сперміїв в одному еякуляті (табл.1).

Таблиця 1. - Спермопродукція баранів асканійської тонкорунної породи різної частки спадковості та їх запліднювальна здатність

Генотип АМ*	Досліджено еякулятів	Показники сперми	Запліднювальна здатність
		об'єм еякуляту, мл	рухливість сперміїв, бали	Концентрація сперміїв, млрд./мл	загальна кількість сперміїв в еякуляті, млрд.	осіменено маток, голів	об'ягнилося від першого осіменіння, %	плодючість вівцематок, %
1/2	64	1,12±0,411	7,0±0,10	3,51±0,121	3,93±0,271	581	55,5	146
1/4	29	1,21±0,280	6,6±0,12	3,30±0,140	3,99±0,172	362	60,2	145
3/4	18	1,00±0,251	7,0±0,16	3,00±0,132	3,00±0,179	276	39,0***	125***
3/8	61	0,98±0,312	6,8±0,14	3,56±0,180	3,49±0,220	554	59,0	142
5/8	28	1,11±0,388	6,6±0,13	3,05±0,101	3,39±0,210	250	46,0***	125***
7/16	17	1,06±0,349	6,7±0,17	3,54±0,140	3,75±0,201	191	53,9	133
АМ	12	0,8±0,400	6,9±0,19	3,35±0,198	2,68±0,289	125	44,0	118
*АМ - доля спадковості за австралійським мериносом Примітка: *** вірогідність різниці з контрольною групою Р<0,001.

Барани-плідники таврійського внутріпородного типу з величиною частки спадковості за австралійським мериносом у межах 25 - 30% характеризуються високою інтенсивністю сперматогенезу, виділяючи в одному еякуляті 3,49 - 3,99 млрд. гамет. Проте подальше збільшення частки спадковості призводить до зниження інтенсивності сперматогенезу і до різкого зменшення кількості статевих клітин, досягаючи мінімуму у чистопородних австралійських баранів (2,68 млрд.). Відмічено тенденцію до зниження запліднювальної здатності сперми баранів-плідників із збільшенням їх частки спадковості за австралійським мериносом. Найбільш низькою (39%) була запліднюваність маток при осіменінні спермою баранів з 3/4 часткою спадковості. Вона вірогідно поступалася запліднюваності маток, осіменених спермою плідників з 1/2 і 3/8 часткою спадковості відповідно на 21,2 і 20,0% (Р<0,001). Аналогічна закономірність спостерігалася і за показниками багатоплідності. У вівцематок, яких осіменили напівкровними баранами, вона склала 146%, а у тих, яких осіменили спермою плідників з 5/8 і 3/4 часткою спадковості багатоплідність суттєво знизилася до 125% (Р<0,01). Від чистопородних австралійських баранів отримано лише 118 ягнят на сто вівцематок, що об'ягнилися. При цьому встановлено, що величина частки спадковості вівцематок у межах 1/4….7/16 суттєво не впливає на їх відтворювальну здатність. Подальше підвищення величини частки спадковості супроводжувалося зниженням запліднюваності і величини багатоплідності вівцематок.

Відтворювальна здатність овець асканійської каракульської породи. У першій серії досліджень щодо потенційної багатоплідності вівцематок асканійських каракульських овець встановлено, що у 38 досліджених тварин овулювало 70 фолікулів при потенційній багатоплідності 184,2%.

У промивній рідині яйцеводів виявлено 61 яйцеклітину, з яких були запліднені 51 або 83,6%. Мікроскопічними дослідженнями встановлено, що з ознаками відмирання було 8 або 15,6%.

У другій серії досліджень встановлено, що на яєчниках цих тварин овулювало, відповідно 44 і 56 фолікулів. Таким чином, потенційна багатоплідність маток становила 191,3% - 215,3%. З яйцеводів тварин вимито 41 яйцеклітину, з яких 90,2% були запліднені, у тому числі 8,1% знаходилися на стадії дегенерації. У 26 вівцематок досліджених у плідний період, на яєчниках овулювало 56 фолікулів і в матці розвивалося 50 плодів, з яких 46 було з нормальним розвитком і 4 (8,7%) відмерлих. У контрольних маток з 49 осіменених тварин ягнилося в строк 47, або 95,9% з багатоплідністю - 172,3%.

Дані фізіологічних і морфологічних досліджень свідчать про те, що вихід ягнят від каракульських овець значно знижується в результаті відмирання незапліднених яйцеклітин (16,4%), відмирання зародків у передплідний період (8,7%) і загибелі плодів упродовж плідного періоду (8%).

