Особенности этиопатогенеза, диагностики, терапии и профилактики мастита коров в сухостойный период

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

ОСОБЕННОСТИ ЭТИОПАТОГЕНЕЗА, ДИАГНОСТИКИ, ТЕРАПИИ И ПРОФИЛАКТИКИ МАСТИТА КОРОВ В СУХОСТОЙНЫЙ ПЕРИОД

06.02.06 - Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

Роман Лилия Григорьевна

Саратов - 2010

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Процветающее сельское хозяйство было во все времена и поныне остается важнейшим источником благосостояния населения, гарантом продовольственной независимости государства.

В период обретения Украиной государственного суверенитета, формирования рыночных отношений не удалось избежать разрушительных тенденций в сельском хозяйстве. Наиболее болезненно это сказалось на животноводческой отрасли, прежде всего молочном скотоводстве. Достаточно сказать, что за сравнительно короткий исторический срок (1990-2005 г г.) дойное стадо сократилось с 10,7 до 3,7 млн голов, а производство молока снизилось до уровня 1953 года.

Негативная тенденция состоит и в том, что преобладающая часть поголовья (около 77%) ныне находится на личных подворьях граждан. Это тупиковый путь, поскольку означает возврат к натуральному хозяйству. Его можно преодолеть лишь созданием на альтернативной основе крупных высокоспециализированных хозяйств акционерного типа, способных в полной мере использовать инновационные технологии мирового уровня.

Наглядным примером может служить деятельность базового хозяйства Министерства аграрной политики Украины в области животноводства - АОЗТ «Агросоюз» (Днепропетровская область), созданного в 1996 г. За истекшее десятилетие инновационные технологии производства и управления дали ожидаемые результаты (высокая производительность труда, низкая себестоимость продукции). На перспективу численность дойного стада намечено увеличить с 770 до 5000 голов, а также построить и ввести в эксплуатацию комплекс по выращиванию ремонтных телок на 6000 голов.

Индустриальные технологии в молочном скотоводстве предполагают неизмеримо более высокий уровень ветеринарного обслуживания поголовья. В этих условиях особую актуальность приобретает сохранение здоровья молочной железы, поскольку в условиях интенсивной эксплуатации, усугубляемой воздействием техногенных факторов, данный орган весьма уязвим для болезнетворных микроорганизмов. С другой стороны, беспривязное содержание поголовья, при наличии динамичных технологических групп, усложняет задачу обнаружения больных животных, оказание им квалифицированной лечебной помощи. Не случайно на некоторых молочных комплексах введена должность врача-маммолога.

В системе противомаститных мероприятий весьма слабым звеном остается отсутствие достаточно простых и надежных методов обнаружения субклинического мастита в постлактационный период. Их разработке должно предшествовать углубленное изучение постлактационных изменений в молочной железе, с использованием клинических, гистоморфологических, цитологических, биохимических методов исследования.

Санация молочной железы коров вслед за прекращением доения пролонгированными антибиотикосодержащими препаратами, изготовляемыми по формуле DC, снискала большую популярность за рубежом, однако механический ее перенос в наши условия неоправдан как с экономической, так и с лечебно-профилактической точек зрения.

Не вскрыта в должной мере этиологическая связь желудочно-кишечной патологии новорожденных телят с неизлеченным маститом коров-матерей.

Цель и задачи исследований. Основная цель исследований - разработать комплекс диагностических, лечебных, профилактических мероприятий при постлактационном мастите высокопродуктивных коров.

Комплексная программа исследований предусматривала решение следующих конкретных задач.

1. Изучить характер и интенсивность морфологических изменений в молочной железе коров после завершения лактации в норме и при субклиническом мастите, и на этой основе разработать визуальный экспресс-метод его диагностики.

2. Научно обосновать и доказать возможность применения цитологического метода диагностики субклинического мастита в постлактационный период с использованием поверхностно-активных веществ.

3. Изучить распространение мастита (клинически выраженного и скрытого) среди коров группы сухостоя.

4. Вскрыть особенности этиологии, клинического проявления, течения и исходов мастита в постлактационный период.

5. Изучить биохимический и цитоморфологический состав секрета вымени сухостойных коров; на основе полученных данных разработать биохимический экспресс-метод и люминесцентно- микроскопический метод диагностики субклинического мастита.

6. Дать терапевтическую и экономическую оценку при мастите сухостойных коров йодсодержащих препаратов: йодмастагеля, ПИВС.

7. Разработать рецептуру и технологический регламент изготовления пленочно-антисептического покрытия (ПАП), изучить в сравнительном аспекте результативность его применения для предупреждения новых случаев мастита в дегенеративную фазу сухостоя.

8. Научно обосновать выбор сроков проведения диагностической и лечебной работы при мастите сухостойных коров, обеспечивающий сохранность молочной продуктивности в очередную лактацию и биологическую полноценность молозива.

Объекты исследований. Коровы красной степной породы, помеси от поглотительного скрещивания их с черно-пестрыми голштинами, а также чистопородные голштины отечественной и зарубежной селекции.

Предмет исследований. Определение особенностей этиологии и патогенеза, принципов диагностики, терапии и профилактики мастита коров в сухостойный период.

Научная новизна. В результате проведенных исследований:

· изучены в динамике органолептические признаки секрета вымени сухостойных коров, на основе полученных данных разработан экспресс-метод диагностики субклинического мастита;

· установлена возможность диагностики субклинического мастита в любой срок сухостоя антитрипсиновым тестом в нашей модификации;

· изучен биохимический состав секрета вымени сухостойных коров, а также молозива в норме и при субклиническом мастите;

· подтверждена возможность использования поверхностно-активных веществ при экспресс-диагностике субклинического мастита; для этих целей предложено использовать жидкое моющее средство «Прогресс» в разведении 1:14;

· на основании данных визуальной оценки секрета и результатов исследования тканевых образцов установлено, что при субклиническом мастите сухостойных коров происходит задержка на 2-3 нед. инволюции паренхимы молочной железы;

· выяснена терапевтическая эффективность при мастите коров (клинически выраженном и субклиническом) в период сухостоя йодвисмутсодержащих препаратов йодмастагеля и ПИВС;

· вскрыта этиологическая роль мастита сухостойных коров (включая субклинический) в возникновении диареи новорожденных телят;

· изучен биохимический состав, иммунологические свойства и санитарное качество молозива коров, перенесших мастит в сухостойный период;

· создано пленочно-антисептическое покрытие (ПАП), содержащее в своем составе биологически активный йод и биополимер, разработаны рекомендации по его применению на сухостойных коровах с целью профилактики мастита.

