Исследование иммунной системы животных

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ

План

1. Нозология, семиотика и классификация болезней иммунной системы

2. Иммунодефицита, аутоиммунные и аллергические заболевания

3. Методы исследования органов, элементов и сред системы иммунитета.

4. Общий иммунный анализ крови у животных.

1. Нозология, семиотика и классификация болезней иммунной системы

Иммунной системе принадлежит основная роль в формировании общих адаптационных механизмов и поддержании гомеостаза (постоянства) организма животных. Иммунитет представляет собой совокупность реакций организма, направленных на защиту не только от инфекционных агентов, но и от различных чужеродных веществ, попавших извне или образовавшихся в организме. Защитные реакции сопровождаются появлением специфических иммунокомпе- тентных клеток и антител, осуществляющих удаление из организма всего чужеродного, в т.ч. и генетически изменившихся клеток

Иммунная система представляет собой совокупность органов, элементов и сред, которые обеспечивают гомеостаз. К ней относятся костный мозг, тимус, лимфоузлы, селезенка, миндалины, пейеровы бляшки, солитарные фолликулы и лимфоидные образования в различных тканях, фабрициева сумка у птиц. Систему составляют также часть лимфоцитов и макрофагов крови и лимфы. Резистентность организма обеспечивается также гранулоцитами, системой комплемента и тромбоцитами. Иммунная система является регуляторной, функционально связанной с нервной, эндокринной системами и поэтому наряду с защитными осуществляет восстановительные процессы.

Нозология - учение о болезни и классификации болезней.

Семиотика - учение о симптомах и лабораторных показателях болезни.

Классификация болезней - это их классификация по определенному принципу. Классификация может быть видовой, возрастной, этиологической, патогенетической, системной, органной и т.д. В 18-19 вв. классификация болезней была симптоматической. Во второй половине 19 в. в медицине введены нозологические единицы, в которых стали выделять и нозологические формы.

Нозологическая единица - это более или менее очерченная болезненная форма, характеризующаяся определенными особенностями этиологии, клинической и патологоанатомической картиной. Болезнь может протекать по- разному и принимать различные формы, которые назвали нозологическими формами и которые зависят от индивидуальной резистентности организма, условий внешней среды и др. факторов.

Номенклатура болезней животных - это общепризнанный перечень названий, терминов, употребляемых в ветеринарной медицине (вопрос в нашей науке довольно запущенный и запутанный).

Что касается нозологии, семиотики, классификации и номенклатуры болезней иммунной системы у животных, то этот вопрос в ветеринарной медицине более-менее оформлен. Примечательно, что родоначальниками этого выступали и выступают сотрудники ВГАВМ (Жаков, Прудников - иммуноморфоло- гия, Карпуть - иммунопатология и иммунитет при внутренних болезнях, Ятусе- вич - иммунитет при инвазионных болезнях, Конопелько, Могиленко, Абрамов, Севрюк, - иммунитет при незаразных болезнях, Веремей - при хирургической патологии, Кузьмич - при акушерско-гинекологической патологии и целый ряд др. сотрудников).

Процесс нозологического оформления болезней иммунной системы у животных имеет ряд трудностей, связанных, главным образом, со сложной их этиологией, патогенезом и диагностикой. Общепризнанная классификация болезней иммунной системы до настоящего времени еще не создана, но попытки предпринимаются, в частности через оформление синдромов и внедрение син- дромного принципа диагностики патологии иммунной системы.

Такой путь уже апробирован в медицине с известным всем синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД). Несколько лет назад медики попытались уйти от синдрома и была предложена нозологическая единица - ВИЧ- инфекция, однако попытка оказалась неудачной, поскольку в мире известно несколько человек, инфицированных вирусом (вирусоносительство) и не заболевших в течение уже около 20 лет.

