Хламидиоз сельскохозяйственных животных

Размещено на http://www.allbest.ru/

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ

ФГОУ ВПО Башкирский государственный аграрный университет

Факультет ветеринарной медицины

Кафедра

Специальность ветеринария

Форма обучения очная

Курс, группа

Курсовая работа

Хламидиоз сельскохозяйственных животных

Уфа 2014



Реферат

Курсовая работа «Хламидиоз», выполнена студентом очного отделения факультета ветеринарной медицины, 5 курса, группы 501/2

Целью работы является изучение методов диагностики, профилактики, особенностей клинических признаков и проявлений хламидиоза сельскохозяйственных животных.

Задачами данной работы является изучение этиологии происхождения болезни, выявление симптомов, правильная поставка диагноза и лабораторной диагностики.

Оглавление

Введение

1. Краткая характеристика заболевания

2. Характеристика возбудителя

2.1 Морфология возбудителя

2.2 Антигенная структура

2.3 Биологические свойства

2.4 Устойчивость возбудителя

3. Лабораторная диагностика заболевания

3.1 Микроскопический метод

3.2 Метод выделения и культивирования хламидий

3.3 Серологический метод

3.4 Молекулярно-генетический метод

3.5 Эпизоотологические данные

4. Иммунитет

5 Профилактика и меры борьбы с хламидиозом

Библиографический список



Введение

История изучения хламидийных инфекций начинается с 1876 года, когда была установлена взаимосвязь между своеобразно протекающей пневмонией человека и болезнями попугаев, завезенных из тропических стран.

Роль попугаев в заражении людей окончательно была установлена в 1892 году во время вспышки болезни у людей, имевших контакт с попугаями, завезенными из Буэнос-Айреса. Morang в 1895 году предложил заболевание, возникшее при контакте с попугаями, именовать пситтакозом (psittacus) - попугай.

Позднее Haagen и Maurer в 1938 году установили, что птицы, не принадлежащие к семейству попугаев, также являются резервуаром возбудителя инфекции и источником заражения человека, инфекция стала называться орнитозом (ornix) - птица.

Затем было найдено сходство между возбудителями орнитоза, трахомы человека и паховой лимфогранулемы (Rake и Johnson 1942).

Поэтому эти возбудители были объединены в одну группу под условным названием "ОЛТ" т.е. орнитоза-лимфогранулемы-трахомы.

В 1966 году по предложению исследователя Page группу микроорганизмов "ОЛТ", имевших названия-синонимы бедсонии, миагаванеллы, парариккетсии, неориккетсии, гальпровии и др. выделили в самостоятельный род "Chlamydiales"семейства "Chlamydiaceae". Таким образом болезни животных и людей, вызываемые этими микроорганизмами, стали называться "Хламидиозами".



1. Краткая характеристика заболевания

Хламидиоз (Chlamydiosis) сельскохозяйственных животных - это большая группа болезней, объединенных этиологически, но в большинстве своем различающихся по характеру течения инфекционного процесса и формам его клинического проявления. Хламидиозы характеризуются абортами маточного поголовья (коровы, овцы, козы, свиньи, лошади), рождением нежизнеспособного или слабого молодняка с симптомами пневмонии, полиартритов, энтеритов, энцефаломиелитов и конъюнктивитов. Хламидиозы относятся к зооантропонозам с выраженной природной очаговостью.

Болезнь у животных известна под разными названиями: пситтакоз, орнитоз, неориккетсиоз, парариккетсиоз спорадический энцефаломиелит, энцефалит Басса, орнитозная пневмония, вульвовагинит, энтерит, пневмоэнтерит, офтальмия, энзоотический аборт и другие.



2. Характеристика возбудителя

2.1 Морфология возбудителя

Уникальность хламидиозной патологии состоит в том, что хламидии вызывают различные по патогенезу и клиническому проявлению болезни, но принадлежат они к одному роду - Chlamydia.

В соответствии с руководством Д. Берджи, 9-е изд., (1993) возбудитель хламидиоза отнесён к царству Procariotae, отделу Gracilicutes, группе 9 "Риккетсии и хламидии", порядку Chlamydiales, семейству Chlamydiaceae, роду Chlamydophilia, в который входят следующие виды: Chl. psittaci, Chl. pneumoniae, Chl. pecorum, Chl. caviae, Chl. abortus, Chl. felis. Chl. psittaci (болеют люди и птицы, у животных наблюдаются аборты и другая патология); Chl. pecorum (вызывает у животных аборты, полиартриты, энцефаломиелиты, кератоконъюнктивиты, пневмонии, энтериты и маститы); Сhl. caviae (заболевание у животных); Сhl. felis (конъюнктивиты у кошек, в ряде случаев конъюнктивиты у человека); Сhl. abortus (вызывает спорадические аборты у женщин); Chl. pneumoniae (пневмонию и конъюнктивит человека).

В соответствии с классификацией Эйдельштейна И.А. (1999) в порядок Chlamydiales входит род Chlamydia, который включает виды: Chl. trachomatis, Chl. suis, Chl. muridarum. Chl. trachomatis - патогенны для человека, вызывают трахому, лимфогранулёму, цервицит, конъюнктивит; Chl. suis вызывает у животных конъюнктивит, энтерит, пневмонию; Chl. muridarum вызывает заболевание у грызунов.

2.2 Антигенная структура

Несмотря на разность происхождения хламидии содержат общий стабильный "группоспецифический" антиген.

Это позволяет выделенные культуры возбудителя относить к роду хламидий (Кирьянов,1990). Для окраски хламидий применяют методы по Романовскому-Гимза, Маккиавелло, Стемпу. При флюоресценции хламидии дают ярко зеленое свечение.

Возбудитель неподвижен, спор и капсул не образует, грамотрицателен. В настоящее время разработано и предложено ряд методов окраски хламидий. Наиболее практически приемлемыми и употребляемыми являются методы окраски по Стампу, Маккиавелло, Романовкому-Гимзе.