Практическая значимость. Предложены простые, относительно дешевые, высокочувствительные экспресс-методы диагностики субклинического мастита у коров в постлактационный период: визуальный, цитологический.

Предложен йодсодержащий препарат йодмастагель в качестве средства монотерапии при мастите сухостойных коров (субклиническом и клинически выраженном).

Определены рациональные сроки проведения противомаститных мероприятий в постлактационный период.

Апробация и реализация материалов работы. Материалы диссертации доложены и получили одобрение: на Всесоюзной научной конференции «Научные основы профилактики и лечения патологии воспроизводительной функции сельскохозяйственных животных» (Воронеж, 1988); на научной конференции «Повышение продуктивности и совершенствование мер борьбы с болезнями животных в условиях промышленного животноводства и мелкотоварных хозяйств (Харьков, 1991);

на Международной научно-практической конференции «Современные тенденции развития агропромышленного комплекса» (Россия, п. Персиановский, 2006); на Международной научно-производственной конференции «Проблемы экологии ветеринарной медицины Житомирщины» (Украина, Житомир, 2005); на Международной научно-производственной конференции «Научное и кадровое обеспечение ветеринарного благополучия животноводства» (Одесса, 2008); 1-й международной научно-практической конференции Кубанского ГАУ (Краснодар, 2009); V научно-практической конференции «Современные проблемы общей патологии в ветеринарной медицине» (Сумы, 2009); на научных конференциях Одесского университета (2005, 2006, 2008 гг.); на научных конференциях Одесского института агропромышленного производства (2004, 2005, 2006 гг.).

Публикации. По материалам представленной к защите диссертации опубликовано 30 работ, в том числе в 7 изданиях, рецензируемых ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация имеет объем 256 страниц в компьютерном исполнении. Состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, предложений для практики, библиографического списка, включающего 327 наименований (в том числе 146 иностранных), приложения.

Основные положения, выносимые на защиту. На защиту выносятся:

· визуальный и цитологический методы диагностики субклинического мастита у коров, находящихся в сухостое;

· влияние мастита сухостойного периода на состав и свойства молозива, заболеваемость новорожденных телят диспепсией;

· применение йодмастагеля и ПИВС при клинически выраженном и субклиническом мастите сухостойных коров;

· использование пленочно-антисептического покрытия (ПАП) для профилактики мастита у коров в дегенеративную фазу постлактационной инволюции молочной железы.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальную часть диссертационной работы выполняли на базе СООО «Агрофирма Нива», СООО «Агрофирма Петродолинское» Овидиопольского района и СПК «Родина» Саратского района Одесской области, Одесской областной лаборатории ветеринарной медицины, кафедры зоогигиены и общего животноводства Одесского госагроуниверситета, кафедр акушерства и хирургии, биохимии и биохимической лаборатории Донского госагроуниверситета (РФ, Ростовская область).

На начальном этапе ставилась задача разработать визуальный экспресс-метод диагностики скрытого мастита у коров, находящихся в сухостое. Для этого предварительно (за 7-10 сут до начала запуска) обследовали на скрытый мастит мастидиновым тестом 137 коров.

Для постановки опыта отобрали 38 коров, давших четкую положительную тест-реакцию на диагностикум. С целью подтверждения диагноза спустя 7 сут секрет вымени этих животных исследовали бактериологическим методом. Основываясь на бактериологических данных (обнаружение патогенных штаммов микроорганизмов), отобрали 31 корову с поражением 1-2 долей, причем с таким расчетом, чтобы смежные (контрольные) доли были здоровыми. В дальнейшем через каждые 10 сут из больных и смежных здоровых долей отбирали пробы секрета для органолептической оценки по признакам: объем, цвет, консистенция, клейкость, однородность, прозрачность, опалесценция.

На 30-й день сухостоя от 25 подопытных коров с четко выраженными различиями по органолептическим признакам взяли пробы секрета для бакисследования. Его проводили по методике ВНИИ фармакологии, патологии и терапии животных (В.А.Париков, В.И.Слободяник, Г.Н.Кузьмин и др., 1981).

Параллельно на группе из 8 сухостойных коров исследовали в динамике секрет здоровых и пораженных субклиническим маститом долей вымени по ряду биохимических показателей (общий и растворимый белок, лактоза, гликопротеиды, сиаловые кислоты, n-ацетил-Я-D-глюкозаминидаза, ДНК, РНК, б₁-антитрипсин).

Влияние субклинического мастита на гистоструктуру паренхимы вымени изучали на биопсийном материале, который получали с помощью биотома конструкции М.Г. Миролюбова (1975) в середине сухостоя. Из 10 тканевых образцов изготовили 50 гистопрепаратов. При их микроскопии выясняли состояние железистого эпителия и межальвеолярной соединительной ткани, кровеносных сосудов, выводных протоков.

Цитологическим исследованием секрета вымени было охвачено 14 сухостойных коров; помимо определения общего числа лейкоцитов по Прескотту-Бриду проводили дифференцированный подсчет числа живых и мертвых клеток люминесцентно-микроскопическим методом (в нашей модификации). Полученные данные послужили научной основой для разработки цитологического экспресс-метода диагностики субклинического мастита в сухостойный период. В качестве реагента избрали жидкое моющее средство «Прогресс» М-20 производства Новочеркасского завода синтетических продуктов. Испытали различные разведения жидкости «Прогресс». Разведение, давшее наибольшее число совпадений с эталонным (прямой подсчет лейкоцитов в секрете) апробировали на 40 животных; базой для сравнения служил импортный экспресс-диагностикум Profilacreagent.

С помощью предложенных нами экспресс-методов (визуальный, цитологический) в трех сельхозпредприятиях Одесской области провели всесторонний анализ заболеваемости сухостойных коров маститом. Наряду с изучением динамики и частоты мастита регистрировали исходы болезни, выясняли этиологическую роль неизлеченного мастита сухостойного периода в возникновении послеродовых осложнений у коров-матерей, желудочно-кишечной патологии у новорожденных телят.

