Гельминтозоонозы: эхинококкоз и дирофиляриоз (биоморфологические особенности возбудителей, совершенствование мер борьбы)

Результаты производственных испытаний показали, что таблетки гидробунида, испытанные при 4_кратном применении (ежеквартально), были эффективными на 97% (у 4 собак при диагностической дегельминтизации ареколином выявили неполовозрелые T. hydatigena), а при 8_кратном применении показали 100%-ную эффективность.

Химиопрофилактическая эффективность азинпрола в производственных условиях

В 1991 году нами разработаны технические условия на производство опытной партии лекарственной формы азинокса пролонгированного действия - азинпрола - ТУ 10.07.78-91 и временное наставление по его применению при цестодозах собак №044-3 от 24.01.1991 г.

Азинпрол - лекарственная форма азинокса (празиквантела) пролонгированного действия, представляющая собой стерильную двухкомпонентную систему, состоящую из 10%-ной суспензии действующего вещества в силиконовом каучуке (компонент №1) и отвердителя - вулканизатора (компонент №2). Азинокс длительно выделяется из азинпрола, оказывая при этом лечебно-профилактическое действие против преимагинальных и имагинальных форм цестод.

Нами было наработано в лабораторных условиях 500 доз азинпрола и в 1991-1992 гг. проведены широкие производственные испытания препарата на приотарных собаках в неблагополучных по ларвальным цестодозам зонах: Кызылординской и Западно-Казахстанской областях. Испытания провели на 186 приотарных собаках в совхозах «Первомайский», «50 лет СССР» и имени Амангельды Сырдарьинского района, Кызылординской области и совхозе «Косубинский» Джамбейтинского района, Западно-Казахстанской области с кратностью применения 2 раза в год (через 6 месяцев). Азинпрол вводили подкожно с соблюдением правил асептики. Компоненты в соотношении 25:1 (компонент №1: компонент №2) непосредственно перед введением смешивали в шприце и инъецировали в залопаточную область в объеме 0,26 мл/кг (компонент №1 - 0,25 мл, компонент №2 - 0,01 мл) или 25 мг ДВ/кг (пятикратная терапевтическая доза по празиквантелу). Первую обработку приотарных собак азинпролом провели в марте перед перегоном овец на летние пастбища до стрижки и купки. Весеннюю обработку собак азинпролом провели в сочетании с антирабической вакцинацией собак. Вторую профилактическую обработку собак азинпролом провели осенью перед отбивкой ягнят до осенней стрижки и купки овец. Контрольно - диагностическую обработку собак проводили 2 раза в год 1%-ным раствором ареколина.

Таким образом, азинпрол, испытанный в производственных условиях на 186 приотарных собаках с кратностью применения 2 раза в год (интервал между обработками 6 месяцев), показал профилактическую эффективность против цестод на 99,5%. У 1 собаки (совхоз «Косубинский) при контрольно-диагностической дегельминтизации ареколином обнаружили 2 экз. неполовозрелых T. hydatigena.

Испытание эффективности новых комбинированных лекарственных форм препаратов при гельминтозах собак

Разработка и изучение эффективности азинила

Азинил - комбинированный антгельминтик (азинокс + нилверм) широкого спектра действия, представляющий собой сложный порошок на основе 1% действующего вещества азинокса (празиквантела), 3% действующего вещества нилверма (тетрамизола гидрохлорида) и корригирующих добавок в виде сухого молока и пивных дрожжей. Азинил применяется для лечения и профилактики нематодозов и цестодозов желудочно-кишечного тракта собак и кошек. Композиция препарата позволяет наиболее рационально дозировать азинокс и дополнительно снижает токсические свойства нилверма. Препарат хорошо переносится животными и выпускается в форме порошка по 0,25 г., рассчитанного на 10 кг массы животного, применяется двукратно (с интервалом 24 часа) с кормом (мясо, фарш, сухой или влажный корм для собак и кошек).

Токсикологические свойства

Параметры острой токсичности азинила определяли на белых мышах методом пробит-анализа, предложенного Литчфилдом и Уилкоксоном в модификации З. Рота, с определением показателей: ЛД_0, ЛД_16, ЛД_50, ЛД₈₄, ЛД₁₀₀ (Беленький М.Л., 1963). ЛД₀ - максимально переносимая доза, не вызывающая падеж животных, ЛД₅₀ вызывает смерть 50% подопытных животных и ЛД₁₀₀ - абсолютно смертельная доза, вызывающая смерть всех подопытных животных. ЛД₁₆ и ЛД₈₄ необходимы для вычисления доверительных границ или предела возможного колебания дозы, соответствующей ЛД₅₀. В опыте использовали 60 белых беспородных мышей массой 18 - 22 г. Азинил вводили мышам в виде водной суспензии однократно, перорально с помощью желудочного зонда в дозах 50 - 350 мг/кг. Дозу препарата определяли эмпирически. Проводили наблюдение за животными в течение 5 суток, учитывая их общее состояние, прием корма и воды, состояние шерстного покрова, подвижность и чувствительность к внешним раздражителям. Установлены следующие параметры острой токсичности азинила в мг/кг ЛД₀ = 100, ЛД₁₆ = 180, ЛД₅₀ = 237,5 (200,5 - 274,5), ЛД₈₄ = 280 и ЛД₁₀₀ = 310.

В картине острого отравления азинилом превалировали нейротоксические эффекты: нарушение координации движения, парезы задних конечностей, слабые судороги и глубокое угнетение общего состояния до полной прострации с адинамией животных. Во многих случаях отмечалась сильная саливация и диурез. Такое состояние длилось от нескольких часов до 2 - 3 суток. По классификации химических веществ по степени токсичности, предложенной И.В. Саноцким, И.П. Улановой (1975), азинил относится к классу умеренно токсических веществ.

Переносимость азинила собаками и кошками

Исследования на переносимость азинила были проведены на собаках и кошках в возрасте 3-4 месяцев. Животным вводили препарат внутрь принудительно однократно в терапевтической дозе, а также в дозах, превышающих терапевтическую в 3, 4, 5 и 6 раз. В течение 10 суток наблюдали за общим клиническим состоянием животных, за координацией движения, сохранностью аппетита, мочеиспусканием и актом дефекации. Препарат хорошо переносился животными, не вызывая видимых клинических отклонений в 4 - 5_кратных терапевтических дозах. Более высокие дозы вызывали усиленную саливацию, рвоту и частое мочеиспускание у животных.