Хламидии имеют уникальный цикл развития. Они могут существовать в виде ретикулярных телец, которые не превышают в диаметре 1,2 мкм, а средний диаметр наиболее многочисленных и опасных в плане заражения промежуточных телец хламидий составляют 0,3 - 0,4 мкм, то есть размеры их соизмеримы с крупными вирусами. Самые высоко инфекционные формы хламидий (элементарные тельца) - это мелкие сферические клетки диаметром 0,25 - 0,3 мкм. Элементарные тельца являются внеклеточной формой существования, а ретикулярные (инициальные) тельца - внутриклеточной формой имеющие структуру типичных грамотрицательных бактерий.

2.3 Биологические свойства

Несмотря на то, что хламидии отнесены к царству Procariotae, особенности биологических свойств (культивирование на 6-7 дневных куриных эмбрионах, культуре клеток) сближают их к вирусами. В своем составе они содержат, ДНК и РНК (чем существенно отличаются от вирусов), около 40% липидов, 35% белка, соляную и фолиевую кислоты, имеют несколько автономных ферментных систем. Размножаясь в цитоплазме живых клеток они образуют мембранно-ограниченные цитоплазматические включения, состоящие из микроколоний (1-12 мкм в диаметре), которые, распадаясь высвобождают сотни элементарных телец. Морфология хламидий зависит от цикла их развития, который слагается из следующих этапов:

1) адсорбция элементарных телец на оболочке клетки и их фагоцитоз;

2) трансформация элементарных телец в инициальные тельца;

3) деление ретикулярных телец с образованием промежуточных форм хламидий;

4) созревание промежуточных форм до элементарных телец.

Патогенные виды хламидий, весьма аналогичны по морфологии, химической структуре, циклу развития, метаболизму и чувствительности к антибиотикам.

Из лабораторных животных к хламидиям чувствительны морские свинки, кролики, белые мыши. Хорошей биологической моделью являются обезьяны. хламидиоз сельскохозяйственный животное пситтакоз

Хламидии сравнительно устойчивы во внешней среде, хорошо сохраняются при низких температурах. В воде не теряют жизнеспособности до 17 дней, в лиофилизированном состоянии - до 3 лет, в не пастеризованном молоке - 23 дня. Возбудитель инактивируется дезсредствами в обычных концентрациях (2-3% раствор натрия гидроокиси, 3% раствор фенола, 2-3% раствор формальдегида и др.). Чувствителен к антибиотикам тетрациклинового ряда (геомицин ретард, террамицин, хлортетрациклин, окситетрациклин и другие). Трудности лечения больных связаны с тем, что возбудитель является внутриклеточным облигатным паразитом и на определенных этапах инфекционного процесса становится недоступным для антибиотиков и других применяемых средств, поэтому курс лечения длительный и зачастую оказывается малоэффективным. Встречаются лекарственно-устойчивые L-формы возбудителя.

2.4 Устойчивость возбудителя

Хорошо сохраняются в замороженном состоянии: при минус 60°С до 20 месяцев, при -20°С до 4-6 месяцев. При температуре + 4°С до 10 дней, при +20°С до 7 дней.

При воздействии высоких температур они быстро погибают.

Легко инактивируются под воздействием традиционных химических средств. Хламидии, чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда.

К заражению хламидиями восприимчивы куриные эмбрионы, белые мыши, морские свинки, в меньшей степени кролики, белые крысы и хомяки.



3. Лабораторная диагностика заболевания

Диагностика хламидиоза базируется на проведении комплексных исследований и наблюдений. При постановке диагноза учитывают эпизоотологические данные, клиническую, патологоанатомическую картину, результаты гистологических исследований. Решающее значение имеет лабораторная диагностика болезни.

Диагностика хламидиоза включает:

1. Микроскопический метод - обнаружение хламидий в исследуемом материале с помощью световой и люминесцентной микроскопии (флуорохромированием и иммунофлуоресценцией);

2. Метод выделения и культивирования хламидий на куриных эмбрионах, культуре клеток, в организме восприимчивых животных с последующей идентификацией возбудителя;

3. Серологический метод - выявление нарастания титра антител в парных пробах сыворотки больных или переболевших животных в: РСК (реакция связывания комплемента), РДСК (реакция длительного связывания комплемента), РНСК (реакция непрямого связывания комплемента), РНГА (реакция непрямой гемагглютинации), ИФА (иммуноферментный анализ);

4. Молекулярно-генетический метод идентификации хламидий - ПЦР (полимеразная цепная реакция).

Диагностика микроскопическим, серологическим и молекулярно-генетическим методами проводится согласно инструкциям по применению соответствующих диагностикумов и тест-систем.

Материал для исследования. От больных и подозрительных по заболеванию животных берут фекалии, соскобы с конъюнктивы, гениталий, используя при этом стерильные инструменты, посуду или упаковочную тару. Исследуемый материал вносят в стерильные пробирки с физиологическим раствором в количестве 1 мл. Пробирки помещают в сосуд со льдом и направляют нарочным в лабораторию. Материал должен быть доставлен в лабораторию в течение 24 часов.

От подозрительных по заболеванию и абортировавших животных берут кровь дважды: первый раз в период клинического проявления болезни, второй - спустя 14 - 21 день после первого взятия с целью получения сыворотки. Сыворотку крови получают по общепринятой методике, и в количестве 1 - 2 мл направляют в лабораторию, где её хранят при - 20°С. Сыворотку, полученную от первого и второго взятия крови, исследуют одномоментно. Гемолизированная, проросшая сыворотка исследованию не подлежит.

От абортировавших маток направляют в лабораторию кусочки плаценты, влагалищную слизь. Абортированные плоды можно отсылать целиком или же их паренхиматозные органы и желудок.

От павших или вынужденно убитых животных посылают кусочки паренхиматозных органов, семенников, головной мозг, пораженные суставы. Материал для исследования отбирают не позднее 2 часов после гибели, аборта или вынужденного убоя животных.

Пробы эякулята или сперму в количестве 1 мл доставляют в лабораторию в пробирках с сухим льдом или в контейнере с жидким азотом.