Характеристика маток різних генеалогічних ліній свідчить, що у тварин усіх досліджуваних ліній фактична багатоплідність (в середньому 164,3%) значно поступається потенційній (182,4%) (табл.2).

Таблиця 2. - Характеристика багатоплідності овець різних генеалогічних ліній при внутрілінійному підборі

Показник	Лінія
	123 сірі	123 чорні	144	434	1185	1542
Досліджено тварин,гол	39	20	16	15	15	20
Виявлено жовтих тіл, шт.	70	40	30	26	27	35
Потенційна багатоплідність, %	179,4	200,0	187,5	173,3	180,0	175,0
Ягнилося маток, гол.	515	729	581	292	544	612
Одержано ягнят, гол	783	1229	967	466	915	999
Кількість ягнят на 100 маток	152,0	168,6	166,4	159,6	168,2	163,2

На яєчниках 125 досліджених вівцематок розвивалося 228 жовтих тіл або 182,4%. У тварин різних генеалогічних ліній цей показник коливався від 173,3% (лінія 434) до 200% (лінія 123 чорного забарвлення). Різниця між найбільшим і найменшим показниками фактичної багатоплідності не така велика і становить від 152,0% до 168,5%.

Крім потенційної і фактичної багатоплідності тварин асканійського каракулю вивчено спермопродукцію баранів-плідників різних ліній (табл.3).

Таблиця 3. - Спермопродукція баранів різних ліній,

Лінія барана	Повторності	Досліджено еякулятів	Показники сперми
			об'єм еякуляту, мл	активність сперми, бали	концентрація сперміїв, млрд./мл	загальна кількість сперміїв, млрд.
123	I	108	0,82±0,031	7,51±0,070	3,07±0,100	2,51±0,081
	II	123	1,03±0,053	9,0±0,101	4,22±0,111	4,35±0,121
144	I	66	0,75±0,040	7,90±0,093	3,39±0,120	2,54±0,082
	II	64	1,01±0,030	8,7±0,080	3,9±0,091	3,94±0,110
434	I	36	0,91±0,062	7,75±0,102	3,15±0,140	2,86±0,101
	II	63	0,97±0,050	8,4±0,080	3,42±0,093	3,32±0,093
1185	I	43	0,78±0,051	6,70±0,111	2,81±0,110	2,35±0,110
	II	57	0,8±0,070	7,8±0,074	3,47±0,12	2,78±0,093
1542	I	24	0,64±0,071	7,20±0,133	2,99±0,120	1,92±0,120
	II	63	0,85±0,062	8,6±0,060	3,42±0,082	2,9±0,081

Вплив використання біологічно-активних добавок у годівлі баранів-плідників на показники їх спермопродукції. Дослідження впливу білково-ліпідних добавок, протеїново-мінеральної добавки з гіпергалинної аквакультури, преміксу з включенням целобактерину, експериментального преміксу “Біо-Мос” у кількості 0,2% від даванки концкормів, комплексного вітамінно-мінерального концентрату на кількісні та якісні показники сперми, а також на статеву потенцію плідників і тератогенність статевих клітин показали, що білково-ліпідні добавки з відходів насіння багаторічних бобових трав у екструдованому вигляді у кількості 10 - 20% за поживністю замість комбікорму сприяють підвищенню сперматогенезу тонкорунних і каракульських баранів-плідників, і не викликають негативних явищ. Заміна 10 і 20% за масою ячменю і 1% за масою мінерального преміксу гіпергалинною аквакультурою справила значний позитивний вплив на кількісні і якісні показники сперми. Так, у плідників обох дослідних груп завдяки зростанню об'єму еякуляту на 14,6 і 18,2 %, активності сперміїв - на 12,7 і 11,9 % і концентрації сперміїв - на 6,0 і 5,2 %, кількість активних сперміїв в еякуляті збільшилася на 36,5 і 39,1 % (Р<0,001). (табл.4,5).

Слід відзначити, що кормові добавки морського походження в зазначених дозах негативно не впливали на процеси сперматогенезу. Кількість патологічних форм сперміїв в еякуляті баранів першої та другої дослідних груп становила відповідно 13,8 і 9,3 %.

Введення до раціону баранів-плідників нетрадиційної протеїново-мінеральної добавки з аквакультури позитивно вплинуло також на запліднювальну здатність сперми. У плідників першої дослідної групи вона, порівняно з контрольною, зросла на 10,3 %, другої дослідної - на 11,7 %.

