Усовершенствование комплексной фармакотерапии при остром послеродовом эндометрите бактериально-микозной этиологии

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ КОМПЛЕКСНОЙ ФАРМАКОТЕРАПИИ ПРИ ОСТРОМ ПОСЛЕРОДОВОМ ЭНДОМЕТРИТЕ БАКТЕРИАЛЬНО-МИКОЗНОЙ ЭТИОЛОГИИ

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Основой для успешного развития отрасли скотоводства является воспроизводство стада, которое обуславливается, прежде всего, внедрением индустриальных методов ведения отрасли, связанных с характерными особенностями ее промышленной технологии. Особое внимание уделяют организации мероприятий направленных на профилактику бесплодия сельскохозяйственных животных. Одной из основных причин, приводящих к бесплодию, является неспецифическое воспаление слизистой оболочки матки у коров (А.П. Студенцов с соавт., 1980; Е.В. Ильинский, 1983; А.Г. Нежданов, 1990; М.В. Назаров, 1997; В.Г. Гавриш, 1998; А.Н. Турченко, 1999; И.А. Родин, 2002).

Причины и, формы бесплодия коров многообразны, их соотношение в различных хозяйствах и регионах, в различные годы очень варьирует. Однако отмечено значительное преобладание симптоматического бесплодия у коров на почве гинекологических заболеваний. В числе последних ведущее место занимают эндометриты (А.П. Студенцов, 1961; Е.В. Ильинский, 1972; В.Я. Никитин, 1973; Д.Д. Логвинов, 1975; Г.В. Зверева, С.П. Хомин, 1976; А.Я. Батраков, 1980; А.Г. Нежданов, М.Т. Коняев, 1982; Г.А. Черемисинов, 1988; В.Д. Мисайлов, 1990; И.Ф. Заянчковский, 1991; С.Н Слипченко, 1994; М.В. Назаров, 1997; В.Г. Гавриш, 1997 В.И. Михайлев, 2001; И.Г. Конопельцев, А.В. Филатов(2001), А.В. Андреева, 2003; М.В. Бирюков, 2005 J. Varejcke, 1964; A. Vuyst et al., 1966; P.M. Summers et al., 1974; K. Arbaeter, 1976; И. Илев, Г. Георгиев, 1976; F. Klug et al., 1988 и др.) Cимптоматическое бесплодие коров, обусловленное воспалением эндометрия и проявляющееся в неспособности к осеменению, оплодотворению и плодоношению отмечается при переходе острого эндометрита в хроническую форму течения и часто бывает связано с нерациональным лечением больных животных.

Острое воспаление эндометрия у коров, в основном, проявляется как осложнение течения послеродового периода вследствие эндо - или экзогенного инфицирования слизистой оболочки матки условно патогенной микрофлорой (бактериями, грибами). Удельный вес острого послеродового эндометрита весьма велик во всех странах мира.

Способствующими факторами возникновения острого послеродового эндометрита у коров являются погрешности их кормления и содержания во время беременности (особенно в период сухостоя) и после родов. Неблагоприятные условия существования животных ведут к нарушению обмена веществ, ослаблению общей резистентности организма и локального иммунитета матки, благоприятствуя проявлению болезнетворного влияния микроорганизмов, проникших в половые пути, в послеродовом периоде

С учетом изложенного очевидна необходимость организации профилактики острых послеродовых неспецифических эндометритов у коров, а при их возникновении - своевременного выявления больных животных и их рациональное лечение, обеспечивающее недопущение перехода острого воспалительного процесса в хроническое воспаление, при котором возможны необратимые структурные изменения в эндометрии.

Известно, что в связи со значительным распространением на фермах хозяйств лекарственно-устойчивых штаммов условно патогенных микробов, (в частности к антибиотикам и сульфаниламидами) эффективность лечения с применением широко используемых антимикробных препаратов заметно снизилась. Это побуждает к дальнейшему изучению этиопатогенеза острого послеродового эндометрита бактериально-микозной этиологии у коров, разработке, научному обоснованию и испытанию новых более эффективных антимикробных препаратов комплексного лечебного действия не содержащих антибиотиков и сульфаниламидов.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилась усовершенствование комплексных лечебных мероприятий при неспецифическом остром послеродовом эндометрите у коров бактериально-микозной этиологии. Для достижения указанной цели, к решению ставились следующие основные задачи:

1. Изучить степень распространения острого послеродового эндометрита бактериально-микозной этиологии у коров.

2. Выявить особенности этиологии и клинического проявления неспецифического острого послеродового эндометрита у коров бактериально-микозного характера, изучить влияние моциона на течение послеродового периода у коров.

3. Разработать новые эффективные антимикробные препараты комплексного лечебного действия, обосновать их применение, провести экспериментальную и клиническую оценку лечебной эффективности при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите у коров бактериально-микозной этиологии.

4. Разработать новый тканевый препарат, обладающий комплексным патогенетическим действием, для применения при остром послеродовом эндометрите у коров бактериально-микозной этиологии, обосновать его применение, провести экспериментальную и клиническую оценку лечебной эффективности.

5. Разработать и дать экспериментальное обоснование и клиническую оценка терапевтической эффективности комплексного лечения и профилактики острого гнойно-катарального эндометрита бактериально-микозной этиологии у коров.

6. Разработать комплексную систему организации терапевтических мероприятий при эндометрите бактериально-микозной этиологии

Научная новизна. Определены особенности этиопатогенеза, степень

распространения неспецифического острого послеродового эндометрита бактериально-микозного характера, его влияние на воспроизводительную функцию у коров. На основе полученных данных предложена комплексная схема профилактики и лечения острого послеродового эндометрита у коров бактериально-микозной этиологии.

Разработаны 3 новых высокоэффективных противомикробных препарата комплексного действия (Эндотон, Бромацид, Фупэдин). Для их внутриматочного введения при остром послеродовом эндометрите у коров бактериально-микозной этиологии. Дана экспериментально-клиническая оценка терапевтической эффективности и безвредности этих препаратов,

Разработан новый тканевый препарат комплексного лечебного действия из плаценты - «Микробиостим», впервые дана экспериментально-клиническая оценка его терапевтической эффективности и безвредности при эндометрите и дисфункции гениталий у коров.