Доставку исследуемого материала в лабораторию осуществляют с соблюдением правил, исключающих распространение возбудителя болезни.

3.1 Микроскопический метод

Световая микроскопия. Из исследуемого материала готовят препараты-отпечатки или препараты-мазки. Препараты окрашивают по Стемпу, Маккиавелло, Романовскому-Гимзе, по Маккиавелло в модификации Здродовского, по модифицированному методу Гименеж. В препаратах хламидии, располагаются отдельно или скоплениями внутри и вне клеток. При окраске по Стемпу хламидии ярко-красные, цитоплазма клеток бледно-зеленая, ядра клеток окрашены в бледно-зеленый цвет несколько интенсивнее, чем цитоплазма. При окраске по Маккиавелло хламидии приобретают рубиново-красный цвет, цитоплазма клеток - светло-синяя, ядра - темно-синие, а по Романовскому- -Гимзе - возбудитель хламидиоза окрашивается в темно-фиолетовый цвет, цитоплазма клеток фиолетово-голубая, ядра сине-фиолетовые.

Успех микроскопического исследования во многом зависит от качества приготовленных препаратов, возможностей и технического состояния светового микроскопа и опыта бактериолога. Для работы необходимо использовать микроскопы с высоким разрешением (0,14 - 0,2 мкм) и общим увеличением в 1350 - 2000 раз.

Люминесцентная микроскопия. Для индикации хламидий в исследуемом материале используют метод флуорохромирования. Техника окраски: препараты (мазки) фиксируют жидкостью Корнуа в течение 5 мин; двукратно отмывают фосфатно-цитратным буфером по 2 - 4 мин; наносят рабочий раствор акридинового оранжевого на 10 - 20 мин; трижды отмывают фосфатно-цитратным буфером по 2 мин и больше; заключают в этот буфер, прикрепляя покровное стекло парафином.

Исследуют в люминесцентном микроскопе с комбинацией фильтров СЗС, БС, ФС.

Элементарные тельца хламидий флуоресцируют ярко-зеленым светом, их промежуточные формы - от соломенно-темного до оранжевого свечения. Подобные структуры обнаруживают, как внутри, так и вне клеток.

Метод дает хорошие результаты при исследовании мазков из патологического материала, особенно плодовых оболочек абортировавших животных.

Идентификация хламидий проводится с помощью реакции иммунофлуоресценции (РИФ). Используют прямой и непрямой варианты.

Для приготовления препаратов используют стекла с матовой площадкой у края и надписи ведут простым карандашом.

Прямой метод иммунофлуоресценции. Фиксированные холодным ацетоном препараты после промывания ФСБР обрабатывают синькой Эванса 30-40 с, промывают водопроводной водой.

При отсутствии синьки Эванса препараты обрабатывают смесью в равных объемах, состоящей из флуоресцирующей хламидийной сыворотки (содержит антитела против хламидий, меченые ФИТЦ) и бычьего альбумина, меченного родамином, взятого в удвоенном титре.

В случае применения синьки Эванса препараты обрабатывают только меченой флуоресцирующей хламидийной сывороткой (в термостате при +37°С в течение 30-40 мин во влажной камере). Тщательно промывают ФСБР, наносят каплю забуференного глицерина, накрывают покровным стеклом, исследуют под люминесцентным микроскопом.

Непрямой вариант реакции иммунофлуоресценции (РИФ). Готовят следующие растворы: фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБ) -6,8 г NаС1, 0,63 г КН2РО4 и 1,48 г Nа2НРО4 последовательно растворяют в 1 л дистиллированной воды рН 7,2; забуференный глицерин - смешивают одну часть ФСБР с девятью частями глицерина; раствор синьки Эванса: 1 г синьки растворяют в 100 мл дистиллированной воды во флаконе из темного стекла. Для приготовления рабочего раствора красителя (1: 10000) берут 0,1 мл раствора 1: 100 и объем доводят дистиллированной водой до 10 мл.

Техника окраски: мазки из патологического материала, инфицированных клеточных культур и т. п. фиксируют ацетоном на холоде в течение 5-10 мин, промывают ФСБР и подсушивают на воздухе. Для устранения неспецифической люминесценции фона на мазки на 30- 40 с наносят рабочий раствор синьки Эванса (1 : 10000), которую смывают слабой струей водопроводной воды. Наносят на каждый препарат 1-2 капли кроличьей (или другого вида животного) иммунной антихламидийной сыворотки, содержащей обычные немеченные антитела против хламидий в титре не ниже 1:32-1:64. Препарат помещают во влажную камеру и помещают в термостат при температуре - 37°С на 30-40 мин.

Затем тщательно промывают ФСБР три раза по 5-10 мин; на препараты наносят антивидовую (содержащую меченые ФИТЦ антитела против глобулинов того вида животного, с использованием которого получена первая иммунная сыворотка) сыворотку, выдерживают в термостате при температуре +37°С во влажной камере 30-40 минут. Тщательно промывают ФСБР. На каждый препарат наносят по капле забуференного глицерина, накрывают покровным стеклом, которое прикрепляют расплавленным парафином. Препараты исследуют под люминесцентным микроскопом в падающем свете при комбинации светофильтров ФС 1-2, БС-8-2, СЗС 7-2 и запирающем ЖС 18, объектив иммерсионный.

Препараты, обработанные синькой Эванса, в ультрафиолетовых или сине-фиолетовых лучах, имеют красный фон разных оттенков, тогда как элементарные тельца хламидий, их колонии (включения) флуоресцируют зеленым изумрудным светом.

При отсутствии синьки Эванса можно использовать для контрастирования фона бычий альбумин, меченный родамином, который в удвоенном титре смешивают с первой сывороткой 1:1.

Бычий альбумин уступает синьке Эванса в том смысле, что каждый раз дополнительно необходимо определять его рабочую дозу методом титрации.

Фон препаратов, обработанных меченым бычьим альбумином, оранжевый, хламидийные структуры - изумрудно-зеленые.