В дальнейшем ставили задачей экспериментально подтвердить этиологическую связь желудочно-кишечной патологии у новорожденных телят с постлактационным маститом коров-матерей.

Под наблюдением находилось 3 группы телят, родившихся от коров: 1 - со здоровым выменем; 2 - больных маститом (клинически выраженным или субклиническим); 3 - прошедших курсовое лечение по поводу мастита до отела. Учитывали частоту, тяжесть, исход болезни.

Клинические данные были дополнены оценкой молозива от коров-матерей по биологической полноценности и санитарному состоянию. Пробы для исследования отбирали при первом доении и на пятые сутки после отела.

Следующим шагом было создание неантибиотического противомаститного препарата с последующей оценкой его терапевтической эффективности при мастите в сухостойный период.

Следуя рабочей концепции, в качестве активного компонента использовали йодвисмутсульфамид нового поколения, лекарственной основы - гидрогель, целевой продукт назван йодмастагелем.

По завершении разработки технологического регламента изготовления йодмастагеля провели цикл исследований по оценке физической и химической стабильности йодмастагеля при различных условиях хранения, специфической активности, безвредности при внутрицистернальном введении.

Положительные результаты лабораторных исследований позволили приступить к клиническим испытаниям препарата. Данный этап начали с определения экспериментальным путем разовой терапевтической дозы йодмастагеля при субклиническом мастите нелактирующих коров, для чего заложили научно-хозяйственный опыт.

Схема опыта

Группа	n	Лечение
1	15	Йодмастагель внутрицистернально дважды, с 48-часовым интервалом, разовая доза 5,0 мл
2	15	Йодмастагель внутрицистернально дважды, с 48-часовым интервалом, разовая доза 10,0 мл
3	15	Йодмастагель внутрицистернально дважды, с 48-часовым интервалом, разовая доза 15,0 мл

При оценке эффективности лечения ориентировались на показания тест-реакции секрета леченной доли с индикатором мастита «Дон-2», а также на органолептические данные.

Помимо этого, определили кратность введения йодмастагеля путем постановки опыта на 45 сухостойных коровах с диагнозом “субклинический мастит”. Сформировали 3 уравненные группы: 1-я - йодмастагель в оптимальной дозе (10 мл) однократно; 2-я - йодмастагель в дозе 10 мл дважды, интервал 48 часов; 3-я - йодмастагель в дозе 10 мл трижды, с 48-часовым интервалом.

Параллельно сопоставили эффективность двух способов применения йодмастагеля: внутрицистернального и трансдермального. Внутрицистернально препарат вводили по оптимальному варианту. Трансдермальный способ состоял в нанесении йодмастагеля на чистую, хорошо увлажненную кожную поверхность пораженной доли вымени; такое лечение повторяли через 48 часов.

Сравнительная оценка терапевтической и экономической эффективности применения йодмастагеля при мастите сухостойных коров проведена на молочной ферме ООО «А/ф Петродолинское» в 2006 г. Базой для сравнения служили мастисан А-форте и ПИВС. Для подтверждения экспериментальных данных организовали производственную апробацию йодмастагеля на трех сельхозпредприятиях Одесской области. По результатам апробации оформлены акты внедрения.

Итоговые данные представлены в актах внедрения.

Заключительный этап НИР состоял в разработке, всестороннем изучении и производственной апробации средства для профилактики мастита у коров после их перевода в сухостой - пленочно-антисептического покрытия (ПАП). Параллельно испытывалось биологическое средство защиты молочной железы от патогенов - биоспорин.

При разработке рецептуры ПАП использовали относительно дешевые и доступные ингредиенты: ПИВС, формалин, мочевину, глицерин, поливинилпирролидон. В процессе научного поиска были определены оптимальное их соотношение, температурные параметры на различных стадиях технологического процесса, последовательность технологических операций.

После отработки рецептуры и технологического регламента изготовления ПАП провели на шести клинически здоровых нелактирующих коровах оценку его пленкообразующей и пенетрирующей способности при нанесении на кожную поверхность сосков.

Вслед за этим изучили влияние ПАП (при накожной аппликации) на микробное число в секрете вымени сухостойных коров.

Затем провели сравнительную оценку защитных свойств ПАП на производственном поголовье. Из числа коров с завершившейся лактацией сформировали четыре группы, в каждую включили 50 голов: 1-я - двукратная, с недельным интервалом, обработка кожи сосков ПАП; 2-я - однократное внутрицистернальное введение нафпензала DC; 3-я - биоспорин внутрицистернально из расчета 10 млрд живых бактерий-симбионтов, суспензированных в 5,0 мл физиологического раствора; 4-я - без применения средств фармако- и биопрофилактики.

У всех подопытных животных на 15-е и 30-е сутки сухостоя провели оценку состояния долей вымени визуальным и пальпаторным путем. Затем отбирали в лунку молочно-контрольной пластины пробы секрета (отдельно из каждой доли); их оценивали по органолептическим признакам с последующей постановкой тест-реакции на субклинический мастит индикатором «Дон-2».

Основываясь на результатах проведенных исследований, выяснили по каждой группе процент заболевших субклиническим и отдельно - клиническим маститом; помимо этого, определена сумма затрат на профилактическую обработку вымени сухостойных коров каждым из перечисленных средств.

Экспериментальный способ в дальнейшем прошел производственную апробацию (с оформлением актов внедрения) в трех сельхозпредприятиях Одесской области.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Заболеваемость маститом коров группы сухостоя

В трех сельхозпредприятиях Одесской области (Украина) провели обследование на мастит 1443 сухостойных коров; он выявлен у 38,53% животных, при соотношении клинически выраженного и субклинического 1,07:1,00. Столь значительную долю клинических форм мастита мы объясняем тем, что в хозяйствах не практикуется системное обследование на субклинический мастит лактирующих коров, включая предзапускной период. Последующий же запуск и начальная (дегенеративная) фаза постлактационных изменений провоцируют его переход в клинически выраженное воспаление.

