Размещено на http://www.allbest.ru/

РЕСПУБЛИКАНСКОЕ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЕ УНИТАРНОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ

«ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ ИМ. С.Н. ВЫШЕЛЕССКОГО НАЦИОНАЛЬНОЙ АКАДЕМИИ НАУК БЕЛАРУСИ»

Автореферат

ИЕРСИНИОЗ СВИНЕЙ

Витебск - 2011

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Одной из важнейших проблем ветеринарии являются острые кишечные инфекционные заболевания молодняка сельскохозяйственных животных. К числу их следует отнести иерсиниоз свиней - болезнь из группы зооантропонозов, характеризующуюся поражением органов пищеварения. Болезнь регистрируют в ряде стран мира, в государствах СНГ, в том числе непосредственно граничащих с Республикой Беларусь.

Иерсиниоз наносит значительный экономический ущерб, который определяется затратами на лечение больных животных, расходами на ликвидацию болезни. В ветеринарной практике зарегистрированы эпизоотии иерсиниоза свиней с высоким процентом летальности (S.G. Christensen, 1980).

У взрослых животных иерсиниоз клинически не проявляется или же проявляется малозаметно. Иерсинионосительство может достигать 50% (G. Wauters, 1979; D.A. Schiemann, C.A. Fleming, 1981), а частота выделения возбудителя из различных органов при убое - 7,5% (B. Hurvell, V. Glatthard, E. Thal, 1979). Бактерионосители являются источником возбудителя, что создает опасность для свинопоголовья, обслуживающего персонала, а также людей, употребляющих в пищу продукты убоя от таких животных.

Иерсиниоз часто диагностируют у людей. Болезнь среди детей подростковых групп занимает второе место после сальмонеллеза. Фактом, указывающим на возможность заражения людей от животных является идентичность возбудителя болезни человека и свиней (Yersinia enterocolitica O3 и O9).

В Республике Беларусь это заболевание официально не регистрируют, что связано со слабой изученностью вопросов эпизоотологии, диагностики и мер борьбы с иерсиниозом у свиней. До сих пор остаются не изученными роль иерсиний в инфекционной патологии желудочно-кишечного тракта у свиней, эпизоотические особенности иерсиниоза (распространенность, бактерионосительство, сезонность и т.д.), которые имеют большое значение для планирования и проведения санитарно-оздоровительных мероприятий. Клиническая и патологоанатомическая картина иерсиниоза свиней сходна с рядом других болезней, поэтому решающее значение в постановке диагноза имеет лабораторная диагностика. Однако, методы лабораторной диагностки, предложенные некоторыми авторами, требуют усовершенствования и остаются пока невостребованными ветеринарной практикой в связи с низкой эффективностью методов выделения иерсиний из патматериала, трудоемкой методикой идентификации и дифференциации их от других энтеробактерий, а также отсутствием надежных методов определения патогенности изолируемых от свиней иерсиний и серологической диагностики болезни.

До настоящего времени не изучена чувствительность иерсиний, выделяемых от свиней, к многим антибактериальным и дезинфицирующим средствам, не разработаны мероприятия по профилактике иерсиниоза у свиней.

Связь работы с научными программами, темами. Работа является частью комплексной темы кафедры микробиологии и вирусологии «Усовершенствование методов диагностики и профилактики инфекционных болезней животных», № 199817777 ВГАВМ, планируемой на 1998-2000 гг., утвержденной МСХ и П РБ.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является совершенствование методов диагностики и мероприятий по профилактике иерсиниоза у свиней.

В связи с поставленной целью были определены следующие задачи:

Выяснить роль иерсиний в инфекционной патологии желудочно-кишечного тракта у свиней.

Изучить эпизоотическую ситуацию по иерсиниозу свиней в хозяйствах Республики Беларусь.

Изучить диагностическую ценность некоторых бактериологических, биологических и серологических тестов в диагностике иерсиниоза свиней.

Определить эффективность ряда дезинфицирующих и антибактериальных средств в отношении возбудителя болезни.

Разработать и внедрить методику лабораторной диагностики иерсиниоза свиней.

Предложить мероприятия по профилактике иерсиниоза у свиней.

Объект и предмет исследования. В качестве основного объекта исследования были свиньи различных возрастных групп из свиноводческих хозяйств Витебской, Гомельской, Гродненской, Могилевской, Минской и Брестской областей, а также документация ветеринарного учета и отчетности Главного управления МСХ и П РБ по заболеваемости свиней желудочно-кишечными инфекциями и Витебского областного центра гигиены и эпидемиологии по заболеваемости людей кишечным иерсиниозом.

Предметом исследования служили кровь свиней и грызунов, фекалии свиней, выделенные культуры иерсиний, лабораторные и производственные животные и их паренхиматозные органы.

Гипотеза. Анализ литературы показывает, что иерсиниозы животных и человека регистрируют во многих странах мира. В Республике Беларусь в условиях промышленного свиноводства широко распространены инфекции желудочно-кишечного тракта у свиней невыясненной этиологии. Условия ведения свиноводства в Беларуси позволяют предполагать наличие иерсиниозной инфекции у свиней, что обусловило необходимость изучения роли иерсиний в инфекционной патологии желудочно-кишечного тракта у этого вида животных. Изучение этиологической роли иерсиний и особенностей эпизоотологии иерсиниоза свиней в республике позволит обосновать необходимость разработки мероприятий по профилактике иерсиниоза у свиней.

Иерсиниоз относится к кишечным инфекциям. Эти инфекции могут обуславливаться двумя-тремя и более видами патогенных энтеробактерий. Все это осложняет постановку верного диагноза, поэтому решающее значение в диагностике имеет лабораторное исследование. В этой связи возникла необходимость испытания различных биологических тестов и реакций с целью определения приемлимости их для практической диагностики иерсиниоза свиней.