Антигельминтная эффективность азинила

Опыты по изучению антигельминтной эффективности азинила провели в 1993-1994 гг. на 11 щенках в возрасте 3 - 4 мес., спонтанно инвазированных T. canis, 13 беспородных собаках в возрасте 1 - 2 года, спонтанно инвазированных T. leonina, U. stenocephala и D. caninum и 11 кошках в возрасте от 6 месяцев до 5 лет, спонтанно инвазированных T. mystax и D. caninum. В опыты включали животных, инвазированность которых подтверждали копроовоскопией методом флотации (модификация Калантарян). В первом опыте щенков дополнительно экспериментально заразили цестодами: по 5 экз. C. tenuicollis и по 20000±500 экз. протосколексов E. granulosus. Препарат задавали на 28_е сутки после заражения в дозе 10 мг/кг по ДВ (7,5 мг/кг тетрамизола гидрохлорида + 2,5 мг/кг празиквантела), двукратно, с интервалом 24 часа. Учет результатов проводили на 7_е сутки после дачи препарата при неполном гельминтологическом вскрытии тонкого кишечника собак.

В первом опыте эффективность азинила в дозе 10 мг/кг по ДВ, двукратно с интервалом 24 часа при спонтанном токсокарозе и экспериментальном тениозе гидатигенном и эхинококкозе собак в возрасте 3 - 4 мес. составила 100%. При вскрытии тонкого кишечника контрольных животных обнаружили 4 - 8 экз. нематод T. canis, 3 - 5 экз. цестод T. hydatigena и 850 - 9050 экз. E. granulosus.

Эффективность азинила в той же дозе при спонтанном токсаскариозе, унцинариозе и дипилидиозе собак в возрасте 1 - 2 года во втором опыте также составила 100%. У контрольных собак при вскрытии обнаружили 4 - 8 экз. нематод T. leonina, 27 - 40 экз. U. stenocephala и 1 - 4 экз. цестод D. caninum.

В третьем опыте на кошках, спонтанно инвазированных токсокарами и дипилидиями, также получена 100%-ная эффективность азинила. У кошек контрольной группы при вскрытии в тонком кишечнике обнаружили 3 - 8 экз. нематод T. mystax и 2 - 3 экз. цестод D. caninum.

В 1994 году нами было наработано в лабораторных условиях 2000 доз азинила. Препарат был предложен в ветеринарную практику для проверки его эффективности при гельминтозах домашних собак и кошек. В ветклиниках г. Москвы была оценена эффективность азинила на 1120 собаках и 370 кошках. Экстенсэффективность препарата у собак составила 97,9 - 99,7%, у кошек - 98,0 - 98,6%. Переносимость препарата была хорошая, жалоб от владельцев животных не поступало. Материалы НТД на азинил рассмотрены на Ученом совете ВИГИС (выписка из протокола №4 от 28 января 1996 г.) и было предложено подготовить документацию для регистрации препарата в Департаменте ветеринарии МСХиП РФ. В 1997 году нами разработаны Технические условия на опытную партию азинила - ТУ оп 93-84-00008064-97 и временное наставление по его применению №13-4-2/1085 от 18. 11. 97 г. при гельминтозах собак и кошек. Выпуск препарата азинила в порошках массой 0,25 г. освоен в Подольском отделе ВИГИС.

Оценка антигельминтной эффективности зарубежных комбинированных антгельминтиков при гельминтозах собак

Совет по ветеринарным препаратам (ВЕТФАРМСОВЕТ) Департамента ветеринарии Минсельхозпрода РФ рекомендовал ВИГИС провести испытания на эффективность при гельминтозах собак ряд комплексных зарубежных препаратов с целью их регистрации и разрешения для применения в нашей стране. Нами проведена оценка эффективности следующих зарубежных препаратов: прател («ЛЕК», Словения), азипирин («Фармация-АД», Болгария) и дронтал джуниор («Байер», Германия).

Оценка антигельминтной эффективности пратела при смешанных гельминтозах собак

Прател - комбинированная лекарственная форма в виде таблеток с содержанием празиквантела (50 мг/таблетку) и пирантела эмбоната (144 мг/таблетку). По данным фирмы «ЛЕК» препарат предназначен для лечения гельминтозов собак и кошек, вызываемых круглыми и ленточными гельминтами, и активен против следующих видов: T. canis, T. cati, T. leonina, U. stenocephala, A. caninum, A. tubaeforme, E. granulosus, E. multilocularis, D. caninum, Taenia spp., Mesocestoides spp.

Испытания пратела провели в марте 1998 г. на базе кинологического центра «Красная звезда» на 20 взрослых собаках служебных пород, спонтанно инвазированных токсокарами, токсаскарисами, унцинариями, дипилидиями и тениями. Степень инвазированности собак была средней (до 500 яиц гельминтов в 1 г фекалий). Таблетки прател в дозе 5 мг/кг по празиквантелу и 14,4 мг/кг по пирантела эмбонату задавали однократно перед утренним кормлением с небольшим количеством корма. Все собаки подопытной группы были свободны от гельминтов. Симптомов непереносимости, в том числе, в связи с возрастом, полом и породой животных не наблюдали. Прием препарата не вызывал изменений общего состояния, поведения, отклонений физиологических показателей собак.

Оценка антигельминтной эффективности азипирина при смешанных гельминтозах собак

Препарат азипирин представляет собой комбинированную лекарственную форму в виде таблеток с содержанием празиквантела (50 мг/таблетку) и пирантела памоата (150 мг/таблетку). По данным фирмы «Фармация-АД», препарат предназначен для лечения гельминтозов собак и кошек, вызванных круглыми и плоскими гельминтами, и эффективен против следующих видов: T. canis, T. cati, T. leonina, E. granulosus, M. multiceps, D. caninum, Taenia spp., O. felineus.