Таблиця 4. - Результати використання біологічно-активних добавок у годівлі баранів-плідників ,

Показник	Досліджено	Об'єм еякуляту, мл	Активність сперміїв, бали	Концентрація сперміїв, млрд/мл	Загальна кількість сперміїв, млрд/мл	Кількість активних сперміїв в еякуляті, млрд/мл
	гол.	еякулятів
Білково-ліпідна добавка
Асканійська тонкорунна порода
контр.	5	99	0,88±0,060	6,35±0,111	2,58±0,050	2,27±0,061	1,44±0,053
I дослід	5	116	0,8±0,041	6,81±0,122	3,26±0,061	2,60±0,072	1,77±0,064
II дослід	5	81	0,86±0,050	6,53±0,100	3,87±0,041	3,28±0,061	1,83±0,115
Асканійська каракульська порода
контр.	7	249	0,63±0,052	7,5±0,131	2,84±0,081	2,44±0,122	1,83±0,072
I дослід	7	236	0,74±0,040	8,3±0,130	3,86±0,072	2,91±0,131	2,42±0,103
II дослід	7	229	0,78±0,051	8,5±0,111	3,94±0,081	3,09±0,112	2,630,080
Протеїново-мінеральна добавка
Асканійська каракульська порода
контр.	7	299	0,82±0,050	7,52±0,140	3,82±0,091	3,13±0,101	2,35±0,102
I дослід	7	264	0,94±0,061	8,48±0,121	4,04±0,100	3,79±0,121	3,21±0,124
II дослід	7	361	0,97±0,043	8,42±0,131	4,02±0,091	3,89±0,113	3,27±0,123
Комплексна вітамінно-мінеральна добавка
Асканійська тонкорунна порода, весняний період
контр.	5	60	0,74±0,711	7,65±0,200	3,75±0,113	2,77±0,100	2,12±0,084
дослід	5	69	0,82±0,830	7,26±0,193	4,19±0,131	3,43±0,142	2,83±0,093
Асканійська тонкорунна порода, літній період
контр.	5	34	0,79±0,080	7,17±0,182	3,63±0,123	2,86±0,112	2,04±0,120
дослід	5	42	0,94±0,071	7,37±0,191	3,58±0,151	3,37±0,092	2,48±0,171

Встановлено позитивний вплив згодовування целобактерину на процес сперматогенезу, внаслідок чого вірогідно зросли, порівняно з контролем, такі важливі показники сперми як об'єм еякуляту - на 24,1% (Р<0,001), рухливість сперміїв - на 9,7% (Р<0,05), концентрація сперміїв - на 13,2% (Р<0,05) і загальна кількість сперміїв в одному еякуляті - на 40,8% (Р<0,001).

Таблиця 5. - Результати використання преміксів у годівлі баранів-плідників,

Показник	Досліджено	Об'єм еякуляту, мл	Активність сперміїв, бали	Концентрація сперміїв, млрд/мл	Загальна кількість сперміїв, млрд/мл	Кількість активних сперміїв в еякуляті, млрд/мл
	гол.	еякулятів
Премікс з целобактерином
Асканійська тонкорунна порода
контр.	10	174	0,83±0,033	8,78±0,084	3,40±0,054	2,82±0,075	2,48±0,114
дослід	10	176	1,03±0,042	9,63±0,052	3,85±0,063	3,97±0,084	3,82±0,093
Премікс «Біо-Мос»
Асканійська тонкорунна порода
контр.	8	62	0,76±0,065	7,51±0,062	3,55±0,130	2,70±0,096	2,03±0,082
дослід	8	65	0,95±0,041	8,53±0,070	3,54±0,154	3,36±0,103	2,87±0,090

Що стосується наявності у спермі контрольних і дослідних баранів патологічних статевих клітин, то їх кількість становила відповідно 6,30 і 6,15% .

Запліднювальну здатність сперми вивчали на 127 матках, з яких 82 голови штучно осіменили нативною спермою контрольних баранів, і 45 голів спермою дослідних. У дослідній групі з 45 осіменених вівцематок за один статевий цикл об'ягнилося 36, заплідненість становила 80,0%. У контрольній групі з 82 маток об'ягнилося 48 або 58,5%. Одержано ягнят у дослідній групі 46 з багатоплідністю 127,8%, у контрольній групі 53 або 110,4% на 100 маток.