Иерсиниоз представляет большую опасность для человека и может наносить значительный ущерб свиноводству. В этой связи возникла необходимость разработки мероприятий по профилактике болезни у свиней.

Методика и методология исследований. Для решения поставленных задач по совершенствованию методов лабораторной диагностики и мероприятий по профилактике иерсниоза у свиней были использованы бактериологические, эпизоотологические, клинические и серологические методы исследования.

Распространенность иерсиниозной инфекции у свиней изучали путем бактериологического исследования фекалий, отобранных от животных различных возрастных групп в различных регионах республики. Чувствительность иерсиний к антибактериальным веществам, устойчивость к дезинфицирующим средствам определяли по общепринятым методикам.

Для выявления специфических антител к Yersinia enterocolitica проводили серологическое исследование сывороток крови свиней и грызунов в РНГА. Клинические признаки иерсиниоза наблюдали у экспериментально зараженных животных.

Материалом по изучению эпизоотической ситуации по иерсиниозу служили данные ветеринарной отчетности ГУВ МСХ и П РБ, Витебского областного центра гигиены и эпидемиологии, результаты собственных исследований.

Научная новизна. Впервые выяснена роль иерсиний в инфекционной патологии желудочно-кишечного тракта у свиней, изучена эпизоотическая ситуация по иерсиниозу свиней в отдельных свиноводческих хозяйствах Республики Беларусь, определена частота носительства иерсиний свиньями и влияние на ее показатель различных внешних факторов.

Выявлены основные звенья эпизоотической цепи и связь между эпизоотическим и эпидемическим процессами при иерсиниозе. Описана клиническая и патологоанатомическая картина болезни у свиней.

Усовершенствована методика лабораторной диагностики иерсиниоза свиней. Изучена эффективность действия ряда дезинфицирующих и антибактериальных средств. Разработан научно-обоснованный комплекс мероприятий по профилактике этой болезни у свиней.

Практическая значимость полученных результатов. В результате проведенных исследований были получены сведения о роли иерсиний инфекционной патологии желудочно-кишечного тракта у свиней, распространенности иерсинионосительсва у свиней в отдельных хозяйствах РБ, уровне бактерионосительства в зависимости от возраста и сезона года, эффективности некоторых дезинфицирующих и антибактериальных средств, что позволило научно обосновать и разработать комплекс мероприятий по профилактике иерсиниоза у свиней.

Результаты исследований по изучению некоторых биологических тестов и реакции непрямой гемагглютинации легли в основу «Методических рекомендаций по лабораторной диагностике иерсиниоза свиней» (авторы: Корочкин Р.Б., Кирпиченок В.А., Долгицер Л.К.), утвержденных ГУВ Минсельхозпрода 24.10.2001 и предназначенные для работников ветеринарных лабораторий районного, областного и республиканского уровней, слушателей ФПК, студентов и преподавателей ветеринарных факультетов.

Экономическая значимость полученных результатов. В результате проведенных исследований была усовершенствована методика лабораторной диагностики иерсиниоза свиней. Экономический эффект от внедрения усовершенствованных методов лабораторной диагностики болезни составляет в среднем 37330 рублей, а ее экономическая эффективность 7,9 рублей на 1 рубль затрат.

Основные положения работы, выносимые на защиту.

Эпизоотическая ситуации по иерсиниозу свиней в отдельных хозяйствах республики и взаимосвязь между эпизоотическим и эпидемическим процессами при иерсиниозе, позволяющие научно обосновать комплекс мероприятий по профилактике иерсиниоза у свиней.

Эффективность применения некоторых биологических тестов и реакции непрямой гемагглютинации, позволяющих разработать методику лабораторной диагностики болезни.

Чувствительность иерсиний к действию дезинфицирующих и антибактериальных средств, позволяющая разработать мероприятия по профилактике иерсиниоза у свиней.

Комплекс мероприятий по профилактике болезни у свиней, позволяющий предупреждать появление иерсиниоза в свиноводческих хозяйствах.

Личный вклад автора. Выполненная диссертационная работа является результатом исследований по выяснению этиологической роли иерсиний в инфекционной патологии желудочно-кишечного тракта у свиней, изучению эпизоотической ситуации в отношении иерсиниоза свиней в отдельных свиноводческих хозяйствах Республики Беларусь и совершенствованию методов диагностике и профилактике болезни.

Вся экспериментальная работа по теме диссертации выполнена лично аспирантом Корочкиным Р.Б. В разработке методических указаний по лабораторной диагностике иерсиниоза свиней принимал участие главный ветеринарный врач государственной ветеринарной инспекции ГУВ МСХ и П РБ Долгицер Л.К. Руководитель научной работы доктор ветеринарных наук, профессор Кирпиченок В.А. оказывал методическую помощь при планировании и проведении исследований. Вновь назначенный руководитель доктор ветеринарных наук Медведев А.П. оказывал помощь в интерпретации полученных результатов.

Апробация результатов. Результаты исследований по диссертационной работе изложены, обсуждены и получили положительную оценку:

на научных конференциях студентов, аспирантов и молодых преподавателей Витебской ордена «Знак Почета» государственной академии ветеринарной медицины (1999 - 2002 гг.)

на Международных научно-практических конференциях, проводимых в Витебске (4-5 ноября 1999г.; 22-23 мая 2001 г.; 26-27 сентября 2001 г.) и Минске (октябрь 2000 г.).