Контроли: первый тест блокировки - после обработки препарата обычной иммунной (немеченой) хламидийной антисывороткой, флуоресцирующая хламидийная сыворотка не должна вызвать свечения хламидиозного антигена (элементарных телец, промежуточных форм хламидий или их включений);второй тест нейтрализации - после инкубации со специфическим (хламидийным) антигеном, флуоресцирующая хламидийная сыворотка не должна давать заметного окрашивания хламидийного антигена;третий - нормальная, не иммунная меченная ФИТЦ сыворотка того же вида животного, продуцента иммунной хламидийной антисыворотки, не должна окрашивать хламидийный антиген; четвертый - в контрольных препаратах, приготовленных из тканей заведомо здоровых животных, флуоресцирующая хламидийная антисыворотка не должна окрашивать цитоплазму клеток.

3.2 Метод выделения и культивирования хламидий

Выделение хламидий из исследуемого материала проводят на куриных эмбрионах, культуре клеток. Чаще всего для выделения хламидий используют заражение куриных эмбрионов суспензией исследуемого материала.

Исследуемый материал (пробы паренхиматозных органов, лимфоузлов и других тканевых материалов) нарезают мелкими кусочками в стерильную фарфоровую ступку, используя стерильные инструменты. В ступку добавляют стерильный песок и растирают пестиком до получения однородной кашицы. Затем, путем добавления физиологического раствора получают 10 - 20% -ную суспензию. Для удаления грубых частиц суспензию фильтруют, фильтрат центрифугируют при 2 - 3 тыс. об/мин. в течение 25 - 30 минут. Надосадочную жидкость обрабатывают пенициллином из расчета 100 ЕД/мл, стрептомицином 500 ЕД/мл и гентамицином 150 мкг/мл.

Пробы спермы, эякулята, влагалищной слизи используют в неразведенном виде или разводят 1:2 физраствором и обрабатывают антибиотиками. Надосадочную жидкость, пробы спермы, эякулята, влагалищной слизи высевают на МПБ, МПА, среду Китта-Тароцци и выдерживают посевы в термостате 48-72 часа для исключения бактериального загрязнения. При отсутствии роста микрофлоры на питательных средах материал используют для заражения куриных эмбрионов.

Куриные эмбрионы заражают в желточный мешок или хорион-аллантоисную оболочку, Яйца должны быть получены от кур, в рацион которых не добавляли антибиотики. Оптимальный возраст эмбрионов для заражения 6-7 суток. Доза для заражения составляет 0,2 - 0,5 мл исследуемого материала. Эмбрионы инкубируют в термостате при 37°С и овоскопируют ежедневно. Гибель эмбрионов в 1-ые двое суток считают неспецифической. Специфическая гибель их начинается на 3 - 4-ые сутки и может регистрироваться до 10 - 12-ого дня.

При отсутствии специфической гибели эмбрионы на 12-й день вскрывают и проводят пассаж по описанной выше методике. Рекомендуется проводить не менее трех последовательных пассажей, используя при этом центрифугат 10 - 15% суспензии желточных мешков.

Погибшие эмбрионы вскрывают, желточные мешки отбирают и готовят из них препараты-отпечатки. Аллантоисную жидкость проверяют на стерильность путем высева на обычные питательные среды.

Препараты окрашивают и микроскопируют. Результат считают положительным в случае обнаружения хламидий в препаратах, приготовленных из желточных мешков куриных эмбрионов любого из 3-х пассажей.

Хламидии из исследуемого материала можно выделять путем внутрибрюшинного, интраназального, интрацеребрального, интрато-ракального заражения морских свинок. Наиболее приемлемым является внутрибрюшинный способ заражения в дозе 0,5 мл 10%-ной суспензией паренхиматозных органов, приготовленной по методике описанной выше (как для заражения куриных эмбрионов).

Лабораторные животные гибнут на 5 - 10 сутки после заражения. В случае выживания животных, их убивают, из паренхиматозных органов делают 10%-ную суспензию, которой заражают новую партию морских свинок. Необходимо провести не менее 3-х последовательных пассажей, как и на куриных эмбрионах.

Результат исследования считают положительным при обнаружении хламидий в препаратах-отпечатках из органов павших лабораторных животных в любом из 3-х последовательных пассажей с помощью световой и люминесцентной микроскопии.

Для культивирования хламидий используют первичные и перевиваемые культуры клеток (McCoy, L-929, HeLa). Заражение культуры клеток проводят материалом, полученным соскобом со слизистых оболочек или суспензией из паренхиматозных органов. Исследуемый материал помещают во флаконы со стеклянными бусами, содержащими: 2 мл среды 199 с 5% фетальной сывороткой крупного рогатого скота, 45% 0,5М раствора глюкозы. Для подавления бактериальной микрофлоры в исследуемый материал добавляют стрептомицин (200 мкг/мл), канамицин (100 мкг/мл), нистатин (25 мкг/мл). Экспозиция с антибиотиками составляет от 3 до 18 часов, при температуре 4°С, после чего материал вносят по 0,3 мл в пробирки с монослоем клеток. На каждую пробу используют не менее 4-х пробирок с культурой клеток. Одновременно ставят контроли:

1) контроль монослоя в норме;

2) контроль монослоя, инфицированного эталонным штаммом;

3) контроль монослоя, зараженного экстрактом ткани аналогичной исследуемому материалу, но не содержащей хламидий.

Культуры клеток ежедневно микроскопируют с целью обнаружения цитопатического действия (ЦПД).

3.3 Серологический метод

Хламидии имеют групповой термостабильный антиген, который выявляют в серологических реакциях: РСК, РДСК, РНСК, РНГА, ИФА. Наибольшее применение в практике получила РДСК, основанная на выявлении специфических антител в сыворотке крови абортировавших животных (нарастание титра в 2 и более раза). Абортировавших свиноматок исследуют дважды. Кровь от свиноматок берут в день аборта и спустя 21 день после него. С помощью РСК проводят массовое обследование поголовья, что позволяет выявлять бактерионосителей и оценивать эпизоотическую ситуацию в хозяйстве. Наличие комплементсвязывающих антител к хламидийному антигену в низких титрах - показатель инфицированности животных.