Поскольку иммунная система животных является наиболее динамичной, то она, естественно, постоянно меняются с возрастом, подвержена сезонным колебаниям, резко изменяется под влиянием различных факторов окружающей среды. В ветеринарной медицине выделяют следующие патологические состояния иммунной системы, или их можно объединить под термином "иммунопатология":

1. Иммунные дефициты (иммунодефицита).

2. Аутоиммунные болезни.

3. Аллергические заболевания.

4. Болезни иммунных комплексов.

5. Лимфопролиферативные заболевания.

семиотика нозология иммунодефицит

2. Иммунодефициты, аутоиммунные и аллергические заболевания

Иммунодефицита являются результатом дефекта того или иного звена иммунной системы. По происхождению иммунодефициты бывают врожденными (первичными), возрастными (физиологическими) и приобретенными (вторичными) [И.М.Карпуть, 1993]. У сельскохозяйственных животных наиболее часто встречаются возрастные и приобретенные иммунодефицита. Вопрос о врожденных специфических иммунодефицитах в ветеринарной медицине еще не нашли достаточного отражения, поскольку выявление их представляет довольно таки большие затруднения да и встречаются они редко (описано 15 первичных иммунодефицитов у разных видов животных). Рассмотрим некоторые из них:

Комбинированный иммунодефициту арабских жеребят (характеризуется полным отсутствием зрелых Т- и В-лимфоцитов, наследуется по аутосом- но-рецессивному типу. Около 26% взрослых арабских лошадей несут ген КИД. В результате до 3% жеребят погибает до 5-месячного возраста, у них отмечается гипоплазия тимуса, атрофия лимфоидных органов и тканей, лимфопения, ги- поглобулинемия).

Сцепленный с Х-хромосомой комбинированный иммунодефицит у собак (встречается у собак, в частности породы Бассет-хаунд. ИД также характеризуется нарушением созревания и дифференциации Т- и В-лимфоцитов. У собак при этом в возрасте от 3 до 6 мес. периодически отмечаются инфекционные заболевания, атрофируется тимус, лимфоидные органы, в крови отмечается гипоглобулинемия за счет IgIg G и М).

Летальный признак А-46 черно-пестрого датского скота и голшти- нов (у животных с 4-8-недельного возраста уменьшается количество, вплоть до отсутствия Т-лимфоцитов, а число В-лимфоцитов и уровень иммуноглобулинов остается в норме. Телята погибают до 4-месячного возраста. Клинически болезнь проявляется дерматитом, а при вскрытии устанавливают гипоплазию тимуса, т-зависимых зон лимфоузлов, селезенки, пейеровых бляшек)

Летальный акродерматит и гипоплазия тимуса у собак (у собак породы Бультерьер отсутствуют Т-лимфоциты).

Болезнь Чедиак-Хигаши (болеют крупный рогатый скот, персидские кошки, норки, лисицы, киты. У них наблюдается дефект, главным образом, со стороны нейтрофилов. При этом их количество обычно в норме, однако гранулы в цитоплазме значительно увеличены и нейтрофилы не способны выполнять свою основную функцию - фагоцитировать чужеродные вещества. Естественно у животных часто регистрируются бактериальные инфекции, от которых они в конце концов и погибают).

Как видите, из приведенных примеров врожденные иммунодефицита имеют наследственную природу и они довольно индивидуальны.

Возрастные иммунодефицита или иммунная недостаточность у животных возникает, нарастает и затухает в растущем организме на определенных этапах его развития. Ее сроки, периоды и их продолжительность достоверно определены и изучены у всех основных видов домашних млекопитающих и птиц. Первый период иммунной недостаточности (рис.) называется синдромом неонатального иммунодефицита (СНИД), который развивается на 1-3 сутки жизни. СНИД 1 наблюдается у новорожденных животных до приема молозива, а СНИД 2 - на 2-3 сутки после истощения колострального иммунитета.