Испытания азипирина провели на базе кинологического центра «Красная звезда» на 20 взрослых собаках служебных пород, спонтанно инвазированных нематодами T. canis, T. leonina, U. stenocephala и цестодами D. caninum и Taenia spp. Степень инвазированности животных была средней (до 500 яиц гельминтов в 1 г фекалий). Азипирин в дозе 5 мг/кг по пирантелу и 15 мг/кг по пирантела памоату задавали однократно в утреннее кормление с небольшим количеством корма. Специальных диет не назначали.

Эффективность препарата проверяли на 10_е сутки после лечения путем исследования проб фекалий флотационным методом (модификация Калантарян). Все собаки подопытной группы оказались свободными от гельминтов. Побочных эффектов действия препарата не отмечено.

Оценка антигельминтной эффективности препарата дронтал джуниор при нематодозах собак

Дронтал джуниор - комбинированный антгельминтик в виде суспензии, 1 мл которой содержит в качестве действующих веществ 15,0 мг фебантела и 14,4 мг пирантела эмбоната, а в качестве консервантов - 2,05 мг натрия пропионата и 2,05 мг натрия бензоата. Препарат производится фирмой «Байер» (Германия) в пластмассовых флаконах емкостью 100 мл в комплекте со шприцем-дозатором объемом 5,0 мл для удобства дозировки антгельминтика.

Работу по испытанию эффективности препарата при нематодозах провели в июне 1998 года на базе кинологического центра «Красная звезда» на 20 взрослых собаках служебных пород и 20 щенках в возрасте 2 - 4 мес.

По результатам копроскопических исследований по принципу аналогов сформировали 4 группы по 10 животных в каждой: две опытных и две контрольных. Собак опытных групп обработали препаратом дронтал джуниор из расчета 1 мл суспензии на 1 кг массы тела животного, однократно, перорально. Как взрослые собаки, так и щенки, хорошо переносили препарат, побочных эффектов не отмечалось.

Таким образом, дронтал джуниор в дозе 15 мг/кг по фебантелу и 14,4 мг/кг по пирантелу эмбонату м.т. животного при однократном пероральном применении показал 100%-ную эффективность при нематодозах пищеварительного тракта у взрослых собак и щенков со слабой и средней степенью инвазии. При сильной степени инвазии (более 500 яиц гельминтов в 1 г фекалий) мы рекомендуем повторную дачу препарата через сутки.

Дирофиляриоз собак

Материалы и методы

Работу по изучению эпизоотологии дирофиляриоза собак провели на базе клиники Центра экстренной ветеринарной помощи ООО «Гала-сервис» (г. Москва). Всего за 5 лет (2003-2007 гг.) провели исследование проб крови на наличие микрофилярий методом Ястреба (2004) от 3371 собаки из Москвы и Московской области. Породу, пол, возраст, хозяйственное назначение и тип содержания собаки определяли по родословной, паспорту и со слов владельца животного.

Размеры личинок изучали под световым микроскопом с помощью микрометрической линейки. Фиксированные этанолом микрофилярии красили по Романовскому-Гимзе, изучали их анатомическое строение и идентифицировали до вида по Schrey C.F., Trautvetter E. (1988).

Сравнительное изучение эффективности методов обнаружения микрофилярий в крови собак также провели на базе клиники Центра экстренной ветеринарной помощи ООО «Гала-сервис». Пробы крови объемом 2 - 3 мл от 918 собак из Москвы и Московской области брали из вены животных в дневное время. В качестве антикоагулянта использовали 5,0%-ный раствор цитрата натрия в соотношении 1:20. Кровь исследовали в день взятия пробы. Сравнивали следующие методы: 1) тонкого фиксированного мазка с окраской по Романовскому-Гимза; 2) толстой раздавленной капли; 3) обогащения Кнотта; 4) концентрации с дистиллированной водой.

Жизнеспособность микрофилярий D. immitis в цитратной крови собак при температуре +2єС изучали по их подвижности, неподвижных личинок считали погибшими. Пробы крови объёмом 10 мл брали из вены трех зараженных дирофиляриями собак с разной интенсивностью инвазии (60 лич./мл, 540 лич./мл, 2200 лич./мл) и хранили в холодильнике при +2є С. Ежедневно, в течение 8 дней отбирали по 1 мл крови, добавляли 9 мл дистиллированной воды, отстаивали 5 минут (для гемолиза эритроцитов) и центрифугировали в течение 5 минут при скорости 2000 об./мин. Надосадочную жидкость сливали, оставляя осадок объемом 1 мл. Порциями переносили осадок на предметное стекло, накрывали покровным стеклом и подсчитывали число живых и погибших личинок в 1 мл крови.

Морфологические и биохимические показатели крови изучали на 83 собаках из Москвы и Московской области, спонтанно инвазированных D. immitis и D. repens. Зараженность собак определяли методом концентрации проб крови с дистиллированной водой. Кровь для исследования у собак брали из вены сафена или подкожной вены предплечья в дневное время: для биохимических исследований в объеме 5 мл после 12_часовой голодной выдержки, для общеклинического исследования - в объеме 2 мл с антикоагулянтом (цитрат натрия 5,0%-ный. Общеклинический анализ крови проводили общепринятыми методами: клетки крови (эритроциты и лейкоциты) подсчитывали при помощи счетной камеры Горяева, концентрацию гемоглобина определяли гематиновым методом по Сали, СОЭ определяли микрометодом в капилляре Панченкова, для подсчета лейкоцитарной формулы мазки красили по Романовскому-Гимза и подсчитывали 200 клеток, а затем выводили процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов.

Биохимические показатели определяли на анализаторе «Cobas Mira (Roche)» и ионоанализаторе «EasyLyte Na/K».

Данные средних значений общеклинических показателей крови: по А.А.

Кудрявцеву и Л.А. Кудрявцевой (1976), биохимических - по Е.Н. Бурмистрову (2004).

Клинические признаки заболевания изучали на 139 собаках, зараженных дирофиляриями, методом визуальных наблюдений (клинический осмотр, термометрия, аускультация), лабораторных исследований проб крови и мочи, а также с помощью аппаратов по ультразвуковой диагностике (УЗИ), рентгенографии и электрокардиографии (ЭКГ).