Подтверждением сказанного могут служить результаты следующего эксперимента. В предзапускной период обследовали на субклинический мастит 150 коров. Из этого поголовья отобрали для опыта 80 голов, с разбивкой на 2 группы: 1 - отрицательная; 2 - положительная тест-реакция на диагностикум. Спустя 2 нед после прекращения доения подопытных животных обследовали на мастит клиническими методами. В 1-й группе выявлено заболевших клиническим маститом 7,5%, во 2-й - 20,0% , т.е. в 2,7 раза больше.

Собранный фактический материал позволил сопоставить частоту постлактационного мастита с удоем за лактацию и продолжительностью сухостоя.

Как выяснилось, чем выше удой, тем больше процент больных. Так,в А/ф «Петродолинское» у коров с удоем за предшествующую лактацию в пределах 3000-3500 кг мастит регистрировался в 1,57 раза, 4000-5000 кг - в 1,89 раза чаще по сравнению с низкопродуктивными животными (2000-2500 кг). В ООО «Петродолинское» при удое за лактацию в пределах 3000-3500 кг доля больных маститом коров составила 40,61%, 4500-5000 кг - 45,27, более 5000 кг - 48,48%.

Также обнаружена зависимость частоты постлактационного мастита от продолжительности сухостойного периода. Она была наименьшей при сухостойном периоде 31-50 сут. Продолжительность сухостоя 71-90 сут увеличило число заболевших в 1,93, до 90 сут и более - в 2,32 раза.

3.2 Синдроматика и дифференциальная диагностика постлактационного клинически выраженного мастита

Как выяснилось в ходе исследований, синдроматика постлактационного клинически выраженного мастита существенно отличается от таковой лактирующих животных. Прежде всего, обращает на себя внимание то, что большинство классических признаков воспаления (гиперемия, повышение местной температуры, болевая реакция, отек тканей, асимметрия долей вымени) малозаметны (стерты), либо вовсе отсутствуют. Исходя из этого, основным ориентиром следует считать результаты органолептической оценки секрета по долям вымени.

Рассматривая этот признак в сравнительном аспекте, следует указать на такие особенности: 1 - объем секрета в воспаленной доле не только не снижен, но, напротив, многократно превосходит нормативный уровень; 2 - в секрете пораженной доли казеин не обнаруживается.

Ввиду отмеченной специфики воспаления в нефункционирующей молочной железе разработали схему дифференциальной диагностики клинических форм мастита у коров группы сухостоя.

3.3 Состав и свойства секрета вымени сухостойных коров в норме и при субклиническом мастите

Оценка известных и разработка новых методов диагностики субклинического мастита в постлактационный период должна опираться на обстоятельные, тщательно выверенные сведения о различиях в составе и свойствах нормального и патологически измененного секрета вымени. Между тем до настоящего времени отечественные и зарубежные источники литературы такими сведениями, по существу, не располагают. Это и поставило нас перед необходимостью восполнить имеющийся пробел.

3.3.1 Органолептическая оценка секрета вымени сухостойных коров в норме и при субклиническом мастите

На протяжении сухостоя (с интервалом 10 сут) отбирали пробы секрета из здоровых и пораженных субклиническим маститом долей вымени с последующей их оценкой по органолептическим показателям: объему, цвету, консистенции, клейкости, однородности, прозрачности, опалесценции.

Как выяснилось, секрет из здоровых долей вымени на протяжении сухостойного периода претерпевал как количественные, так и качественные изменения. На 10-е сут после прекращения доения объем, который можно было извлечь из доли, составил в среднем 7,19 мл; к 20-м сут он уменьшился почти вдвое, а в середине сухостоя был минимальным (1 мл). Начиная с 50-х сут сухостоя объем извлекаемого секрета нарастал, с достижением пика перед отелом.

Из качественных показателей наиболее динамичными были цвет, консистенция, клейкость секрета. Так, к 30-м суткам цвет изменился от серо-белого до соломенно-желтого или янтарного, консистенция - от полужидкой до густой (медоподобной), клейкость - от полного ее отсутствия до умеренной или высокой. Подобная картина сохранялась до 50-х суток после отела.

Секрет из пораженных субклиническим маститом долей вымени имел наибольшие отличия от нормального в середине сухостоя. Они состояли в следующем: объем увеличен до 4-5 мл (т.е. в 2-2,5 раза), цвет серо-белый, клейкость низкая либо отсутствует.

Отмеченные различия следует однозначно интерпретировать таким образом; субклинический мастит замедляет интенсивность инволюционных процессов в паренхиме пораженной доли вымени.

3.3.2 Цитоморфологическая характеристика секрета вымени сухостойных коров в норме и при субклиническом мастите

Основываясь на бактериологических данных, отобрали в начале сухостоя 14 коров с поражением 1-2 долей вымени. У них ежедневно исследовали секрет из больной и смежной здоровой долей вымени цитологическим методом (по Прескотту-Бриду).

Общее число лейкоцитов в секрете из здоровых долей вымени было относительно постоянной величиной, находясь в пределах 12,01 ± 0,31 - 15,42 ± 0,79 10⁹/л; лишь в конце сухостоя, т.е. в фазу колострогенеза снизилось по отношению к исходному уровню на 4,51 10⁹/л. В лейкограмме наиболее многочисленными были полинуклеары: их относительная доля находилась в пределах от 41,94 до 53,27%.

В секрете долей, инфицированных патогенными микроорганизмами суммарное число лейкоцитов в 1,82-2,31 раза достоверно превышало (Р< 0,05-0,001) таковое секрета здоровых долей, причем наиболее контрастные различия имели место в конце сухостоя. На всем протяжении сухостойного периода преобладали нейтрофилы (45,74-54,41%), а их абсолютное количество изменялось параллельно общей численности лейкоцитов.

Как уже было показано в обзоре литературе, вопрос пригодности цитологических экспресс-методов для диагностики субклинического мастита у сухостойных коров до последнего времени оставался спорным. Ответ на него можно получить лишь досконально изучив наряду с общей численностью лейкоцитов соотношение живых и мертвых клеток в норме и при субклиническом мастите.

Для дифференциации живых и мертвых лейкоцитов использовали метод люминесцентной микроскопии. Пробы секрета отбирали перед началом запуска коров и затем ежедневно на всем протяжении сухостойного периода.