Включення до раціону баранів-плідників дослідної групи експериментального преміксу «Біо-Мос» у кількості 0,2% від даванки концкормів сприяло підвищенню їх статевої потенції на 22,4%, об'єму еякуляту - на 25,0% (Р<0,01), активності сперміїв - на 13,6% (Р<0,01), загальної кількості сперміїв в еякуляті - на 24,4% і кількості активно рухомих сперміїв - на 41,4%. (Р<0,001).

За результатами оцінки якості спермопродукції баранів-плідників установлено, що заміна 15% (за масою) ячменю та пшениці на еквівалентну кількість вітамінно-мінерального концентрату у комбікормі баранів позитивно вплинула на процеси сперматогенезу і сприяла суттєвому його підвищенню.

Об'єм еякуляту у тварин дослідної групи впродовж весняного та літнього періодів збільшився відповідно на 10,8 і 18,9%, загальна кількість сперміїв в еякуляті - на 23,8 і 17,8% у порівнянні з контрольними аналогами. В результаті включення комплексного вітамінно-мінерального концентрату до раціону баранів-плідників дослідної групи кількість активно-рухомих сперміїв в еякуляті достовірно збільшилася на 33,4% весною і на 21,5% влітку (Р<0,001). Застосування кормового концентрату протягом 3,5 місяців негативно не вплинуло на процес сперматогенезу, кількість патологічно розвинених сперміїв не перевищувала 11,9 %.

Вплив сануючих препаратів на мікробну контамінацію сперми. Застосування сануючих препаратів дозволяє знизити рівень мікробної контамінації сперми, тим самим покращуючи її відтворювальну здатність. Дослідженнями 67 проб промивної рідини, взятої з препуцію баранів-плідників таврійського типу асканійської тонкорунної породи перед одержанням сперми, встановлено наявність у ній мікроорганізмів у кількості 253 тіл на 1 мл після обробки перекисом водню і 300 тіл - після обробки фурациліном. Отже використання перекису водню в якості сануючого препарату було на 18,6% ефективнішим, ніж застосування фурациліну. Визначення ступеня забруднення мікроорганізмами показало, що у шести випадках з 39 досліджених (15,45%) мав місце II-й ступінь забруднення, а у 18-ти випадках (46,2%) - III-й ступінь, у 10 випадках (25,6%) - IV-й ступінь і у 5 випадках (12,8%) - V-й ступінь забруднення.

Результати використання сперми баранів, замороженої у поліетиленових соломинках. Доведено, що метод заморожування і подальшого зберігання сперми в пайєтах має суттєву перевагу над методом заморожування і подальшого зберігання сперми у відритих гранулах як при однократному так і при двократному осіменінні маток в одну охоту. Найнижчий відсоток запліднення при однократному осіменінні (19,4%) виявився у маток осіменених спермою замороженою у відкритих гранулах. Із 92 маток, осіменених спермою, замороженою у соломинках, об'ягнилося 25%. При використанні сперми, замороженої в соломинках запліднюваність маток була на 5,6% вищою, ніж у маток, яких осіменяли спермою, замороженою у гранулах (табл. 6).

Таблиця 6. - Результати ягніння вівцематок, осіменених замороженою спермою баранів-плідників

Показники	Однократне осіменіння	Двократне осіменіння
	відкриті гранули	пайєти	відкриті гранули	пайєти
Осіменено вівцематок, гол.	77	92	48	48
Об'ягнилося вівцематок, гол.	15	23	25	31
Заплідненість,%	19,4	25,0	52.1	64,6
Отримано ягнят, голів	21	41	38	47
Багатоплідність,%	140	178,2	152	151
Отримано ягнят на 100 осіменених вівцематок,	27,3	44,6	79,2	97,5

Багатоплідність маток була високою в усіх групах і коливалася від 140% у маток, яких осіменяли спермою, замороженою у гранулах, до 178,2% - у маток, яких осіменяли спермою, замороженою у соломинках. Показники багатоплідності вівцематок свідчать, що заморожена сперма зберігає свої біологічні властивості, а на процес запліднення впливає синхронність між введенням сперми при осіменінні і овуляцією фолікулів. Оскільки термін життєздатності заморожених сперміїв у геніталіях вівці вдвічі - тричі коротший, тому доцільно осіменяти вівцематок не менше двох разів з інтервалом у 10 - 12 годин.

При двократному осіменінні в одну охоту показник запліднення вівцематок, яких осіменяли спермою, замороженою в пайєтах, становив 64,6%, багатоплідність - 151%, що перевищувало показник запліднення у відкритих гранулах на 12,5% при багатоплідності 152%.