Опубликованность результатов. По теме диссертации опубликовано 16 научных работ общим объемом 39 страниц, из них 22 страницы написана лично автором, в которых изложены основные положения выполненных исследований.

Структура и объем курсовой. Материалы диссертации изложены на 121страницах машинописного текста, включающих 26 таблиц и 5 рисунков.

Диссертация состоит из оглавления, введения, общей характеристики работы, основной части, представленной 7 главами, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы, включающих 195 источников, в том числе 101 отечественных, приложения.

В главе проанализированы данные литературы относительно эпизоотической ситуации по иерсиниозу свиней, биологических свойств возбудителя болезни и ее диагностики, а также выбраны направления собственных исследований.

ОБЩАЯ КОНЦЕПЦИЯ И ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

иерсиниоз свинья инфекционный кишечный

В Республике Беларусь острые кишечные болезни свиней являются одной из важных проблем ветеринарии. К числу их следует отнести иерсиниоз, который по данным ряда авторов наносит значительный ущерб свиноводству и представляет угрозу для здоровья человека. В этой связи наши экспериментальные исследования были направлены на совершенствование методов лабораторной диагностики и мероприятий по профилактике иерсиниоза у свиней.

На первом этапе мы выясняли роль иерсиний в инфекционной патологии желудочно-кишечного тракта у свиней и изучали эпизоотическую ситуации по иерсиниозу свиней в отдельных свиноводческих хозяйствах республики. Мы изучали формы проявления иерсиниозной инфекции у свиней в условиях промышленного свиноводства, определяли частоту носительства Yersinia enterocolitica животными и уровень антител к возбудителю в их крови, выясняли влияние на этот показатель различных внешних факторов, выявляли взаимосвязь между эпизоотическим и эпидемическим процессами при иерсиниозе и значение синантропных грызунов в эпизоотическом процессе при иерсиниозе.

На втором этапе работы мы исследовали эффективность различных методов изоляции и дифференциации иерсиний, способов определения их патогенных свойств, оценивали значение РНГА как серологического метода исследования при диагностике иерсиниоза, определяли чувствительность бактерий к некоторым антибиотикам и дезинфицирующим средствам.

На заключительном этапе разрабатывали мероприятия по профилактике иерсниоза у свиней с учетом выполненных экспериментальных исследований и полученных результатов.

Для решения поставленных задач нами были использованы бактериологические, серологические, эпизоотологические и клинические методы исследования. Расчет экономической эффективности предлагаемых методов исследования проводили по «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий», утвержденной Главным управлением ветеринарии с Государственной ветеринарной инспекцией МСХ и П РБ 10.05.2000 г., в ценах на 1 января 2002 г.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ. ПРИМЕНЯЕМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И ТЕХНИКА ЭКСПЕРИМЕНТА

Экспериментальные исследования были выполнены в 1998-2001 годах в лаборатории кафедры микробиологии и вирусологии, в клинике кафедры эпизоотологии Витебской государственной академии ветеринарной медицины и в свиноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

В ходе проведения экспериментальной работы исследовано 828 проб фекалий животных из 14 хозяйств: 414 проб были отобраны от свиноматок возрастом 2-4 года и 414 проб от поросят-сосунов возрастом 1--60 дней. Пять хозяйств являлись свинокомплексами с производственной мощностью 60-100 тысяч голов свиней в год и девять - товарных с производственной мощностью до 3 тысяч голов.

Идентификацию выделяемых микроорганизмов осуществляли по ряду биохимических тестов, включающих определение ферментации глюкозы, лактозы, образования сероводорода (в агаре Клиглера), ферментации маннита, сорбита, сахарозы, рамнозы, мальтозы (на средах Гисса), определения уреазной активности (среда Кристенсена), ферментации лизина и фенилаланина, подвижности (0,3%-ный ПЖА).

Уровень антител к Yersinia enterocolitica у свиней и грызунов определяли в отношении серовариантов О3 и О9. Реакцию непрямой гемагглютинации осуществляли с использованием медицинского «диагностикума эритроцитарного кишечноиерсиниозного О3; О9 антигенного сухого», выпускаемого НИИВС в Санкт-Петербурге. В реакции непрямой гемагглютинации нами были происследованы 64 пробы сывороток крови свиней и 34 проб сывороток крови грызунов в отдельном хозяйстве.

Часть экспериментальной работы была направлена на апробацию биологических тестов в лабораторной диагностике иерсиниоза свиней для повышения степени выделения иерсиний из патматериала.

В ходе изучения метода холодового обогащения изучали динамику изоляции микроорганизмов из 238 проб фекалий свиней после хранения их при температуре 4С в течение различного срока: один, пять, десять и пятнадцать дней.

При изучении метода щелочной обработки патматериала было проведено бактериологическое исследование проб фекалий от десяти свиней-иерсинионосителей. Нами изучалось действие на патматериал растворов калия гидроксида в концентрациях: 0,1%, 0,25%, 0,5%, 1%, 3% и 5% с различной временной экспозицией (30, 60, 90, 180, 300 секунд). Для исследования использовали пробы фекалий, хранившиеся в холодильнике на протяжении одних и пятнадцати суток. В качестве контроля служили пробы фекалий от этих же свиней, но не обработанных щелочью.

На следующем этапе исследований разрабатывали методику дифференциации Yersinia enterocolitica от других бактерий с применением агара Клиглера, на который высевали микроорганизмы, изолируемые из фекалий свиней. В ходе экспериментов определяли характер рост бактерий на среде и проводили дальнейшую идентификацию их путем изучения биохимических свойств.

