Вирус болезни Марека

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Вирус болезни Марека

1. Характеристика возбудителя

1.1 Наименование вируса (историческая справка)

Хотя вирусная природа этой болезни предполагалась давно, до 1967 г. вирус не был открыт. В 1967 г., З группы ученых, в Англии, и в США одновременно и независимо друг от друга выделили от больных в культуре клеток герпесвирус цыплят и предоставили доказательства, указывающие на этиологическую роль этого агента. В настоящее время определенно установлено, что ВБМ относится к роду Herpesvirus группы В и является клеточно-связанным вирусом.

В 1969 г. Calnek и др. выявили вирус специфический ИФ АГ в эпителии перьевых фолликул зараженных цыплят. Оказалось, что перьевые фолликулы - постоянное место локализации АГ в высокой концентрации. Однако дерма и эпидермис кожи инфицированной птицы всегда свободны от вирус специфического АГ. Пораженные клетки эпителия фолликулов, представляющие часть многослойного плоского эпителия, в результате слущивания отделяются в окружающую среду вместе с линяющими перьями и являются источником инфекции. В 1970 г. выделили из этого источника инфекционный внеклеточный вирус и вызвали с его помощью заболевание у цыплят. Эта работу продолжили Nazerian и Witter. Они вызвали заболевание внеклеточными экстрактами перьевых фолликулов и доказали, что местом репликации полного инфекционного вируса является эпителий перьевых фолликулов. Позднее для передачи инфекции использовали перхоть, собранную от инфицированных птиц.

1.2 Систематика

Вирус относится к:

Царству: VIRA,

семейству: Herpesviridae - герпесвирусы образуют обширное семейство (свыше 80 видов). Название семейства происходит от гр. слова нerpes (ползучий). Вирусы поражают широкий круг хозяев: человека, животных, грызунов, птиц, пресмыкающихся, рыб и даже грибы.

Подсемейству: Alphaherpesvirinae

Роду 3: Безымянный род - вирус болезни Марека, ЗКГ.

1.3 Морфология

Вирионы содержат 2-спиральную линейную ДНК. Тип симметрии кубический, количество капсомеров 162, форма - шар, размер вириона 120-200 нм в диаметре, сложноорганизован

1.4 Антигенные свойства

АГ структура сложна. Основными гликопротеинами ВБМ являются А - АГ - (gр57-65) и В-АГ - комплекс (gp lOO, gp 60 и gp 49). В составе вируса БМ выявлено 6 АГ, из которых наиболее важные А, В, С. АГ А содержится во всех патогенных штаммах и при аттенуации утрачивается ими. АГ ВБМ содержит секретируемый гликопротеин с мол. м. от 57 до 65 кД в полностью гликозилированной форме. Этот АГ обнаружен в культуральной жидкости и экстрактах зараженных клеток, а В и С АГ - только в экстрактах зараженных клеток. Известно, что первоначально предшественник gA синтезируется как белок с мол-м. 47 кД, который после отщепления сигнального пептида дает белок-предшественник: мол. м. 44 кД Функция gA до сих пор неясна. Показано, что он не является существенным для репликации в культуре клеток, однако может иметь важное значение для развития вируса в организме птицы Выдвинута гипотеза о том, что gA является иммуносупрессором на ранних стадиях инфекции. АГ В представляет собой связанный с поверхностной мембраной комплекс, состоящий из 3-х гликопротеинов - gplOO, gp60, gp48, причем последние 2 представляют собой части первого. Полагают, что В-АГ - комплекс играет центральную роль в нейтрализации вируса иммунной системой хозяина и может вызвать частичную защиту против БМ. Помимо АГ А, В и С, ВБМ содержит мембранный АГ (связанный с клеточной мембраной), общий для ВБМ и ВГИ. Его обнаруживают в ИФ на поверхности клетки. Полагают, что мембранный АГ связан с А АГ, так как оба они исчезают при аттенуации вируса. АГ В также общий для ВБМ и ВГИ и выявляется в РДП.

Метод ИФ, в котором использовали сыворотки от переболевших или гипериммунизированных птиц, оказался недостаточным, чтобы показать наличие АГ в опухолевых клетках (38) Однако аналогичная методика, в которой используют AT, полученные от цыплят или кроликов, иммунизированных трансплантатом опухолевых клеток, позволяет выявить наличие специфического АГ на поверхности опухолевых клеток (67). Этот АГ получил название опухолеассоциированного поверхностного AT (MATSA). Он обнаруживается в большинстве опухолевых клеток, трансплантируемых опухолях и трансформируемых клеточных линиях, но его нет в культуре фибробластов, инфицированной ВБМ либо ВГИ (131, 198, 15». 205, 142, 144). В опытах J.M. Sharm (183) большинство клеток-носителей MATSA осаждалось со скоростью, превышающей 3 мм/ч, тогда как клетки, осаждающиеся при более низ кой скорости, не содержали этот АГ, Клетки-носители MATSA составляли 11,7% клеток опухоли. Инфекционны были и клетки-носители опухолевого АГ и клетки, лишенные его Таким образом, клетки, содержащие вирусный геном, не обязательно являются носителями MATSA и не всегда трансформируются.

В 1972 г. Biggs (49) сообщили о выделении в птицехозяйстве непатогенноп (неонкогенного) шт. ВБМ от здоровых цыплят и впервые предложили разделить имеющиеся изоляты на 3 родственные группы. К 1-й были отнесены вирусы, вызывающие острую БМ. ко 2-й - классическую, а к 3-й - апатогенные изоляты. Разделение вирусов на группы по патогенности совпало с серологической их классификацией, основанной на РИФ и РДП, с помощью которых Bulow и др. (58, 59) определили 3 серотипа. Серотип 1 включает все онкогенные вирусы и аттенуированные варианты, серотип 2 - все неонкогенные вирусы, серотип 3 - АГ родственные ВБМ вирусы герпеса индеек. Наличие 3-х серотипов в дальнейшем подтверждено РН вирусов, двумерным гель-электрофорезом и РИФ с применением монАТ (123). Серологическая классификация подтверждена сравнительными исследованиями фрагментов вирусных ДНК при обработке нуклеиновых кислот рестриктазами (44).