Від вівцематок, яких осіменяли спермою, замороженою у відкритих гранулах, одержано менше ягнят на 100 осіменених маток (79,2%), ніж від маток, осіменених за допомогою пайєт (97,5%).

Перевагу вівцематок, яких осіменяли спермою замороженою в пайєтах, можна пояснити тим, що рівень мікробної контамінації у пайєтах зменшується, тож при використанні пайєт ембріони зазнають менш згубного впливу мікроорганізмів.

Таким чином, використання сперми замороженої в пайєтах при двократному осіменінні в одну охоту з інтервалом десять - дванадцять годин забезпечує підвищення рівня запліднюваності на 12,5% та одержання на 18,3% більше ягнят на сто осіменених вівцематок.

Економічна ефективність отриманих результатів. Визначення економічної ефективності проведено з урахуванням реалізаційної ціни на спермопродукцію, одержану у результаті використання біологічно-активних добавок у годівлі баранів-плідників, отриманого додаткового прибутку в грошових одиницях. Мінімальна реалізаційна ціна однієї спермодози становила за цінами 2007 року 10 гривень. Таким чином, від баранів-плідників, яким згодовували білково-ліпідні добавки одержано додатково по 32 спермодози від кожного барана на суму 320 грн., від згодовування протеїново-мінеральної добавки, преміксу та комплексно-вітамінної добавки одержано додатково по 128, 152 та 96 спермодоз на суму 1280, 1520 та 960 гривень відповідно.

При використанні сперми замороженої в соломинках запліднюваність вівцематок була вищою на 5,6% при однократному і на 12,5% при двохкратному осіменінні, ніж у маток яких осіменяли спермою замороженою у гранулах (табл.7).

Таблиця 7. - Економічна ефективність використання замороженої сперми

Показники	Однократне осіменіння	Двократне осіменіння
	відкриті гранули	пайєти	відкриті гранули	пайєти
Осіменено вівцематок, гол.	77	92	48	48
Об'ягнилося вівцематок, гол.	15	23	25	31
Заплідненість,%	19,4	25,0	52.1	64,6
Отримано ягнят, голів	21	41	38	47
Багатоплідність,%	140	178,2	152	151
Отримано ягнят на 100 осіменених вівцематок	27,3	44,6	79,2	97,5
Вартість одного ягняти, грн.	53,70	53,70	53,70	53,70
Вартість отриманих ягнят, грн.	1466,01	2395,02	4253,04	5235,75

Таким чином використання сперми замороженої в пайєтах при двократному осіменінні в одну охоту з інтервалом у 10- 12 годин забезпечує підвищення рівня запліднюваності на 12,5% та одержання на 18,3% більше ягнят на сто осіменених вівцематок, що у грошовому еквіваленті дорівнює 982,71 грн. Включення гіпергалинної аквакультури до комбікорму для баранів, крім помітного поліпшення показників спермопродукції і запліднювальної здатності сперміїв, сприяло зменшенню витрат на кормові цілі зерна ячменю, а також вилучення з комбікорму мінерального преміксу, що сприяло зниженню вартості комбікормів у три рази.

ВИСНОВКИ

1. Удосконалено технологічні прийоми підвищення спермопродукції баранів-плідників і відтворювальних якостей вівцематок для овець тонкорунної і смушкової порід. Визначено показники відтворювальної здатності баранів-плідників таврійського типу асканійської тонкорунної породи: об'єм еякуляту становить 1,11 - 1,31 мл з активністю 7,4 - 7,8 бала, концентрація сперміїв - 2,80 - 3,24 млрд./мл, запліднення маток за один статевий цикл становить - 62 - 71%, багатоплідність - 139 - 165%. Баранам-плідникам асканійської каракульської породи властива висока відтворювальна здатність: активність сперміїв - 7,8 - 9,6 бала, концентрація сперміїв - 3,48 - 4,42 млрд./мл., запліднювальна здатність при одноразовому осіменінні - 68 - 79%. Асканійські каракульські вівці мають задатки високої потенційної багатоплідності, яка у каракульських маток чорного забарвлення становить 183,7%, сірого - 175%.