Испытание микрофилярицидной и макрофилярицидной эффективности препаратов провели на 78 домашних собаках, спонтанно инвазированных дирофиляриями, на базе клиники Центра экстренной ветеринарной помощи. При формировании опытных групп учитывали пол, породу, возраст и массу собак, а также клинические признаки и степень инвазирования (по количеству микрофилярий в 1 мл крови). Работу по испытанию профилактической эффективности препаратов провели в очагах, неблагополучных по дирофиляриозу собак (поселок Внуково, г. Звенигород и приют для собак «Эко», г. Москва). В опытах по профилактике дирофиляриоза использовали 92 собаки от частных владельцев и 105 из приюта для собак «Эко» 16_ти пород (109 кобелей и 88 сук) в возрасте от 1 до 12 лет массой от 7 до 68 кг. Перед началом эксперимента от всех животных отобрали образцы венозной крови и исследовали на наличие микрофилярий по методу Ястреба. В опытах использовали только здоровых собак (без микрофилярий).

В качестве микрофилярицидного средства использовали абиктин в форме таблеток и инъекционного раствора. В опытах по изучению микрофилярицидной эффективности абиктина использовали 2 группы собак. Первой группе (26 собак) задавали абиктин в дозе 0,05 мг/кг из расчета 1 таблетка на 40 кг массы животного однократно, перорально. Животным второй подопытной группы (20 собак) вводили абиктин подкожно, однократно в дозе 0,05 мг/кг из расчета 0,1 мл на 20 кг массы тела. Для предотвращения анафилактического шока, спровоцированного гибелью микрофилярий, за час до введения абиктина животным обеих групп вводили антигистаминный препарат тавегил в дозе 0,05 мг/кг.

В качестве макрофилярицидного средства использовали меларсомина дигидрохлорид и таблетки абиктина. Меларсомина дигидрохлорид - органическое соединение мышьяка с молекулярной массой 501, хорошо растворимое в воде. Препарат выпускается в виде порошка, 50 мг которого растворяется в 2 мл стерильной воды для инъекций. После разведения раствор хранится в холодильнике не более 24 часов. Не допускается замораживание и смешивание с любым другим препаратом. Животных третьей подопытной группы (14 собак) лечили абиктином и меларсомином. Меларсомин вводили внутримышечно двукратно в дозе 2,5 мг/кг из расчета 0,1 мл/кг с интервалом 24 часа в область между 3 и 5 поясничными позвонками. Для предотвращения анафилактического шока вследствие гибели взрослых паразитов собакам вводили антигистаминный препарат тавегил в дозе 0,05 мг/кг 2 раза в день в течение 5 дней после начала лечения. Для предотвращения тромбоэмболии (уменьшения вязкости крови и ускорения лизиса паразитов) за 7 дней до и с 1 по 21_й после введения меларсомина собакам ежедневно давали аспирин в дозе 5,0 мг/кг. В качестве средств патогенетической и симптоматической терапии применяли иммуномодуляторы (риботан, ронколейкин), гепатопротекторы (карсил, эссенциале), аналептики (сульфокамфокаин), препараты, улучшающие микроциркуляцию крови (трентал), препараты, влияющие на метаболические процессы в сердечной мышце (рибоксин, кокарбоксилаза). Также проводили инфузионную терапию (различные солевые и коллоидные растворы) и применяли другие средства. Все препараты назначали по показаниям согласно инструкциям и наставлениям. Собакам обеспечивали покой и ограничение физических нагрузок в течение месяца.

Изучение макрофилярицидной эффективности таблеток абиктина провели на 2 группах собак (6 животных в каждой) с субклинической и средней тяжестью инвазии: четвертой группе животных задавали таблетки абиктина в дозе 0,05 мг/кг, а пятой - в дозе 0,1 мг/кг. Препарат применяли с кратностью 1 раз в месяц в течение года. Животные шестой группы (6 собак) препараты не получали, они служили в качестве зараженного контроля.

Ежедневно за животными вели клинические наблюдения. На 10, 30 и 60_е сутки после введения меларсомина проводили общеклинические и биохимические анализы мочи и крови. Микрофилярицидную эффективность абиктина оценивали на 7_е сутки после введения и далее ежемесячно в течение 12 месяцев по методу Ястреба. Макрофилярицидную эффективность меларсомина и абиктина оценивали по клиническому состоянию животных и биохимическим показателям крови через 6 и 12 месяцев после лечения.

Профилактическую эффективность таблеток абиктина, инсектоакарицидного препарата адвантикса и абиктина в сочетании с адвантиксом оценивали на 4 группах собак, в каждой из которых были опытные животные, подвергавшиеся обработкам, и контрольные (без обработок). В первой группе на 49 собаках (г. Звенигород) испытали профилактическое действие абиктина в таблетках в дозе 0,05 мг/кг по ДВ с кратностью применения 1 раз в 2 месяца в период лета комаров (с мая по октябрь 2005 года). Во второй группе на 28 собаках (приют «Эко») испытали профилактическое действие адвантикса с кратностью применения 1 раз в месяц в период лета комаров (с мая по октябрь 2005 года). Адвантикс - новый инсектоакарицидный препарат фирмы «Байер», представляющий комбинацию имидоклоприда - 100 мг/мл и перметрина - 500 мг/мл. Имидоклоприд - это хлорникотилиннитрогуанидин из класса нитрометиленов, а перметрин - синтетический пиретроид третьего поколения - эфир перметриновой кислоты. Препарат наносили накожно в области спины в объеме 0,1 мл/кг массы животного. В третьей группе на 23 собаках (п. Внуково) испытали действие абиктина в сочетании с адвантиксом в тех же дозах и с той же кратностью, что в 1_й и 2_й группах. В четвертой группе на 37 собаках (приют «Эко») испытали профилактическое действие абиктина в дозе 0,05 мг/кг с кратностью применения 1 раз месяц в период лёта комаров (с мая по октябрь 2005 года). В первой группе было 12, во второй и четвертой - 40 и в третьей - 8 контрольных животных, которые не подвергались обработкам. Учет эффективности профилактического действия препаратов проводили через 8 и 12 месяцев после последнего их применения путем исследования проб венозной крови на наличие микрофилярий по методу Ястреба.