Перед запуском в пробах молока из здоровых долей вымени лейкоцитарное число составляло в среднем 6,45 10⁹/л, из них 72,2% было представлено живыми клетками. В пробах молока с четкой положительной тест-реакцией на диагностикум общее количество лейкоцитов в 1,8-2,5 раза превосходило таковое нормального секрета, при несколько меньшей относительной численности лейкоцитов - 63,1-64,1%. Тем не менее, абсолютное число живых лейкоцитов не только не было снижено, но, напротив, имело 1,57-2,21-кратный прирост.

Как видим, в предзапускной период сохраняются существенные различия секрета из здоровых и пораженных субклиническим маститом долей вымени по общей концентрации лейкоцитов и, что особенно важно, по категории живых клеток.

У сухостойных коров в секрете из здоровых долей вымени общее число лейкоцитов варьировало на протяжении сухостоя от 10,91 до 18,23 10⁹/л, с достижением пика к его середине. При этом доля живых лейкоцитов была относительно стабильной, находясь в пределах от 56,94 до 61,16%.

В секрете из долей, пораженных субклиническим маститом, лейкоцитов насчитывалось от 22,99 до 29,97 10⁹/л, т.е. по сравнению с нормальным секретом превышение было почти 2-кратным. Сопоставление данного показателя по категории живых лейкоцитов обнаружило еще большее различие - оно составляет 2,3-2,5-кратную величину, причем пик также приходится на середину сухостоя.

Вскрытые закономерности позволяют считать с фундаментальных позиций цитологический экспресс-метод вполне приемлемым для диагностики субклинического мастита у коров как в конце лактации, так и на всем протяжении сухостойного периода (предпочтительно в его середине)

3.3.3 Биохимическая характеристика секрета вымени сухостойных коров в норме и при субклиническом мастите

В зарубежных программах контроля мастита лактирующих коров все большее применение находят биохимические методы диагностики скрытого мастита; привлекательным является высокая их достоверность и возможность автоматизации процесса исследования. В частности, предложено (T. Mattila, 1985) определять уровень сиаловых кислот и б₁ - антитрипсина - при мастите их содержание в 2-3 раза превышает норму.

Что касается сухостойных коров, то разработка биохимических методов не велась ввиду отсутствия сведений о биохимическом составе секрета вымени в различные фазы постлактационной инволюции молочной железы.

Наши исследования были направлены на выяснение различий секрета здоровых и пораженных субклиническим маститом долей вымени по следующим биохимическим показателям: гликопротеиды, ДНК и РНК, сиаловые кислоты, б₁ антитрипсин, n-ацетил-Я-D-глюкозаминидаза, иммуноглобулины, сывороточные белки, лактоза.

Секрет из долей вымени, пораженных субклиническим маститом, имел более низкий уровень гликопротеидов во все контролируемые сроки (соответственно на 60, 30, 150, 550, 490 мг/л), однако это снижение было статистически достоверным (Р < 0,01-0,001) лишь на 40-50-е сутки сухостоя.

Различия секрета неинфицированных и инфицированных долей вымени по содержанию ДНК и РНК не были достоверными из-за малой их величины и значительной вариабильности.

Гораздо больший интерес представляли сравнительные данные по сиаловым кислотам, поскольку количественное их определение используется в диагностике субклинического мастита лактационного периода.

В сухостой при субклиническом мастите концентрация сиаловых кислот была достоверно ниже во все контролируемые сроки (исключая 20-е сутки), причем наиболее контрастные различия имели место на 30-е и 50-е сутки: их содержалось в 1,6 и1,5 раза меньше по сравнению с нормальным секретом (Р < 0,001). Концентрация сиаловых кислот во все сроки исследований положительно коррелировала с уровнем гликопротеидов (r = 0,590 на 10-е и 20-е сутки; 0,489 - на 30-е и 0,479 - на 40-е и 50-е сутки).

Нами также обнаружены существенные межгрупповые различия по уровню альфа₁ -антитрипсина; на 10-, 20-, 30-, 40-, 50-е сут его содержание в секрете больных долей было выше соответственно в2,5; 2,52; 2,74 и 2,06 раза (Р < 0,001).

Концентрация n-ацетил-Я-D-глюкозаминидазы в нормальном секрете на 10-е сутки сухостоя составила 122,58 nмоль/л. По мере увеличения срока сухостоя оно продолжало нарастать с достижением максимума (400,0 n/моль/л) к 50-м сут. При субклиническом мастите была в 1,2-2,05 раза выше по сравнению с таковой здоровых долей (Р < 0,05-0,001).

Содержание сывороточных белков при субклиническом мастите по сравнению с нормальным секретом было ниже во все контролируемые сроки соответственно на 25,3; 44,2; 43,7; 57,1 и 34,2 г/л (Р < 0,01-0,05).

Концентрация иммунных глобулинов в нормальном секрете возросла с 52,6 г/л на 10-е сут до 129,1 г/л на 40-е сут сухостоя; в последующую декаду понизилась до 23,3 г/л. При субклиническом мастите количество иммуноглобулинов было достоверно ниже (Р < 0,01) во все исследованные сроки.

По остальным биохимическим показателям (лактоза, ДНК и РНК) межгрупповые различия были несущественными либо отсутствовали.

Из результатов исследований следует, что специфическими тестами в диагностике скрытого мастита сухостойных коров могут служить определение б₁-антитрипсина, n-ацетил-Я-D-глюкозаминидазы, иммуноглобулинов, сывороточных белков.

3.4 Разработка и экспериментальная оценка цитологического экспресс-метода диагностики субклинического мастита в постлактационный период

Выбор реагента для экспресс-диагностикума субклинического мастита осуществляли исходя из его доступности, приемлемой цены, универсальности, неприхотливости к условиям хранения. Перечисленным критериям в наибольшей мере отвечало жидкое моющее средство «Прогресс» производства Новочеркасского завода синтетических продуктов. Его состав представлен набором поверхностно-активных веществ, которые удачно дополняют друг друга.

Задача, прежде всего, состояла в том, чтобы подобрать нужную концентрацию жидкости «Прогресс» применительно к секрету вымени сухостойных коров. Оценочными показателями служили: 1 - процент совпадений тест-реакции с прямым подсчетом лейкоцитов; 2 - скорость завершения гелеобразования и плотность сгустка.

В узком эксперименте совпадение показателей тест-реакции с прямым подсчетом в секрете вымени было наиболее полным при использовании жидкости «Прогресс» М-20 в разведении 1:14 (табл. 1).