Постановку РДСК осуществляют согласно «Методическим указаниям по лабораторным исследованиям на хламидийные инфекции сельскохозяйственных животных», утвержденным ГУВ МСХ СССР 15.04 1986 г. Для постановки РСК Российский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности выпускает «Набор антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных».

В случае нарастания титра антител при исследовании в РНСК парных проб сывороток в два и более раза диагноз считается установленным серологическим методом.

Иммуноферментный анализ применяют для ретроспективной диагностики хламидиоза. Используют твердофазный метод в направлении идентификации антигена и антител.

Сущность ИФА заключается в специфическом взаимодействии антител и антигена с последующим присоединением к полученному комплексу антивидового иммуноглобулина, меченного ферментом, способным вызывать разложение субстрата с образованием цветного продукта ферментативной реакции.

Интерпретация результатов ИФА.Основанием для постановки предварительного диагноза на хламидиоз является увеличение титра антител в парных пробах сывороток в 2-4 раза. При этом учитывается эпизоотическая ситуация в хозяйстве, наличие клинических и патологоанатомических признаков заболевания.

Сыворотки, давшие сомнительную реакцию, подлежат повторному исследованию и при подтверждении первоначального результата считаются положительными.

Животных, с сыворотками крови которых получены положительные и сомнительные результаты, исследуют повторно прямыми методами диагностики для постановки окончательного диагноза.

3.4 Молекулярно-генетический метод

Метод предназначен для выявления ДНК хламидий с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в патологическом материале от животных.

Суть ПЦР заключается в амплификации, т.е. увеличении числа копий строго определенных фрагментов молекулы ДНК или РНК (праймеров) искомого агента in vitro с последующей индикацией амплификона (амплифицируемый участок ДНК) методом электрофореза или другим методом.

ПЦР позволяет идентифицировать возбудитель в количестве 1 бакт. клетки в пробе, специфичность 100%.

Идентифицируют хламидии и их антигены методами световой и люминесцентной микроскопии (РИФ), в РДСК, РНСК, РНГА, ИФА или с помощью ПЦР.

Диагноз на хламидиоз считают установленным в одном из следующих случаев:

1. При выделении возбудителя из исследуемого материала и его идентификации;

2. При получении нарастания титра антител в парных пробах сыворотки крови больных или переболевших животных в РДСК, РНСК, РНГА, ИФА в два и более раз;

3. При выявлении ДНК хламидий в ПЦР.

При диагностике хламидиоза предусмотрены следующие сроки исследований:

- выявление специфических антител - от 1 до 5 дней;

- световая микроскопия - от 30 минут до 2 часов;

- люминесцентная микроскопия - до 3 часов;

- выделение и идентификация хламидий - от 7 до 40 дней;

- выявление ДНК хламидий - от 4 часов до 2 суток.

3.5 Эпизоотологические данные

Хламидиозы имеют глобальное распространение в мире. Их регистрируют в Европе, Азии, Африке, Америке и в Австралии (Бакулов, Юрков, 1973). Ведущим фактором такого широкого распространения является практически неконтролируемый резервуар инфекции в природе среди диких птиц. Описано 132 вида из 28 семейств и 15 отрядов класса птиц - носителей этого инфекционного агента (Терских И.И., 1979). Помимо традиционно известных резервуаров возбудителей хламидиозов - птиц семейств Psittacidae (попугайные) и Columbidae (голубиные), существенное эпизоотологическое значение имеют и другие птицы, особенно птицы водного или околоводного комплекса (утки, чайки и др.)

Циркулируя в природе, возбудитель хламидиоза наиболее интенсивно распространяется по путям миграции диких птиц на территории их зимовья, гнездовий и линьки, формируя природные очаги инфекции (Кирьянов, 1990).

Микроорганизм обнаружен также у ряда членистоногих - эктопаразитов птиц и грызунов.

К хламидиозам восприимчивы все основные виды с/х животных, а также птицы, собаки, кошки. Болеет и человек.

Источником возбудителя инфекции служат больные животные и птицы. Выделение патогена больными животными происходит с секретом из носовых ходов, при кашле, с молоком, мочой, фекалиями, спермой. Особенно интенсивно его выброс во внешнюю среду отмечается с околоплодными водами, абортированными плодами, последами, выделениями из половых органов. Происходит контаминация возбудителем окружающей среды: воздух, полы, стены, кормушки, подстилка, корма, вода. Все это служит факторами передачи патогена здоровым животным.

Основные пути передачи возбудителя алиментарный и аэрогенный. Среди млекопитающих животных обмен возбудителем возможен при акте случки, через сперму при искусственном осеменении. Плоды заражаются внутриутробно, в момент рождения, при употреблении молозива и молока.

Возникновению заболевания способствуют неудовлетворительные условия кормления и содержания, переохлаждение. В стадах животных активизация эпизоотического процесса происходит после отелов, окотов, абортов. Различные стрессовые ситуации дают толчок для активизации эпизоотического процесса и проявления клинической патологии.

Сезонность. С учетом особенностей циркуляции возбудителя наибольший риск для возникновения патологии существует в весенне-летнее время. К этому времени заканчивается весенняя миграция птиц, накапливается восприимчивое поголовье молодняка с/х животных, осуществляется выгон животных на пастбищное содержание, появляются условия для неограниченного контакта животных с окружающей средой.

Патогенез. Главными воротами инфекции являются слизистые оболочки пищеварительного, дыхательного трактов, а также плацента и слизистые оболочки половых органов.

Попав в организм возбудитель первоначально локализуется в регионарных лимфатических узлах, а затем разносится лимфой и кровью по всему организму. Наиболее интенсивное размножение микроба происходит в ретикулоэндотелиальных и лимфоидных клетках, в эпителии бронхов и бронхиол, в альвеолярном эпителии, в органах половой системы.

