Респираторные болезни крупного рогатого скота в Дагестане

5

На правах рукописи

БУДУЛОВ НУРДИН РАГИМХАНОВИЧ

Респираторные болезни крупного рогатого скота в Дагестане

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

16.00.01 - диагностика болезней и терапия животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Краснодар - 2009

Работа выполнена в ГНУ «Прикаспийский зональный НИВИ» и ГНУ «Краснодарский НИВИ» Российской академии сельскохозяйственных наук

Научные консультанты: доктор биологических наук Глотова Татьяна Ивановна, доктор ветеринарных наук Басова Наталья Юрьевна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Болоцкий Иван Александрович, доктор ветеринарных наук, профессор Малышева Людмила Александровна, доктор ветеринарных наук, профессор Никулин Иван Алексеевич

Ведущая организация: Ставропольский государственный аграрный университет

Защита состоится «01» июля 2009 г. в «10-00» часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 в Кубанском государственном аграрном университете по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета.

Автореферат разослан « » 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук И.А. Родин

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Перед сельским хозяйством страны «Концепцией развития животноводства в ХХІ век» поставлена задача - решить проблему обеспечения населения продовольствием за счет собственных ресурсов. Ее решение зависит от надежного эпизоотического благополучия животных по инфекционным и незаразным болезням (В.М. Авилов, 1998).

Широкое распространение респираторных болезней крупного рогатого скота (КРС) в Российской Федерации, в том числе и Республике Дагестан (РД), препятствует решению поставленной задачи вследствие экономических потерь, складывающихся из падежа, вынужденного убоя, снижения прироста живой массы, затрат на лечебно-профилактические мероприятия, уменьшения потенциала продуктивности и племенных качеств животных (О.Г. Петрова с соавт., 1999; А.Г. Высокопоясный с соавт., 2000; Н.И. Закутский, 2000; В.А. Мищенко с соавт., 2001; Н.Ю. Басова, 2002; К.П. Юров с соавт., 2003; A.L.E. Lindberg, 2003).

Большинство болезней, развивающихся на фоне неблагоприятного воздействия на животных различных предрасполагающих факторов, снижающих общую неспецифическую резистентность организма, имеют инфекционную природу (Г.В. Корнева, 1990; В.А. Белопольский с соавт., 1993; А.В. Жаров, 1995; В.П. Иноземцев с соавт., 1996; А.С. Кашин, 1996; А.Н. Гизатулин, 1996; С.М. Лавренов с соавт., 1997; А.Г. Шахов, 1997; В.Н. Выдрин с соавт., 1998; Б.Л. Белкин, 1998; Ю.Н. Федоров, 2005; Н.А. Кавенькин с соавт., 2005; М.А. Сидоров с соавт., 2006; В.А Мищенко с соавт., 2006; C.S. Ribble et al., 1995; D.A.-V.K. Virtala et al., 1996; F. Marschang, 1998).

По мнению ряда исследователей (Н.Н. Крюков с соавт., 1984; В.А. Мищенко с соавт., 2000; К.П. Юров с соавт., 2003; А.Г. Глотов с соавт., 2006; L.A. Babiuk et al., 1996; K.W. Jericho et al., 2004 и др.), первопричиной возникновения пневмоний у 90% телят являются вирусы, которые, вызывая инфекционный процесс в макроорганизме, создают оптимальные условия для жизнедеятельности в нем бактерий, что приводит к осложнению вирусного заболевания.

Взаимодействие микроорганизмов различных классов приводит к значительному усилению тяжести течения респираторных болезней молодняка КРС. Ассоциативное течение болезней осложняет их диагностику, профилактику и терапию (С.И. Жидков с соавт., 1996; П.А. Красочко, 1991; Н.Ю. Басова, 2002; О.Г. Петрова, 2002; К.П. Юров с соавт., 2003; Т.И. Глотова, 2006; М.И. Гулюкин с соавт., 2007; H. Houe, 1999 и др.).

Несмотря на большой объем информации по проблеме острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ), многие вопросы эпизоотологии респираторных болезней молодняка КРС, связанные с учетом природно-климатических особенностей и специализации хозяйств, остаются до сих пор нерешенными.

Республика Дагестан занимает одно из ведущих мест по производству животноводческой продукции в Российской Федерации.

С внедрением в республиках Северного Кавказа, в том числе в Дагестане, промышленной технологии ведения животноводства изменилась система содержания КРС. Новые технологические приемы (круглогодовое стойловое содержание, высокая концентрация животных на ограниченных площадях, отсутствие выгулов и инсоляции) при разнообразных климатических условиях республики повысили функциональную нагрузку на организм животных, что привело к увеличению болезней органов дыхания.