Результаты исследований

Аспекты эпизоотологии дирофиляриоза собак в Московском регионе

Микрофилярии обнаружили у 136 (4,0%) собак с интенсивностью от 2 до 3650 личинок в 1 мл крови. Экстенсивность инвазии по годам составила 5,0%, 4,2%, 4,0%, 3,0% и 2,3% соответственно (табл. 4). По клиническим, морфологическим и анатомическим признакам микрофилярии у 114 собак идентифицировали как личинки Dirofilaria immitis, а у 22 - как D. repens. Размеры микрофилярий D. immitis составили 260-330 мкм в длину и 4-6 мкм в ширину, личинки D. repens были несколько крупнее: 272-368 мкм в длину и 6-7 мкм в ширину. При окраске фиксированных личинок по Романовскому-Гимзе у микрофилярий D. immitis четко выделялись неокрашенные экскреторная и анальная поры, а у микрофилярий D. repens была неокрашенной и четко выделялась только анальная пора.

Таблица 4. Динамика исследований и зараженности собак дирофиляриями за 2003-2007 г. г.

Возраст зараженных собак составил от 2 до 17 лет, из которых 57,4% были кобели, а 42,6% - суки. У собак в возрасте до 2 лет инвазию не регистрировали. Собаки в возрасте от 2 до 13 лет были заражены примерно в равной степени, старше 13 лет - значительно реже (Рис. 1). Из исследованных нами 62 пород собак микрофилярии обнаружили у 37. Наиболее высокую экстенсивность инвазии выявили у немецких и восточноевропейских овчарок. Другие породы собак были заражены значительно реже, однако, еще у 8 пород экстенсивность инвазии была выше средней. В настоящее время в мире насчитывается более 400 пород собак, которые условно делятся на 4 группы: служебные, охотничьи, комнатно-декоративные и бойцовые (Умельцев А.П., 2001). В «десятку» пород с наибольшей экстенсивностью инвазии вошли шесть пород из служебной группы (немецкая, восточноевропейская, среднеазиатская овчарки, ризеншнауцер, доберман-пинчер, боксер), две - из охотничьей (английский кокер-спаниель, афганская борзая), одна - из бойцовой (американский стаффордшир) и беспородные собаки.

Мы проанализировали также динамику исследований и зараженности дирофиляриями собак по их хозяйственному назначению и использованию за 5 лет. Наиболее высокую ЭИ наблюдали у бездомных (7,4%) и служебных (6,8%) собак. Несколько ниже были заражены дирофиляриями охотничьи (5,5%) и бойцовые (3,6%) собаки, спорадические случаи инвазии выявлены у комнатно-декоративных собак. Наблюдается тенденция снижения ЭИ у всех групп собак, кроме бездомных. В среднем ЭИ в 2007 году по сравнению с 2003 годом снизилась на 2,7%. Мы предполагаем, что снижение ЭИ произошло за счет лечебно-профилактических мероприятий, а также за счет изменения структуры пород исследованных собак. В ветеринарных клиниках Москвы ежегодно растет доля исследования комнатно-декоративных пород собак и снижается доля служебных и бойцовых. Такая же тенденция наблюдается и в целом по России. Рейтинг популярности пород собак за последнее десятилетие значительно изменился (Патрушев Д., 2006). Если на рубеже веков в России самыми популярными были представители «зубастых» пород (сторожевые, бойцовые), то в 2006 году в «десятку» наиболее популярных уже входили 4 представителя комнатно-декоративных пород (йоркшир-терьер, чау-чау, французский бульдог, шарпей), а популярность «зубастых» пород значительно снизилась.

На зараженность собак дирофиляриями влияет, главным образом, не порода, а тип их содержания и хозяйственное назначение: бездомные, сторожевые и охотничьи собаки заражаются значительно чаще по сравнению с комнатными из-за длительного пребывания их вне помещений и большей вероятности контактов с комарами.

При изучении сезонной динамики заболевания установлено, что микрофилярии в крови собак обнаруживали в течение всего года с января по декабрь, но в летний период несколько чаще.

Дирофиляриоз собак зарегистрировали в Москве и 33 районах Московской области: Егорьевском, Ногинском, Павлово-Посадском, Шатурском, Орехово-Зуевском, Истринском, Одинцовском, Солнечногорском, Ленинском, Дмитровском, Талдомском, Раменском, Люберецком, Ступинском, Красногорском, Щелковском, Сергиев-Посадском, Рузском, Домодедовском, Химкинском, Клинском, Подольском, Чеховском, Серпуховском, Мытищинском, Луховицком, Коломенском, Озерском, Воскресенском, Балашихинском, Наро-Фоминском, Волоколамском, Можайском, а также в 5 граничащих областях: Владимирской, Тульской, Смоленской, Тверской и Калужской. В Московской области выявили 3 очага D. immitis (поселок Внуково, г. Звенигород, г. Истра) и 1 очаг D. repens (Ступинский район), где зарегистрировано 5 и более зараженных собак. Необходимо отметить, что границы распространения дирофиляриоза в Московской области ежегодно расширяются: в 2003 году зарегистрировано 19 неблагополучных районов, в 2004 - 27, в 2005 - 30, в 2006 - 32, в 2007 - 33. Наиболее неблагополучным по дирофиляриозу собак является юго-восток Московской области (Егорьевский, Шатурский, Ногинский районы) и районы, граничащие с Москвой (Одинцовский, Ленинский, Мытищинский, Люберецкий).

Прижизненная диагностика и влияние дирофилярий на организм животных

Сравнительное изучение эффективности методов обнаружения микрофилярий в крови собак

Методом тонкого фиксированного мазка с окраской по Романовскому-Гимза микрофилярии обнаружили в 5 пробах с микрофиляриемией > 1000 личинок в 1 мл крови. Метод позволяет изучать размеры, форму и другие анатомические особенности микрофилярий с дифференциацией их по видам (Schrey C.F., Trautvetter E., 1998), но эффективен только при очень высокой микрофиляремии.

Методом толстой раздавленной капли обнаружили микрофилярии в 9 пробах с микрофиляриемией > 500 личинок в 1 мл крови. Метод самый простой и быстро выполнимый (в течение 1 минуты), не требует химреактивов и лабораторного оборудования, но эффективен только при высокой микрофиляриемии.