На предложенные препараты разработана и в установленном порядке утверждена необходимая нормативно-техническая документация (технические условия, инструкции по изготовлению и контролю препаратов, наставления по их применению).

Практическая значимость работы. Результаты проведенных научных исследований по выяснению этиологии неспецифического острого послеродового эндометрита бактериально-микозной этиологии у коров явились теоретической основой усовершенствования мероприятий по профилактике и лечению осложнения послеродового периода с острым воспалением эндометрия. Осуществление этих мероприятий позволит снизить затраты на лечение больных животных.

Предложенные новые антимикробные препараты, не содержащие антибиотики, а также тканевый препарат обеспечивают повышение эффективности лечения коров с неспецифическим острым послеродовым эндометритом бактериально-микозной этиологии, предупреждают развитие воспаления слизистой оболочки матки. Применение указанных препаратов по разработанным нами схемам профилактики и лечения способствует профилактированию распространения в стаде коров острого послеродового эндометрита бактериально-микозной этиологии. В связи с этим создаются реальные предпосылки снижения уровня симптоматического бесплодия крупного рогатого скота и наносимого яловостью коров экономического ущерба, повышения рентабельности молочного скотоводства.

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации доложены на:

- международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию организации Всероссийского НИВИ патологии, фармакоголгии и терапии г. Воронеж, 2005 г.;

- международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ г. Краснодар, 2006 г.;

- международная научно-практическая конференция, посвященная 40-летию кафедры акушерства Ставропольского ГАУ, 2007 г.

- международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию факультета ветеринарной медицины г. Махачкала 2008 г.;

- международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора В.А. Акатова г. Воронеж 2009 г.

- производственных совещаниях ветеринарных специалистов Краснодарского края 2004-2009 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 37 научные работы, в числе которых 1 решение о выдаче патента на изобретение.

Основные положения выносимые на защиту:

1. Распространение, особенности этиологии и проявления острого послеродового эндометрита бактериально-микозной этиологии в стадах коров при индустриальной технологии ведения молочного скотоводства с круглогодовым стойловым содержанием крупного рогатого скота в условиях Краснодарского края.

2. Научно обоснованные рекомендации по усовершенствованию профилактики острого послеродового эндометрита бактериально-микозной этиологии у коров при ведении молочного скотоводства на промышленной основе.

3. Материалы разработки и экспериментально-клинической оценки трех антимикробных препаратов (Эндотон, Бромацид, Фупэдин) и нового тканевого препарата из плаценты (Микробиостим), предложенных к использованию при лечении коров, больных неспецифическим острым послеродовым эндометритом. А также для профилактики осложнения течения послеродового периода с целью недопущения симптоматического бесплодия животных.

2. Материалы и методы исследования

Работа выполнялась с 2000 по 2008 год в условиях лаборатории акушерства и гинекологии сельскохозяйственных животных Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института, на базе 11 хозяйств 7 районов Краснодарского края. Работа выполнялась по государственной тематике РАСХН, задание №…………

В проведении отдельных лабораторных исследований принимали участие Е.В. Кузьминова, Н.Ю. Басова и др.

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому исследованию по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания, животных в период проведения работы и учета результатов. При постановке опытов были использованы токсикологические, фармакологические, физиологические, клинические, биохимические, морфологические, иммунологические и другие методы исследований

Клинико-гинекологическому исследованию по общепринятой методике подвергнуто 11124 отелившихся коров, из них у 297 животных проведены гематологические, биохимические, иммунобиологические исследования. Для микробиологических исследований использовано 790 проб маточных выделений коров больных острым послеродовым эндометритом. Для проведения биологических и токсикологических исследований препаратов было использовано 475 белых мышей, 255 белых крыс, 5 кроликов.

Степень распространения острого послеродового эндометрита бактериально-микозной этиологии учитывали в зависимости от сезона года. Для своевременного выявления коров с острыми эндометритами в послеродовом периоде мы применяли методику гинекологической диспансеризации, предложенную В.А. Акатовым (1973) и Н.И. Полянцевым (1989)

Животных с нормальным течением родов первый раз обследовали на второй день после отела, а затем каждые пять дней до полного восстановления матки; определяли сроки восстановления родополового аппарата, а также сроки проявления течки и охоты.

Состояние половых органов определяли клиническими методами, которые подразделялись на наружные, вагинальные и ректальные исследования.

При наружном исследовании устанавливали состояние вульвы, наличие или отсутствие выделений из половых органов их цвет, запах и консистенцию.

Вагинальные исследования проводили с помощью влагалищного зеркала с осветителем. При этом учитывали состояние слизистой оболочки влагалища и влагалищной части шейки матки, их целостность, положение шейки матки и степень раскрытия ее канала, а также характер и объем маточных выделений.

Ректальным исследованием устанавливали величину, форму матки и рогов, наличие в них содержимого, тонус маточной стенки, а также определяли величину яичников и наличие в них фолликулов или желтых тел.

Кровь для исследований от коров брали дважды: первый раз при постановке животного на курацию, второй-при выздоровлении животного. При гематологических исследованиях определяли количество эритроцитов и лейкоцитов, выводили лейкоформулу по В.Г. Мухину, содержание гемоглобина (гемоглобинцианидным методом), высчитывали цветовой показатель, СОЭ в аппарате Панченкова, характер лейкограммы (микроскопией окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках крови). Биохимические исследования состояли из определения в сыворотке крови общего белка (колориметрически), белковых фракций (нефелометрически), мочевины (цветной реакцией с диацетилмонооксимом и тиосемикарбазидом), общего кальция (с орто-кризолфталеином), неорганического фосфора (с ванадат-молибдатным реактивом), глюкозы (ферментативно). Активность трансаминаз, щелочной фосфатазы, билирубин, - с помощью наборов фирмы «ДДС».