Вирулентность иерсиний для белых мышей определяли путем орального, внутрибрюшинного и внутримышечного заражения их суспензией 18-ти часовой культурой Yersinia enterocolitica в объеме по 0,2 мл. Для определения ЛД₅₀ иерсиний для белых мышей животных заражали возрастающими дозами микроорганизма: 10⁶, 10⁷, 10⁸, 10⁹, 10¹⁰ микробных клеток, используя на дозу по шесть мышей.

Для постановки биопробы на свиньях использовали 15 поросят послеотъемного возраста (45-60 дней) весом 20-30 кг. В качестве контроля служили десять поросят. Перед заражением у всех животных бактериологически исследовали пробы фекалий для исключения носительства Yersinia enterocolitica и кровь в РНГА. Заражение проводили перорально суспензией Yersinia enterocolitica в стерильном изотоническом растворе натрия хлорида в объеме 6,0 см³ с концентрацией 10⁹ микробных тел в 1 см³ (общая доза заражения 6•10⁹ м.т.).

ЭПИЗООТИЧЕСКАЯ СИТУАЦИЯ ПО ИЕРСИНИОЗУ СВИНЕЙ В ХОЗЯЙСТВАХ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

Бактерионосительство у свиней в хозяйствах Республики Беларусь.

При бактериологическом исследовании фекалий, взятых от 828 свиней в различных хозяйствах Республики Беларусь, микроорганизм Yersinia enterocolitica был обнаружен у 60 свиней во всех исследуемых хозяйствах, где проводили отбор проб. Причем, степень носительства варьирует в диапазоне от 4,9 до 10,0%. Данные по широте носительства Yersinia enterocolitica, суммированные по областям республики позволяют заключить, что степень носительства Yersinia enterocolitica у свиней является наибольшей в Гродненской области (9,0+2,9%), а наименьшей - в Витебской (5,5+1,5%). Обобщенные данные позволяют считать частоту носительства Yersinia enterocolitica у свиней в исследованных хозяйствах на уровне 7,2+0,9%.

Производственная мощность, а также характер комплектования свинопоголовья хозяйств существенно не влияют на широту носительства Yersinia enterocolitica у свиней, так как показатель частоты носительства иерсиний у свиней на свинокомплексах и в товарных хозяйствах составляют 7,0+1,5 и 7,4+1,1% соответственно.

При изучении влияния природно-климатического расположения хозяйств на частоту носительства Yersinia enterocolitica мы установили, что в северной зоне она в 1,5 раза ниже, чем в южной (5,6+1,5% и 8,3+1,5% соответственно).

Влияние сезонности и возраста на уровень бактерионосительства у свиней.

Влияние возраста животных на широту носительства Yersinia enterocolitica у свиней определяли при сравнении данных по степени носительства микроорганизма у свиноматок и поросят-сосунов. Анализ полученных данных показывает, что возраст животных не оказывает существенного влияния на степень носительства микроорганизма, о чем свидетельствуют суммированные показатели частоты носительства Yersinia enterocolitica у свиноматок и поросят-сосунов (7,5+1,3% и 7,0+1,3% соответственно).

Влияние фактора сезонности на степень носительства Yersinia enterocolitica выявляли путем сравнения данных по частоте бактерионосительства у свиней в хозяйстве «Подберезье» (Витебская область) в различные сезоны года. При этом было установлено, что показатель частоты носительства микроорганизма у свиней является более высоким в весенний сезон года (8,3%), чем в летне-осенний (5,0-6,3%).

Наличие антител к Yersinia enterocolitica в крови у свиней и грызунов.

В ходе серологического исследования 64 проб сывороток крови свиней (32 пробы сыворотки от свиноматок возрастом 2-4 года и 32 пробы сывороток от поросят-сосунов возрастом 10-60 дней) было выявлено 6 положительных проб, в которых обнаружены антитела к микроорганизму Yersinia enterocolitica серовара О9 в титрах от 1:25 до 1:400. Из полученных положительных результатов 4 пробы принадлежали свиноматкам (титры антител 1:25, 1:50, 1:100 и 1:400) и 2 пробы поросятам-сосунам (титры антител 1:50 и 1:200).

При исследовании 34 проб сывороток крови грызунов были также выявлены антитела к микроорганизму Yersinia enterocolitica сероварианта О9 в 6 пробах.

Результаты проведенного серологического исследования указывают на циркуляцию у свиней и грызунов одного сероварианта, причем процент положительно реагирующих в РНГА грызунов значительно выше, чем у свиней (17,6% и 9,4% соответственно), что свидетельствует о более широком носительстве иерсиний у грызунов, чем у свиней в пределах одного хозяйства.

Циркуляция у свиней и грызунов одного и того же сероварианта иерсиний позволяет заключить, что эти виды животных являются звеньями в единой эпизоотической цепи при иерсиниозе, причем грызуны являются резервуаром микроорганизма для свиней в пределах одного хозяйства.

Бактериологическим исследованием фекалий и серологическим исследованием сыворотки крови свиней установлено, что показатели носительства микроорганизма у поросят-сосунов и антител в их крови равны (6,25%) и отличаются у свиноматок: частота носительства иерсиний - 5,3%, частота обнаружения антител - 12,5%.

Наличие специфических антител к Yersinia enterocolitica у 6,25% клинически здоровых свиней, у которых в ходе бактериологического исследования изолировали патогенный возбудитель позволяет доказать распространенность у свиней латентной формы иерсиниоза.

Связь между эпизоотическим и эпидемическим процессами при иерсиниозе.

Данные отчетности Витебского областного центра гигиены и эпидемиологии по заболеваемости людей кишечным иерсиниозом за период 1999-2001 г. свидетельствуют о том, что в Витебской области на протяжении анализируемого периода регистрировались случаи заболевания людей иерсиниозами, в группу которых относят кишечный иерсиниоз и псевдотуберкулез. При этом показатель заболеваемости людей иерсиниозом в Витебской области в 2-2,5 раза выше, чем усредненный аналогичный показатель по республике (см. табл. 1).