2. Використання нетрадиційних кормових добавок з відходів очищення насіння багаторічних бобових трав і з аквакультури морського походження сприяє підвищенню сперматогенезу баранів-плідників. Заміна 10 і 20 % (за поживністю) комбікорму білково-ліпідними добавками на 17 і 23 % підвищує об'єм еякуляту, на 33 і 35 % концентрацію сперміїв, на 19,2 і 26,6 % загальну кількість сперміїв в еякуляті. Заміна 10 і 20 мас% ячменю і 1 мас% мінерального преміксу гіпергалинною аквакультурою сприяє зростанню об'єму еякуляту на 14,6 і 18,2 %, активності сперміїв - на 12,7 і 11,9 %, збільшенню кількості активних сперміїв в еякуляті - на 36,5 і 39,1 %, запліднювальної здатності сперміїв - на 10,3 і 11,7 %.

3. Включення до складу раціону баранів-плідників ферментно-пробіотичного препарату целобактерину по 3г на голову в день протягом трьох місяців сприяло підвищенню об'єму еякуляту на 24,1%, активності сперміїв - на 9,7%, концентрації сперміїв - на 13,2% і їх загальної кількості в еякуляті - на 40,8% і запліднювальної здатності на 21,5%. Використання целобактерину підвищує рівень запліднення вівцематок на 21,5%. Включення до раціону баранів-плідників пробіотичного препарату "Біо-Мос" у кількості 0,2% від даванки концкормів протягом 112 днів сприяє підвищенню статевої потенції асканійських баранів таврійського типу на 22,4%, об'єму еякуляту на 25%, активність сперміїв на 13,6%, їх загальної кількості на 24,4%.

4. Підвищення у раціоні баранів-плідників кадмію у 1,5 - 2,0 рази до максимально допустимої норми (0,3 мг на 1,0кг сухої речовини корму) негативно впливає на ріст гонад і розвиток гамет, різко підвищує тератогенність статевих клітин.

5. Метод замороження і подальшого зберігання сперми в поліетиленових соломинках має суттєву перевагу над методом заморожування і зберігання сперми у відкритих гранулах та забезпечує підвищення рівня запліднюваності на 12,5% і одержання на 18,3% більше ягнят на 100 осіменених вівцематок (Р<0,01).

6. Розроблено нове лактозо-трис-жовтково-гліцеринове середовище для кріоконсервації сперми баранів у герметичних упаковках, що забезпечує підвищення життєздатності активних сперміїв після відтавання на 45-50%.

7. Сперма баранів-плідників містить значну загальну кількість мікроорганізмів, рівень якої восени на 20,1% вищий, ніж у весняно - літній період. Обробка препуційного каналу 0,02% - ним розчином фурациліну або 3% - ним розчином перекису водню призводить до зменшення загальної кількості мікробних тіл у спермі на 29,7%. Використання сануючих препаратів “Декомсан” або “Спермосан-3” при розбавленні сперми дозволяє значно зменшити її мікробну забрудненість у процесі кріоконсервації, у відкритих гранулах - на 19,7%, в облицьованих - на 21,8% (Р<0,001).

ПРОПОЗИЦІЇ ВИРОБНИЦТВУ

відтворювальний спермопродукція баран контамінація

Для підвищення якості спермопродукції баранів-плідників пропонуємо включати до їх раціону:

- вітамінно-мінеральну добавку морського походження у кількості 15% за масою замість зерна ячменю та пшениці, що сприятиме підвищенню об'єму еякуляту на 21% і кількості сперміїв в еякуляті на 35%. При цьому забезпечується запліднення 91% вівцематок таврійського типу асканійської тонкорунної породи і їх багатоплідність на рівні 175%.

- спеціальний пробіотичний препарат "Біо-Мос" у кількості 0,2% від даванки концкормів, що сприятиме підвищенню об'єму еякуляту на 12,55 і кількості активних сперміїв в еякуляті на 41%.

- по 3г комплексного пробіотичного препарату целобактерину щоденно, що сприятиме підвищенню об'єму еякуляту на 24% і загальної кількості сперміїв на 40%, а також запліднення в один статевий цикл до 80% вівцематок при багатоплідності 128%.

СПИСОК ОПУБЛІКОВАНИХ ПРАЦЬ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ

1. Болотов Ю.І. Кріоконсервація сперми баранів у соломинках /Ю.І. Болотов//Селекційно-технологічні методи використання генетичного потенціалу с.-г. тварин. К. - 1994. - С .17

2. Болотов Ю.І. Результати використання сперми баранів, замороженої в соломинках / Ю.І. Болотов //Вівчарство.: Міжвід.темат. наук. зб. - Херсон, 1995. - Вип. 28. - С. 96-98.