Вирусы серотипа 1 включают штаммы ВБМ, различающиеся по латогенности (онкогенности) для птицы. Высоковирулентные изоляты М.5, Ala-8, RB-TB выделены от цыплят вакцинированного поголовья во время вспышки БМ(76). Эти вирусы вызывают значительный отход при БМ у генетически резистентной не вакцинированной птицы или у генетически чувствительной вакцинированной ВГИ птицы. Witter (212) предложил называть очень вирулентными штаммы ВБМ (ОВВБМ), которые вызывают, характерные поражения в стадах птиц, длительное время вакцинированных препаратами на основе ВГИ. Вирулентные шт., серотипа 1 (GA, HPRS-16, JM) - вызывают значительный отход с коротким инкубационным периодом у генетически чувствительной, но не резистентной птицы (64). Умеренно патогенные классические шт. HPRS-17, Сопл-1 индуцируют опухоли только у незначительной части цыплят (39, 64). Они имеют тенденцию вызывать нервные явления. Наименьшую онкоген-ность среди шт. серотипа I имеют шт., подобные Си-1 или CV7988 (67, 76), которые вызывают только нервные изменения. Вирусы серотипа 2 изолируются довольно часто. По-видимому они неонкогенны и не патогенны для цыплят (37, 76). Вирусы серотипа 3 включают апатогенные, неонкогенные вирусы герпеса, выделенные от индеек. Впервые ВГИ выделили в США Witter и др. (76) и Kawamura и др. (55) при исследовании индеек как возможного промежуточного хозяина и резервуара вируса БМ в природе. ВГИ широко распространен в коммерческих индюшиных стадах.

Серотипы ВБМ характеризуются сложной АГ структурой, изучение которой важно для дифференциации шт., выявления значения отдельных вирусспецифических (оболочечных антигенов) и вирусиндуцированных (гА) белков в иммунитете при БМ, проведения серологических исследований, интерпретации АГ родства ВГИ и ВБМ, а также для конструирования эффективных вакцин. Высокоспецифичным и чувствительным экспресс-методом, с помощью которого возможно изучение перечисленных вопросов, является ИФА Решением Международного эпизоотического бюро ИФА признан официальным референс тестом. (15).

В Российской Федерации впервые разработаны методы ИФА индикации антигенов разных серотипов ВБМ и AT к ним. В общем гликопротеидном АГ (гА), индуцированном ВГИ, содержатся 2 АГ детерминанты, одна из которых перекрестно реагирует со структурными компонентами вирулентных штаммов ВБМ, не имеет общих АГ связей с мелкофокусным вариантом ВГИ и аттенуированным ВБМ. Помимо теоретического, это открытие имеет и прикладное значение и побуждает пересмотреть существующее представление о роли отдельных АГ детерминант общего гликопротеидного А АГ ВГИ и ВБМ (15).

АГ вариабельность и родство. Благодаря общему А-АГ различий в АГ характеристике штаммов данного вируса нет. Однако вирусы болезни Марека и герпеса индеек имеют АГ различия (200, 57). Такое различие было показано при использовании РИФ, преципитации с двойной диффузией в агаровом геле и РН (199), Так, в клетках, инфицированных ВГИ, АГ выявляется с помощью гомологичной сыворотки и в ядре, и в цитоплазме, тогда как в клетках, инфицированных ВБМ, он выявлялся антисывороткой к ВБМ только в ядре. Аналогичные результаты были получены С.В Лавровым, и др. (12) При заражении культуры клеток куриных фибробластов ВГИ (шт. М-24) через 24 и 48 ч после заражения наблюдалась флюоресценция ядра и цитоплазмы. Свечение ядер было диффузным, в цитоплазме были видны тонкогранулярные глыбчатые светящиеся участки. Однако попытки продемонстрировать перекрестную РДП ВГИ и ВБМ оказались неудачными (28,162). Поскольку ВБМ является клеточно-ассоциированным, постановка РН с ним затруднена.

Nazarian и др. (143) ЭМ охарактеризовали ультраструктуру вирионов ВГИ, которая оказалась чрезвычайно сходной с вирионом ВБМ.

Герпесвирусы голубей, сов, соколов, больших бакланов, человека (типов 1 и 2), вирусы болезни Ауески и инфекционного ларинготрахеита не имеют серологического и иммунологического родства с ВБМ. По А-АГ ВБМ и ВГИ родственны, но не идентичны.

Референтные шт. вируса JM, HPRS-24, Fc-126 относятся к серотипам 1 и 2 и 3.

Патогенные свойства. Показано, что тяжесть острой цитолитической инфекции БМ зависит от штамма вируса, например, шт. Md-5 и Md-11 оказались сходными с прототипным штаммом БМ по онкогенности для чувствительных цыплят, иммунодепрессивной активности и антнгенности. Другие же штаммы (JM/102 и JA-22) с большой частотой индуцировали острую цитолитическую инфекцию с атрофией бурсы и тимуса и ранней гибелью цыплят без развития лимфом, высокую онкогенность как для привитых ВГИ, так и непривитых.

В 1972 г. (50) описаны изоляты ВБМ различной патогенности. Они впервые разделены на 3 категории: 1 - вызывают остро протекающую БМ; 2 - вызывают классическое течение болезни; к 3-й относятся авирулентные изоляты. Высоковирулентные изоляты обычно встречались в 3 раза чаще в неблагополучных фермах, а авирулентные - у птиц из благополучных хозяйств. Так, изоляты Е-107/81 и E-129/8I более вирулентны, чем вариант МД-S

В Северной Италии выделено 2 высоковирулентных изолята вируса, обладающих иммунодепрессивным эффектом. Наиболее восприимчивы цыплята в первые 2 нед жизни. Петухи породы корниш более устойчивы к БМ и восприимчивее к лимфоидному лейкозу, а несушки породы белый плимутрок - наоборот. Относительная частота обнаружения вируса БМ в определенной популяции кур обратно пропорциональна его вирулентности. С увеличением возраста птиц наличие менее патогенных вирусов возрастает. Иногда из одного и того же стада выделяли вирусы 2-х типов. Следовательно, один и тот же цыпленок в полевых условиях может быть заражен вирусами более, чем одного типа. В 1972 г. Clio и Сепгу (70) решили проверить эту мысль, вызывая двойное заражение острым и слабым штаммами BБМ: цыплят, выращиваемых на подстилке из стружек, контаминированных штаммами, вызывающими острое заболевание Этим, по существу, моделировано естественное двойное заражение в полевых условиях. В результате авторы установили интересный факт: птицы, зараженные одним штаммом (острым или слабым), были защищены от заражения другим шт. У отдельных цыплят виремия не была постоянной по титру, у некоторых птиц состояния виремии и невиремии чередовались. Различные типы цыплят реагировали на заражение по-разному (при одновременном заражении одной и той же окружающей среды); не ясно, являлось ли это результатом действия материнских AT и фактом наличия у цыплят ВГИ. Виремия, вызванная шт. острой формы БМ (ID-1), наблюдалась у белых леггорнов уже на 1-й нед после заражения, а у птиц мясного типа - на 2-й нед. Реакция птиц разных генетических ллний при содержании их в одной и той же инфицированной среде оказалась различной.