Таблица 1 Заболеваемость людей иерсиниозом (показатель на 100 тыс. жителей).

Регион	Годы
	1999	2000	2001
Витебская обл. Республика Беларусь	6,92 2,67	7,31 2,82	6,39 3,19

Затем мы проанализировали данные по заболеваемости людей кишечным иерсиниозом в Витебском районе, где нами за указанный период были выявлены свиньи-иерсинионосители. Данные Витебского областного центра гигиены и эпидемиологии свидетельствуют, что у людей в местности, где расположены свиноводческие хозяйства регистрируются случаи кишечного иерсиниоза. За анализируемый период времени (1999-2001) показатель заболеваемости людей в Витебском районе варьировал в промежутке от 11,4 до 15,6 случаев на 100 тыс. жителей. При этом все регистрируемые случаи заболевания людей кишечным иерсиниозом были вызваны Yersinia enterocolitica серовариантов О3 и О9. Данный факт свидетельствует о взаимосвязи эпизоотического и эпидемического процессов при иерсиниозе.

Клиническая форма иерсиниоза у свиней.

В ходе проведенного клинического и бактериологического исследования 828 свиней нами зарегистрировано 2 случая (0,24+0,14%) клинически выраженного иерсиниоза у свиней. Мы наблюдали клиническую картину болезни у свиней отъемного возраста, которая характеризовалась угнетением, отказом от корма, повышением температуры тела на 1,1С выше физиологической нормы, признаками поражения желудочно-кишечного тракта (диарея, выделение жидких, желтых, с неприятным запахом фекалий). Диагноз был подтвержден бактериологическим исследованием фекалий с выделением чистой культуры Yersinia enterocolitica, патогенной для белых мышей.

При постановке биопробы на пятнадцати поросятах мы наблюдали развитие клинически выраженного заболевания у шести животных, характеризующегося также признаками поражения желудочно-кишечного тракта, среди которых превалировала частая дефекация (до 6-9 раз в сутки), фекалии имели желто-коричневый цвет, жидкие, покрытые густой слизью. Развитию клинических признаков предшествовало угнетение у животных, отказ от корма, повышение температуры тела на 0,8-1,2⁰С выше физиологической. Общая продолжительность продромального периода во всех случаях не превышала 12-18 часов.

Динамика появления симптомов болезни характеризовалась следующими особенностями: первые клинические признаки болезни регистрировали у экспериментальных животных после заражения в интервале от 3 до 9 дней (третий день - 1 голова; пятый день - 2 головы; шестой день- 2 головы; девятый день - 1голова). В нашем эксперименте инкубационный период болезни составил 3-9 суток, а ее длительность - от 3 до 7 суток.

Из числа заболевших (шесть голов) две свиньи пало. Таким образом, заболеваемость при экспериментальном иерсиниозе составляет 40%, а летальность - 30%. У остальных заболевших животных наступало выздоровление в течение семи суток после появления первых клинических признаков болезни.

При вскрытии у павших животных отмечали картину катарального гастроэнтерита, серозного лимфаденита брыжеечных лимфоузлов, зернистой дистрофии печени, почек, миокарда, незначительное увеличение селезенки.

У всех экспериментально зараженных животных при бактериологическом исследовании фекалий, а у павших поросят при исследовании их паренхиматозных органов (печень, селезенка, брыжеечные лимфоузлы) изолировали культуру Y. enterocolitica, патогенную для белых мышей. Кроме того, проводили исключение других бактериальных и вирусных болезней: сальмонеллеза, колибактериоза, вирусного трансмиссивного гастроэнтерита, дизентерии.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ИЕРСИНИОЗА СВИНЕЙ. БАКТЕРИОЛОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ

Использование низкой температуры для выделения культуры Yersinia enterocolitica.

В ходе опыта было исследовано 238 проб фекалий, которые высевали на среду накопления и хранили в холодильнике при температуре 4°С, а затем каждую пробу, высеянную на среду накопления, исследовали бактериологически через 1,5, 10 и 15 дней хранения.

Нами установлено, что микроорганизм Yersinia enterocolitica изолируется из исследуемого материала при всех сроках выдерживания фекалий в 0,85%-ном стерильном растворе натрия хлорида при 4С, что свидетельствует о возможности применения этого раствора в качестве среды накопления. Минимальное количество положительных проб (три пробы) обнаружено при исследовании сред накопления в первый день.

Микроорганизм Yersinia enterocolitica был изолирован в наибольшем количестве проб (двенадцать) из числа исследованных после десяти дней хранения среды накопления в холодильнике. Затем процент выделяемости микроорганизма из исследуемого материала не повышался

Параллельное испытание метода холодового обогащения с использованием комплексного буферного солевого раствора показало, что его применение в качестве среды накопления также как и использование изотонического раствора натрия хлорида в качестве среды накопления повышает степень выделения микроорганизма из исследуемого материала. Причем динамика изолируемости иерсиний из материала, а также количество проб, из которых выделили микроорганизм имели аналогичные показатели.

Щелочной метод выделения иерсиний из патматериала.

Эффективность применения щелочного метода при выделении чистой культуры Yersinia enterocolitica определяли по результатам бактериологического исследования 10 проб фекалий свиней-иерсинионосителей с обработкой патматериала растворами калия гидроксида различных концентраций и без нее в день отбора проб, а затем повторно через 15 суток хранения проб при 4°С.

