Определение концентрации креатинина лабораторными методами

Размещено на http://allbest.ru

Реферат

Определение концентрации креатинина лабораторными методами

1.Креатинин

Креатинин - это азотистый метаболит, конечный продукт превращения креатинфосфата, участвующего в энергетическом обмене.

Синтез креатинина осуществляется, в мышечной ткани. В процессе мышечного сокращения происходит распад креатинфосфата с выделением энергии и образованием креатинина. Отсюда следует что, у крупных животных креатинина немного больше, чем у мелких животных.

Концентрация его в сыворотке крови относительно постоянна и зависит от равновесия процессов синтеза и выведения.

Креатинин относится к беспороговым веществам: в норме фильтруется в клетках почек и не подвергается реабсорбции или секреции в канальцах. Поэтому повышение уровня креатинина обычно свидетельствует о снижении фильтрации в почечных клубочках и понижении выделительной функции почек.

Креатинин может повышаться при обезвоживании, одновременно повышается плотность мочи и содержание креатинина в моче.

Сильное истощение и снижение мышечной массы, сопровождается снижением образования креатинина.

Вместе с большим количеством жидкости из организма удаляется больше креатинина. При почечной недостаточности креатинин в крови остается повышен.

Креатинин используется в анализах, для количества токсичных продуктов обмена.

Образование и выделение креатинина довольно постоянные величины, не зависящие внешних факторов, поэтому динамика креатинина в анализах наиболее точно отражает изменения в работе почек

Креатин постоянно образуется в мышцах в результате метаболизма. Из организма он выделяется только с мочой, полностью профильтровываясь в почках через клубочки и лишь в незначительной степени подвергаясь секреции в почечных канальцах. Концентрацию креатинина в плазме крови считают лучшим косвенным индикатором функции почек, хотя на точность его определения оказывают многие факторы.

В этом случая нельзя сбрасывать со счетов влияние различных факторов, действующих до взятия анализа и во время его проведения. Пробы крови для его проведения следует брать у животных натощак. Некоторое количество креатинина есть в кормах, поэтому после их приема у собак может произойти повышение концентрации в крови выше нормы, что становится причиной не лучших показаний теста. Физическая нагрузка не приводит у собак к значительному изменению концентрации креатинина в плазме крови. Концентрацию креатинина в плазме крови лучше определять ферментным методом.

Сывороточное содержание креатинина может значительно отличаться у кошек и, особенно, у собак различных пород. Кахексия любого генеза, как и низкобелковое питание или тем более анорексия, также может приводить к снижению уровня креатинина. Высокое содержание в употребляемом животными корме мясных ингредиентов (прежде всего термически обработанных), напротив, может приводить к увеличению уровня азотемии, поскольку часть креатина в процессе приготовления кормов переходит в креатинин.

Уровень мочевины в крови напрямую зависит от количества потребляемого белка и может неоднократно меняться в течение суток. Следовательно, у животных, находящихся на малобелковой диете, уровень азотемии, вероятнее всего, будет ниже, чем это можно было бы предполагать, исходя из данных методов диагностики.

К ситуациям или состояниям, которые могут существенно снизить диагностическую ценность определения уровня креатинина, также можно отнести следующие:

1)Возраст и масса тела животного

2)ожирение;

3) мало энергетического вещества в организме

4)низкобелковая диета;

1.Методы исследования креатинина сыворотки крови

креатинин животное лабораторный

В щелочной среде пикриновая кислота взаимодействует с креатинином с образованием оранжево-красной окраски, которую измеряют фотометрическим методом.

Определение в сыворотке крови проводят после депротеинизирования, в моче - после разведения водой. Определение не совсем специфично, интерферируют вещества с активной метиленовой группой и некоторые восстанавливающие вещества, например глюкоза, ацетон, ацетоуксусная и пировиноградная кислоты.

2.Определение уровня креатина в сыворотке

1) Пикриновая кислота, насыщенный раствор. Товарная пикриновая кислота содержит 15--20 (% ) влажности; кислоту не сушить. В 100 (мл) воды растворяют 2 (г) пикриновой кислоты при нагревании на горячей водяной бане. После этого раствор, оставляют отстояться на 24 часа, периодически перемешивая. Затем раствор фильтруют. Реактив стабилен. Хранят в темной посуде.

2) НСl, 0,1 (моль/литр)

3) Основной калибровочный раствор креатинина, 10 (ммоль/л): 113,1 (мг) креатинина доводят до 100 (мл) 0,1 (моль/л) раствором НСl. Хранят в холодильнике в посуде с притертой пробкой. Для определения креатинина в сыворотке крови рабочий калибровочный раствор получают разведением основного раствора водой в 100 раз; 1 (мл )раствора содержит 0,1 (ммоль/креатинина.)

4) Натр едкий, 2,5( моль/литр).