Методом концентрации Кнотта микрофилярии обнаружили в 46 пробах при очень низкой микрофиляриемии (< 10 личинок в 1 мл крови). Метод классический, им пользуются во всем мире, показывает высокую эффективность при очень низкой микрофиляриемии, но не дает возможности исследовать жизнеспособность микрофилярий, так как под действием формалина личинки фиксируются и становятся неподвижными.

Метод концентрации с дистиллированной водой. При взятии крови в качестве антикоагулянта использовали 5,0%-ный раствор цитрата натрия при соотношении 1:20. При использовании стандартного для общеклинических исследований 3,8%-ного раствора цитрата натрия кровь при смешивании с дистиллированной водой и центрифугировании сворачивалась, что не позволяло проводить дальнейшее исследование. В центрифужную пробирку объемом 10 мл переносили 1 мл тщательно перемешанной цитратной крови и 9 мл дистиллированной воды. Смесь тщательно перемешивали стеклянной палочкой, отстаивали 5 минут (для гемолиза эритроцитов) и центрифугировали в течение 5 - 7 минут при скорости 2000 об./мин. Надосадочную жидкость сливали, оставляя осадок в объеме 0,5 мл. Порциями переносили осадок на предметное стекло, накрывали покровным стеклом и подсчитывали число микрофилярий в 1 мл крови. Этим методом обнаружили микрофилярии в 46 пробах. Метод не уступает по эффективности классическому методу Кнотта и имеет перед ним ряд преимуществ: личинки в осадке остаются живыми, и в дальнейшем их можно культивировать для получения экскреторно-секреторного антигена паразита. Кроме того, с помощью этого метода можно изучать микрофилярицидное действие препаратов как in vitro, так и in vivo. При работе с дистиллированной водой не требуется наличие в лабораторной комнате вытяжного шкафа, без которого невозможно работать с формалином.

Таким образом, методы Кнотта и концентрации с дистиллированной водой показали 100%-ную эффективность выявляемости микрофилярий в крови, эффективность метода тонкого фиксированного мазка составила 10,9%, а толстой раздавленной капли крови - 19,6%.

Жизнеспособность микрофилярий D. immitis в цитратной крови собак при хранении

Для изучения сроков жизнеспособности микрофилярий при хранении цитратной крови собак в холодильнике при температуре +2єС использовали метод Ястреба (2004). Плотность микрофилярий в первой пробе составляла 60 лич./мл, во второй - 540 лич./мл и в третьей - 2200 лич./мл. Установлено, что микрофилярии D. immitis в цитратной крови при температуре +2єС сохраняют жизнеспособность от 3 до 6 дней, через 7 - 8 дней они погибают и лизируются. Жизнеспособность личинок не зависит от их плотности в 1 мл крови.

Клинические проявления дирофиляриоза собак

Всего проанализировано 139 случаев дирофиляриоза собак с наличием микрофилярий в крови, из них: 114 случаев (82,0%) инвазирования D. immitis, 17 случаев (12,2%) - D. repens и 8 случаев (5,8%) одновременного инвазирования обоими видами возбудителей.

В зависимости от клинических проявлений заболевания, вызванного возбудителем D. immitis, мы условно разделили собак на 3 группы.

1. Субклиническая форма болезни - 37 собак (32,5%).

2. Средняя степень тяжести заболевания (кардиопульмонарная болезнь с почечной недостаточностью) - 34 собаки (29,8%)

3. Тяжелая форма болезни (кардиопульмонарная болезнь с тромбоэмболическими осложнениями, почечной и печеночной недостаточностью) - 43 собаки (37,7%).

У 32,5% собак, зараженных D. immitis, болезнь протекала бессимптомно и диагностировалась только лабораторными методами.

Заболевание средней тяжести выявлено у 29,8% собак. Все животные этой группы быстро уставали при физической нагрузке, у 32,3% - наблюдали кашель, у 26,4% - одышку. При рентгенографии у 41,2% собак отмечали расширение легочных артерий. УЗИ сердца и органов брюшной полости выявила увеличение правого желудочка у 35,3%, расширение почечных лоханок у 44,1% и наличие кисты простаты у 17,6% собак. ЭКГ показала синусовую аритмию у 14,7% животных. Лабораторные исследования выявили изменения морфологии и биохимии крови и мочи и нарушение функции почек у 85,3% собак.

Тяжелая форма болезни установлена у 37,7% собак. У животных этой группы наблюдали повышенную утомляемость, кашель, одышку, потерю массы тела, желтуху, асцит. При рентгенографии у большинства собак наблюдали увеличение границ сердца и расширение легочных артерий. УЗИ сердца выявила увеличение правого желудочка, истончение миокарда и жидкость в перикарде. УЗИ органов брюшной полости выявила увеличение печени, расширение печеночных вен, увеличение селезенки, расширение почечных лоханок, кисты простаты и асцит. ЭКГ показала нарушение проводимости сердца и синусовую аритмию у большинства собак. При лабораторных исследованиях выявили резкие нарушения в морфологии и биохимии крови и мочи почти у всех собак этой группы.

Собаки, зараженные D. repens, также были условно разделены на 3 группы по клиническим признакам.

1. Субклиническая форма болезни - 9 собак (52,9%).

2. Кожная форма болезни (дерматиты) - 5 собак (29,4%).

3. Псевдоопухолевая форма болезни (опухолевидные подкожные образования) - 3 собаки (17,7%).

При субклинической форме у всех животных отмечали микрофилярии в крови и эозинофилию.

У животных с кожной формой болезни отмечали: микрофилярии в крови (100%); микрофилярии в экссудате (40%); дерматиты на разных участках тела (чаще в области головы) (100%); отек конечностей (40%); эозинофилию (60%); лейкоцитоз (60%); сдвиг лейкоцитарной формулы влево (40%); протеинурию (40%) и повышение уровня щелочной фосфатазы (40%).