В первые два месяца жизни у телят и поросят отмечены, как правило, два или три периода иммунной недостаточности. Это первый синдром возрастного иммунодефицита (СВИД I), который развивается у телят на 10-12, ау поросят - на 20-22 дни жизни. И второй возрастной иммунодефицит (СВИД II), который возникает у телят в возрасте 20-25 дней, а у поросят - на 30-35 дни. Следует отметить, что возрастная иммунная недостаточность в значительной мере зависит от технологии получения и выращивания молодняка и, следовательно, сроки возникновения иммунодефицитов могут несколько изменяться.

Старческий иммунодефицит (СИД) - его разработка пока что в ветеринарной медицине не проводится, но вопрос актулен, особенно для собак, кошек и других домашних животных. Основной причиной СИД у старых животных является износ лимфоидной системы и недостаточным образованием Т- лимфоцитов.

Приобретенные (вторичные) иммунные дефициты развиваются у животных в результате воздействия очень многих факторов, основными из которых являются:

- неполноценное кормление;

- тяжелое переболевание животных незаразными, инфекционными и инвазионными болезнями;

- радиоактивное облучение;

- длительное воздействие лекарственных веществ (иммунодепресантов, антибиотиков, сульфаниламидов, нитрофуранов идр.;

- обширные хирургические травмы и т.д.

Иммунная недостаточность усугубляет болезнь, а ее проявления включаются в картину основного заболевания и его осложнений. Диагностика вторичных дефицитов с учетом того, что они являются причиной возникновения многих болезней, затруднена.

Аутоиммунные заболевания - это группа нозологических форм воспалительных заболеваний органов, объединенных наличием иммунного этиологического фактора. Чаще встречаются вторичные аутоиммунные заболевания, связанные с изменением собственных антигенов под воздействием токсинов, лекарственных средств, микроорганизмов и ряда других факторов. Развитие аутоиммунной патологии возможно только при нарушении физиологической изоляции аутоантигенов, к которым отсутствует иммунная толерантность. Диагноз при этих заболеваниях устанавливают на основании выявления этиологического фактора. В ветеринарии описан целый ряд заболеваний - аутоиммунные гепатит, гастрит, тиреоидит и др.

Аллергические заболевания - это группа болезней, вызываемых аллергенами и проявляющиеся гиперчувствительностью немедленного типа (через 20-30 мин.) или гиперчувствительностью замедленного типа (через 16-48 часов). Для ветеринарии наибольшее значение имеют кормовая и лекарственная аллергии. Кормовой аллергии наиболее подвержен молодняк, в частности поросята, в результате резкой смены кормов.

При этом у них поражается желудочно-кишечный тракт, сосуды, кожа. Диагноз на кормовую аллергию устанавливают посредством сбора анамнеза, по результатам клинического и лабораторного исследований.

При исследовании крови выявляют, как правило, эози- нофилию и повышенное содержание в сыворотке иммуноглобулинов Е. Надежным методом диагностики является постановка внутрикожной аллергической пробы.

семиотика нозология иммунодефицит

3. Методы исследования органов, элементов и сред системы иммунитета

Для оценки функциональной полноценности иммунной системы и диагностики ее нарушений необходимо применять клинические, патологоанато- мические и лабораторные методы исследования, при этом последние являются ведущими.

Для выявления патологии со стороны иммунной системы обязательно и тщательно собирают анамнез, анализируют условия содержания, ухода и кормления животных. Для всех иммунодефицитов характерными являются частые рецидивирующие инфекции, которые проявляются расстройством функции органов пищеварения и дыхания, нарушается обмен веществ.

Характерным признаком аутоиммунных заболеваний является волнообразное течение болезни. У новорожденных животных патология развивается после приема неполноценного молозива, содержащего аутоантитела и сенсибилизированные лимфоциты.

Поскольку основной причиной кормовой аллергии у животных является резкая смена кормов, то при этом обязательно анализируется рацион и схема кормления. При подозрении на лекарственную аллергию собираются сведения о применении животным препаратов (когда и что вводили, в какой дозе, по какой схеме идр.).