Для определения факторов неспецифической резистентности использовали тест бактериального фагоцитоза нейтрофилов с учетом степени его завершенности по отношению к бактериям Staphylococcus aureus (№209 Р) по И.В. Нестеровой с соавт. (1996). Бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) определяли по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), лизоцимную (ЛАСК) - по Д.Г. Дорофейчук, Т-, В-, NК-лимфоциты методом Пирса в модификации Н.Н. Гугушвили с соавт. (2000) с прочным синим и нафтилацетатом.

Для микробиологических исследований маточные истечения получали по методике Н.Н. Михайлова, М.А. Лучко и З.С. Конновой (1967). С целью определения состава микрофлоры матки осуществляли посев полученного материала на МПА, МПБ, кровяной агар, МПА с 1% глюкозы, среды Эндо, Сабура, кандида агар сусло-агар и др. Идентификацию изолированных микроорганизмов проводили с учетом их морфологических, культуральных свойств по общепринятым методикам. Для определения вида бактерий использовали пластины биохимические дифференцирующие энтеробактерии и стафилококки научно-производственного объединения «Диагностические системы», г. Нижний Новгород, углеводные среды Гиса. Видовую принадлежность бактерии устанавливали, руководствуясь «Определителем бактерий» Берги (1980) и рекомендациями Н.Н. Михайлова (1983), В.М. Карташовой с соавт. (1988), а грибов - «Определителем патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов» (1979) и также «Атласом грибов патогенных для сельскохозяйственных животных и птиц» (1953). Патогенность микроорганизмов изучали путем внутрибрюшного заражения белых мышей одномиллиардной взвесью смыва суточной агаровой культуры в дозах 0,2-0,5 мл (200-500 млн. микробных клеток).

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам проводили на среде АГВ путем наложения стандартных дисков с антибиотиками. Антибактериальные средства лекарственных препаратов изучали луночным методом диффузии в агар (Е.А. Тебякин, С.М. Чайковская, 1959). Оценку чувствительности осуществляли по диаметру зоны задержки роста тест-культур.

Пробы воздуха в животноводческих помещениях брали по методу Г.К. Волкова (1978).

Ультразвуковое исследование матки коров проводили на сканере Draminski animal profi со следующими техническими характеристиками: монитор - ЛЦД, диагональ 16,26 см (6,4 дюйма); память_200 изображений с датой, временем и номерами животных; тип зонда (частота) - ректальный секторный (5,0 МГц); угол сканирования: 180є (ректальный).

Испытания разработанных нами препаратов включали их экспериментальную и клиническую оценку.

Экспериментальная оценка препаратов предусматривала следующие исследования: а) изучение физико-химических свойств; б) определение стабильности и срока годности; в) изучение специфического действия; г) определение безвредности.

При изучении физико-химических свойств препаратов определяли: цвет, запах, консистенцию (органолептически), плотность или удельную массу (ареометром), рН (Piccolo plus), а также подлинность составных компонентов рекомендуемыми химическими методами, предусмотренными техническими условиями. В необходимых случаях определяли содержание свободного формалина в основе препарата по Т.Н. Кастериной с соавт. (1963).

Определение стабильности и установление срока годности препаратов проводили по изменению внешнего вида, физико-химических свойств, антимикробной активности (для противомикробных препаратов), биологической активности (для тканевого препарата из плаценты) при различных режимах и сроках хранения.

Определение срока годности и старение препаратов проводили в соответствии с Временной инструкцией по проведению работ с целью определения срока годности лекарственных средств на основе метода ускоренного «старения» при повышенной температуре №42-2-82 Минздрава СССР (1983 г.), а также по показателям качества препаратов по истечении 1, 3, 6, 9, 12, 15 и 18 месяцев хранения.

Изучение специфического действия антимикробных препаратов включало: 1) установление антибактериальных и антимикозных свойств методами диффузии в агар с образованием лунок и последовательных серийных разведений в МПБ с использованием в качестве тест-микробов выделенных из матки больных эндометритом коров микробных культур; 2) определение противовоспалительного действия путем накожных аппликаций испытуемых препаратов на область экспериментально вызванного термическим и химическим факторами воспаления кожи и подкожной клетчатки у кроликов и морских свинок (по Ж.И. Абрамову, 1954), учитывая при этом степень развития и время исчезновения воспалительной реакции); 3) определение влияния на регенеративные процессы по скорости заживления экспериментальных кожно-мышечных ран в области спины у морских свинок и белых крыс после нанесения на их поверхность испытуемых препаратов (по Л.З. Пономаревой-Астраханцевой, 1954).

Биологическую активность препарата из плаценты («Микробиостим») определяли по рекомендуемой методике (Д.Ф. Осидзе, 1981) на инфантильных самках белых мышей.

Фармакокинетику антимикробных препаратов путем выявления остаточного количества их основных активно действующих веществ в крови и молоке определяли по методике Д.К. Крастыня и А.Б. Мичулиса (1982) фотоэлектрокалориметрически.

Утеротоническое действие препаратов осуществляли баллонным методом (по В.С. Шипилову); с учетом силы, продолжительности и частоты маточных сокращений устанавливали индекс маточной контрактации по Доске (1958).

Безвредность препаратов изучали путем установления их «острой» и «хронической» токсичности, раздражающего и аллергогизирующего действия, влияния на муцины маточной слизи и морфофункциональное состояние эндометрия.

Изучение острой токсичности препаратов проводили на белых мышах и крысах в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» (извлечения из нормативных и методических документов, утвержденных МЗ СССР, ВАСХНИЛ и ГУВ Госагропрома СССР, 1988). Выбор изучаемых доз препаратов при их пероральном, внутрибрюшном и подкожном введении и расчет среднесмертельной их дозы (ЛД₅₀) осуществляли по Г.Н. Першину.

Хроническую токсичность препаратов изучали при их длительном применении в лечебных и повышенных дозах лабораторным животным и больным эндометритом коровам. В частности, безвредность проверяли на коровах спустя 6-12 дней после отела острым послеродовым эндометритом; препарат вводили внутриматочно в лечебной дозе и дозах, превышающих последнюю в 3,5 и 10 раз. За животными в течение месяца вели систематическое наблюдение с регистрацией их общего состояния, аппетита, измерением температуры тела, частоты пульса и дыхания, суточных удоев.