Учитывая сложность развития патологического процесса респираторных болезней, их полиэтиологичность и многофакторность, стратегия профилактики и лечения животных должна быть направлена на комплексное воздействие как на этиологические факторы болезни, так и на организм в целом.

Все вышеупомянутое определяет актуальность проведения комплексных исследований по изучению этиологической структуры болезней органов дыхания у телят и поиску специфических препаратов, методов и схем их применения для повышения эффективности ветеринарных мероприятий.

Цель исследований. Изучить особенности эпизоотической ситуации, этиологическую структуру респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота, усовершенствовать методы их диагностики, разработать систему профилактических и лечебных мероприятий, с учетом зональных особенностей Дагестана.

Задачи исследований:

1. Изучить распространение респираторных болезней молодняка КРС в хозяйствах Дагестана и определить наносимый ими экономический ущерб; выяснить причины и факторы, способствующие их возникновению и распространению на территории республики;

2. Изучить этиологическую структуру вирусных респираторных инфекций КРС и особенности эпизоотической ситуации по наиболее распространенным болезням (парагрипп-3, инфекционный ринотрахеит, аденовирусная и респираторно-синцитиальная инфекции, вирусная диарея-болезнь слизистых оболочек КРС), факторы, влияющие на развитие острых респираторных болезней и определить спектр бактериальных агентов, осложняющих их течение;

3. Усовершенствовать методы диагностики вирусных инфекций КРС с использованием культур клеток, а также систему специфической профилактики и терапии респираторных болезней телят в условиях Дагестана;

4. Усовершенствовать методы, средства профилактики и терапии крупного рогатого скота и разработать систему лечебных мероприятий респираторных болезней;

5. Разработать и внедрить в хозяйствах республики усовершенствованную комплексную научно обоснованную систему мероприятий по профилактике и терапии респираторных болезней молодняка КРС, основанную на рациональном сочетании точной диагностики, специфической профилактики и эффективной терапии смешанных респираторных болезней молодняка КРС, отягощенных наличием лейкоза.

Научная новизна. Изучено распространение респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота в Республике Дагестан и наносимый ими экономический ущерб. Определена этиологическая структура респираторных вирусных заболеваний телят в промышленных комплексах и на фермах сельхозпредприятий.

Разработаны методы получения первичных культур клеток и субкультур с преобладанием клеток эпителиоподобного типа из легочной ткани плода буйволицы и доказана возможность использования их для диагностики вирусных респираторных болезней КРС. Изучены некоторые культурально-морфологические свойства полученных культур клеток, выявлены некоторые особенности цитопатогенного действия респираторных вирусов на культуру клеток.

Впервые установлена возможность использования сыворотки крови буйволят и плодов буйволиц для культивирования клеточных культур.

Разработана и внедрена в ветеринарную практику республики научно обоснованная система специфической профилактики и терапии респираторных болезней телят с применением гипериммунной сыворотки крови и сухой культуральной ассоциированной вакцины против парагриппа-3 (ПГ-3) и инфекционного ринотрахеита (ИРТ) крупного рогатого скота (ВИЭВ).

Установлена противовирусная активность изатизона в отношении вируса ИРТ КРС. Показана профилактическая эффективность двух форм изатизона у телят, экспериментально инфицированных смешанными вирусными инфекциями. На основании полученных данных предложен способ профилактики вирусных респираторных заболеваний молодняка КРС препаратом сероизатизон, на который получен патент РФ на изобретение.

Новизна исследований подтверждена двумя авторскими свидетельствами. На «Способ профилактики вирусных респираторных заболеваний крупного рогатого скота» получен патент.

Теоретическая и практическая значимость работы. Материалы диссертации использованы при составлении:

ѕ «Методических рекомендаций по культивированию первичных культур клеток и субкультур из ткани легкого плодов крупного рогатого скота», утвержденных секцией «Биология, общая и сравнительная патология животных» Отделения ветеринарии ВАСХНИЛ (протокол № 2 от 03.06.1985 г.);

ѕ «Методических рекомендаций по профилактике и лечению вирусных респираторных заболеваний крупного рогатого скота в хозяйствах Дагестана», утвержденных секцией ветеринарии НТС МСХиП ДАССР (протокол № 15 от 23.12. 1991 г.);

ѕ «Методических рекомендаций по культивированию первичных культур клеток, субкультур и эксплантатов из ткани легкого плодов буйволиц», утвержденных секцией «Ветеринарная биотехнология» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (протокол № 3 от 09.06.1999 г.);