3. Шинкаренко И.С., Воспроизводительная способность австрализированых овец различной степени кровности /И.С. Шинкаренко, А.И. Катрашенко, Ю.И. Болотов //Матер. межд. науч.-практич. конф. по овцеводству и козоводству, посвященной 65-летию ВНИИОК. - Ставрополь. - 1997. - С. 193-198. (Дисертантом проведено дослідження та оброблено результати)

4. Шинкаренко І.С., Плодовитість каракульських овець асканійської селекції і шляхи її підвищення /І.С. Шинкаренко, М.М. Туринський, Ю.І. Болотов, Н.А. Кудрик, //Вісник аграрної науки. - Київ. - 2005. №11 - С. 36-39. (Дисертантом проведено дослідження та оброблено результати)

5. Шинкаренко І.С. Вплив використання комплексного вітамінно-мінерального концентрату в годівлі баранів-плідників на їх відтворювальну здатність. /І.С.Шинкаренко, Ю.І.Болотов, Г.В. Маніна //Вівчарство: Міжвід.темат. наук. зб. - Херсон, 2005. - Вип. 31-32. - С. 198-203. (Дисертантом проведено дослідження, подготовлено матеріали до публікації)

6. Шинкаренко І.С. Фізіологічні основи розмноження асканійського багатоплідного типу овець. / І.С. Шинкаренко, Ю.І. Болотов // Зб. наукових праць до 75-річчя з дня заснування закладу . ІТСР ім. М.Ф.Іванова «Асканія-Нова» національний науковий селекційно-генетичний центр з вівчарства. Нова Каховка «ПИЕЛ» - 2006 - С. 182-184. (Дисертантом проведено дослідження, підготовлено матеріали до публікації)

7. Шинкаренко І.С. Вплив кормів з різним вмістом забруднюючих речовин на сперматогенез у баранів. / І.С.Шинкаренко, Ю.І.Болотов, М.М. Свистула //Вівчарство: Міжвід.темат. наук. зб. - Херсон, 2005. - Вип. 31-32. - С. 195-197. (Дисертантом проведено дослідження та оброблено результати)

8. Шинкаренко І.С. Система заходів підвищення плодючості асканійського багатоплідного типу овець. / І.С.Шинкаренко, Ю.І.Болотов, М.М. Туринський //Вівчарство.: Міжвід.темат. наук. зб. - Херсон, 2006. - Вип. 33. - С. 78-83. (Дисертантом проведено дослідження та оброблено результати)

9. Болотов Ю.І. Вплив препарату "Біо-Мос" на відтворювальну здатність баранів-плідників. / Ю.І.Болотов, Н.О.Корінець, Н.М. Деменська //Вівчарство: Міжвід.темат. наук. зб. - Херсон, 2007. - Вип. 34. - С. 158-161. (Дисертантом проведено дослідження та оброблено результати)

10. Болотов Ю.І. Ендогенні чинники та репродуктивність баранів-плідників. / Ю.І.Болотов, Н.О. Корінець //Тваринництво України. - 2007. - №9. - С. 27-29. (Диссертантом проведено дослідження, подготовлено матеріали до публікації)

11. Болотов Ю.І. Результати осіменіння вівцематок таврійського типу асканійської тонкорунної породи спермою, кріоконсервованою за різними технологіями. /Ю.І.Болотов, Н.О. Корінець // Наук. вісник «Асканія-Нова» - 2008. - Вип. 1. - С. 213 - 217. (Дисертантом проведено дослідження, підготовлено матеріали до публікації)

АНОТАЦІЯ

Болотов Ю.І. Удосконалення технологічних прийомів підвищення спермопродукції баранів-плідників і відтворювальних якостей вівцематок різного напрямку продуктивності. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата сільськогосподарських наук за спеціальністю 06.02.04 - технологія виробництва продуктів тваринництва. - ДВНЗ «Херсонський державний аграрний університет», Херсон, 2010.

Представлено результати досліджень щодо розробки прийомів підвищення рівня сперматогенезу баранів-плідників залежно від ступеня їх ліпідного живлення, застосування біологічно-активних речовин, вмісту забруднюючих речовин в кормах.

Розроблено шляхи зменшення мікробної контамінації сперми баранів-плідників.

Розроблено нове лактозо-трис-жовтково-гліцеринове середовище для кріоконсервації сперми баранів у герметизованих упаковках.

Доведено, що метод заморожування і подальшого зберігання сперми в поліетиленових соломинках має перевагу над методом заморожування і зберігання сперми у відкритих гранулах та забезпечує підвищення рівня запліднюваності на 12,5% і виходу ягнят на 100 вівцематок - на 18,3%.