Влияние препаратов на слизистую оболочку матки при их внутриматочном введении коровам изучали путем гистологических исследований органа и цитологических исследований окрашенных мазков-отпечатков маточных истечений.

В рекогносцировочных опытах на больных острым эндометритом коровах устанавливали оптимальные лечебные дозы разработанных препаратов.

Клиническую оценку терапевтической эффективности предложенных препаратов в сочетании с другими лечебными приемами осуществляли в сравнительном аспекте в серии научно-хозяйственных. При этом в контрольных группах в качестве базового лечения использовали традиционные ранее предложенные лекарственные средства этиотропной, патогенетической и заместительной терапии.

В опытах, в сравнении с общеизвестными антимикробными препаратами (рихометрин, лозеваль, палочки йодопена, эндометромаг_Т, бромацид, фуразолидоновые палочки, йодовет, 5% суспензия фуразолидона, 1,5% раствор ваготила), определяли терапевтическую эффективность эндотона и фупэдина вводимых внутриматочно на фоне идентичных в опытных и контрольных группах коров других лечебных приемов (инъекций раствора окситоцина или утеротона, тканевых препаратов ПДЭ согласно имеющимся наставлениям), при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите у коров, как наиболее распространенной форме неспецифического воспаления эндометрия. В дополнение к этому изучали возможность использования этих препаратов после патологических отелов с целью профилактики острого послеродового эндометрита.

В связи с тем, что весьма часто острый послеродовый эндометрит развивается у коров после отделения задержавшегося последа или на фоне субинволюции половой сферы, а также с учетом осложнения воспаления эндометрита дисфункцией (гипофункцией) яичников возникла необходимость в серии специальных научно-производственных опытов определить эффективность при указанных патологических процессах препарата «Микробиостим» в сравнении с его аналогом ПДЭ для предупреждения симптоматического бесплодия у крупного рогатого скота.

Основным критерием оценки терапевтической эффективности испытуемых препаратов явилось восстановление в возможно короткие сроки у леченных животных их воспроизводительной способности. При этом принимали во внимание продолжительность курса лечения, сроки исчезновения выраженных признаков заболевания или возможного предотвращения их проявления, сроки возобновления половых циклов и полноценность, оплодотворяемость подвергнутых лечению после первого и последующих осеменений, индекс оплодотворения (осеменения), продолжительность бесплодия.

Экономический ущерб, наносимый заболеваниями половой сферы у коров, экономическую эффективность лечебно-профилактических мероприятий определяли согласно утвержденной Главветупром СССР в 1982 г. «Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий». Цифровой материал подвергали биометрической обработке в соответствии с рекомендациями И.А. Ойвина (1960) и Н.А. Плохинского (1970) с использованием ЭВМ «Pentium_4».

3. Результаты собственных исследований

3.1 Распространение острого послеродового эндометрита бактериальной и бактериально-микозной этиологии

По данным наших исследований заболеваемость отелившихся коров острым послеродовым эндометритом в среднем составляет 46,0% коров.

В своих исследованиях мы установили, что заболеваемость коров неспецифическим послеродовым эндометритом имеет определенный сезонный характер. Наибольшее количество животных заболевает в зимне-весенний период, что составляет 48,2 - 59,4% от общего количества отелившихся коров, а в летне-осенний период - 34,7-41,2% соответственно

Нами установлено, что сезонное проявление эндометрита бактериальной этиологии отличается от эндометрита бактериально-микозной этиологии. Эндометрит бактериальной этиологии наиболее часто проявляется в зимне-весенний период, в который переболевает от 40,0 до 67,3% отелившихся коров, а пик заболеваемости эндометритом бактериально-микозного характера приходится на летние месяцы от 19,9 до 22,2%.

Проведенный анализ заболеваемости коров острым гнойно-катаральным эндометритом на промышленной ферме показал, что процент заболевания составляет от 30,6%-59,9%, а на фермах с традиционной системой содержания 18,4%-39,1%. Причем процент заболеваемости коров эндометритами бактериально-микозной этиологии, на фермах с традиционной системой содержания ниже и составляет 6,3-14,3%, против 9,8-22,9% - на промышленных фермах

3.2 Роли микробного фактора в этиопатогенезе послеродового эндометрита

При микробиологическом исследовании маточного содержимого от 250 коров, больных острым гнойно-катаральным послеродовым эндометритом, и течковой слизи от 200 здоровых животных выделено 20 видов микроорганизмов, всего 501 культура.

У животных больных острым гнойно-катаральным послеродовым эндометритом микрофлора выделялась в ассоциациях у 220 коров (88%) Чаще всего встречались следующие ассоциации бактерий и грибов в исследуемом материале: Staph. аureus + E. coli - 53 (24,0%), Staph. аureus + E. coli + P. vulgaris, mirabilis - 43 (19,5%), E. coli + P. vulgaris, mirabilis - 34 (15,5%), K. pneumoniae + Staph. аureus + E. coli - 17 (7,7%), K. pneumoniae + E. coli - 13 (5,9%), Str. pyogenes + P. vulgaris, mirabilis + Candida albicans - 11 (5,0%), Staph. аureus + E. coli + Candida albicans - 11 (5,0%), Staph. аureus + P. vulgaris, mirabilis + Candida albicans - 10 (4,5%), E. coli + P. vulgaris, mirabilis + Candida albicans - 6 (2,7%), E. coli + P. vulgaris, + Candida albicans + Aspergillus fumigatus - 5 (2,2%), Staph. аureus + E. coli + Candida albicans + Aspergillus fumigatus - 5 (2,2%), Staph. аureus + P. vulgaris + E. coli + Candida albicans + Aspergillus fumigatus + Mucor racemosus - 2 (1%), другие микробные ассоциации - 10 (4,5%) случаев (рисунок 5). А в монокультуре (рисунок 6) микрофлору выделяли в 12%: Staph. aureus у 20 (66,7%) коров, E. coli - 6 (20%), P. vulgaris, mirabilis - 4 (13,3%). Из них гемолитической активностью обладали 271 культура (54,1%), были патогенны для лабораторных животных, 190 культур (37,9%), давали положительную реакцию плазмокоагуляции - 40 культур (7,9%).