Под влиянием микроорганизма происходит разрушение клеток. Возбудитель вместе с содержимым разрушенных клеток проникает в кровь, вызывая бактериемию, токсемию, аллергизацию макроорганизма, поражения различных паренхиматозных органов.

Для хламидий характерно длительное персистирование в организме животных, обуславливающее возможность возникновения болезни.

Иммунитет при хламидиозах оценивается как нестерильный.

Клинические признаки. Болезнь характеризуется клиническим полиморфизмом. По преобладанию поражения отдельных органов и систем выделяют самостоятельные формы проявления инфекции: у взрослого рогатого скота - хламидийный аборт к.р.с., хламидийный аборт овец.

У молодняка регистрируются следующиеформы проявления болезни:

- хламидийная бронхопневмония телят;

- хламидийная пневмония овец и коз;

- хламидийный энцефаломиелит телят;

- хламидийный энтерит телят и овец;

- хламидийный полиартрит ягнят и телят;

- хламидийный конъюнктивит телят и овец.

Все эти формы проявления инфекции можно рассматривать под названием "Хламидиоз рогатого скота" с преобладанием того или иного симптомокомплекса.

Инкубационный период при спонтанном заражении длится от 2 до 3-х месяцев.

Хламидиоз характеризуется абортами маточного поголовья на 7-9 месяце беременности, но могут быть и на 4-ом месяце. Заболевание начинается внезапно, и коровы перед абортом не проявляют особых клинических признаков, повышается лишь температура тела до 40,5°С. Иногда отмечается прогрессивное истощение животных.

По данным (Schoop и Kauker,1956) животные болеют в течение 6-ти месяцев. Болезнь характеризуется в основном снижением молочной продуктивности. У значительной части абортировавших животных отмечается задержание отделения последа, развиваются метриты, вагиниты и, наконец, может наступить бесплодие. Французский ученый Mage (1976) считает, что в 20 случаях из 100 аборты у коров вызваны хламидиями. У 2-7 % коров рождаются мертвые плоды. Процент абортировавших животных в неблагополучных стадах может доходить до 70, особенно среди первотелок и вновь введенных коров (Mekercher et al,1969).

У коров отмечаются маститы, изменение свойств молока или полное прекращение лактации (агалактия).

У быков-производителей инфекция протекает бессимптомно или со слабо выраженным уретритом, реже орхитом.

У телят хламидиоз характеризуется энтеритами, бронхопневмонией, кератоконъюнктивитами, иногда полиартритами и нарушением функций Ц.Н.С. Эти признаки могут развиваться неодновременно.

В начале у новорожденных телят появляется энтерит, сопровождающийся повышением температуры тела, угнетенным состоянием, отсутствием или уменьшением аппетита, залеживанием, а также непроизвольным выделением каловых масс с примесью слизи, а иногда и крови. Отмечаются явления обезвоживания и токсикоза организма. В ряде случаев энтерит протекает в легкой форме, лишь с кратковременным повышением температуры тела, а иногда и бессимптомно.

В 3-10 дневном возрасте у некоторых телят появляются признаки поражения суставов (преимущественно запястных): опухание, повышение местной температуры, болезненность, хромота. Больные животные стараются больше лежать. У многих температура тела повышена, сердцебиение и дыхание учащено.

В 10-20 дневном возрасте у телят часто наблюдается ринит со слизистыми или слизисто-гнойными выделениями из носовых ходов, дыхание становится затрудненным, прослушиваются хрипы.

У отдельных телят обнаруживают поражения глаз - в начале наблюдают явления острого катара конъюнктивы, чаще одностороннее: гиперемия, слезотечение, склеивание век. Через 5-6 дней развивается кератит - помутнение роговицы, васкуляризация. Иногда на роговице образуются язвы и вытекает содержимое передней камеры глаза.

У телят старше 20-30 дневного возраста преобладают признаки бронхопневмонии. Температура тела повышается до 41,5°C, кашель, учащенное дыхание, наблюдается скованность движений, широкая постановка конечностей, особенно задних, одышка. Из носовых отверстий и глаз выделяются серозные или серозно-слизистые истечения. В легких прослушиваются хрипы, при перкуссии участки притупления, в частности, в диафрагмальных, сердечных и особенно в верхушечных долях легких. У отдельных животных может отмечаться энцефалит: судороги, круговые движения.

Летальность может быть выше 20 %. Наибольшее число телят гибнет в возрасте 1-6 месяцев (от бронхопневмонии).

Важно отметить, что в различных хозяйствах хламидиоз протекает своеобразно: аборты могут быть от 5 до 30, иногда до 70 % маток. У телят в одних хозяйствах хламидиоз проявляется в основном гастроэнтеритами и бронхопневмонией, а артриты только в единичных случаях; в других все признаки проявляются почти в равной мере; в третьих - в основном бронхопневмонии и кератоконъюнктивиты. Замечено, что у телят, родившихся летом, поражения суставов наблюдаются очень редко.

В целом в Сибири по частоте клинических признаков энтериты занимают 1 место (до 90 %), респираторная патология на втором месте (30-60%), на третьем - кератоконъюнктивиты (до 30%), а затем полиартриты (10-16 %). Энцефалиты встречаются редко.

В случае ассоциации хламидиоза с аденовирусной, парагриппозной или микоплазменной инфекцией тяжесть болезни усиливается, а летальность повышается.

Постановка диагноза на хламидиоз представляет определенную трудность. Это прежде всего связано с малой изученностью болезни, недостаточно разработанными методами диагностики, а также с многообразием форм проявления болезни и отсутствием патологоанатомических, присущих только хламидиозу, признаков. В результате этого нередки случаи, когда хламидиоз не диагностируют. Обычно необходимость исследовать на хламидиоз возникает после исключения бактериальных инфекций.

Диагноз на хламидиоз может быть поставлен на основании комплекса клинических, микроскопических, вирусологических, серологических исследований с учетом результатов патологоанатомического вскрытия. Но основой является выделение культуры хламидий.