Churchill и Biggs (74) работали с 2-мя шт. ВБМ (JM и JA), которые поддерживались на 1-дн цыплятах. Последних заражали кровью с интервалом 4-6 нед. В результате авторы показали, что шт. JM вызывал высокую смертность цыплят с большими поражениями периферических нервов и половых желез, тогда как смертность цыплят от шт. JA была непостоянной, с более продолжительным латентным периодом. Присутствие шт. JA в организме зараженных цыплят характеризовалось следующими сроками: в почках вирус обнаруживали через 2 нед, в яичниках - к 7-й нед, в печени и селезенке - к 8-й нед и в головном мозге - к 4-й нед после заражения (92). Шт. JA оказался более висцеротропным, так как при заражении им антигены выделялись на 9 дн раньше в печени и на 4 дня раньше в 12-перстной кишке н легких, чем при заражении шт. JM, Только при инфицирования шт. JA у птиц развивались опухоли в печени, сердце и селезенке, тогда как шт. JM был более нейротропным и обладал большим тропизмом для гонад, чем шт. JA, что подтверждалось более ранним выявлением вирусного АГ и более тяжелыми поражениями периферических нервов и гонад (38).

Sohet К. and Calnek В (177) описали новый изолят ВБМ: - вирус SB клон SB-1, который отличался от патогенных изолятов характеристиками роста in vitro, как описано для других апатогенных изолятов. Он не вызывав поражений, характерных для БМ, в течение 11-нед экспериментального периода и оказался неонкогенным. Однако при определенных условиях он может являться причиной воспалительного типа инфекции. Поэтому для классификации этого и похожих изолятов был предложен термин «неонкогенный» и «апатогенный». Клон SB-J защищал цыплят от вирулентного ВБМ и опухолевой трансплантации Авторы при помощи гистологических исследований выявили различие между изолятами SB и HN-1, с одной стороны, и изолятом CU-2 с другой. Цыплята, зараженные CU-2, имели значительные поражения нервов, характеризующиеся обильной инфильтрацией большого количества лимфобластов, либо слабой лимфоцитарной инфильтрацией. В других органах, особенно в головном мозге и печени, наблюдались типичные для БМ поражения.

Purchase (167) привел ряд биологических маркеров, которые можно использовать для распознавания различий между вирулентными и аттенуированными шт. ВБМ и ВГИ. Такими маркерами являются: 1) патогенность; 2) морфология бляшек и цикл репродукции; 3) АГ различия; 4) круг хозяев (спектр патогенности); 5) патогенность для клеточных систем.

Онкогенные свойства. Проявляются не у всех штаммов ВБМ. По механизму онкогенного действия этот вирус значительно отличается от других онкогенных вирусов. Считают, что ВБМ трансформирует только Т-лимфоциты. В одной трансформированной клетке выявляют до 20 эквивалентов генома ВБМ (85). Онкогенные варианты вируса, по-видимому, кодируют характерные для них АГ детерминанты, отсутствующие у неонкогенных вариантов Наиболее четкие различия наблюдаются в характеристике гликопротеида (gp5), позволяющие разграничить среди штаммов вируса варианты с высоко- и кизкоонкогенными свойствами, а также отличить ВБМ от ВГИ. По этому критерию выделены 2 варианта ВГИ.

Все опухолевые клетки содержат от 3 до 12 геномов ВГМ на клетку, причем 90% вирусного генома транскрибируется с кодирующей нити 2-нитевой ДНК. Транскрибированная вирус специфическая РНК в разных клетках кодируется одним и тем же фрагментом ДНК.

1.5 Патогенность, место репродукции, восприимчивые животные, лабораторные модели

Локализация вируса. У птицы с признаками болезни вирус обнаруживают в крови. По организму он разносится лейкоцитами крови и размножается в клетках лимфоидных органов (фабридиевоЙ сумке, селезенке, тимусе, миндалинах, слепой кишке), лимфоидных очагов инфильтрации, эпителиальных клетках почечных канальцев и особенно перьевых фолликул, где найдены зрелые вирионы, покрытые оболочкой. Вирус также содержится в лимфоретикулярных клетках гребня, сережек и голени. В первую нед его обнаруживают в тимусе, селезенке и бурсе, в результате чего развивается персистирующая инфекция клеток белой крови. Выделить вирус в свободном состоянии не удается. В перьевых фолликулах вирус находится у инфицированных птиц всех возрастов независимо от метода заражения. Он содержится в слушивающихся клетках.

Патогенез и иммунитет при болезни Марека имеют исключительные особенности, накладывающие отпечаток на эпизоотологию и профилактику инфекции. Вирусоносительство, виремия и вирусовыделение после переболевания сохраняются практически всю жизнь, несмотря на устойчивость и присутствие ПА и ВНА. Даже вакцинация не предотвращает Вирусоносительство и способность к контактному заражению. Более того, частота виремии на неблагополучных фермах выше у здоровых цыплят, чем у больных. Иными словами, переболевание или иммунизация практически не влияют на циркуляцию эпизоотического вируса. Высоковирулентные шт. вызывают гибель 1 - дневных цыплят. При заражении их слабо вирулентными штаммами они остаются носителями вируса в течение всей жизни, несмотря на устойчивость и присутствие ПА и ВНА.

Больная птица выделяет вирус через органы дыхания и пищеварения, а также с десквамированным эпителием кожно-перьевых фолликул, эпителий которых служит местом размножения вируса. Установлена прямая связь между созреванием вируса в клетках фолликул и контагиозностью болезни. Вирусоносительство отмечено у клинически здоровой птицы не только во время инкубационного периода, клинического проявления болезни, но в течение 16-24 мес после переболевания, практически пожизненно, при наличии у такой птицы специфических (РН, РДП) AT в 80-90% случаев.

Из эпителиальных клеток перьевых фолликул удалось получить очищенный вирус. Высушенные эпителиальные клетки перьевых фолликул сохраняют инфекционность для цыплят при аэрогенном заражении. Присутствие клеточно-свободного ВБМ в перьевых фолликулах зараженных 1-сут цыплят впервые обнаружено в 1970 г. (140). Вирус обнаруживался в фолликулах через 2 нед после заражения, концентрация его там нарастала с 3-й по 5-ю нед и снижалась к 6 и 7-й нед после заражения, 90-100% цыплят, зараженных вирулентным вирусом БМ в возрасте 0-2 нед, спустя 2 нед имели генерализованную инфекцию в перьевых фолликулах, вирусный АГ персистирует в них несколько месяцев (62).