ѕ «Методических рекомендаций по получению сыворотки крови плодов буйволиц для клеточной биотехнологии и культивирования вирусов», утвержденных секцией «Ветеринарная биотехнология» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (протокол № 1 от 30.02.2004 г.);

ѕ «Методических рекомендаций по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Прикаспийского региона РФ», утвержденных НТС Комитета Правительства РД по ветеринарии (протокол № 15 от 29.06.2005 г.);

ѕ рекомендаций «Стратегия и принципы применения противовирусных препаратов при вирусных болезнях продуктивных и мелких домашних животных», утвержденных подсекцией секции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (протокол № 3 от 30.10.2007 г.);

ѕ «Комплексной системы оздоровления и профилактики лейкоза крупного рогатого скота в Республике Дагестан на 2008-2015 гг.», утвержденной НТС Департамента по ветеринарии при МСХ РД (протокол № 1 от 12.03.2008 г.).

Результаты исследований представляющие теоретическую и практическую ценность, создают почву для использования противовирусных препаратов в общей схеме противоэпизоотических мероприятий при смешанных вирусно-бактериальных инфекциях молодняка КРС с целью его терапии и могут быть использованы в практике при разработке оздоровительно-профилак-тических мероприятий с учетом лейкоза КРС.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: заседаниях ученого совета Прикаспийского зонального НИВИ в 1987-2008 гг.; республиканских, краевых, областных научно-практических и научно-производственных конференциях (Махачкала, 1996, 1997, 2000, 2001, 2002, Краснодар, 2001, Ставрополь, 2005, Вологда, 2007); Международной конференции «Современное состояние и перспективы интеграции ветеринарной науки и практики в условиях реформирования с.-х. производства Прикаспийского региона» (Махачкала, 1997); Международной научной конференции «Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микросистем» (Махачкала, 1998); Международной научной конференции «Достижения и современные проблемы развития науки в Дагестане» (Махачкала, 1999); Международной юбилейной научно-практической конференции «Проблемы ветеринарной медицины в условиях реформирования с.-х. производства» (Махачкала, 2003); Всероссийской конференции «Лекарственные средства для животных и корма. Современное состояние и перспективы» (М., 2005); Всероссийской научно-практической конференции «Сельскохозяйственная наука Республики Мордовия: достижения, направления развития» (Саранск, 2005); Международной научно-практической конференции «Основные проблемы, тенденции и перспективы устойчивого развития с.-х. производства» (Махачкала, 2006); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006); Всероссийской научно-практической конференции «Естественные науки в решении проблем производства, экологии и медицины» (Назрань, 2006); Всероссийской научно-практической конференции «Антибиотикорезистентность и антимикробная химиотерапия» (Махачкала, 2006); 16-й Всероссийской научно-методической конференции «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных» (Ставрополь, 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Образование, наука, инновационный бизнес - сельскому хозяйству регионов» (Махачкала, 2007); ІХ Международной конференции «Биологическое разнообразие Кавказа» (Махачкала, 2007); Международной научной конференции «Биологическое разнообразие Кавказа» (Грозный, 2008); Международной научно-практической конференции «Достижения ветеринарной науки и практики - с.-х. производству» (Махачкала, 2008).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 57 научных работ, в том числе 9 статей в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ (Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук», «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», «Ветеринарная патология», «Аграрный вестник Урала», изданы 7 методических рекомендаций, получено 2 авторских свидетельства и патент на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 335 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, приложения. Работа иллюстрирована 23 рисунками и 68 таблицами. Список литературы включает 590 источников, в том числе 275 зарубежных.

Внедрение результатов исследований. Результаты научных исследований использованы при разработке методических рекомендаций, утвержденных на федеральном и региональном уровнях, по культивированию первичных культур клеток и субкультур из легочной ткани плодов коров и буйволиц; по получению сыворотки плодов буйволиц для клеточной биотехнологии и культивирования вирусов; по профилактике и лечению вирусных респираторных заболеваний КРС в хозяйствах Дагестана; по стратегии и принципам применения противовирусных препаратов при вирусных болезнях продуктивных и мелких домашних животных; по профилактике и лечению инфекционных пневмоэнтеритов телят; по комплексной системе профилактики болезней КРС в Республике Дагестан.