При бактериологическом исследовании в первый день получили следующие результаты. Бесщелочным методом иерсинии выделили в 4 пробах из 10 исследованных. При выделении иерсиний из материала с помощью щелочного метода процент высеваемости иерсиний увеличился. При обработке патматериала 0,1%-ным раствором щелочи количество проб, из которых удалось изолировать иерсинии составило 7, а при обработке патматериала 0,5%-ным раствором микроорганизм выделили во всех пробах. Данный результат был получен при обработке патматериала щелочью в течение от 1 до 3 минут. Обработка патматериала щелочью той же концентрации в течение 5 минут значительно снижает количество проб, из которых удалось выделить культуру Yersinia enterocolitica (6 проб). Растворы калия гидроксида в концентрации 1% и выше вне зависимости от времени экспозиции оказались непригодными для выделения иерсиний из патматериала, так как они обладали бактерицидным действием. При подсчете количества колоний на плотной среде мы установили, что в случае обработки исследуемого материала щелочью 0,5%-ной концентрации изолирование наибольшего числа колоний иерсиний достигается экспозицией калия гидроксида в 3 минуты. При этом при посеве на питательные среды в одной чашке Петри изолировали в среднем 2,5+0,28 колоний иерсиний. При меньшей экспозиции число изолируемых колоний микроорганизма составило от 1,7+0,38 до 2,0+0,16 колоний.

При исследовании того же патматериала после 15-ти суток хранения его при 4°С иерсинии выделили во всех пробах как в случае обработки их щелочью, так и без нее, что указывает на одинаковую эффективность щелочного и холодового методов выделения чистой культуры Yersinia enterocolitica из патматериала.

Мы рекомендуем одновременное использование обоих методов в лабораторной диагностике иерсиниоза свиней. В первый день бактериологического исследования патматериал перед посевом необходимо обрабатывать 0,5%-ным раствором калия гидроксида в течение 3 минут. В случае отрицательного результата при выделении чистой культуры иерсиний патматериал необходимо выдерживать при 4°С в течении 10-15 суток для повторного посева на питательные среды.

Дифференциация иерсиний от других бактерий семейства Enterobacteriaceae.

Представленная в работе методика дифференциации Yersinia enterocolitica от других бактерий основана на использовании агара Клиглера на первом этапе дифференциации микроорганизмов. При этом иерсинии представляли короткие грамотрицательные палочки и через 24-48 часов инкубации вызывали изменение окраски скошенной части агара в красный цвет, а столбиковой - в желтый без газообразования. Нами установлено, что аналогичные изменения вызывают наиболее часто микроорганизмы рода Proteus из числа несероводородобразующих штаммов, а также лактозонегативные штаммы E. сoli.

Тесты по определению ферментации маннита и мочевины позволяют исключить присутствие вышеуказанных микроорганизмов в изоляте: иерсинии вызывают гидролиз мочевины и ферментацию маннита.

На заключительном этапе бактериологическое исследование должно быть направлено на дифференциацию Y. enterocolitica от других бактерий рода Yersinia. Оптимальным на этом этапе является определение ферментации сорбита, сахарозы и рамнозы, что позволяет дифференцировать микроорганизмы рода Yersinia между собой (см. табл. 2).

Таблица 2 Биохимические тесты, дифференцирующие виды иерсиний.

Сорбит, кислота	Сахароза, кислота	Рамноза, кислота	Виды иерсиний
+	+	+	Y. frederiksenii Y. intermedia
+	+	-	Y. enterocolitica
+	-	-	Y. kristensii
+	-	+	Y. aldovae
-	-	+	Y. pseudotuberculosis
-	-	-	Y. pestis Y. ruckeri

БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ

При апробации биологического метода исследования в диагностике иерсиниоза мы проводили оральное, внутрибрюшинное и внутримышечное заражение белых мышей 18-ти часовой культурой Yersinia enterocolitica в объеме по 0,2 мл. На каждый способ введения использовали по 3 мыши.

Нами установлено, что внутримышечное введение культуры Yersinia enterocolitica не вызывает нарушения общего состояния организма белых мышей за исключением образования незначительного припухания и появления болезненности на месте введения через 12-24 часов после заражения. Гибели мышей при внутримышечном заражении их не наблюдали.

При оральном и внутрибрюшинном заражении у животных через 24-48 часов после введения культуры наблюдали развитие острого энтерита: угнетение, частую дефекацию, вздутие брюшной полости. При вскрытии лабораторных животных обнаруживали следующие патологоанатомические изменения: слизистая оболочка кишечника была набухшей, покрасневшей, покрытая густой слизью. Кроме того, отмечали незначительное увеличение селезенки, серозный лимфаденит брыжеечных лимфоузлов, развитие перитонита со скоплением серозного экссудата в брюшной полости. Из содержимого кишечника погибших мышей при бактериологическом исследовании изолировали возбудителя иерсиниоза.

В дальнейшем мы установили, что при оральном заражении ЛД₅₀ Y. enterocolitica для мышей составляет 10^7,5, а при внутрибрюшинном - 10^7,3.

Экспериментальной работой был определен процент патогенных иерсиний, циркулирующих у свиней. Нами исследована патогенность 60 изолированных от свиней культур Yersinia enterocolitica, 46 из которых были признаны патогенными, что составляет 76,6+5,4% от их общего числа.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ

При серологическом исследовании проб сывороток крови экспериментально зараженных свиней нами установлено появление первых антител к Yersinia enterocolitica к 10-му дню после заражения в тирах 1:50-1:100 с тенденцией четырех и восьмикратного возрастания к 20-му дню после заражения. Антитела сохраняли свои значения к 25-му дню опыта.