Ход определения:

Определение креатинина в сыворотке крови: 2 (мл) сыворотки смешивают с 6 (мл) насыщенного раствора пикриновой кислоты. Через 5 минут пробирку помещают на 15- 20 секунд в кипящую водяную баню, затем центрифугируют. К 4 (мл) центрифугата добавляют 0,2 (мл) 2,5 (моль/литра) раствора едкого натра и тщательно смешивают. Иногда после подщелачивания раствор мутнеет вследствие выпадения фосфатов. В этом случае раствор еще раз центрифугируют. Затем раствор доводят до объема 10 мл водой. Через 10 минут (не позже 20 минут) измеряют в кювете с толщиной слоя в 2 (см) при длине волны 500--560 (нм) (зеленый светофильтр) против холостой пробы.

Холостая проба: 3 (мл) насыщенного раствора пикриновой кислоты и 0,2(мл) 2,5 (моль/литра) раствора едкого натра доводят до объема 10 (мл) водой.

Расчет производят по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика: из рабочего калибровочного раствора креатинина готовят разведения, как указано ниже.

Через 10 минут производят измерения при тех же условиях, что и опытные пробы. Калибровочная кривая линейна до 260 (мкМоль/литр) креатинина.

3.Определение уровня креатинина в моче

В мерной колбе или цилиндре вместимостью 100 (мл) смешивают 0,5 (мл) мочи (из суточного количества) с 3 (мл) раствора пикриновой кислоты. Смесь тщательно встряхивают и добавляют 0,2( мл) 2,5( моль/литра) раствора едкого натра. Выдерживают при комнатной температуре в течение 10 минут. Доводят объем до 100 (мл) водой. Измеряют на фотометре в кювете с толщиной слоя в 1 (см) при длине волны 500--600 (нм) (зеленый светофильтр) против холостой пробы.

Холостая проба: 3 (мл) раствора пикриновой кислоты и 0,2 (мл) 2,5 (моль/л) раствора едкого натра доводят водой до объема 100 мл. Расчет производят по формуле при сравнении с калибровочной пробой.

Калибровочная проба: к 0,5 мл основного калибровочного раствора прибавляют 3 мл раствора пикриновой кислоты и 0,2 (мл) 2,5 (моль/л) раствора едкого натра. Далее пробы обрабатывают так же, как опытные.

К = Ск * Еоп * а / Ек * б,

где

К - количество креатинина в суточной моче, (мкМоль);

Ск - количество креатинина в калибровочной пробе, 50( мкМоль);

Еоп - экстинкция опытной пробы;

Ек - экстинкция калибровочной пробы;

а - суточное количество мочи;

б - количество мочи, взятой для анализа.

4.Клинико-диагностическое значение

Нарушение выделения креатинина почками наблюдается лишь при патологических процессах. Устойчивое повышение уровня креатинина в крови аналогично повышению уровня мочевины указывает на нарушение работы почечного фильтра и может считаться ранним показателем почечной недостаточности. Повышение содержания креатинина в сыворотке крови отмечается не только при почечной недостаточности и прогрессирующих диффузных заболеваниях почек, но также при закупорке мочевых путей, гипофункции надпочечников, хлорипривной азотемии, голодании и беременности. Азотемия при простатите не дает повышения креатинина.

Понижение уровня креатинина отмечается при анемии, после введения АКТГ.

Содержание креатинина в моче зависит от питания. Помимо эндогенного креатинина в моче содержится креатинин экзогенный, поступающий из мясной пищи.

Повышение содержания его в моче наблюдается при усиленной мышечной работе, лихорадочных состояниях (при которых происходит более интенсивный распад белков), пневмонии, недостаточности печени.

Понижение уровня наблюдается при мышечной дегенерации почек, амилоидозе почек, лейкемии.

Одновременное определение у одного и того же пациента концентрации креатинина в крови и моче значительно расширяет возможности исследования функционального состояния почек, позволяя получить более надежную информацию о процессах фильтрации, реабсорбции и секреции.

Нормативные показатели

Заключение

Исходя из вышесказанного, креатин является важнейшим показателем для проведения анализа разных видов животных. Почки поддерживают уровень креатинина крови в пределах нормы. Соответственно нарушение функции почек ведет к нарушению. Таким образом, креатинин - это хороший индикатор нормального функционирования почек. В случае нарушения почечной функции не зависимости от причин, уровень креатинина в крови будет расти. Очень высокие показатели креатинина крови могут указывать на почечную недостаточность в различных стадиях. Именно по этой причине, анализа крови важно контролировать. Более точным методом определения функции почек является оценка того, сколько креатинина выводится из организма через почки за определенное время.

Список литературы

1.Зайцев С. Ю., Конопатов Ю. В. «Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты» / Зайцев С. Ю., Издательство « Лань» 2004 год.

2.Тилли Л., Смит Ф. Ветеринария. Болезни кошек и собак: Пер. с англ. - М.:ГЭОТАР-МЕД, 2001

3.Чандлер Э.А., Гаскелл К. Дж., Гаскелл Р.М. Болезни кошек / Пер. с англ. - М.:«АКВАРИУМ ЛТД»

Размещено на Allbest.ru