Ключові слова: барани-плідники, спермопродукція, кріоконсервація, гонади, гамети, сім'яники.

АННОТАЦИЯ

Болотов Ю.И. Усовершенствование технологических приемов повышения спермопродукции баранов-производителей и воспроизводительных качеств овцематок различного типа продуктивности. - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук по специальности 06.02.04 - технология производства продуктов животноводства. - ГВНЗ «Херсонский государственный аграрный университет», Херсон, 2010.

Диссертация посвящена разработке приемов повышения уровня спермопродукции баранов-производителей в зависимости от степени их липидного питания, применения биологически активных веществ, содержания загрязняющих веществ в кормах.

Разработаны пути уменьшения микробной контаминации спермы баранов-производителей

Разработана новая лактозо-трис-желточно-глицериновая среда для криоконсервации спермы баранов в герметизированных упаковках.

Установлено, что метод замораживания и дальнейшего хранения спермы в полиэтиленовых соломинках имеет существенные преимущества в сравнении с методом замораживания и сохранения спермы в открытых гранулах и при двукратном осеменении в одну охоту с интервалом в 10 - 12 часов обеспечивает повышение уровня оплодотворяемости на 12,5% и выхода ягнят на 100 овцематок - на 18,3%.

Установлено, что сперма баранов-производителей содержит значительное количество микроорганизмов, уровень которого осенью на 20,1% выше, чем в весенне-летний период. Разработаны пути уменьшения микробной контаминации спермы баранов-производителей. Обработка препуция 0,02%-ным раствором фурациллина или 3%-ным раствором перекиси водорода уменьшают общее количество микробных тел в сперме на 29,7%. Использование санирующих препаратов «Декомсан» или «Спермосан - 3» для разбавления спермы позволяет значительно уменьшить её микробную загрязнённость в процессе криоконсервации: в открытых гранулах - на 19,7% и облицованных на 21,8%.

Установлено, что замена в рационах баранов-производителей 10 - 20% комбикормов белково-липидными добавками из отходов семян многолетних бобовых трав в экструдированом виде способствует повышению сперматогенеза тонкорунных и каракульских баранов-производителей, не вызывая побочных явлений. Применение витаминно-минеральной добавки морского происхождения в кормлении баранов-производителей, экспериментального премикса с использованием целобактерина, включение в состав премикса для баранов-поизводителей препарата «Био-мос», а также включение в их рацион комплексного витаминно-минерального концентрата в количестве 15% массы вместо зерна ячменя и пшеницы способствовало повышению потенции животных, увеличению объема эякулята, активности спермиев и их количества в эякуляте.

Установлено, что введение в рацион молодых баранов солей тяжелого металла кадмия в количестве 1,5 - 2,0 раза больше против максимально допустимой нормы (0,3мг/кг сухого вещества корма) отрицательно влияет на развитие семенников и процессы сперматогенеза. При этом значительно повышается тератогенность спермиев, которая наблюдается более 6 месяцев после прекращения употребления этого загрязняющего вещества.

Ключевые слова: бараны-производители, спермопродукция, криоконсервация, гонады, гаметы, семенники.

SUMMARY

Bolotov Yu.I. Improvement of technological receptions of increase of sperm productivity of rams and reproductive qualities of ewes different directions of productivity. - Manuscript.

Dissertation for procurement of the degree of Candidate of Agrarian Sciences under specialty 06.02.04. - Technology of production of products of stock-raising. Kherson State Agrarian University, Kherson, 2010.

Dissertation devoted to development of receptions of increase of level of sperm productivity of rams, depending on the degree of their lipid feed, application of bioactive matters, and maintenance of contaminants in sterns.

The ways of diminishing of microbial contamination of sperm of rams-producers are developed.

A new lactose-tris-vitelline-glycerin environment for crioconservation of sperm of rams in the hermetically packing is developed.

It is well-proven that the method of freezing and further storage of sperm in polyethylene straws takes advantage above the method of freezing and storage of sperm in the opened granules and provides the increase of level of impregnated on 12,5% and output of lambs on 100 ewes - on 18,3%

Key words: rams, sperm production, crioconservation, gonady, gamety, testicles.

Підписано до друку 28 травня 2010 р. Формат 60х90/16

Обс. друк. арк. 0,9. Тираж 100 примірників

Віддруковано редакційно-видавничим відділом „Колос”

Херсонського державного аграрного університету

73006, м. Херсон, вул. Р. Люксембург, 23, ХДАУ

тел. 26-32-89

Размещено на Allbest.ru