Затем серологически обследовали 64 пробы сыворотки крови у свиней различных возрастных групп в отдельном хозяйстве. При этом антитела к микроорганизму в крови клинически здоровых свиней были выявлены в титрах от 1:25 до 1:100, а у больных - в тирах 1:200 и выше.

По результатам серологического исследования постановку диагноза на иерсиниоз можно рекомендовать в случае четырехкратного возрастания титра антител в интервале 10-ти суток или в случае выявления антител в титре 1:200 и выше при однократном исследовании.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ИЕРСИНИЙ

Устойчивость Yersinia enterocolitica к дезинфицирующим растворам.

Проводимые нами исследования показали устойчивость Yersinia enterocolitica к действию 5%-ного раствора кальцинированной соды, так как действие указанного раствора в течение 1 часа не обеспечивает снижение количества КОЕ до нуля (контроль 124 КОЕ).

Действие на исследуемый микроорганизм 2%-ного раствора натрия гидроксида, используемого при температуре 70С, раствора хлорной извести, содержащей 2% активного хлора, а также 2%-ного раствора формальдегида оказалось бактерицидным, убивающим 100% клеток используемой суспензии Yersinia enterocolitica, что позволяет отнести иерсинии к первой группе микроорганизмов, характеризующейся относительно низкой устойчивостью к химическим дезинфицирующим средствам.

Для проведения дезинфекции мы рекомендуем использование горячего (70С) 2%-ного раствора натрия гидроксида, хлорной извести с содержанием 2% активного хлора или 2% раствора формальдегида.

Чувствительность Yersinia enterocolitica к антибиотикам.

В ходе экспериментальной работы нами получены результаты, свидетельствующие о высокой чувствительности иерсиний к левомицетину, стрептомицину и энроксилу и отсутствии антибактериальной активности пенициллина к микроорганизму. Среди используемых антибактериальных препаратов наибольшую активность в отношении иерсиний имел энроксил (100% исследуемых культур микроорганизма оказались высокочувствительными к антибиотику и давали задержку роста на плотной среде более 25 мм; средняя зона задержки роста - 29,8+0,54 мм) и чуть меньшую - левомицетин (26,6+1,04 мм) и стрептомицин (25,1+1,32 мм), к антибактериальному действию которых высокочувствительными являются 85 и 70% исследуемых культур Y. enterocolitica.

МЕРОПРИЯТИЯ ПО ПРОФИЛАКТИКЕ ИЕРСИНИОЗА У СВИНЕЙ В СВИНОВОДЧЕСКИХ ХОЗЯЙСТВАХ

На основании полученных данных по изучению роли иерсиний в эпизоотическом и эпидемическом процессах, чувствительности их к дезинфицирующим и антибактериальным веществам, предложенной схеме диагностики болезни нами был разработаны мероприятия по профилактике иерсиниоза у свиней в свиноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Они включают сочетанное применение дератизации в свиноводческих помещениях, диагностирование болезни и скрытого носительства иерсиний у свиней, лечение больных свиней антибактериальными препаратами и проведение дезинфекции свиноводческих помещений.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

По результатам экспериментальной работы впервые выяснена роль иерсиний в инфекционной патологии желудочно-кишечного тракта у свиней, установлена частота иерсинионосительства у свиней, влияние на ее показатель внешних факторов, описаны основные звенья эпизоотической цепи при иерсиниозе, определена эффективность ряда дезинфицирующих и антибактериальных веществ, усовершенствована лабораторная диагностика болезни.

Анализ данных по эпизоотической роли иерсиний, эффективности некоторых антибиотиков и химических дезинфектантов позволил разработать мероприятия по профилактике иерсиниоза у свиней в свиноводческих хозяйствах.

В условиях промышленного свиноводства инфекции желудочно-кишечного тракта у свиней, обусловленные Yersinia enterocolitica, наблюдаются в виде бактерионосительства (у 7,2% свиней), латентной (6,25%) и клинической (0,24%) форм болезни. Инфицированность свиней в зимне-весенний период в 1,5 раза выше, чем в летне-осенний. В условиях Республики Беларусь свиньи являются источником возбудителя болезни для других свиней и людей, а грызуны - резервуаром возбудителя болезни [1,8,9,10, 14,16].

Клинически выраженный иерсиниоз проявляется угнетением, отказом от корма, повышением температуры тела на 0,8-1,2С, диареей, образованием жидких, зловонных, желтого цвета фекалий с выделением вместе с ними возбудителя во внешнюю среду. При экспериментальном заражении болезнь развивается у 40% свиней с их 30%-ной летальностью [15].

Yersinia enterocolitica, выделяемая от свиней, является короткой грамотрицательной палочкой, вызывающей изменение скошенной части агара Клиглера в красный цвет, а столбиковой - в желтый, ферментирующей мочевину, маннит, сорбит и сахарозу, не ферментирующая рамнозу, чувствительной к энроксилу, левомицетину и стрептомицину, погибающей при действии 2%-ных растворов формальдегида и натрия гидроксида, хлорной извести с 2% активного хлора. Выделяемые от свиней иерсинии в 76,6% являются патогенными для белых мышей при оральном и внутрибрюшинном заражении, вызывая развитие у них энтерита с последующей их гибелью в течение 4 суток [13].

Диагноз на иерсиниоз необходимо устанавливать комплексно, учитывая клинические признаки, эпизоотическую обстановку, результаты серологического (в РНГА) исследования сыворотки крови больных и подозрительных в заболевании животных, бактериологического исследования патматериала с выделением из него чистой культуры Yersinia enterocolitica и определением ее патогенности для белых мышей [12,13].