Рабочую концентрацию жидкости «Прогресс» в дальнейшем испытали на 40 сухостойных коровах. В качестве базы для сравнения использовали ранее предложенный нами визуальный метод и экспресс-диагностикум «Profilaktreagent» производства компании Westfalia Surge. Сопоставление проводилось путем постановки параллельных проб.

Таблица 1 - Соотношение показателей тест-реакции и числа лейкоцитов в секрете вымени сухостойных коров

Число проб	Показания тест-реакции с экспериментальным диагностикумом	Концентрация лейкоцитов, 109/л
5	Отрицательная	1,54 ± 0,08
5	Сомнительная	2,27 ±0,44
6	Положительная	2,996 ±0,11

Испытуемый метод обеспечил 95%-ное совпадение с визуальным методом. Profilactreagent уступал ему по чувствительности: четкая положительная реакция (2-3 креста) отмечена в 75% проб.

Сравнительная оценка двух диагностикумов по скорости гелеобразования показала, что при взаимодействии проб секрета из пораженных долей вымени с жидкостью «Прогресс» в разведении 1:14 гелеобразование длилось от 11 до 25 с (в среднем 15,5 ± 1,7 с), это в 3,5 раза быстрее по сравнению с прототипом (Р < 0,001).

3.5 Микроанатомические изменения в молочной железе сухостойных коров при мастите

При изучении гистоструктуры паренхимы здоровых долей вымени во вторую фазу постлактационных изменений (середина сухостоя) наиболее характерным было следующее: митоз клеток железистого эпителия альвеол, пролиферация клеточных элементов в междольковых выводных протоках; во внутридольковой соединительной ткани много фагоцитирующих лейкоцитов (нейтрофилы, макрофаги). Такая картина указывает на преобладание регенеративных процессов в паренхиме.

Микроскопия гистопрепаратов из долей вымени, пораженных субклиническим маститом, показала следующее. Железистый эпителий альвеол и малых выводных протоков в состоянии вакуолизации, кариолизиса и пикноза; просвет альвеол заполнен десквамированным эпителием либо клеточным детритом. Встречаются микроочаги воспаления продуктивного характера, они отделены от здоровых тканей демаркационной зоной. Местами виден разрост соединительной ткани; встречаются ретенционные кисты. Строма набухшая, находящиеся в ней кровеносные сосуды инъецированы.

Описанные выше патоморфологические изменения характерны для микроочагового катарального воспаления.

При гнойно-катаральном мастите констатировали разрост междольковой и и межальвеолярной ткани, очаги фиброза, зернистую дистрофию покровного эпителия молочных протоков. Альвеолы вытянутые, неодинакового размера, с истонченными стенками, лишены железистого эпителия; просвет заполнен клеточным детритом. Местами железистая ткань долек полностью замещена стромой. Таким образом, для гнойно-катарального мастита в период сухостоя характерны альтерация железистой ткани, пролиферация стромы, что приводит к полному замещению участков паренхимы соединительнотканными элементами.

3.6 Течение и исходы мастита сухостойных коров

На молочной ферме СООО АФ «Петродолинское» системный контроль состояния молочной железы коров перед запуском позволил выявить у 61 головы субклинический и у 17 голов - клинический мастит.

Наблюдая за спонтанным его течением на протяжении сухостойного периода выяснили следующее. Субклинический мастит у 24 голов (36,5%) персистировал до отела, у 26 (43,5%) перешел в клинический, у 11 голов (18,03%) исходом было самовыздоровление.

В 87,5% случаев переход субклинического мастита в клинический произошел в начале (первые 2 нед) сухостоя, между тем как все случаи самовыздоровления были приурочены к его середине.

В группе из 60 коров, вступивших в постлактационный период со здоровым выменем, заболело клиническим маститом в сухостой 4 головы. Таким образом, персистирующий субклинический мастит лактационного периода является основным источником клинического мастита сухостойного периода, увеличивая в 5,2 раза вероятность его возникновения.

Клинический мастит, обнаруженный в конце лактации (17 голов) и возникший в начале сухостоя (21 голова) персистировал до отела. За этот срок у восьми голов клинический мастит распространился на соседние здоровые доли, у одной осложнился флегмоной.

По результатам обследования молочной железы на 5-е сут после отела, исходами клинического мастита сухостойного периода были: индурация паренхимы (5 долей), заращение молочной цистерны (4 доли), облитерация молочных протоков (5 долей). У восьми голов произошло обострение процесса с переходом в гнойно-фибринозный мастит.

3.7 Мастит сухостойных коров как этиологический фактор диспепсии новорожденных телят

Диспепсия телят профилакторного периода имеет полифакторную этиологию. Приводя обширный перечень причин данной патологии специалисты по болезням молодняка (В.В.Митюшин, А.А.Аликаев, 1985; В.В.Митюшин, 1989) упускают из виду возможную этиологическую ее связь с маститом сухостойного периода у коров- матерей.

Правомерность такой постановки вопроса вытекает, с одной стороны, из значительного распространения мастита среди коров, находящихся в сухостое, а с другой - из ранее полученных нами данных (Л.Г.Роман с соавт., 1989), согласно которым «маститное» молозиво существенно отличается от нормального по ряду биохимических, иммунологических показателей и санитарному качеству. Так, «маститное» молозиво имело пониженное содержание сиаловых кислот, ДНК, РНК, лактозы, общего белка, сывороточных белков, иммуноглобулинов. В частности, содержание иммунолактоглобулинов было в 2,9 раза ниже по сравнению с молозивом здоровых коров. Сыворотка молозива из больных долей вымени имела лизоцимную активность 34,26% против 47,7% в контроле (Р < 0,05).

Критерием для суждения о санитарном качестве молозива служила общая микробная контаминация. В молозиве из больных долей микробное число составило 11,47 тыс./мл; это в 6,86 раза больше по сравнению со здоровыми долями (Р < 0,001).

Таким образом, по всем контролируемым параметрам молозиво больных коров отличалось от молозива здоровых животных. В связи с этим предстояло выяснить последствия использования такого молозива для выпойки телятам. С этой целью ежедневно вели наблюдения за четырьмя группами новорожденных телят, полученных: от коров со здоровым выменем (I группа), от коров-матерей, больных скрытым маститом (II), от коров, больных клиническим маститом (III), от коров, прошедших курсовое лечение по поводу мастита в конце сухостоя (IV).