При клиническом исследовании придерживаются общепринятого плана. При этом важно тщательно провести общее исследование, особенно оценить состояние слизистых оболочек, кожи, подкожной клетчатки, лимфатических узлов. Связано это с тем, что при иммунодефицитах отмечается часто уменьшение (недоразвитие) лимфоузлов, а при аллергии - поражения кожи и слизистых в виде отеков и сыпей. Следует также отметить, что чаще всего патология иммунной системы проявляется расстройствами со стороны органов пищеварения.

Патологоанатомическая диагностика болезней иммунной системы. При иммунодефиците отмечают отсутствие или недоразвитие тимуса, костного мозга, лимфатических узлов и селезенки. Трупы животных как правило истощены (недоразвиты). Морфологические изменения аутоиммунных заболеваний ха- растеризуются воспалительными и дистрофическими поражениями органов и тканей. Для аллергии немедленного типа характерна морфология острого иммунного воспаления с преобладанием экссудативных и альтеративных процессов, сопровождающихся выпотеванием серозного, фибринозного и геморрагического экссудатов. Альтеративные изменения наблюдаются в стенках сосудов, строме и паренхиме органов. При аллергии замедленного типа выражено хроническое иммунное воспаление.

Лабораторные методы исследования при патологии иммунной системы являются ведущими. Общий иммунологический анализа крови включает:

1) подсчет общего числа лейкоцитов;

2) выведение лейкограммы и расчет абсолютного количества лимфоцитов;

3) определение относительного и абсолютного количества Т- и В-лимфоцитов;

4) определение фагоцитарной активности нейтрофилов;

5) определение концентрации в сыворотке крови суммарного количества иммуноглобулинов и их основных классов.

Эти тесты позволяют выявить обобщенные характеристики или "грубые" дефекты в клеточном и гуморальном иммунитете, в системе фагоцитоза.

4. Общий иммунный анализ крови у животных

Подсчет количества лейкоцитов производится в камере с сеткой Горяева. Относительное количество видов лейкоцитов определяется посредством микроскопии мазков крови, которые изготавливаются, фиксируются и окрашиваются по уже отработанной нами схеме. Дифференциация лейкоцитов проводится по морфологическим признакам, результат заносится в таблицу Егорова или фиксируется на клавишном счетчике.

Лейкограмма дает представление об относительном (в процентах) содержании различных видов лейкоцитов в крови, в т.ч. и лимфоцитов. Полученное процентное содержание лимфоцитов характеризуется как их относительная величина в популяции лейкоцитов крови. Зная общее количество лейкоцитов и относительное содержание лимфоцитов, вычисляется абсолютное число видов лейкоцитов, в т.ч. и лимфоцитов.

Определение относительного и абсолютного количества Т- и В- лимфоцитов крови. Т- и В-популяции лимфоцитов мало различимы при световой микроскопии. Вместе с тем эти клетки имеют отчетливые антигенные и функциональные различия. Т-лимфоциты обеспечивают клеточные реакции иммунитета, в частности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и реакции трансплантационного иммунитета. В-лимфоциты преимущественно отвечают за гуморальное звено иммунитета, они являются предшественниками антителпродуцирующих клеток.

Одним из методов определения числа Т- и В-лимфоцитов в крови является реакция розеткообразования. Суть феномена состоит в том, что при контакте Т-лимфоцитов с эритроцитами барана клетки формируют образования, напоминающие тутовую ягоду, которые принято называть розетками. В-лимфоциты также могут формировать розетки, но для этого нужны более сложные условия: эритроциты нагружаются комплексом аниген- антитело-комплемент.