У животных с псевдоопухолевой формой болезни отмечали: микрофилярии в крови (100%); микрофилярии в экссудате (66,6%); опухолевидные подкожные образования в области подгрудка (66,6%); опухолевидные подкожные образования в области мошонки (33,3%); эозинофилию (66,6%); лейкоцитоз (66,6%); сдвиг лейкоцитарной формулы влево (33,3%); протеинурию (66,6%) и повышение уровня щелочной фосфатазы (33,3%).

При рентгенографии, ультразвуковой диагностике и электрокардиографии у собак, зараженных D. repens, изменения не выявлены.

У собак, зараженных одновременно двумя видами возбудителей (8 случаев), наблюдали тяжелую форму болезни с клиническими признаками, характерными при инвазировании D. immitis.

Морфологические и биохимические изменения крови при дирофиляриозе собак

В зависимости от клинических проявлений заболевания, вызванного возбудителем D. immitis, мы условно разделили собак на 3 основные группы.

1. Субклиническая форма болезни - 24 собаки.

2. Средняя степень тяжести заболевания - 19 собак.

3. Тяжелая форма болезни - 31 собака.

При субклинической форме болезни (n=24) у всех животных (100%) выявили микрофилярии в крови и у 8 собак (33,3%) - эозинофилию.

У животных со средней степенью тяжести заболевания (n=19) микрофилярии в крови выявили у 19 собак (100%), эозинофилию - у 6 (31,6%), лейкоцитоз - у 8 (42,1%) и сдвиг лейкоцитарной формулы влево - у 7 (36,8%. У собак с тяжелой формой болезни (n=31) микрофилярии в крови выявили в 31 случае (100%), эозинофилию - в 6 сл. (19,3%), лейкоцитоз - в 18 сл. (58,1%) и сдвиг лейкоцитарной формулы - в 16 сл. (51,6%).

При биохимических исследованиях крови у всех собак с субклинической формой болезни отмечали относительно небольшое повышение фермента ЛДГ. Наивысшая активность этого фермента наблюдается в скелетных мышцах, печени и сердечной мышце, но он имеется также в почках, поджелудочной железе, эритроцитах и в легких.

У собак со средней степенью тяжести заболевания кроме повышения уровня ЛДГ у 100% животных, наблюдали также повышение уровня АсАТ, которая присутствует в миокарде, скелетных мышцах и печени, и АлАТ, которая в наибольших количествах содержится в печени и почках. Кроме того, у 100% собак этой группы отмечали повышение уровня креатинина и мочевины, которые являются побочными продуктами обмена веществ. Уровни мочевины и креатинина в крови возрастают, если скорость клубочковой фильтрации, отражающая функциональное состояние почек, значительно снижается. У 6 собак (31,6%) отмечено повышение уровня ЩФ, что служит признаком повреждения, главным образом, клеток печени.

У всех собак с тяжелой формой болезни отмечали значительное (в 2-8 раз по сравнению с нормой) повышение уровня ферментов ЛДГ, АсАТ, АлАТ, ЩФ, а также креатинина и мочевины. Кроме того, у 16 собак (51,6%) отмечали повышение уровня альфа-амилазы - фермента поджелудочной железы и у 3 собак (9,7%) - уровня глюкозы.

В зависимости от клинических проявлений дирофиляриоза, вызванного D. repens, мы также условно разделили собак на 3 группы.

1. Субклиническая форма болезни - 2 собаки.

2. Кожная форма болезни - 5 собак.

3. Псевдоопухолевая форма болезни - 2 собаки.

При субклинической форме болезни у собак отмечали микрофилярии в крови и эозинофилию (100%). Биохимические показатели оставались в пределах нормы.

У животных с кожной и псевдоопухолевой формами болезни отмечали микрофилярии в крови (100%) и экссудате (42,8), эозинофилию (42,8%), лейкоцитоз (57,1%), сдвиг лейкоцитарной формулы влево (42,8%). При биохимических исследованиях обнаружили повышение уровня ЩФ у 3 собак (42,8%).

Таким образом, у собак, инвазированных D. immitis, при средней степени тяжести заболевания и тяжелой форме болезни установлены значительные биохимические изменения крови, указывающие, в первую очередь, на тяжелое поражение почек, а также сердца, легких и печени. У собак, зараженных D. repens, эти изменения незначительные.

Терапия и профилактика дирофиляриоза

При исследовании проб крови собак первой и второй групп на 7_е сутки после лечения микрофилярий в крови не обнаружили. Зараженность собак шестой (контрольной) группы изменилась несущественно.

Отмечена хорошая переносимость препарата независимо от пола, массы, возраста и породы собак.

Таким образом, абиктин в форме таблеток и инъекционного раствора в дозе 0,05 мг/кг по ДВ при однократном, пероральном и подкожном применении ДВ в сочетании с тавегилом показал 100%-ную микрофилярицидную эффективность при спонтанном дирофиляриозе собак. При повторных ежемесячных исследованиях проб крови микрофилярии обнаружили у 18 собак первой и 16 собак второй групп через 3-11 месяцев после лечения. У остальных собак этих групп в течение 18 месяцев (срок наблюдений) микрофилярий в крови не обнаружили.

При макрофилярицидной терапии в первые трое суток после введения меларсомина у собак третьей группы наблюдали признаки интоксикации - угнетение, одышку, анорексию, лихорадку. В связи с этим одновременно с этиотропной терапией проводили неспецифическую (патогенетическую и симптоматическую) терапию, интенсивность которой определялась характером осложнений и степенью их выраженности. На 3-5_е сутки после лечения клиническое состояние животных обычно было удовлетворительным, однако 2 собаки с тяжелой формой заболевания пали вследствие тромбоэмболии кровеносных сосудов на 7 и 11 сутки после лечения.

При лабораторных исследованиях мочи на 10_е сутки у всех собак отмечали резко выраженную протеинурию (до 1,5 г/л), наблюдали почечный эпителий в осадке мочи (6-12 клеток в поле зрения) и снижение удельной плотности (1,005-1,009). На 30_е сутки эти показатели приблизились к норме, а к 60_м - укладывались в пределы нормы. Биохимические исследования крови всех собак на 10_е сутки выявили повышение содержания аминотрансфераз (АСТ и АЛТ), лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы и креатинина в 2-6 раз по сравнению с нормой. На 30_е сутки эти показатели значительно снизились, однако превышали верхние пределы на 15-30%, а к 60_м - укладывались в пределы нормы.