У экспериментально зараженных суточных цыплят появление ИФ АГ в коже отмечалось с 56-го дн. В этот срок в коже наблюдали специфическую ИФ в 50%, в очинах пера - в 90% случаев, в то время, как преципитирующий АГ в этот срок и от тех же цыплят был установлен у 70,5% зараженных цыплят. Выделение вируса из кожи и очин пера в культуре клеток удавалось в 87,5% случаев. Клеточно-ассоциированный ВБМ выявляется в легких, лимфоидных органах через 1-4 дн после заражения, в лейкоцитах - позже. Затем он выявляется в нервах, головном мозге, печени, почках, гонадах. Титр вируса достигал пика в течение 2-х нед после заражения. Далее инфекционность снижалась, но улавливалась ещё 55 дн (51). Однако, в этих органах не происходит созревания полного инфекционного вируса.

Что касается клеточно-свободного ВБМ в организме зараженных цыплят, то помимо эпителия перьевых фолликулов (63) он формируется в фабрициевой сумке в среднем в 52-55% случаев. Выявить вирус в других органах (нервы, селезенка), а также в опухолях в этот период не удавалось. Это свидетельствует о том, что в других тканях и органах изменения являются вторичными и находятся под влиянием иммунологических процессов (58).

Аналогичные данные получил Purchase (164). Он отметил, что вирусный АГ может длительно выявляться в перьевых фолликулах (несколько месяцев), в то время как в висцеральных органах или невральных вирусиндуцированных опухолях он в поздние сроки либо отсутствовал вовсе, либо обнаруживался в небольшом количестве клеток.

Не ясно, почему выделение вируса происходит лишь через перьевые фолликулы; между тем вирусный геном присутствует и в других клетках больных кур, поскольку заболевание может быть искусственно передано свободными от вируса интактными клетками. Пока неизвестно, что мешает полной экспрессии вируса в этих клетках.

АГ активность. АГ ВБМ содержатся у больной птицы в эпителии перьевых фолликул. По содержанию их у экспериментально зараженных цыплят установлены значительные различия между онкогенным и неонкогенным ВБМ. В перьевых фолликулах, соответствующих онкогенному вирусу, содержалось достаточно АГ, реагировавшего в РДП через 3-6 нед после заражения. Материал из фолликул, инокулированных неонкогенным вирусом в РДП, за редким исключением реагировал отрицательно. Таким образом, исследование экстракта из перьевых фолликул в РДП может служить простым тестом для обнаружения онкогеннон инфекции цыплят, а обнаружение ИФ и преципитирующих АГ в очинах перьев представляет собой надежный метод лабораторной диагностики.

У зараженной птицы образуются гуморальные AT, способные нейтрализовать вирус in vitro. Чрез 1-3 нед после заражения или вакцинации в крови цыплят обнаруживают ВНА и ПА. в 85% случаев вирусный АГ выявляют в фолликулах кожи. У цыплят, зараженных вирулентным вирусом, AT чаще обнаруживают в тех случаях, когда птицы остаются здоровыми, к значительно реже у больных птиц или в случаях персистирующей инфекции. Инфицированные несушки передают потомству через яйцо ПА, которые обычно сохраняются до 3-нед возраста и не защищают против экспериментального заражения цыплят в 1-дн возрасте

Экспериментальная инфекция. Ранее предпринимали много попыток экспериментальной передачи БМ. Однако впервые болезнь была успешно и неоднократно передана тишь в начале 60-х гг. (218). Оказалось, что кровь или опухолевый материал, содержащий живые интактные клетки, могут передавать заболевание чувствительным 1-дн цыплятам. Любые обработки инокулята, которые убивают клетки или разрушают их целостность, раз-рушают и инфекционность вируса.

Цыплят удавалось заражать внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно, подкожно, интрацеребрально, интранефрально. Чувствительность к экспериментальному заражению выше у цыплят суточного возраста, чем у 2-3 и 10 нед. Суточные экспериментально зараженные цыплята после инокуляции вируса выделяют его со 2-й до 3-й нед. Микроскопические поражения развиваются уже на 2-й нед, а макропоражения и симптомы болезни проявляются не раньше, чем на 4-й нед или даже позднее. При заражении 1-сут цыплят в нос апатогенным шт. ML-6 вирусные внутриклеточные АГ были обнаружены на 3-й дн в легких, на 5-14 дн - в лимфоидных органах и на 14-30 дн - в фолликулах перьев. Вирус изолирован из селезенки на 14-30-й дн. После 10-го дн в сыворотке методом ИФ выявлялись AT (125).

Смертность экспериментально зараженной птицы от 0,2 до 79,9% при наблюдении в течение 65-210 дн. Все цыплята, зараженные в 1-сут возрасте, как правило, погибают, в то время как гибель 2, 3 и 10-нед цыплят составляет соответственно 60, 30 и 10%. Возрастная устойчивость обусловлена различной способностью организма цыплят продуцировать специфические AT. Наличие у цыплят материнских пассивных AT к ВБМ защищает их от заражения. Введение 1-сут цыплятам лимфоцитов от больных цыплят после предварительного их культивирования in vitro ведет к развитию болезни. Полагают, что возможна интеграция ББМ с геном клеток кур (лимфоцитоз).

При остром течении экспериментальной инфекции клиническое проявление болезни отмечено через 20-85 дн, первоначальные патоморфологические признаки - через 21-60, гистологические изменения - через 12-21 дн. Специфические AT в сыворотке крови и вирус-специфический АГ в эпителии перьевых фолликулов выявлены соответственно через 21-28 и 28-60 дн. При экспериментальном заражении вакцинированных 3-нед цыплят вирусный АГ в перьевых фолликулах появляется через 1-5 нед и при смертельном исходе выявляется до момента гибели, а у выздоровевших птиц постепенно исчезает.

При экспериментальном заражении 1-дн SPF-цыплят непатогенным вирусом ML-6 БМ серотипа 2 внутриклеточные вирусные AT (VJAS) обнаруживали в селезенке и фабрициевой сумке 5-14 дн, в легких - через 3 дн и в перьевых фолликулах - спустя 14-30 дн после зара-кения, но не обнаруживали в этих органах (кроме перьевых фолликулов) через 21 дн после заражения. Показано, что в период через 5-14 дн после инфицирования наиболее часто были инфицированы ВБМ делящиеся В-клетки фабрициевой сумки и селезенки. Таким образом, при инокуляции цыплятам вируса ML-6 его репликация происходила в лимфатических ор-анах первоначально в Ь-клетках бурсы и селезенки (125).