Из приведенных в табл. 3 данных следует, что по группе телят, которым выпаивали молозиво от больных субклиническим маститом коров-матерей, заболеваемость диспепсией была в 3,21 раза выше (Р< 0,05) по сравнению с контрольной группой (выпойка молозива здоровых коров-матерей). При этом регистрировали в основном простую диспепсию, которая характеризовалась частой дефекацией, наличием водянистых фекалий неприятного запаха, с примесью слизи, при удовлетворительном общем состоянии; температура тела повышена незначительно - на 0,1-0,4⁰ С.

При своевременно начатом комплексном лечении такие животные на 5-7-е сутки выздоравливали. При выпойке молозива от коров-матерей, которые перенесли мастит в сухостойный период, но до отела прошли курс лечения, заболеваемость телят диспепсией снизилась с 38,5 до16%, то есть в 2,4 раза (Р < 0,05).

Таблица 3 - Заболеваемость телят диспепсией в зависимости от состояния молочной железы коров-матерей

Группа	n	Заболело диспепсией	Пало
		голов	%	голов	%
1	25	3	12,0	-	-
2	26	10	38,5	1	3,9
3	25	23	92,0	5	20,0
4	25	4	16,0	-	-

Если клинически выраженный мастит сухостойных коров сохраняется до отела, то с наступлением лактации накопленный в емкостной системе пораженной доли экссудат, будучи многократно разбавлен молозивом, обычно остается незамеченным. Поступление же продуктов воспаления в желудочно-кишечный тракт теленка приводит к тяжелым расстройствам пищеварения, с токсическими проявлениями и высоким процентом летальности. При использовании для выпойки телятам молозива коров-матерей, больных клиническим гнойно-катаральным маститом, заболеваемость их диспепсией в 7,67 раза превышала таковую контрольной группы (Р < 0,05), при этом пало 5 телят (20%). При выпойке телятам молозива от коров, больных клинически выраженным маститом, регистрировали в основном токсическую диспепсию. Она характеризовалась угнетенным состоянием, мышечной дрожью, адинамией. У больных телят была понижена кожная чувствительность, взьерошен волосяной покров, глаза запавшие, носовое зеркало сухое. При использовании для выпойки молозива коров-матерей с персистирующим субклиническим маститом диспепсией заболело 38,5% новорожденных телят, это в 3,1 раза больше, чем при выпойке молозива здоровых коров. Молозиво коров-матерей, больных клиническим гнойно-катаральным маститом, увеличило заболеваемость телят до 93%, причем диспепсия протекала с картиной токсемии и в 20% случаев завершалась летально.

3.8 Сроки лечения при субклиническом мастите в постлактационный период и биологическая полноценность молозива

Как следует из предыдущего подраздела, оценка эффективности лечения сухостойных коров при мастите должна включать полноценность молозива, безопасность для здоровья новорожденных. Это побудило нас провести биохимическую, иммунологическую, ветеринарно-санитарную оценку молозива первого и пятого дней лактации на коровах, прошедших курсовое лечение по поводу субклинического мастита в различные сроки (начало, середина, конец сухостоя). Базой для сравнения служили как здоровые животные, так и больные субклиническим маститом (без лечения).

У коров, оставшихся до отела больными, концентрация сывороточного альбумина и иммунных глобулинов в молоке первого удоя была на 1,54 и 10,4 г/л выше (Р < 0,05), а лактозы - на 16,13 г/л ниже (Р < 0,05) по сравнению со здоровыми.

В содержании общего белка, сывороточных белков, Я-лактоглобулинов и б-лактоглобулинов достоверные межгрупповые различия отсутствовали.

В молозиве 5-го дня лактации у больных и здоровых коров не выявлено достоверных различий по уровню сывороточных белков, Я-лактоглобулинов и б-лактоглобулинов, иммуноглобулинов, между тем как у больных общего белка и сывороточного альбумина содержалось на 29,74 и 0,5 г/л больше (Р < 0,001), а лактозы - на 22,25 г/л меньше (Р < 0,001).

У находившихся на лечении и выздоровевших животных биохимические показатели соответствовали таковым здоровых; исключение составляет повышенная концентрация сывороточного альбумина у коров, поставленных на лечение в конце сухостоя.

У здоровых коров фагоцитарная активность нейтрофилов в молозиве первого и пятого дней лактации была равна соответственно 14,3 и 18,8%; у больных - на 6,2 и 7,4% ниже (Р < 0, 05- 0,001 ).

В пробах молозива первого дня от коров, леченных в начале и середине сухостойного периода, значения этих показателей были близки к контролю; при лечении, проведенном в конце сухостоя, они оказались более низкими (Р <0,001). Однако к пятому дню лактации различия исчезали. Подобные результаты дало определение интенсивности фагоцитоза нейтрофилов, ИФ и АФ макрофагов.

У коров, леченных в конце сухостойного периода, отмечено достоверное снижение в молозиве первого удоя АФ и ИФ макрофагов - его кратность была равна 1,35 и 1,42 по отношению к здоровым животным. Эти различия прослеживались и на пятый день лактации.

Лизоцимная активность молозива первого удоя у здоровых коров находилась на уровне 47,71%, у больных субклиническим маститом - на 13,44% ниже (Р < 0,001). У прошедших курс лечения в начале, середине или в конце сухостоя, была снижена на статистически недостоверную величину.

Параллельно проводили бактериологическое исследование молозива подопытных коров. В молозиве первого удоя из здоровых нелеченных долей вымени микробное число составило в среднем 1629 м.т./мл; при неизлеченном скрытом мастите было в 6,86 раза больше. У прошедших курс лечения в сухостойный период микробное число составило 2006-2296 м.т./мл, что в 1,11-1,28 раза превышает базовый уровень. На пятый день лактации оно понизилось в 2-3 раза как в опытных, так и в контрольных группах.

Таким образом, коровы, прошедшие эффективный курс лечения по поводу мастита в постлактационный период, являются продуцентами биологически полноценного молозива.