Основные положения, выносимые на защиту:

ѕ результаты изучения распространения и особенностей проявления вирусных респираторных инфекций КРС в Дагестане и наносимого ими экономического ущерба промышленному животноводству;

ѕ результаты комплексных вирусологических, бактериологических, иммунологических и серологических исследований, использованных при изучении этиологической структуры респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота;

ѕ схема получения и применения лечебных сывороток для профилактики и терапии респираторных болезней в комплексе с противовирусными препаратами;

ѕ разработка и эффективность усовершенствованной комплексной научно обоснованной системы мероприятий по профилактике и терапии респираторных болезней молодняка, основанной на рациональном сочетании точной диагностики, специфической профилактики и эффективной терапии смешанных респираторных болезней молодняка КРС, отягощенных наличием лейкоза.

Теоретический анализ, обобщение результатов, экспериментальные исследования выполнены автором самостоятельно.

Автор выражает глубокую благодарность за участие в выполнении некоторых фрагментов диссертации профессору кафедры микробиологии и вирусологии ДГСХА П.Д. Устарханову, заведующему лабораторией биотехнологии-диагностический центр ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН А.Г. Глотову, а также сотрудникам лаборатории вирусологии Прикаспийского зонального НИВИ.

2. Собственные исследования

2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнялась в период с 1987 по 2008 г. в лаборатории вирусологии ГНУ «Прикаспийский зональный НИВИ» РАСХН, ОПХ «Уйташское» НИВИ и в 212 животноводческих хозяйствах 29 районов Республики Дагестан в соответствии с утвержденными планами НИР гостематик (№№ Госрегистрации: 01.9.10.027806; 01.2.00.104429; 15070.77210178217821).

Анализ распространения у телят болезней органов дыхания, наносимого ими экономического ущерба и показатели производственной деятельности животноводческих хозяйств проводили, используя данные ветеринарной отчетности РФ, Департамента ветеринарии при МСХ РД.

При изучении и анализе бактериального пейзажа больных бронхо-пневмонией телят учитывали данные Республиканской ветеринарной лаборатории и результаты собственных исследований.

Экономический ущерб, наносимый промышленному скотоводству болезнями органов дыхания, рассчитывали согласно «Справочные работы, таблицы животновода, ветврача, зоотехника» (Н. Новгород, 1998).

Распространение вирусных респираторных заболеваний КРС определяли, рассчитывая средний процент проб сыворотки крови, содержащих вируснейтрализующие антитела к вирусам, от числа поступивших из благополучных и неблагополучных по респираторным болезням хозяйств.

Эпизоотические, клинические, патологоанатомические, бактериологические исследования проводили по общепринятым методикам.

Вирусологические исследования проводили согласно стандарту МЭБ (OIE Manual, Manual of Standarts//Chapter 2.3.5., 2000; Chapter 2.10.6., 2004). При массовых обследованиях от больных животных в период выраженных клинических признаков респираторных болезней отбирали и исследовали пробы носовых выделений, от вынужденно убитых - кусочки тканей паренхиматозных органов.

Подготовку проб биоматериала для вирусологических исследований проводили согласно методикам А.Ф. Карышева, В.Н. Сюрина (1980); В.Н. Сюрина, Н.Ф. Фоминой (1979).

Выделение вирусных агентов из патологического материала проводили в первично-трипсинизированных культурах клеток: почка эмбриона коровы (ПЭК), легкие эмбриона коровы (ЛЭК), легкие плода буйволицы (ЛПБ) и их субкультурах.

Для ретроспективной диагностики болезней пробы сыворотки от животных отбирали однократно, а от больных телят - двукратно с интервалом 20-23 дня для установления сероконверсии. Пробы хранили при -20оС и исследовали одновременно.

Для культивирования культур клеток использовали следующие питательные среды: ИГЛА, 199, 0,5%-ный гидролизат лактальбумина (ГЛА), с добавлением сыворотки крови КРС и без нее.

Жизнеспособность и концентрацию клеток определяли путем окрашивания клеточной суспензии 0,5%-ным водным раствором трипанового синего по методике, описанной Л.П. Дьяконовым и др. (1986, 1988). Субкультуры из монослоя первично-трипсинизированных культур клеток (ПЭК, ЛЭК, ЛПБ) готовили бесцентрифужным методом, описанным В.А. Сергеевым (1963).

Бактериологические исследования проводили по общепринятым методикам с использованием коммерческих дифференциальных питательных сред и тест-систем (СИБ, ПБДЭ, ММТЕ 1 и 2). Изучение культуральных и патогенных свойств выделенных микроорганизмов проводили по общепринятым методикам, а видовую идентификацию - с помощью определителя бактерий Берги (1980).