Чувствительность к экспериментальному заражению у птиц разных пород и линий неодинакова; чаще болеют куры мясных пород и особенно белые плимутроки. В 1969 г. Сиккорди высказал мысль, что БМ - инфекция лимфоцитов, поэтому заразить птиц до начала функционирования у них лимфоцитов не удается. Инфекция лимфоидных клеток приводит к трансформации и образованию специфического опухолевого АГ, пролиферации и образованию опухолей. После инъекции небольшого количества неповрежденных опухолевых клеток ВБМ здоровым, но восприимчивым к заболеванию цыплятам не удается снова выделить из этих клеток вирус. И только в редких случаях удавалось получить вирусные частицы из опухолевых тканей зараженных птиц (41,138).

Экспериментальная инфекция суточных цыплят изучена при различных методах заражения: интраперитонеальном, интраназальном, внутриглазном, в переднюю камеру глаза. В качестве инокулята использовали цельную кровь, суспензию клеток яичников, нервов и эпителия фолликулов. Авторы показали, что частота заболеваемости зависела от вида инокулята и метода заражения Экспериментально вызванное заболевание было сходно с классической формой (175) Первое микроскопическое изменение - адвентициальная клеточная пролиферация головного мозга. Она наблюдалась во всех случаях с 1 по 8 нед после заражения. Следовательно, ткань головного мозга первой отвечает на заражение ВБМ Вирус, введенный в глаз экспериментальным цыплятам, вызывал 3 формы БМ. Наблюдались изменения в глазу, конъюнктиве, хрусталике, целлюлярном теле и сетчатке, которые ранее не были описаны Рецидивов иридоциклитов не отмечали. Выделенный вирус по его патогенным характеристикам относится к группе велогенных агентов (132).

Экспериментальная инфекция шт. HPRS-B14 характеризуется поражениями периферических нервов. У некоторых цыплят развивались лимфоидные опухоли, главным образом, в яичниках. Экспериментально вызванная БМ практически почти не отличается от естественной, разница лишь в длительности латентного периода. Куры оказались более чувствительными к шт. HPR3-B14, чем петухи.

Цыплята без материнских AT, зараженные экспериментально, гибли через 10-17 дн после периода депрессии и остановки роста Вирус всегда присутствовал в крови цыплят с клиническими симптомами болезни. Титр вируса в крови составлял 10-3,6 - 10-4,2 ИД ₅о/мл. Плазма цитратной крови после центрифугирования её при 2000 мин»¹ была также инфекци-онна, но содержала меньше вируса, чем цельная кровь (51). Около 95% инфекционности цельной крови связано с её клеточной фракцией. Быстрое замораживание до -70°С сильно снижало инфекционность опухолевой суспензии и цельной крови.

БМ была воспроизведена экспериментально на 10-11-дн КЭ и 1-7-дн цыплятах при инокуляции им крови и взвеси опухолевых клеток, смывов со скорлупы яйца и суспензии из перьевых фолликулов. Инфекционность суспензии из перьевых фолликулов была самой высокой и вызывала заболевание 52% зараженных цыплят и 57,5% КЭ. Патогенность изолятов ВБМ установлена для цыплят 1-7-дн возраста и 10-11-дн КЭ независимо от способа введения инокулята. Возбудитель, выделенный из крови, перьевых фолликулов от домашних кур и диких птиц, оказался идентичным (3).

При внутривенном заражении эмбрионов в 10- или 17-дн возрасте цыплята вылуплялись нормально, но заболевали БМ после инкубационного периода такой же продолжительности, как цыплят, зараженных в 1-дн возрасте. Заражение 10-дн КЭ в аллантоисную полость вызывает БМ у вылупившихся цыплят. При заражении КЭ в желточный мешок вирусом, вызывающим классическую форму БМ. отмечали перикардиты, сгшеномегалию и наличие бляшек в селезенке (38).

У экспериментально зараженных цыплят первые клинические проявления болезни отмечались через 5 нед после заражения. Течение болезни имело 3 периода: с 5 по 15 нед отмечалась вялость, атаксия, потеря координации движения, диарея, бледность сережек и гребня, далее с 15 по 30 нед - постепенное ослабление нервных симптомов, исчезновение диареи, появление позы пингвина и, наконец, с 30 по 56 нед часть птиц находилась в по^г пингвина. С 34-й нед клинические проявления болезни исчезали, но птица была очень ослаблена по сравнению с контрольной. Цыплята, выжившие после экспериментального заражения ВБМ в 2-3-нед возрасте, являлись носителями вируса до 16-24-мес возраста Вирус > таких птиц содержался в крови до 24-мес возраста (90).

Контактный способ заражения птицы в экспериментальных условиях оказался таким же эффективным, как и внутрибрюшинный - введение вируссодержашей крови больных птиц-доноров. Контактно зараженные ВБМ цыплята погибали от БМ через 4 мес.

Индюки оказались менее чувствительны к культуральному ВГИ, чем куры, но более чувствительны к заражению лейкоцитарной кровью, содержащей ВГИ (202).

Инфекция у индюшат, вызванная ВБМ. Вопрос о чувствительности индюшат к ВБМ имеет противоречивое толкование По одним данным у 3-х из 7 зараженных индюшат развились лимфоидные опухоли, причем 2 из них пали на 43-й и 50-й дн после заражения. не один из зараженных индюшат не имел ПА и реизолировать от них ВБМ не удалось. В итоге сделали вывод о нечувствительности индюков к экспериментальной инфекции БМ.

Однако в 1977 г. (151) показана высокая чувствительность индюшат к шт. Джорджия ВБМ. Заражали ВБМ 1-сут цыплят и индюшат путем введения инфекционной плазмы или гомогената опухоли и выращивали их в изоляции в течение 29 нед. Инокуляты оказались патогенными для цыплят и индюшат и вызывали высокую смертность (100% у цыплят и 70% у индюшат). Изменения наблюдали в печени, селезенке, легких и других висцеральных органах. Микроскопически пораженные ткани инфильтрированы плеоморфной популяцией неопластических лимфоцитов Авторы не выявили изменений воспалительного характера От экспериментально инфицированных цыплят и индюшат был реизолирован ВБМ и у этих птиц обнаружены ПА. Данная работа показала, что индюшата высоко чувствительны к экспериментальному заражению шт. ВМБ.!^ги данные (151) были подтверждены (5).

Однако в индюшиных стадах БМ не проблема. Возможное объяснение этого - присутствие у индеек ВГИ, который будучи АГ родственным ВБМ защищает индюшат от болезни.

Культивирование. ВБМ удается культивировать в организме 1-дневных цыплят и в КЭ (10-12- и 4-дн возраста при заражении на ХАО и в желточный мешок, соответственно в культуре фибробластов и почечных клеток куриных и утиных эмбрионов, в культуре клеток почки 2-8 нед цыплят малочувствительной к БМ линии. Заражение КЭ в желточный мешок ведет к образованию характерных бляшек на ХАО (Рис. 98), поэтому некоторые исследователи считают использование эмбрионов эффективным методом выделения БМ (196).