3.9 Йодмастагель и его применение при постлактационном мастите коров

После отработки опытно-поисковым путем рецептуры и технологии изготовления йодмастагеля провели всестороннее его изучение; последнее включало определение физико-химических свойств, стабильности при хранении, безвредности, специфической активности, терапевтической и экономической эффективности при мастите коров.

При хранении образцов йодмастагеля на протяжении шести месяцев в прохладном месте (холодильник) либо при комнатной температуре его физико-химические характеристики (цвет, запах, однородность, вязкость, рН) оставались близкими к исходным.

Общее состояние подопытных животных после введения в здоровую долю вымени йодмастагеля находилось в физиологических границах; раздражающее действие на паренхиму вымени не прослеживалось.

Антибактериальный компонент йодмастагеля (йодвисмутсульфамид М) проверили на чувствительность к нему основных возбудителей неспецифического воспаления. Использовали паспортные штаммы Staph.aureus, Esch. сoli, а также смешанную микрофлору, выделенную из патологического секрета долей вымени, пораженных гнойно-катаральным маститом.

При высеве тест-культур на твердую питательную среду (МПА) йодвисмутсульфамид М проявлял выраженное бактериостатическое и умеренное бактерицидное действие. В жидкой инкубационной среде посевы становились стерильными после 24-часовой экспозиции.

По завершении данного этапа опыты перенесли на животных. Вначале в серии узких экспериментов определили наиболее эффективную разовую терапевтическую дозу йодмастагеля, кратность, интервалы и способ его применения при мастите сухостойных коров.

Опытно-поисковым путем была установлена терапевтическая доза в 10,0 мл, что соответствует 0,9 г действующего начала.

Достаточно эффективным и рациональным с экономической точки зрения оказалось 2-кратное, через 48-часовой интервал, введение йодмастагеля в вымя.

Исходя из того, что внутрицистернальный способ введения лекарственных веществ в вымя имеет недостатки (травмирование соскового канала, инокуляция извне микроорганизмов, раздражающее действие на паренхиму), провели поисковый опыт по трансдермальному его применению. Как выяснилось, он уступал базовому способу: разница составила 20,0% по числу выздоровевших животных и 28,5% - вылеченных долей вымени. Причина, как полагаем, состоит в том, что находящийся в составе йодмастагеля жировой компонент (вазелиновое масло) создает препятствие для проникновения активного компонента к патологическому очагу. Поэтому сосредоточились на производственной оценке йодмастагеля при внутривыменном его введении, используя в качестве базы для сравнения мастисан А-форте, а также ближайший аналог йодмастагеля - полимерйодвисмутсульфамид (ПИВС).

По материалам научно-хозяйственного опыта (табл. 4), при гнойно-катаральном мастите сухостойных коров монотерапия йодмастагелем позволила полностью устранить патологический процесс в 70,83% долей вымени; в остальных отмечено значительное улучшение.

Мастисаном А-форте за тот же срок (4 суток) вылечено долей на 16,3% меньше (Р < 0,001).

При субклиническом мастите результатом лечения йодмастагелем стало выздоровление 86,67% коров; патологический процесс устранен в 83,33% долей вымени. На этом фоне преференции перед мастисаном А-форте выразились как в более высоком проценте выздоровления, так и в отсутствии осложнений.

Терапевтическая эффективность ПИВС превысила таковую йодмастагеля соответственно на 6,6 и 8,9%. Поскольку действующим веществом обоих препаратов является йодвисмутсульфамид, отмеченную разницу можно объяснить высокой пенетрирующей способностью ПИВС, а также более щадящим (трансдермальным) способом его применения. При этом совокупные затраты на лечение оказались в 1,3 раза выше по сравнению с йодмастагелем, составив 12,1 грн на каждую вылеченную долю.

На этапе внедрения йодмастагеля учли результаты его применения в трех сельхозпредприятиях Одесской области, на 152 головах. Они оказались близкими к таковым научно-хозяйственного опыта, составив при субклиническом мастите 82,3% выздоровления животных и 84,6% - излечения долей вымени (при клиническом 73,8 и 78,9 соответственно).

Результаты апробации приведены в табл.5.

Таблица 4 - Сравнительная оценка терапевтической эффективности йодмастагеля при мастите сухостойных коров

группа	Голов в группе	Число пораженных долей	Средство монотерапии	Кратность применения	Выздоровело	Вылечено долей	осложнения
					голов	%	голов	%	голов	%
Гнойно-катаральный мастит
1	15	22	Йодмастагеля	3,98±0,15	9	60,0	17	70,83	-	-
2	15	24	ПИВС	2,53±0,21	13	86,67	23	92,0	-	-
3	15	25	Мастисан-А форте	4,08±0,15	7	46,67	12	54,55*	3	13,64
Субклинический мастит
1	15	24	Йодмастагеля	2	13	86,67	13	83,33	-	-
2	15	25	ПИВС	2	14	93,33	14	92,30*	-	-
3	15	23	Мастисан-А форте	2	10	66,67	10	65,22	4	17,4

Таблица 5 - Результаты производственной апробации йодмастагеля в качестве средства монотерапии при мастите сухостойных коров

Хозяйство	Прошло курс лечения	Выздоровело	Вылечено долей
	голов	долей вымени	голов	%	кол-во	%
Клинический мастит
СООО «АФ Петродолин-ское»	31	34	22	70,97	25	73,53
СООО «АФ Нива»	15	23	11	73,33	17	73,91
СПК «Родина»	38	52	29	76,32	44	84,61
Всего	84	109	62	73,81	86	78,90
Субклинический мастит
СООО «АФ Петродолин-ское»	27	41	22	81,48	34	82,92
СООО «АФ Нива»	13	20	11	84,62	18	90,0
СПК «Родина»	28	43	23	82,14	36	83,72
Всего	68	104	56	82,35	88	84,62

3.10 Фармакопрофилактика мастита у коров в постлактационный период с использованием ПАП

Решая вопрос фармакопрофилактики мастита у коров в наиболее уязвимую - дегенеративную фазу сухостоя, мы полагали, что предназначенное для этого средство, в отличие от известных, должно создавать двойную защиту нефункционирующей молочной железы от патогенов, а именно, препятствовать накоплению микроорганизмов на коже сосков, прежде всего в зоне соскового отверстия; помимо этого, блокировать их жизнедеятельность в сосковом отделе молочной цистерны, т.е. в первичном депо.