Серологическую идентификацию вирусов проводили в реакции нейтрализации (РН), реакции гемагглютинации (РГА), реакции торможения гемагглютинации (РТГА), реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), реакции иммунодиффузии (РИД) с использованием иммунных к референтным штаммам возбудителей сывороток: ПГ-3 (МВА-1/77), ИРТ (МВА-1/80), аденовируса (Bovine-10) и ВД-БС КРС (ВК-1В1).

Антитела к вирусу ПГ-3 в сыворотке крови животных определяли в РТГА и РНГА, к вирусу ИРТ в РН и РНГА, к аденовирусам в РНГА, к вирусу ВД-БС в РСК и ИФА, к вирусу респираторно-синцитиальной инфекции (РС) в РИД с использованием коммерческих диагностических наборов согласно «Методическим указаниям по лабораторной диагностике вирусных респираторных инфекций КРС» (1978).

Специфические антитела к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) выявляли в РИД и иммуноферментного анализа (ИФА), согласно «Методическим указаниям по диагностике лейкоза крупного рогатого скота» (утв. 23.08. 2000 г. МСХ РФ).

Для диагностики ПГ-3 в РТГА готовили твин-эфирный антиген по общепринятой методике из полевого штамма ПГ-3 (Аксай).

Устойчивость выделенных изолятов к температуре изучали с применением метода заражения культур клеток прогретым при различных температурах вирусом. Устойчивость к эфиру определяли по методике A. Mayer and M. Bogel (1961), гемадсорбирующие и гемагглютинирующие свойства выделенных ЦПД-агентов - по общепринятым методам. Тип нуклеиновой кислоты определяли с помощью 5-йоддезоксиуридина (JUPR).

Титр вируса рассчитывали по цитопатическому действию с использованием пробирочных культур клеток на 5-7-е сутки их инкубирования при 37оС.

Параметры микроклимата определяли общепринятыми методами: содержание аммиака - при помощи газоанализатора УГ-2, скорость движения воздуха - анемометром АСО-3, влажность воздуха - аспирационным психрометром ШБ-4М, бактериальную обсемененность - методом осаждения.

Гематологические исследования проводили по общепринятым методикам (А.А. Кудрявцев с соавт., 1969; Г.А. Симонян с соавт., 1995).

Общий белок в сыворотке крови определяли биуретовым методом по О.Д. Кушмановой и Т.М. Ивченко (1983), лизоцимную активность крови - по В.Г. Дорофейчику (1968), бактерицидную активность сыворотки крови - по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), фагоцитарную активность лейкоцитов крови по А.И. Иванову и Б.А. Чуклову (1987).

Для получения культуры клеток ЛПБ использовали плоды буйволиц на 4-8-м месяцах развития, 0,02%-ный раствор версена, 0,25%-ный раствор трипсина, питательные среды 199, ИГЛА, 0,5%-ный раствор гидролизат лактальбумина (ГЛА), солевой раствор Хенкса, с добавлением 200 Ед/мл пенициллина и 200 мкг/мл стрептомицина.

Цитологические исследования проводили путем выращивания культуры клеток на покровных стеклах с последующей их фиксацией через 24, 48, 72, и 96 ч в жидкости Буэна и окрашиванием гематоксилин-эозином по общепринятой методике.

Чувствительность полученной культуры клеток ЛПБ к вирусам ИРТ (штамм МВА-1/80) и ПГ-3 (штамм ПТК-45) изучали путем их заражения в дозе 2-3 ТЦД на клетку.

Оптимизацию схемы получения гипериммунных сывороток в условиях хозяйств изучали на 60 15-18-месячных бычках красно степной породы живой массой 350-400 кг, серонегативных к бруцеллезу, лейкозу, лептоспирозу, отрицательно реагирующих на введение туберкулина.

В работе использовали вирусы: ПГ-3 (аттенуированный вакцинный штамм МВА-1/77) с инфекционной активностью 105,0 ТЦД50/мл, ИРТ (аттенуированный вакцинный штамм МВА-1/80) с титром 105,5 ТЦД50/мл, аденовирус (штамм Bovine-10) с титром 104,0 ТЦД50/мл и вирус диареи-болезни слизистых оболочек (аттенуированный вакцинный штамм ВК-1В1) с титром 105,0 ТЦД50/мл. Титры антител к вирусу ПГ-3 контролировали в РТГА.

Противовирусное действие изатизона и сероизатизона в опытах in vitro изучали в перевиваемых линиях культур клеток MDBK и КСТ с использованием референтных штаммов вирусов ИРТ КРС (штамм ТК-А) и ВД-БС КРС (штамм ВК-1), цитотоксичность - микрометодом в культуральных 96-луночных планшетах.