Из вышеизложенного следует, что микробный фон матки представлен разнообразными видами условно-патогенных микроорганизмов, которые являются одной из непосредственных причин острого воспаления матки животных.

3.3 Микробный фон воздушной среды животноводческих помещений

Для того чтобы определить идентичность видового состава микроорганизмов воздушной среды животноводческих помещений и содержимого матки коров, больных острым послеродовым эндометритом, находящихся в этих же помещениях, были взяты пробы воздуха в корпусах и пробы маточного содержимого коров.

Наиболее часто выделяли как из воздушной среды, так и из содержимого матки коров больных острым послеродовым эндометритом, культуры энтеробактерий в 52,4% и 44,5% соответственно. Изоляты стафилококков выделены из воздушной среды животноводческих помещений в 25,4%, из содержимого матки коров, больных острым эндометритом 33,3% случаев. Культуры стрептококков выделяли из воздушной среды животноводческих помещений 13,3%, из содержимого матки коров в 12,2% Культуры грибов выделяли, как из воздушной среды животноводческих помещений, так и из содержимого матки коров, больных острым эндометритом в 8,7% и 9,9% соответственно.

Таким образом, микрофлора, выделенная из воздушной среды животноводческих помещений и из половых органов коров больных острым гнойно-катаральным эндометритом в основном идентична и является одним из источников контаминации репродуктивных органов у коров в процессе родов и в послеродовом периоде, когда половые пути их открыты и доступны для проникновения в них болезнетворных микробов.

3.4 Патогенез острого послеродового эндометрита бактериально-микозной этиологии у коров

Строение полового аппарата самок сельскохозяйственных животных делает доступным проникновение микробов в полость влагалища, а при определенных условиях и в вышележащие отделы - матку и яйцеводы. Развитию инфекции в полости матки способствует, в первую очередь, общее ослабление организма животного, плохие условия содержания и кормления. Патогенные бактерии и грибы могут проникать в полость матки экзогенным, гематогенным или лимфогенным путем и вызывать воспалительный процесс при наличии соответствующих условий, вызывающих нарушение барьерных функций слизистой оболочки влагалища и матки. При проникновении патогенных микроорганизмов в матку, патологические изменения начинаются с ее тела, затем процесс переходит на рога, стенки матки воспаляются и утолщаются, слизистая оболочка набухает. В ее полости скапливается густой или жидкий гнойный экссудат. В каудальной части влагалища и краниальной части шейки матки наблюдаются полосчатые кровоизлияния.

Развитие воспалительного процесса в матке зависит от течения родов. При патологическом течении родов (задержание последа, родовспоможение) процент заболеваемости коров эндометритом выше по сравнению с животными с нормальным течением родового процесса.

Динамика развития бактерий и грибов в матке коров после отела

При изучении видового состава микрофлоры маточного содержимого коров с нормальным течением родового процесса установлено, что в первый день после родов из маточных истечений у 20% животных микрофлора не выделена, у остальных 80% коров половые органы контаминированы различной непатогенной микрофлорой: Staph. аureus - 25%, E. coli - 46%, K. рneumoniae - 18%, Str. pyogenes - 10%. У коров с задержанием последа содержимое матки в 100% контаминировано различными условно-патогенными микроорганизмами: Staph. аureus - 26%, E. coli - 46%, Pr. mirabilis - 14%, K. рneumoniae - 8%, Str. pyogenes - 5%.

Динамику развития микрофлоры в матке коров мы отслеживали до 15 дня после отела и установили, что родополовой аппарат коров после отела, в основном, несвободен от условно-патогенной микрофлоры. Бурный рост микроорганизмов в родополовом аппарате коров с задержанием последа происходит, в основном, на 3-5 день, а у коров с нормальными родами - на 7-9 день. Отмечено, что у коров с задержанием последа культуры грибов выделяются из маточного содержимого уже на 5_й день после родов, а у коров с нормальным течением родового процесса культуры грибов изолируются из маточных истечений на 9_й день после родов и все эти животные были больны эндометритом.

Изучение роли неспецифической иммунобиологической резистентности организма в этиопатогенезе послеродового эндометрита у коров

Нами был проведен опыт в на животных черно-пестрой породы 8 месяцев стельности. Все животные находились на общехозяйственном рационе и имели одинаковые условия содержания. У всех животных брали кровь для общего и иммунологического анализа. После отела за животными вели наблюдения и отмечали тех животных, у которых проявлялись признаки острого гнойно-катарального эндометрита. Животные были разделены на 2 группы в зависимости от показателей крови.

Из полученных материалов, явствует, что животные 8 месяцев стельности, у которых количество лейкоцитов было выше в среднем на 2,1х10¹²/л и лимфоцитов на 4,1%, а так же пониженное количество сегментоядерных нейтрофилов на 7%, фагоцитарная активность нейтрофилов и фагоцитарное число понижено в среднем на 15,9 и 0,9 соответственно, а так же понижено количество Т и В-лимфоцитов на 13,8 и 11,6 процента заболеваемость эндометритом составила 92,3%. Коровы, у которых эти показатели находились в пределах физиологической нормы, заболели острым послеродовым эндометритом в 7,4%.

Таким образом, заболеваемость коров острым послеродовым эндометритом напрямую зависит от уровня неспецифической резистентности организма.