При постановке диагноза должны приниматься во внимание эпизоотологические особенности хламидиоза: энзоотичность вспышек, возрастная восприимчивость, стационарность болезни на фермах, влияние неблагоприятных факторов, снижающих резистентность животных. При этом учитывают:

- низкий процент получения телят на 100 коров

- количество абортов и рождение мертвых плодов

- задержание последов, эндометриты и вагиниты

- у молодняка - энтериты, бронхопневмонии, артриты и конъюнктивиты.

В лабораторию для исследования на хламидиоз направляют:

- материал от абортировавших животных (кусочки плаценты, влагалищную слизь); - абортированные плоды целиком или паренхиматозные органы от них;

- сыворотку крови в количестве 2-3 мл от абортировавших и подозрительных по заболеванию животных.

Материал отбирают не позднее 2-х часов после аборта в стерильные, герметически закрывающиеся флаконы.

Флаконы с материалом помещают в термос со льдом, а абортированные плоды во влагонепроницаемую тару и в этот же день, но не позже чем через 24 часа после аборта, доставляют в лабораторию с соблюдением мер, исключающих распространение инфекции.



4. Иммунитет

Иммунитет - механизм иммунитета при хламидиозах еще полностью не раскрыт. Как и на любую инфекцию, микроорганизм отвечает регуляцией клеточного и гуморального иммунитета, однако есть особенности:

- постинфекционный иммунитет не вырабатывается;

- если заражение происходит в эмбриональном периоде, то после рождения у телят теряется способность в выработке к хламидиям антител так же, как и на собственный блок.

Эффективность клеточного иммунитета при хламидиозной инфекции гораздо выше, чем гуморального. Т-клетки ответственны за иммунитет и могут действовать путем:

- активации макрофага

- продуцировании интерферона и ингибировании хламидийной репликации

- прямой цитоксичности против инфицированных клеток

При длительном течении хламидиозной инфекции происходит нарушение иммунногенной активности микроорганизма, что выражается резким снижением количества Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, а также нарушением трансформирования Т-лимфоцитов в бласты. Таким образом, такие расстройства в иммунной системе приводят к развитию синдрома иммунодефицита.

Хламидии - слабые антигены и вызывают образование относительно небольшого количества антител. В молоке и молозиве так же обнаружены антитела, но в титрах выше сывороточных. Эти антитела обнаруживают длительное время. При хламидиозе образуются комплементсвязывающие и нейтрализующие антитела. Сывороточные антитела относятся к иммуноглобулинам классов М и G, а антитела молока и молозива - к иммуноглобулинам подкласса G 1. У телят, получивших антитела с молозивом, к 35-му дню жизни антитела в крови не обнаруживают, то есть коллостральный иммунитет уже не предупреждает болезнь. Высоковирулентные штаммы хламидий после дачи молозива, содержащего антитела к ним, все равно вызывают системную инфекцию у телят. Хламидии в вирулентном состоянии выделены из крови с титром антихламидийных антител 1:256. При хламидиозе вырабатывается мало нейтрализующих антител, они выделяются не постоянно и в малых титрах. Нейтрализующие антитела могут связывать и гетерологичные изоляты хламидий. Гуморальный иммунитет при хламидиозе не играет решающего значения. Важную роль играет клеточный иммунитет. Нейтрофильные лейкоциты могут лизировать хламидии. Однако иногда хламидии могут размножаться в нейтрофилах (в неиммунном организме). По данным Пигаревского В.Е. определенная роль в защите организма принадлежит и продуктам распада лейкоцитов.



5. Профилактика и меры борьбы с хламидиозом

Специфическая профилактика. В настоящее время для иммунизации животных применяют "Эмульгированную вакцину против хламидиозного аборта овец" производства Сумской биофабрики, Украина, которая применяется и для других животных.

Исследования показали, что она защищает 96-98 % привитых животных. Иммунитет до года.

В России производится "Инактивированная культуральная вакцина против хламидиоза рогатого скота" в Новочеркасске. Ее вводят 3-кратно подкожно в дозе 5 мл. Иммунитет 6 месяцев.

Также широкое применение находит "Инактивированная эмульгированная вакцина против хламидиоза" фирмы "Филаксия" Венгрия.

Позитивно зарекомендовала себя и поливалентная вакцина "ПЛАХ" против: парвовирусной инфекции лептоспироза.

Меры борьбы. При хламидийных инфекциях рогатого скота, свиней, лошадей по условиям ограничений в неблагополучном хозяйстве (ферме, отаре) проводят следующие мероприятия:

- запрещают ввод (ввоз) и вывод (вывоз) рогатого скота, свиней, лошадей, вывоз кормов, фуража, соприкасавшихся с больными животными;

- запрещают перемещение животных;

- не допускают скармливания всеядным и плотоядным животным сырых продуктов, полученных от больных животных;

- запрещают доступ в животноводческие помещения лиц, не связанных с кормлением, уходом и содержанием животных;

- запрещают вольную случку коров, нетелей, телок, овец, свиней и лошадей;

- проводят ежедневный клинический осмотр животных с обязательной термометрией, больных животных помещают в изолятор на 30 дней и лечат, применяя антибиотики тетрациклинового ряда;

- станки для группового содержания и другие помещения, где находятся больные животные, подлежат ежедневной очистке и дезинфекции 2 %-ным раствором едкого натра или 5 %-ным раствором формалина. Навоз, остатки корма, подстилку и т.д. складируют в отдельные бурты для биотермического обеззараживания;

- плаценты и плоды абортировавших коров, кобыл и свиноматок, трупы павших животных складируют в непроницаемые для жидкости ящики и после взятия необходимого патологического материала для лабораторных исследований обеззараживают или уничтожают;

- в неблагополучных хозяйствах новорожденных телят, жеребят и поросят содержат изолировано от больных животных и их обслуживает отдельный персонал.

Хозяйство (ферму) считают благополучными по хламидийным инфекциям при условии:

- отсутствии в течение 3-х лет случаев выявления больных животных с характерными для этих болезней клинико-эпизоотологическими данными и картиной вскрытия;

- отсутствия специфических антител в диагностических титрах (1:10 и выше) при исследовании в РСК или РДСК сывороток крови животных.