Для повышения степени выделения Yersinia enterocolitica из патматериала его необходимо обрабатывать 0,5%-ным раствором калия гидроксида в течение 1-3 минут, а в случае отрицательного результата по изоляции возбудителя дополнительно хранить при 4°С в течение 10 дней, что позволить повысить степень выделения иерсиний в 2-2,5 раза. Экономический эффект от использования предложенного метода составляет 37330 рублей, а его экономическая эффективность 7,9 рублей на 1 рубль затрат [2-7].

Комплекс мер по профилактике иерсиниоза у свиней в свиноводческих хозяйствах должен включать проведение дератизации в животноводческих помещениях, диагностики болезни и носительства у свиней, лечения животных антибиотиками (энроксил, левомицетин, стрептомицин), дезинфекции помещений с использованием 2%-ного горячего раствора натрия гидроксида, 2%-ного формальдегида и хлорной извести с 2% активного хлора.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты экспериментальных исследований легли в основу методических рекомендаций по «Лабораторной диагностике иерсиниоза свиней», утвержденных ГУВ МСХ и П РБ 24 октября 2001 года и предложений по проведению мероприятий по профилактике иерсиниоза у свиней.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Кирпиченок В.А., Корочкин Р.Б. Проблема иерсиниоза свиней и пути ее решения // Ученые записки ВГАВМ: Материалы III Международной научно-практической конференции, г. Витебск, 4-5 ноября 1999г. - Витебск, 1999. - Т. 35; Ч. 1. - С. 61-62.

Кирпиченок В.А., Корочкин Р.Б. Бактериологический метод диагностики иерсиниоза свиней // Материалы Международной научно-практической конференции: Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных / Мн.: Бел. тов-во Хата, 2000. - С. 283-284.

Корочкин Р.Б., Кирпиченок В.А. Диагностика иерсиниоза свиней. // Материалы международной научно-практической конференции: Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных / Мн.: Бел. тов-во Хата, 2000. - С.290-292.

Корочкин Р.Б. Совершенствование методов выделения Yersinia enterocolitica // Материалы Международной научно-практической конференции: Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных / Мн.: Бел. Тов-во Хата, 2000. - С.289-290.

Корочкин Р.Б., Кирпиченок В.А. Применение агара «К» в диагностике иерсиниоза свиней // Ученые записки ВГАВМ: Материалы научно-практической конференции по результатам научных исследований ВГАВМ за 1999 год / Витебск, 1999.- Т.36; Ч. 1 - С. 47-48.

Кирпиченок В.А., Корочкин Р.Б. Совершенствование бактериологического метода диагностики иерсиниоза свиней // Ученые записки ВГАВМ: Материалы научно-практической конференции по результатам научных исследований ВГАВМ за 1999 год. / Витебск, 1999. - Т.36, Ч. 1 - С.49-50.

Корочкин Р.Б. Выделение Yersinia enterocolitica при холодовом методе обогащения материала // Ученые записки ВГАВМ: Материалы научно-практической конференции по результатам научных исследований ВГАВМ за 1999 год. / Витебск, 199 - Т.36; Ч. 1 - С.45-47.

Кирпиченок В.А., Корочкин Р.Б. Изучение вирулентных свойств Yersinia enterocolitica на белых мышах // Исследования молодых ученых в решении проблем животноводства / Сборник статей Международной научно-практической конференции. - Витебск: ВГАВМ, 2001 - С. 101-102.

Корочкин Р.Б., Кирпиченок В.А. Влияние сезона года на частоту носительства Yersinia enterocolitica у свиней // Исследования молодых ученых в решении проблем животноводства / Сборник статей Международной научно-практической конференции. - Витебск, 2001 - С.117-118.

Корочкин Р.Б., Кирпиченок В.А. Эпизоотическая ситуация по иерсиниозу свиней // Исследования молодых ученых в решении проблем животноводства / Сборник статей Международной научно-практической конференции. - Витебск, 2001 - С.119-120.

Корочкин Р.Б., Кирпиченок В.А. К вопросу о патогенности Yersinia enterocolitica для свиней // Ученые записки ВГАВМ. Сборник научных трудов по материалам Международной научной конференции «Современные проблемы селекции, ветеринарной генетики и защиты животных от болезней», посвященной 100-летию со дня рождения профессора О.А. Ивановой. - Витебск, 2001. - Т.37; Ч.2. - С. 82-84.

Корочкин Р.Б., Кирпиченок В.А. Диагностика иерсиниоза свиней в реакции непрямой гемагглютинации // Ветеринарная медицина Беларуси. - 2001. - №3. - С. 6-7.

Кирпиченок В.А., Корочкин Р.Б., Долгицер Л.К. Лабораторная диагностика иерсиниоза свиней: Методические рекомендации. - Витебск, 2001. - 10 с.

Гурский П.Д., Корочкин Р.Б. Иерсинионосительство у свиней с поражением желудочно-кишечного тракта // Исследования молодых ученых в решении проблем животноводства / Сборник статей II Международной научно-практической конференции. - Витебск: ВГАВМ, 2002. - С. 75-76.

Гурский П.Д., Корочкин Р.Б. Клиническое проявление и патологоанатомические изменения у свиней при иерсиниозе // Исследования молодых ученых в решении проблем животноводства / Сборник статей II Международной научно-практической конференции. - Витебск: ВГАВМ, 2002. - С. 76-77.

Корочкин Р.Б. Эпизоотическая ситуация по иерсиниозу свиней в Республике Беларусь // Исследования молодых ученых в решении проблем животноводства / Сборник статей II Международной научно-практической конференции. - Витебск: ВГАВМ, 2002. - С. 133.

Размещено на Allbest.ru