Жизнеспособность клеток оценивали после окрашивания 1%-ным раствором трипанового синего, приготовленного на фосфатном буфере рН 7,2-7,3.

Научно-производственные опыты по определению эффективности предложенных препаратов и схем их применения проводили в хозяйствах РД, неблагополучных по респираторным болезням крупного рогатого скота.

Статистическую обработку проводили общепринятыми методами, оценивая доверительный интервал для 95%-ной вероятности.

Достоверность результатов подтверждали путем статистической обработки и определения различий средних значений с помощью критерия Стьюдента. Результаты считали достоверными при Р < 0,05, использовали программу «Microsoft Excel».

Экономический эффект проводимых лечебно-профилактических мероприятий рассчитывали согласно методическим рекомендациям по определению экономической эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденным ГУВ МСХ и П РФ 21.02.1997 г.

Объем проведенных исследований: серологических - 33087, вирусологических - 1104, бактериологических - 1100, биохимических - 1640, иммунологических - 1670, гематологических - 6900, цитологических - 160, патологоанатомических - 2200, клинических - 10900 проб.

В производственных опытах по изучению профилактической и лечебной эффективности предложенных препаратов и схем использовано 12500 голов КРС.

2.2 Результаты исследований. Распространение респираторных болезней телят в Дагестане и наносимый ими экономический ущерб

Анализ ветеринарной отчетности Департамента по ветеринарии при МСХ РД за последние 10 лет свидетельствует о значительном уровне заболеваемости КРС. Так, за период 2000-2007 гг. ежегодно заболевало 18645-32093 гол., или 23,2-32,8% к обороту стада. Заболеваемость молодняка составляла 37,2-52,1 % к полученному приплоду, в том числе болезнями органов дыхания - 45,8-50,4%, а в стационарно неблагополучных хозяйствах этот показатель достигал 60-90%.

Основной процент гибели животных приходится на молодняк - 42,9-77,2% от павших, в том числе по причине респираторных болезней ежегодно гибло 41,1-50,9% от количества павших и вынужденно убито 45,4-57,0% от общего количества вынужденно убитых телят.

В среднем за период 1996-2007 гг. заболеваемость молодняка КРС респираторными болезнями колебалась в пределах 45,4-50,4%, занимая второе место после болезней органов пищеварения, а в 2006 г. повысилась по сравнению с 1996-м на 4,7%. Падеж телят по причине этой патологии за тот же период ежегодно составлял 41,1-50,9% от числа павших, а вынужденный убой - 45,4-57,0% от общего числа вынужденно убитых, причем в 2007 г. этот показатель вырос по сравнению с 1996 г. на 11,6%.

Удельный вес к общей заболеваемости и падежу телят от респираторных болезней за 2000-2007 гг. составляет, соответственно, 45,8-50,4% (рис.1).



Рисунок 1. Заболеваемость и падеж телят от респираторных болезней Обозначения: 1 - заболеваемость, 2 - отход

Ущерб от болезней органов дыхания складывался в основном за счет гибели животных и вынужденного убоя. Прямой экономический ущерб от респираторных болезней телят в Республике Дагестан ежегодно составляет 5-7 млн. руб. Однако, учитывая затраты на проведение ветеринарных мероприятий и недополучение продукции от переболевших животных, размер ущерба можно увеличить в 1,5-2 раза.

Результаты исследований показали, что заболеваемость молодняка КРС болезнями органов дыхания выше в горной зоне республики - в среднем за 10 лет наблюдений она ежегодно составляла 55,4%, в равнинной зоне этот показатель на 23,5% ниже - 31,9%, а наименьшее количество больных данной патологией регистрировали в предгорной зоне - 12,7%. Отход телят из-за респираторных болезней в горной зоне был также наиболее высоким - 70,4% от числа павших и вынужденно убито 36,8% от общего количества вынужденно убитых телят.

2.2.2 Вирусные и смешанные вирусно-бактериальные инфекции молодняка КРС в Дагестане

Для установления этиологической структуры массовых респираторных заболеваний молодняка КРС в РД провели ретроспективный серологический мониторинг на респираторные вирусные инфекции.

При серологических исследованиях животных, принадлежащих 37 хозяйствам, неблагополучным по респираторным болезням КРС, в 36 выявляли антитела к вирусу ПГ-3 (97,3%), в 33 - ИРТ (89,2%), аденовирусной инфекции (АДВ) - 73,0%, вирусу диареи-болезни слизистых оболочек (ВД-БС) - 59,5% и РСИ - 51,4%.