Библиографический список

1 Белоусов В.И. Средства специфической профилактики и диагностики хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза животных.//Автореф. дис. д-ра вет. наук. - М. - 1997. - 41с.

2 Бортничук В.А. Хламидиоз свиней.//Справочное издание. "Урожай" - Киев. - 1991. - 193с.

3 Гласкович А.А., Вострикова В.Н. Диагностика хламидиозов сельскохозяйственных животных / Методич. рекоменд. - Витебск. - 1994. С.8 - 26.

4 Горовиц. Э.С., Тимашева О.А., Петров В.Ф., Карпунина Т.И. Диагностика хламидийных инфекций человека и животных.//Журн. микробиология, эпидемиология и иммунобиология. - М. - 1998. - №2. - С.72-75.

5 Евстифеев В.В. Усовершенствование средств диагностики и специфической профилактики при хламидиозе свиней: Автореф. дисс. канд. вет. наук/Всерос. н..-и. вет. ин-т. - Казань. - 1998.- 26с.

6 Караваев Ю.Д., Калугина И.А., Дьяконов Л.П., Белоусов В.И. Диагностика, профилактика и меры борьбы с хламидиозами животных//Ветеринария. - 1999. - №2. - С.28-30.

7 Конопаткин А.А. Хламидиозы животных.//Лекция. - М. - 1989. - 26с.

8 Кузьмич Р.Г., Фомченко И.В. Урогенитальный хламидиоз крупного рогатого скота в Республике Беларусь.//Уч. записки Межд. науч.конф. "Современные проблемы селекции ветеринарной генетики и защиты животных от болезней.", посвященной 100-летию со дня рождения профессора О.А. Ивановой, 26-27 сентября 2001. т.37 - 2001. - Витебск. - С.87-89.

9 Максимович В.В., Синица Н.В., Фомченко И.В. Распространение хламидиоза в Республике Беларусь.//Уч. записки т.34: Матер. междунар. науч.- практ. конф. посвященной 70-летию клинических кафедр, 14-15 апреля. - Витебск. - 1998. - С.155-157.

10 Мананков В.В., Тихонов Н.Г., Рыбкина Р.А., Пашанина Т.П., Ротов К.А., Смелянский В.П., Мулик А.В., Васильев В.П. Хламидиозы и смешанные инфекции у сельскохозяйственных животных.// Актуальные пробл. ветеринарии. - Барнаул. - 1995. - С.93.

11 Небогатиков Г.В., Калашников С.В., Небогатикова В.Г. Хламидийное инфицирование половых органов и плаценты у коров//Актуал. пробл. и достижения в области репродукции и биотехнологии размножения животных. - Ставрополь. - 1998. - С.128-130.

12 Обухов И.Л. Методы диагностики орнитоза.//Птицеводство. - 1998. - №5. - С. 27-29.

13 Обухов И.Л. Перинатальные хламидийные болезни у кошек.//Сб. науч. тр. ВГНКИ. - 1996. т.59. - С.18-20.

14 Обухов И.Л., Панин А.Н., Груздев К.Н., Васильев Д.А. Орнитоз.//Учебное пособие. - Ульяновск. - 1998. - 54с.

15 Семёнов В.М., Козин В.М., Дмитраченко Т.И. Хламидиозы: руководство для врачей общей практики. - Витебск. - 2002. - 112с.

16 Толстов В.П. Иммунодиагностика хламидиоза крупного рогатого скота.//Пробл. сел. хоз-ва Сибири. - Омск. - 1996. - С.10-12.

17 Фомченко И.В. Некоторые эпизоотологические данные хламидиоза крупного рогатого скота. /Уч. записки т.34: Матер. междунар. науч.-практ. конф., посвященной 70-летию клинических кафедр, 14-15 апреля. - Витебск. - 1998. - С.176-178.

18 Фомченко И.В. Реакция непрямого связывания комплемента в диагностике хламидиоза сельскохозяйственных животных.//Аграрная наука на рубеже XXI века: Материалы Общего собрания Академии аграрных наук Республики Беларусь, 16 ноября 2000 г. - Минск, 2000. - С.254.

19 Фомченко И.В. Хламидиоз крупного рогатого скота.//Молодежь, наука, аграрное образование и производство: Сб. тр. молод. учен. и препод. с.-х. учеб. и науч.-исслед. заведений/ Вит. академия вет. медицины. - Витебск, 1999. - С.222-223.

20 Фомченко И.В. Сравнительная эффективность РНСК и РДСК в диагностике хламидиоза крупного рогатого скота.//Материалы учредительной конф. Межд. Ассоциации Паразитоценологов, Витебск, 23-24 сентября 1999г. - Витебск,1999. - С.108-109.

21 Фомченко И.В., Степанов Г.В., Багрецов В.Ф. Хламидиоз крупного рогатого скота// Ветеринарная медицина Беларуси. - 2002 - №2. - С.18-20.

Хазипов Н.З., Равилов А.З., Хамадеев Р.Х. Хламидиозы сельскохозяйственных животных. - М.:Колос. - 1984. - 223с.

22 Хамадеев Р.Х., Равилов А.З. Возбудители хламидиозов сельскохозяйственных животных и патогенность их для человека.//Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - М. - 1997. - №1. - С.99-101.

23 Хусаинов Ф.М., Хамадеев Р.Х., Евстифеев В.В., Равилов А.З. Сравнительная оценка серологических методов РСК, РНГА и ИФА при диагностике хламидиозной инфекции крупного рогатого скота и свиней.//Всерос. науч. конф. "Инфекц. болезни молодняка с.-х. животных.": Тез. док. - М. - 1996. - С.12-16

24 Ятишин А., Бортничук В.А., Павленко Н.С. Патологоанатомические и гистологические изменения при хламидиозе животных.//Вет. медицина Украины. - 1996. - №3. - С.18-19

Размещено на Allbest.ru