Влияние активного моциона на течение послеродового периода у коров

Нами было проведено 2 опыта для определения значения моциона в профилактике акушерско-гинекологических болезней у коров в первом опыте было задействовано 332 животных - 172 коровы (опытная группа), которые находились на беспривязном содержании и могли свободно передвигаться по базу, прилегающему к корпусу, а животные, которых отнесли к контрольной группе (160 коров), выгула в базу не имели, но находились на беспривязном содержании. (таб. 1)

Таблица 1 - Особенности течения послеродового периода у коров в зависимости от наличия моциона

Система содержания	Кол-во отелив-шихся коров	Нормальное течение послеродового периода	Заболевание гениталий в послеродовом периоде
			Воспаление матки	Дисфункция яичников
		Жив.	%	Жив.	%	Жив.	%
Беспривязное содержание (контроль)	172	37	21,5	86	50,0	49	28,5
Беспривязное содержание+ моцион в базах (опыт)	160	65	40,6	63	39,4	32	20,0

Во втором опыте было задействовано 807 животных, в контрольной группе находилось 489 коровы, которые постоянно находились на пассивном моционе (в корпусе и на выгульной площадке). В опытной группе (318 голов), животным предоставлялся с марта по декабрь систематически активный моционом, а в зимний период - в летних базах. (таб. 2)

Таблица 2 - Особенности течения послеродового периода у коров в зависимости от наличия активного моциона

Система содержания	Кол-во отелив- шихся коров	Нормальное течение послеродового периода	Заболевание гениталий в послеродовом периоде
			Воспаление матки	Дисфункц. яичников
		Жив.	%	Жив.	%	Жив.	%
Без активного моциона	489	171	34,9	196	40,0	122	24,9
С постоян ным активным моционом	318	204	64,1	67	21,0	47	14,7

Обобщая результаты опытов, по определению влияния гиподинамии на возникновение расстройств репродуктивного аппарата у коров, можно отметить, что из 649 отелившихся коров и содержащихся на пассивном моционе (корпус-баз) нормальное течение послеродового периода обнаруживается у 236 (36,4%) животных. Причем наличие воспалительных процессов в матке выявили у 259 животных (39,9%), а функциональные расстройства яичников - у 154 коров (23,7%). В то же время у коров находящихся в условиях содержания с постоянным активным моционом, нормальное течение послеродового периода отмечается после отела у 64,1% животных, воспалительные процессы в матке выявлены только 21,0% коров, а дисфункция яичников - у 14,7% животных. В группе животных, которая находилась на беспривязном содержании в корпусе и не имела возможности моциона на выгульных дворах процент воспалительных процессов в матке и дисфункций яичников был наиболее высокой (78,5%). Причем доля воспалительных процессов в матке составляла 50,0%, а дисфункции яичников - 28,5%

Следовательно, гиподинамия животных, присущая для молочных комплексов, ведет к осложнению течения послеродового периода развитием острого неспецифического эндометрита и дисфункцией яичников. Активный моцион коров, особенно во время сухостоя и после отела, способствует предупреждению возникновения острого послеродового воспаления эндометрия.

3.5 Клинические признаки острого послеродового эндометрита бактериально-микозной этиологии

В хозяйствах Краснодарского края по нашим наблюдениям, среди разных форм острого послеродового эндометрита у коров наиболее высокий процент составляет эндометрит катарально-гнойного характера - в среднем 75%; катаральный эндометрит - 14%; фибринозный эндометрит - 7%, некротический метрит - 4%.

У животных, больных катарально-гнойным эндометритом бактериально-микозной этиологии, наблюдали увеличение температуры тела (превышала верхнюю границу нормы на 0,5-1⁰С) у 91% коров, что на 64% животных больше по сравнению с коровами, больными эндометритом бактериальной этиологии. Пульс учащен (на 10-15 уд/мин.) у 81% животных, больных эндометритом бактериально-микозной этиологией, что на 52% коров больше по сравнению с животными, больными эндометритом бактериальной этиологии. У этих животных регистрировали снижение аппетита и молочной продуктивности. У коров с эндометритом бактериально-микозной этиологии на слизистой оболочке влагалища четко выражены белые рыхлые пленки.

У коров, больных фибринозным эндометритом бактериально-микозной этиологии, наблюдали увеличение температуры тела (температура тела превышает верхнюю границу нормы на 1-2⁰С) у 93% коров, что на 57% коров больше по сравнению с животными, больными эндометритом бактериальной этиологии. Учащение пульса (на 15-20 уд/мин.) наблюдали у 85% животных, что на 40% коров больше по сравнению с животными, больными эндометритом бактериальной этиологии. А также у коров с эндометритом бактериально-микозной этиологии на нижней части поверхности слизистой оболочки влагалища отмечали наличие белых рыхлых пленок, которые полностью отсутствовали у коров, больных эндометритом бактериальной этиологии. У больных животных отмечали потерю аппетита и молочной продуктивности.

У животных при некротическом воспалении матки бактериально-микозной этиологии наблюдали увеличение температуры тела и пульса (температура тела превышает верхнюю границу нормы на 1,5-2,5⁰С, пульс - на 20-25 уд/мин.) у 100% животных, что на 20% коров больше по сравнению с животными, больными эндометритом бактериальной этиологии. При эндометритах бактериально-микозной этиологии на нижней поверхности слизистой оболочки влагалища наблюдали следы белых рыхлых пленок. У больных животных отмечали угнетение общего состояния, отказ от корма, отсутствие жвачки.

Полученные результаты исследования свидетельствуют о том, что из признаков острого эндометрита бактериально-микозной этиологии наиболее информативными являются показатели температуры тела и пульса, менее дыхания, которые резко возрастают с увеличением тяжести воспалительного процесса в матке, а также наличие на слизистой оболочке влагалища белых рыхлых пленок, по сравнению с животными, больными эндометритом бактериальной этиологии, у которых они отсутствуют.

3.6 Изменение показателей крови коров, больных острым послеродовым эндометритом бактериально-микозной этиологии

При изучении гематологического, биохимического и иммунологического состава крови коров, не болевших эндометритом, и больных острым послеродовым эндометритом бактериальной и бактериально-микозной этиологии выявлены некоторые различия (таблица 3).

Анализируя полученные данные таблицы 4, у коров, больных острым послеродовым эндометритом, отмечается эритроцитоз, плейохромия, гипопротеинемия, что характерно для экссудативного процесса. Наблюдается выраженная нейтрофилия с резким регенеративным сдвигом, характеризующаяся появлением в периферической крови юных, увеличением процента палочкоядерных нейтрофилов, лейкоцитозом, а также лимфоцитопенией, гипоэозинофилией, сопровождающиеся снижением альбуминов, в - глобулинов, увеличением б- и г - глобулиновых фракций, а также NK_лимфоцитов, что указывает на наличие острого воспалительного процесса в организме животных. Низкий процент фагоцитарной активности, снижение уровня Т- и В-лимфоцитов позволяют судить о нарушении неспецифического звена иммунной системы.