Шт. В-14 ВБМ поддерживали внутрибрюшинной инокуляцией 1-2 дн цыплят разных линий с интервалом 3-10 нед кровью, взятой от птиц с клиническими симптомами БМ. В течение 70-100 дн наблюдения за цыплятами на протяжении 40 последовательных пассажей заболевание у них колебалось в пределах 29-87% у RIR, 12-40 у EBrL и 27-58% у HPRS-BrL

В культуре клеток почек цыплят и фибробластов утиных эмбрионов ВБМ образует характерные бляшки (138. 189). Хотя в первых пассажах этот вирус не вызывает образования бляшек в культуре клеток куриных фибробластов, но при дальнейшем пассировании в чувствительных культурах он приобретал эту способность которая возрастала с увеличением количества пассажей (165) ЦПЭ характеризовался образованием округлых рефрактильных клеток и поликариоцитов. Размер и число последних варьировалось в зависимости от типа культуры клеток и пассажа вируса, Зараженные клетки погибали, продуцируя большое количество вирусного АГ и голых вариантов, которые можно наблюдать в тельцах-включениях и ядрах большинства зараженных клеток.

Штаммы различаются по активности репродукции в культуре клеток, характеру ЦПД, морфологии бляшек и количеству клеточно-свобод но го инфекционного вируса. По морфологии бляшек можно дифференцировать вирулентные штаммы от слабо вирулентных Так, шт. CPRL-11 ВБМ утрачивал патогенность (онкогенность) для цыплят после его серийного пассирования in vitro в клетках куриных эмбрионов. При длительных пассажах вируса в культуре клеток А-АГ исчезал, поэтому при изучении АГ структуры вируса он не должен пассироваться более 10 раз. По бляшкообразованию в культуре клеток штаммы ВБМ делят на 3 группы: высокоенкогенные, вызывающие в клеточных культурах образование бляшек средних размеров, и неонкогенные изоляты, вызывающие образование мелких бляшек; ВГИ и аттенуированный ВБМ, вызывающий образование крупных бляшек Высказана мысль о возможной связи между бляшкообразованием и патогенностью полевых штаммов ВБМ (21) ВБМ удавалось размножать в органных культурах почек, селезенки, гонад и легких цыплят 3-4-нед возраста. Вирус не репродуцировался в культуре клеток млекопитающих, и все попытки в этом отношении оказались безуспешными.

Титрование ВБМ в культуре клеток основано на его свойстве образовывать бляшки без агарового покрытия, так как возбудитель является клеточносвязанным. Его также удавалось серийно пассировать и на 1-сут цыплятах, свободных от материнских AT, заражая их ин-траперитонеально в дозе по 500 БОЕ на цыпленка С увеличением числа пассажей вирулентность вируса снижалась. Неспособность ВБМ в клеточной культуре вьщеляться во внеклеточную среду связана с его внутрицитогшазматической деструкцией. Данный вирус может быть в 2-х формах: тесно вязанным с клеткой и свободным от интеграции с какими-то клеточными структурами. В организме инфицированной птицы вирус размножается и созревает только в эпителиальных клетках перьевых фолликул, где инфекционные вирионы связаны с большим количеством цитоплазменных клеточных включений. Эти включения, вероятно, связаны с синтезом бесклеточного инфекционного вируса. В то же время было замечено, что вирус можно выделять из зараженных культур клеток, используя специальные методики их обработки (ультразвук, хелаты, бикарбонат-диамин - тетраацетат).

Аттенуированные шт. ВБМ, а также природноослабленные вакцинные шт. ВГИ не созревают в эпителии перьевых фоликулов цыплят, и поэтому вакцинированная вирусом этих штаммов птица не передает возбудителя посредством контакта.

Предложен простой способ дифференцирования in vitro ГВИ и ВБМ с использованием клеток линии Т35 (из опухоли японской перепелки). ГВИ образует в этой культуре мелкие бляшки, отсутствующие при заражении ВБМ. В настоящее время клетки Т35 успешно применяют для избирательного выделения и накопления ГВИ. Установлено, что гены US1. US 10 (US2) не нужны для роста ВБМ в ФЭК. Делетированные гены не нужны для заражения цыплят (149). Проведен анализ распределения позитивных по АГ Iа - дентритных клеток, В-клеток и позитивных по ВБМ АГ клеток в лимфоидных органах и ХАО 13 дн КЭ, инфицированных ВБМ серотипа 1, ВБМ изолята В и 3-мя вакцинными штаммами (CVI 988, SB1, HVT - 1 - 2 и 3-го серотипов соответственно) (85а).

Репродуцируются в ядре, образуя там внутриядерные включения.

1.6 Устойчивость

Устойчивость клеточно-свободного вируса к физическим и химическим факторам характеризуется следующими данными. Центрифугирование при 50 тыс. мин»¹ осаждает вирус в течение 1 ч. В пределах рН 4-10 вирус чувствителен к эфиру. Многие месяцы он сохраняет вирулентность при -65°С, но при -20°С вирулентность его снижается через 4 мес хранения. В чешуйках кожи (перхоти) и размельченных сухих перьях больных птиц, хранившихся в условиях 28,5 - 41,5°С вирус, был активен в течение 55 дн. При контакте с этим вируссодержащим материалом у 40% здоровых цыплят уже через 8 нед. обнаруживались гистологические изменения, свойственные БМ. Следовательно, чешуйки кожи (перхоть) и сухие перья больных птиц могут быть источником инфекции в птицеводческих фермах. Schudel и др. (186) успешно заражали цыплят суспензией кожи кур, павших от БМ. Пыль, собранная в помещении, где содержались больные цыплята, сохраняла инфекционность в условиях комнатной температуры не менее 44 дн. Клеточно-свободный вирус, содержащийся в пыли курятника, патогенен для культуры клеток почек цыпленка и способен индуцировать опухоли в течение 1г. Клеточно-свободный, экстрагированный из пыли вирус остается патогенным при хранении в условиях -70°С, однако при -20°С 60% его инактивируется через 20 дн, а в условиях комнатной температуры - в течение 5 дн (99). Вирус выдерживает неоднократное замораживание, оттаивание и воздействие ультразвука в течение 10 мин. Полная термоинактивация клеточно-свободного вируса происходит при 4°С через 2 нед., при 20-25°С - через 4 дн, при 37°С - через 18 ч и при 60°С - за 10 мин. Птичий помет сохраняет инфекционность в течение 16 нед (198).