Методика определения количества Т- и В-лимфоцитов включает следующие этапы:

- выделение лимфоцитов из периферической крови (отделение плазмы крови с лейкоцитами от эритроцитов, выделение лимфоцитов из крови на градиентах плотности центрифугированием, определение количества и жизнеспособности лимфоцитов);

- определение количества Т-лимфоцитов (приготовление эритроцитов барана, смешивание взвеси лимфоцитов и суспензии эритроцитов, приготовление, фиксация и окрашивание мазков, идентификация Т-лимфоцитов по образованию розеток (Е-РОК), расчет относительного и абсолютного количества клеток);

- определение количества В-лимфоцитов (приготовление эритроцитов барана, нагруженных комплексом анитело + комплемент, смешивание и инкубирование взвеси лимфоцитов и суспензии эритроцитов, приготовление, фиксация и окрашивание мазков, идентификация клеток по выявлению рецепторов к третьему компоненту комплемента (ЕАС-РОК), расчет количества В-лимфоцитов).

Определение фагоцитарной активности лейкоцитов (фагоцитарное число, фагоцитарный индекс).

Фагоцитарная активность лейкоцитов максимально выражена у нейтрофилов и, в меньшей мере, у моноцитов и зозинофилов. Фагоцитарная активность лейкоцитов зависит не только от функциональной активности клеточных элементов, но и от состояния внутренней среды организма. Интенсивность же фагоцитоза в значительной степени обусловлена активностью самих клеточных элементов.

Наибольшее распространение получила методика определения фагоцитарной активности клеток крови по Кост и Стенко. Принцип методики основан на том, что при контакте с чужеродными частицами гранулоциты и моноциты поглощают (фагоцитируют) и разрушают их внутриклеточными ферментами. Рассчитывают фагоцитарная активность, фагоцитарное число и фагоцитарный индекс (ФИ) нейтрофилов.

Определение иммуноглобулинов в сыворотке крови.

В ветеринарной лабораторной практике существует несколько методов определения иммуноглобулинов.

1. Количественное определение иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии в геле, содержащем моноспецифичную иммунную сыворотку (по Манчини). Суть методики: на стекляные пластины разливают раствор агара, содержащий моноспецифичную сыворотку, после застывания, в агаре делают лунки, в которые вносят исследуемую сыворотку крови животных. Затем пластины помещают во влажную камеру при 37оС и инкубируют в течение определенного времени. Далее замеряют диаметр образовавшихся колец преципитатов. В качестве стандарта используется сыворотка с известным количеством определенного иммуноглобулина.

2. Определение иммуноглобулинов методом дифференциального электрофореза в полиакриламидном геле (в модификации В.М.Холода, 1983). Принцип метода: разделяют белки в зависимости от заряда белковой мицеллы и размера молекулы.

3. Определение иммуноглобулинов в сыворотке крови путем осаждения цинком сульфатом или натрия сульфитом. Принцип метода основан на том, что при добавлении цинка сульфата или натрия сульфита происходит осаждение из сыворотки иммуноглобулинов. Образующееся при этом помутнение, интенсивность которого зависит от концентрации иммуноглобулинов, можно оценить с помощью колориметра или нефелометра. Методы эти простые, но недостаточно специфичные.

При некоторых патологических расстройствах наблюдаются значительные отклонения уровней иммуноглобулинов в крови. Концентрация Ig G возрастает во время инфекционных заболеваний, при некоторых болезнях печени и аутоиммунных растройствах. Уровень этих иммуноглобулинов снижается при гипо- и агаммаглобулинемиях, задержке развития и некоторых опухолях лим- фоидной системы.

Концентрация Ig M повышается при инфекционных заболеваниях, поражающих систему крови, при острых гепатитах и первичном билиарном циррозе. Снижается - при гипо- и агаммаглобулинемиях, некоторых опухолях лимфоидной системы.

Уровень сывороточного Ig A возрастает при заболеваниях дыхательных путей и кишечного тракта, при перитониальных инфекциях. Снижается - при гипо- и агаммаглобулинемиях, некоторых опухолях лимфоидной системы.

Размещено на Allbest.ru