Во всех хозяйствах установили ассоциированное течение вирусных респираторных инфекций. Наиболее часто (37,8%) выявляли ассоциации трех возбудителей, несколько реже (29,7%) - четырех, еще меньше (21,6%) - пяти, а наименьшая частота встречаемости (10,9%) - у двух антигенов.

На протяжении последних 20 лет (1987-2008 гг.) у КРС в неблагополучных по ОРВИ хозяйствах наиболее широко циркулируют возбудители ПГ-3 - количество серопозитивных животных составляет 66,9% от числа обследованных животных, ИРТ - 37,8%, АДВ - 14,1%, ВД-БС - 11,7% и РС - 7,8% (рис. 2).

Рисунок 2 - Результаты ретроспективных серологических исследований телят на ПГ-3 (1), ИРТ (2), АДВ (3), ВД-БС (4) и РС (5)

При изучении роли вирусов в развитии респираторных болезней КРС установили, что на крупных животноводческих комплексах количество телят с данной патологией в 1,5-5 раз превышает количество телят с патологией желудочно-кишечного тракта. Начало вспышек и их интенсивность не связаны с сезонами года, а зависят от сроков завоза животных и времени комплектования групп. Вспышки респираторных заболеваний среди завезенных телят, как правило, регистрировали на 7-10-е сутки после формирования секции из вновь поступивших животных, в течение 10-15 дней они охватывали 80-90% поголовья с последующим падежом 12-16% пораженных животных. Ежегодные потери (вынужденный убой и падеж) поголовья по причине респираторных болезней на крупных комплексах составлял 28,2 - 33,4%.

В хозяйствах репродукторного типа респираторные болезни чаще регистрировали в весенний и осенне-зимний периоды с вовлечением соответственно 40,2-51,5% и 26,5 - 34,8% от общего количества телят. Падеж составлял 2,6-19,3% и 5,1-11,0%. Телята болели, начиная с 15-20-дневного возраста, массовые респираторные болезни регистрировались у телят 1,5-2-месячного возраста. В период вспышки, как правило, на фоне перегруппировки или температурного стресса, заболеваемость достигала 68-75%, а падеж - 9,4-21%.

Установлено, что хозяйства-поставщики являются источниками возбудителей вирусных респираторных инфекций, возникающих на комплексах, где в одном боксе размещают телят, собранных из нескольких хозяйств с различной эпизоотической ситуацией. В течение 7-8 дней телята инфицируются возбудителями вирусных инфекций, вследствие чего возникают вспышки респираторных болезней. В свою очередь, комплексы по выращиванию нетелей способствуют заносу в репродукторные хозяйства вирусов, не регистрировашихся в них ранее.

При проведении вирусологических исследований 65 проб биоматериала от вынужденно убитых телят и 291 пробы носовых выделений, отобранных от больных телят с клиническими признаками ОРВИ, изолировали в 20,5% случаев вирус ПГ-3; в 8,4 - ИРТ; 4,8 - аденовирус; в 3,9% исследованных проб выделенные цитопатогенные агенты идентифицировать не удалось.

В результате исследований в РИФ в 10% проб выявили вирус ИРТ, а в 60% - вирус ПГ-3.

При интраназальном и интратрахеальном заражении телят в возрасте пяти месяцев, серонегативных к вирусам ПГ-3 и ИРТ КРС, изолятом вируса ИРТ КРС в дозе 2 х 6 lg ТЦД50/мл установили его патогенность. Этот изолят был выделен при вспышке ОРВИ на МТК совхоза «Хамаматюртовский». Клиническая картина заболевания была аналогичной наблюдаемой в полевых условиях: на третьи сутки после заражения у подопытных телят повысилась температура тела до 40,50С, появились серозно-слизистые истечения из носовых ходов, сухой, лающий кашель, серозный конъюнктивит, слезотечение, положительные трахеальная проба и проба апноэ. При патологоанатомическом вскрытии в верхних дыхательных путях установили изменения, характерные для серозно-катарального воспаления, в легких - мелкодольчатые ателектазы. Телята контрольной группы на протяжении опыта оставались здоровыми.

В хозяйствах, неблагополучных по ИРТ в 25-30% случаев кроме респираторной выявляли генитальную форму течения болезни. В таких хозяйствах отмечали увеличение количества абортов и число мертворожденных телят, у коров удлинялся сервис-период, увеличивалось количество перегулов.

Так, при серологическом исследовании животных ОПХ ДагНИИСХ на ИРТ КРС положительно реагировало 71,4% коров, 52,3% нетелей и 21,7% телок разного возраста. Клиническая картина заболевания выявлена у 41,1% коров, 20,5% нетелей; количество абортированных и мертворожденных плодов составило соответственно 10,7 и 6,8%.