Хранение и консервирование вируса. Вирус сохраняется в клетках опухоли и культуры ткани при концентрации 50-106 кл./мл в контейнере, погруженном в жидкий азот. Кожу и эпителий перьевых фолликулов, содержащих клеточно-свободный вирус, сохраняют npv: температуре -20-60°С или лиофилизируют Кровь больных цыплят при хранении в условиях 4°С остается вирулентной в течение 7 дн. При лиофилизации вируссодержащей крови к патогенность падает. Надежное сохранение патогенных свойств вируссодержащей крови обеспечивается при добавлении к ней 5%-ного ДМСО в жидком азоте (-196°С).

2. Характеристика болезни, вызываемой вирусом

2.1 Определение (синонимы)

вирус птица заболевание марек

Болезнь Марека

Polinevritis intei stinalis chronica, Polinevritis gallinarum (лат.); Fowl or range paralisis, neural, okular, (grey or paerly eye) and vaskular lymphomatosis, Marek's leukosis, Marek's disease, Polynevritis, Neurolymphomatosis galinarum (англ.); Seuchenhafte Hirn Ruckenmark-Nervenentziindung der rluhner Infectiose, Anstecende oder Mareksche Huhnerlahme oder Huhnerlahmung, Herpesvirus-B-infektion des Huhnes (Marek) (нем.); La maladie de Marek classique et aigue (франц.); Enfermedad de Marek (исп.).

Болезнь Марека (БМ, нейролимфоматоз птиц, паралич птиц, энзоотический нейроэнцефаломиелит птиц) - высококонтагиозная вирусная болезнь кур и индеек, проявляющаяся в 2-х формах: классической (поражение периферической и центральной нервной системы) и острой (лимфоидный лейкоз).

2.2 Краткая историческая справка

Заболевание впервые описал в 1907 г. Ж. Марек, венгерский ветеринарный патолог, профессор Королевского Венгерского университета.

БМ известна очень давно, а истинный возбудитель ее - только с 1970 г. С открытием и описанием возбудителя БМ и герпеса индеек по иному представились пути передачи инфекции, иммунитет и перспективы специфической профилактики.

БМ получила свое название в 1961 г. в США на конференции Всемирной ветеринарной ассоциации птицеводства. До этого ее смешивали с лимфоидным лейкозом из-за сходства поражений в висцеральных органах. Чаще всего явные опухоли, состоящие почти исключительно из лимфоидных клеток, находили в печени и гонадах. В 1950 г., эта инфекция, еще точно не дифференцированная от лимфоидного лейкоза, сильно распространилась в США. Она наблюдалась у молодых птиц, проявляясь ярко выраженными висцеральными поражениями. В 1965 г. аналогичная болезнь появилась в Англии. До тех пор, пока не были предложены вакцины, фермеры не могли вести борьбу с болезнью, масштабы распространения которой все возрастали.

2.3 Эпизоотологические данные

Распространен повсеместно. Болеют куры, индейки, фазаны, утки, гуси, лебеди, канарейки, куропатки. Наиболее восприимчивы куры и особенно цыплята в первые 2 недели жизни. БМ распространена по всему миру, но, в основном, в районах промышленного птицеводства, хотя стада птицы поражаются ею в разной степени. Заболевание под названием «нейролимфоматоз птиц» впервые зарегистрировано в России в 30-40-е г. о чем сообщалось в работе А.В. Коронного (1941). Возникшую тяжелую ситуацию по БМ в США, Англии и Европе охарактеризовали как эпизоотию, В это время было предложено название «острая форма БМ» в противоположность форме с доминирующими нервными изменениями, которая затем была обозначена как «классическая форма БМ». Острую форму БМ в СССР впервые установили в 1970 г. (7). До применения средств специфической профилактики БМ наносила огромный экономический ущерб во всех странах мира.

Смертность колеблется от единичных случаев до 70-80%. При классической форме поражается небольшой процент стада (до 10), а при острой - 20-30% (51). Среди птиц, оставленных для воспроизводства, болезнь особенно распространена у птиц тяжелых пород (белые рокки) и приводит к летальному исходу в среднем в 23,7% случаев; были зарегистрированы случаи с летальностью, превышающей 50%. В естественных условиях от БМ среди бройлеров наблюдается небольшая смертность, так как их убивают в 2 мес возрасте. Смертность часто начинается в 8-не-возрасте у несушек, хотя пик ее обычно наступает к 5 мес (Рис. 99). При искусственном заражении суточных цыплят без материнских AT они могут погибнуть через 3 нед и даже через 10-17 дн после периода депрессии и остановки роста.

Главный источник болезни - больная птица Входные ворота - респираторные пути. Больная птица выделяет вирус через дыхательный и пищеварительный тракты, с шелушащимся эпителием перьевых фолликулов и перхотью (клеточно-свободный вирус). При остром течении болезни процент гибели птицы варьирует в широких пределах и иногда превышает 10-15%. При классическом заболевании поражается обычно 10-30% поголовья, а смертность, как правило, ниже. Вирус БМ среди цыплят распространяется путем прямого и косвенного контакта, а также по воздуху (51, 181). Заражение происходит путем вдыхания инфекционного материала (перья, перхоть и пыль помещения). Пыль и перо длительное время остаются инфицированными. При температуре 17. 22 и 4°С инфекционность вируса сохраняется по меньшей мере 10 мес (срок наблюдения). В условиях термостата (37°С) он выживает 5 мес (9). Кожные чешуйки и сухие перья сохраняют инфекционность 55 дн (188). В пыли птицеводческих помещений вирус в высушенном состоянии сохраняется до 1,5 лет (99). Инфекционны также подстилка и помет инфицированных цыплят. Обратная связь между содержанием влаги и инфекционностью подстилки (198) может указывать на то, что инфекционный материал переходит в аэрозоль и вызывает инфекцию, либо на большую устойчивость вируса в сухом состоянии. Обе гипотезы приемлемы, поскольку пыль птичников, которая содержит легко аэрозолирующие частицы и очень мало влаги, также является источником инфекции (46, 111). Экспериментальное применение выпадающих при линьке перьев или пыли путем ингаляции и трахеального введения вызывало заболевание птиц (63). Помимо подстилки и помета инфекционной оказалась пыль, собранная с вентиляционной системы, поверхности электрооборудования и подоконников. Начиная со 2 или 3-й нед после заражения, цыплята выделяют вирус во внешнюю среду. Десквамированные клетки кожи, и перхоть птичников оболочек пера, являясь основными компонентами пыли, служат основным средством передачи вируса (62,109,170).