У коров, больных острым послеродовым эндометритом бактериально-микозной этиологии, воспалительный процесс в организме протекает более выражено по сравнению с животными, больными эндометритом бактериальной этиологии, о чем свидетельствуют увеличение количества лейкоцитов на 8%, сегментоядерных - на 10% и палочкоядерных нейтрофилов - на 7%, эритроцитов - на 13%, количество лимфоцитов снижено на 8%, альбумина - на 6%, б-глобулиновые фракции увеличены на 5%, в-глобулиновые фракции - на 3,2%. Процент активных нейтрофилов снижен на 21%, фагоцитарное число - на 16%, процент переваривания - на 8,5%, содержание Т-лимфоцитов - на 18%, В-лимфоцитов - на 22%; NK_лимфоциты увеличены на 29%.

Таблица 3 - Показатели крови здоровых и больных острым гнойно-катаральным эндометритом коров

Показатели	Еди-ница измере-ния	Животные, не болевшие эндометритом n=10	Больные животные бактериальной этиологии, n=10	Больные животные бактериально-микозной этиологии, n=10
Гемоглобин	г/л	108±0,27	112±0,30	113±0,29
Эритроциты	10 12/л	6,72±0,36	7,18±0,38	8,26±1,34
Лейкоциты	109/л	6,76±0,12	9,73±1,78	10,56±0,14
Эозинофилы	%	4,8±0,5	4,0±0,12*	2,3±0,6*
Лимфоциты	%	63,0±2,5	44,3±1,0	40,6±0,26
Моноциты	%	2,5±0,27	2,4±0,8**	2,3±0,3**
Нейтрофилы палочкояд.	%	2,0±1,3	7,8±2,6*	8,4±2,3*
Нейтрофилы сегментояд.	%	27,1±1,3	40,2±0,9**	44,8±1,4**
Нейтрофилы юные	%	0	1,0±0,5**	1,1±0,5**
Общий белок	г/л	76,5±0,09	61,4±0,2	60,8±0,8
Белковые фракции: Альбумин	%	42,8±1,52	31,8±1,41**	29,9±1,32**
б-глобулины	%	13,3±0,3	21,1±0,4***	22,3±0,5***
в - глобулины	%	12,7±0,4	6,0±0,4***	6,2±0,5***
г - глобулины	%	31,0±1,7	41,0±2,0***	41,4±1,3***
%ФАН	%	50,3±0,6	43,2±0,3**	34,1±0,4**
ФЧ	%	2,6±0,1	1,9±0,2	1,6±0,14
%П	%	54,2±0,12	47,8±0,16**	43,7±0,16**
Т-лимфоциты	%	54,7±0,4	48,2±0,6**	39,6±0,5**
В-лимфоциты	%	27,1±1,5	23,8±1,0**	18,6±0,9**
NK_лимфоциты	%	17,7±0,5	27,7±0,6**	39,2±0,5**

*Р< 0,05; **Р> 0,01; ***Р> 0,001

Установлено, что гематологические, биохимические и иммунологические показатели крови коров, больных острым послеродовым эндометритом, имеют отклонения от физиологической нормы, а иммунные реакции снижены по сравнению с животными, не болевшими эндометритом. Отмечено, что у животных, больных острым эндометритом бактериально-микозной этиологии, воспалительный процесс в организме протекает в более тяжелой форме, чем у животных больных эндометритом бактериальной этиологии.

3.7 Разработка, фармако-токсикологическая и клиническая оценка новых лечебно-профилактических средств

В настоящее время большой практический и научный интерес представляет разработка средств с широким спектром антимикробного действия, обладающими как бактерицидной, так и фунгицидной активностью, которые были бы высокоэффективными и при эндометритах бактериально-микозной этиологии. Также очевидна необходимость комплексного этиотропно-патогенетического и симптоматического лечения больных животных. Местная этиотропная терапия предусматривает внутриматочное введение антимикробных препаратов для подавления возбудителей воспалительного процесса. Симптоматическая терапия включает применение методов и средств, обладающих утеротоническим действием. В качестве патогенетической терапии с целью активизации защитных механизмов организма рекомендуется использовать новокаинотерапию, тканевые препараты, гемотерапию и другие лечебные приемы.

Разработка и оценка терапевтической эффективности антимикробных препаратов

С целью повышения эффективности местной этиотропной терапии мы разработали три антимикробных препарата, которым дали экспериментально-клиническую оценку. Это такие препараты как: 1. Эндотон - активнодействующим компонентом которого является дидецилдиметиламмоний бромид и краски; 2. Бромацид - активно-действующим компонентом которого является дидецил-диметиламмоний бромид. 3. Фупэдин - включающий в себя полимер и нитрофуран, а также формалин с экстрактом природного дубильного компонента.

Нами были проведены фармако-токсикологические исследования указанных препаратов, включавшие определение специфичности действия (антимикробной и антимикозной токсичности, противовоспалительного действия, стимулирующего влияние на регенеративные процессы, в отдельных случаях утеротонического действия), а также их токсичности, местного раздражающего действия.

Также изучали возможность формирования лекарственной устойчивасти к препаратам микрофлоры выделенной у коров больных эндометритом бактериально-микозного характера, срока годности препаратов при хранении.