При макрофилярицидной терапии абиктином у собак 4 и 5_й групп побочных эффектов не наблюдали. Клиническое состояние и биохимические показатели крови этих собак через 6 и 12 месяцев после лечения были в пределах нормы. Анализ проб крови на микрофилярии через 6 и 12 месяцев также показал отрицательные результаты.

Таким образом, можно заключить, что меларсомин при двукратном внутримышечном применении в дозе 2,5 мг/кг и таблетки абиктина в дозах 0,05 мг/кг и 0,1 мг/кг при кратности применения 1 раз в месяц в течение года показали 100%-ную макрофилярицидную эффективность.

Результаты опыта по профилактике дирофиляриоза собак отражены в таблице 5. Все собаки первой опытной группы, которым применяли таблетки абиктина с кратностью 1 раз в 2 месяца, были свободны от микрофилярий. В контрольной группе микрофилярии D. immitis обнаружили у 3 собак.

Во второй группе животных при накожном применении адвантикса у 2 собак опытной группы обнаружили микрофилярий D. immitis. В контрольной группе выявлено 6 зараженных собак.

В третьей опытной группе животных, которым применяли абиктин в сочетании с адвантиксом, все собаки были свободны от инвазии. В контрольной группе микрофилярии обнаружили у 1 собаки.

Таблица 5. Профилактическая эффективность абиктина и адвантикса при дирофиляриозе собак

Собаки четвертой опытной группы, которым назначали таблетки абиктина с кратностью 1 раз в месяц, также были свободны от инвазии, в контрольной группе оказались зараженными 6 собак.

Таким образом, все собаки первой, третьей и четвертой групп, обработанные абиктином с различной кратностью, оказались свободными от инвазии. Во второй группе при накожном применении адвантикса, у 2 собак из 28 обнаружили микрофилярии. В контрольных группах животных микрофилярии обнаружили у 10 собак, из них у 3 - в г. Звенигороде, у 1 - в поселке Внуково и у 6 - из приюта «Эко». Побочных реакций препаратов за период исследования выявлено не было.

Абиктин, применяемый для профилактики дирофиляриоза собак, зарекомендовал себя как эффективное средство. У собак, получавших препарат в дозе 0,05 мг/кг с различной кратностью в период лёта комаров, при исследованиях крови на наличие микрофилярий получен отрицательный результат. Адвантикс в испытанных дозах и кратности применения оказался недостаточно эффективным. Положительный результат, полученный у собак из контрольных групп, подтверждает, что эксперименты были проведены в эндемичных по дирофиляриозу районах.

Выводы

1. В странах СНГ четко выражены эпизоотологические особенности штаммов E. granulosus в синантропных очагах. На западе Европы (Белоруссия, западные и центральные регионы Украины) главную роль в эпизоотологии эхинококкоза играет свиной штамм, на юге - (Молдавия, южные регионы Украины) активно функционируют овечий и свиной штаммы и несколько слабее - бычий штамм E. granulosus. Ведущую роль в эпизоотологии эхинококкоза в Узбекистане и Казахстане играет овечий штамм, активно функционируют также верблюжий и слабо - бычий штаммы. Лошадиный штамм E. granulosus в исследуемых регионах России и стран СНГ не выявлен.

2. Сроки преимагинального развития E. granulosus зависят от штамма паразита и составляют у собак, зараженных овечьим штаммом 48,3±2,4, свиным - 58,8±2,2, бычьим - 50,2±2,1 и верблюжьим - 37,8±1,3 дня. Наиболее высокая приживаемость у собак выявлена у протосколексов верблюжьего штамма - 19,4%, несколько ниже - овечьего и бычьего - 12,2 и 12,4% соответственно и наиболее низкая - у свиного штамма - 8,6%.

3. Восприимчивость беспородных белых мышей к внутрибрюшинному заражению протосколексами E. granulosus и развитие у них вторичных ларвоцист до фертильной стадии зависит от штамма паразита: овечьим штаммом заразилось 93,3%, бычьим - 75%, верблюжьим - 45% мышей; фертильные ларвоцисты обнаружили соответственно через 15, 12 и 6 месяцев после заражения; протосколексы свиного штамма у мышей не развивались.

4. Протосколексы и взрослые цестоды E. granulosus овечьего, свиного, бычьего и верблюжьего штаммов из разных регионов имели достоверные различия по размерам хоботковых крючьев и развитию стробилы. Протосколексы от разных хозяев внутри регионов (Самаркандская обл., Узбекистан; Крым, Украина) также отличались по форме и размерам хоботковых крючьев, за исключением бычьего и овечьего штаммов, которые по этим критериям практически не различались.

5. Разработан и испытан при цестодозах собак отечественный препарат гидробунид, эффективность которого в дозе 50 мг/кг при однократном применении составила 100% против крупных цестод (тений, мультицепсов, дипилидий), ЭЭ против эхинококков - 80 - 91,7%.

6. Таблетки эпсипрантела в дозе 5 мг/кг однократно при экспериментальном эхинококкозе собак показали ЭЭ, равную 80,0%, ИЭ - 99,8%.

7. Изучена химиопрофилактическая эффективность новой лекарственной формы празиквантела пролонгированного действия - азинпрола. Азинпрол в 5_кратной терапевтической дозе по празиквантелу при подкожном применении при экспериментальном эхинококкозе и тениозе собак полностью профилактировал их заражение цестодами в первые 3,5 месяца и подавлял развитие цестод в следующие 2,5 месяца. Выделение яиц и члеников цестод в течение 6 месяцев (срок наблюдения) не отмечали. Азинпрол, испытанный в производственных условиях на приотарных собаках с кратностью применения 2 раза в год, показал профилактическую эффективность против цестод 99,5%.

8. Разработан и испытан новый комплексный препарат - азинил на основе действующих веществ празиквантела и тетрамизола гидрохлорида и корригирующих добавок в виде сухого молока и пивных дрожжей. Эффективность его в дозе 2,5 мг/кг по празиквантелу и 7,5 мг/кг по тетрамизолу при двукратном применении против цестодозов и нематодозов собак и кошек составила 100%.