Сохранение вируса в окружающей среде и его передача аэрогенным путем - причина высокой контагиозности заболевания. Цыплята в основном заражаются через респираторный путь. Описана овариальная передача, но есть сведения, отрицающие это. Наблюдалось, что большие группы коммерческих цыплят, выращенных в изоляторе, не заражаются. Это указывает, очевидно, на то, что передача через яйцо - редкий феномен (81). Таким образом, эпителий респираторного тракта - ворота для проникновения вируса. Наличие вирусспецифического ИФ АГ в эпителии легких подтверждает эту возможность. Передача инфекционного вируса по воздуху вызвана с 1-й нед жизни цыпленка-донора и продолжается в течение 3-х нед пребывания в контакте со здоровой птицей. Наибольшее число случаев респираторного заражения отмечено на 2-3-й нед жизни цыплят-доноров (81).

Птицы, выращенные в новых помещениях, часто тяжело заболевали. Это явление известно как «синдром нового помещения». Иногда результаты выращивания птиц были луч-ше при весьма негигиенических условиях: на старом помете или небольших количествах его. Это называлось «контролируемым воздействием». Обычно отход среди кур-несушек в период роста составлял 10-15%, иногда до 50%. Среди молодок, начинающих нестись, отход был небольшой, около 1% в мес, но к концу 18-мес, только половина птиц несла яйца.

Птицы-носители непатогенного (природноослабленного) ВБМ пожизненно остаются источником инфекции Интересно, что наличие патогенных шт. ВБМ возрастает с увеличе-нием возраста популяции птиц. Исход БМ зависит от вирулентности эпизоотического штамма, возраста зараженной птицы и её генетически обусловленной резистентности.

В последние годы было обнаружено изменение в распространении БМ, Происходит определенная эволюция этой болезни: с 1968 г. процент стад с зарегистрированным заболеванием был стабильным - от 5,8 до 8,0% в разные годы. Хотя заболевание распространено и в некоторых хозяйствах носило эндемический характер, наблюдается заметное снижение ле-тальности и потерь. У бройлеров БМ диагностируется редко. У ремонтного поголовья средний процент летальности от этой болезни в инфицированных стадах достигает 3-6 и только з некоторых случаях наблюдались потери до 20-25 (8).

Поскольку вирус содержится в пыли помещений где содержится больная птица, этот материал долго остается инфекционным: перхоть - 4 нед, пыль - 6 и подстилка - до 16 нед. Вирус также может передаваться жуком-чернотелкой Alphiobrus diaperinus, имаго и личинки которого обнаружены не только в соломенной подстилке помещений бройлеров, но и в подложной клетчатке больной птицы (88). Свободно летающие дикие птицы - возможные переносчики вируса. Из суспензии органов (печень, почки, селезенка) 164-х исследованных птиц, относящихся к 12 видам, вирус выделен у 4: от 3-х ворон обыкновенных и 1-го скворца рода майна. При внутрибрюшинной инокуляции суточным цыплятам суспензии из напившихся кровью комаров через 4 нед обнаружили БМ у (9 из 14 и у 1 из 16) (55).

Что касается вертикальной передачи БМ, то есть сведения, что цыплята, полученные из яиц неблагополучных хозяйств и выращенные в изоляции, не заболевали (101). При заражении у них появились антитела и многие цыплята погибали. Эти результаты свидетельствуют об отсутствии передачи с яйцом от матери потомству.

Спектр патогенности вируса в естественных условиях. В естественных условиях БМ диагностирована у кур, индеек, перепелов, фазанов, уток, лебедей и куропаток. Вирус изолирован от птиц 10 видов, относящихся к роду Callus. Установлена также и чувствительность японских перепелов (117, 104). Однако данных о распространении инфекции у этого вида и о том, каково эпизоотологическое значение этого естественного резервуара вируса нет. Вылупившиеся японские перепела (Coturnix coturnix Japonica) устойчивы к вирулентному ВБМ (64). Изменения, сходные с поражениями при БМ, отмечены у фазанов (98, 110), уток (82), сов (97), перепелов (167), лебедей (54), куропаток (108), но этиологическая специфичность этих изменений осталась не установленной. Вирус выявлен в тканевых гемогенатах от 3 ворон и 1 скворца (176). К видам, устойчивым к лабораторному заражению ВБМ, относятся воробьи (117), голуби (149) и различные млекопитающие (64, 75), однако у уток имеются AT к вирусу. (45). Не выявлены ПА к ВБМ у цесарок, уток и городских голубей (28). Только куры являются основным, хотя и не единственным, резервуаром инфекции.

Опубликованы интересные экспериментальные данные о проявлении феномена клеточной связанности степени патогенности шт. ВБМ, вида ткани в зависимости от метода заражения и сроков исследования птицы после её инфицирования. Изучали сравнительный патогенез БМ у цыплят, экспериментально зараженных высокопатогенным шт. HPRS-16, атте-нуированным YHRS-16 и природноослабленным (апатогенным) HPRS-26 (156) Было установлено в мозге, нервных сплетениях, легких, печени, почках, гонадах, тимусе, селезенке, бурсе, коже, эпителии перьевых фолликулов, что пик накопления клеточно-ассоциированного вируса приходился на первые 2 нед после заражения. Наибольшая концентрация всех 3-х штаммов ВБМ обнаружена в легких, селезенке, печени. Первоначально клеточно-ассоциированный вирус выделяли через 1 дн после заражения в селезенке (патогенный шт. НРР-16), через 4 дня - в легких, тимусе, селезенке, печени (аттенуированный шт. НРР-16) В наиболее высокой концентрации обнаруживался патогенный шт. НРР-16, тогда как для аналогичного аттенуированного она была самой низкой. Интересно, что перьевые фолликулы и бурса становились позитивными в отношении ВБМ только после того, как последний был выявлен в легких, селезенке и тимусе (62). В отличие от этих результатов выявлена наибольшая концентрация клеточно-связанного вируса в эпителии перьевых фолликулов у птиц, инфицированных контактно или внутри брюшин но. Изучены сроки созревания в перьевых фолликулах патогенного (Jd-1) и апатогенного (HN) штаммов ВБМ при двойной инфекции цыплят. Оба штамма одновременно вводили 2-нед цыплятам (породы белый леггорн C-WH и высокочувствительной к данному вирусу линии WSU-VS) подкожно и путем контакта. В результате подкожного заражения оба штамма были обнаружены через 2, 4, 6 нед в крови всех кур линии WSU-VS и 50% кур линии C-WH Через 2 нед после заражения оба вируса были обнаружены в перьевых фолликулах птиц обеих линий. Куры могут не только одновременно инфицироваться двумя вирусами различной степени патогенности, но иметь виремию в сроки, зависящие от генетической чувствительности их к ВБМ.