Как видно из представленных нами материалов (таблица 4), разработанные антимикробные препараты не содержащие антибиотиков, отличаются выраженной антимикробной и антимикозной активностью, проявляют противовоспалительное действие, стимулируют регенеративные процессы (на 4-5 дней ускоряют заживление экспериментальных кожно-мышечных ран у лабораторных

Таблица 4 - Фармако-токсикологические свойства антимикробных препаратов

Изучаемые показатели	Разработанные препараты
	Эндотон	Бромацид	Фупэдин
Актимикробная активность, ЗЗР, мм.	Антибактериальная	20,3-24,7	19,8-28,0	25,6-30,0
	Антимикозная	19,7-25,3	22,4-23,4	23,4-24,4
Противовоспалительное и стимулирующее регенеративные процессы действие	+	+	+
Утеротонические свойства	-	-	+
LD50 мг/кг массы	2000	2000	3800
Местнораздражающее действие	-	-	-
Сроки содержания АДВ а крови и молоке, дни	0	0	0
Срок годности, мес. При хранении в темноте То С	18,6 (5-20)	18 (5-20)	18 (5-20)

животных). Остаточные количества активно действующих веществ (АДВ) препаратов в крови и молоке у коров после завершения курса лечения не обнаруживается. После 20 пассажей тест-микробов на средах, содержащих препараты их чувствительность была выше по сравнению с антибиотико содержащими препаратам на 3-10 раз Препарат фупэдин оказывал утеротоническое действие (индекс маточных сокращений возрастал в 4-5 раз в течение вервых 1,5 часа).

Проведенное токсикологическое исследование позволяет констатировать безвредность предложенных нами антимикробных препаратов их LD₅₀ составляет от 2000 до 3800 мг/кг массы тела животного, что позволяет отнести эти препараты к малотоксичным соединениям. Они не оказывают местнораздрожающего действия.

Клиническую оценку терапевтической эффективности разработанных антимикробных препаратов осуществляли в сравнительном аспекте при проведении комплексного лечения коров с острым гнойно-катаральным эндометритом бактериально-микозной этиологии в многосерийных научно-практических опытах, разделяя больных животных по принципу аналогов в опытные и контрольные группы. С целью местной этиотропной терапии коровам вводили внутриматочно испытуемые препараты с интервалом в 24-48 часов по 100 мл.:коровам контрольных групп-базовые препараты аналоги (йодовет, лозеваль, рихометрин, фуразолидоновые палочки, 1,5% р-р ваготила).

Этиотропную терапию сочетали с применением патогенетической терапии ПДЭ и в качестве миотропных средств применяли утеротон или окситоцин, а также использовали препараты заместительной терапии Каролин, карток, тривитамин. Испытания препаратов вначале осуществляли на ограниченном поголовье животных, а затем в широком производственном опыте. Критерием эффективности препаратов служило восстановление воспроизводительной способности в возможно короткие сроки у животных подвергавшихся лечению. Обобщенные результаты отражены в таблице 5

Таблица 5 - Терапевтическая эффективность эндотона, бромацида и фупэдина, в сравнении с препаратами аналогами при остром гнойно-катаральном эндометрите бактериально-микозной этиологии

Показатели эффективности лечения	Испытуемые препараты
	эндотон	бромацид	фупэдин	Препараты аналоги
Срок лечения, дни (м)	6,4	7,8	9,1	13,6
Кратность введения препарата (м)	6,4	7,8	5,4	9,6
Терапевтическая эффективность (%)	90	88,2	90,3	72,5
Количество дней бесплодия	94,5	98,3	69,6	128,4

Анализируя полученные данные, предложенные препараты позволяют сократить продолжительность курса лечения на 7,2-4,5 дня, кратность введения в 4,2 - 1,8 раза (что снижает расходы на лечение), повышает терапевтическую эффективность лечения на 17,8-15,7% и сокращает продолжительность бесплодия на 30,1-58,8 дня. Обеспечив тем самым повышение экономической эффективности лечебных мероприятий. Проведенные лабораторные исследования крови коров подвергнутых лечению опытными препаратами подтверждают их клиническое выздоровление, которое сопровождалось нормализацией гематологических и биохимических показателей.

Эти данные, так же как и показатели клинического состояния подопытных животных, подтверждают безвредность разработанных и рекомендованных нами для использования в ветеринарной практике антимикробных препаратов, они не оказывают на организм животного побочного влияния.

Разработка и экспериментально-клиническая оценка терапевтической эффективности гормонально-тканевого препарата Микробиостим

Отличительной чертой нового препарата микробиостим в сравнении с известным аналогом является введение в его состав соли двухвалентного кобальта (Со²⁺). Принимая во внимание способность ионов кобальта, выступать в роли комплексообразователя, предлагалась возможность образования устойчивого комплекса с метилолмочевиной, входящей в состав препарата. Ожидалось, что это повысит эффективность использования кобальта из органического комплекса, что актуально, учитывая его низкую усвояемость.

Однакоформирующееся комплексное соединение имеет ограниченную растворимость в водном растворе препарата и частично выпадает в осадок. Это приводит к тому, что часть ионов кобальта выводится из раствора.

Чтобы избежать подобных потерь, было предложено использовать хорошо растворимые в воде комплексы кобальта. Таким требованиям отвечает комплексное соединение полученное нами.

Данный комплекс хорошо растворим в воде, и не осаждается из готового препарата, что позволяет добиться получения рабочего раствора с заданной концентрацией.

Специфичность действия микробиостима проявляется в двух направлениях: общестимулирующем влиянии и гормональной активности. При подкожном введении он обуславливает у коров достоверное понижение лейкоцитов и повышение эритроцитов и гемоглобина, снижение сегментоядерных нейтрофилов у животных на 36,5% по сравнению с долечебным, а также повышение лимфоцитов до 62,4±1,54%, что является физиологической нормой, указывает на уменьшение воспалительного процесса в организме.

Достоверные изменения показателей крови общего белка до 79,4 г/л по сравнению с долечебным периодом, в котором он составил 88,3 г/л, а также явное повышение концентрации альбуминов крови коров на 18,5%, что свидетельствует о биологической направленности этой фракции белков. Также отмечается повышение активности щелочной фосфатазы, AST и ALT. Препарата благотворно влияет на повышение иммунитета. ФА повышается на 10% ФЧ - на 0,85%. Гормональная активность препарата подтверждается тем, что под его влиянием у инфантильных самок белых мышей масса яичников и матки возрастает в 1,6-2,0 раза, а у коров он вызывает усиление моторики матки.

Токсикологические исследования позволили установить безвредность микробиостима для лабораторных животных и коров, в том числе общетоксикологического, местнораздражающего и аллергизирующего действия не установлено.