Широкому распространению ИРТ в генитальной форме способствовали быки-производители, зараженные вирусом ИРТ. При обследовании племпредприятий РД, вирусоносительство выявлено у 32,4%, а через шесть месяцев - у 75,7% быков, клиническое проявление заболевания регистрировали у 18,9% животных, из эякулята 31,6% быков выделен цитопатогенный агент, в 21,1% идентифицированный как возбудитель ИРТ. В реакции ИФА выявление вируса ИРТ было выше - 47,4% проб.

Одним из факторов, осложняющих ОРВИ у 25-45% телят, является бактериальная микрофлора, вызывающая бронхопневмонию при неблагоприятных условиях содержания и несвоевременно проводимой терапии.

При бактериологическом исследовании патологического материала, полученного от вынужденно убитых и павших телят в острой стадии заболевания выделяли, бактерии семейств Pasteurellaceae - 31,4%, Enterobacteriac-ea - 4,9%, родов Streptococcus - 26,7%, Staphylococcus - 22,8%, Mycoplasma - 14,2%. Очевидно, что в этиологии респираторных болезней телят в республике кроме вирусов участвуют ассоциации бактерий разных таксономических групп, которые осложняют протекающий в легкой форме вирусный процесс.

Из носовых секретов больных острыми респираторными инфекциями телят наиболее часто выделяли в 34,7% - Streptococcus, 24% - Mycoplasma, 8,6% - Enterobacteriacea, 9,2% - Staphylococcus, 23,5% культур идентифицировать не удалось. В большинстве случаев выделяли бактериальные ассоциации: 35,6% - два патогена, 26,7% - три, 12,9% - четыре, и только в 24,8% были выделены монокультуры. Выделенные культуры были патогенны для белых мышей: 100% пастерелл, 48% стрептококков, 65% стафилококков в дозе 500-750 млн м. т./мышь и 77% энтеробактерий в дозах 360 млн - 1,5 млрд м. т./мышь.

При изучении чувствительности выделенных культур микроорганизмов к 19 антимикробным препаратам, наиболее часто применяемым в хозяйствах республики, не обнаружено ни одного препарата 100% активного по отношению ко всем изолятам. Наиболее активны были: сульфаниламиды (норфлоксацин) - 98,7% исследованных культур, антибиотик пятого поколения абактан - 90,0%, четвертого поколения - гентамицин - 89,3% и неомицин - 87,1%.

2.2.3. Влияние факторов внешней среды на заболеваемость телят респираторными болезнями

Развитие респираторных болезней зависит не только от наличия возбудителя, но и от факторов внешней среды, снижающих резистентность организма животных.

Исследования по определению влияния условий содержания телят на рост, развитие, показатели общей резистентности, а также на устойчивость к респираторным заболеваниям проводили в комплексе по выращиванию телок колхоза им. Батырмурзаева в реконструированном профилактории № 1 (опытная группа из 210 телок) и профилактории № 2 - 180 телочек (контроль). Животные поступили на выращивание в возрасте 1-1,5 месяцев со средней живой массой 65 кг.

Для контроля физиологического состояния по принципу аналогов было отобрано по 20 телят в каждой группе. Учитывали продуктивность, заболеваемость и отход животных.

Изменения параметров микроклимата в обоих профилакториях в различные сезоны года были примерно одинаковыми, но в контрольной группе отмечали повышенное содержание: аммиака - в 3-4 раза, микробных тел - в 22-33 раза, повышенную температуру воздуха в летний, пониженную - в зимний периоды по сравнению с опытной.

Таблица 1 - Влияние микроклимата на прирост живой массы, заболеваемость и сохранность телят

Показатели	Профилактория № 1 (опыт) n = 210	Профилактория № 2 (контроль) n = 180
Живая масса в начале опыта, кг	61,3±0,3	64,0±0,5
Живая масса через 30 дней, кг	84,1±0,6	80,8±0,9
Живая масса через 60 дней, кг	104,6±0,9	97,3±0,8
Среднесуточный прирост живой массы, г.	680,3±2,0	560,4±8,0
Заболеваемость животных / %	32/15,2	66/36,7
Отход животных / %	17/8,1	33/18,3

У телят опытной группы клинико-физиологические показатели были сравнительно лучше, чем у контроля: температура тела ниже на 0,2-0,50С, частота пульса на - 6,3-14,6%, частота дыхания - на 10,3-20,0%, количество общего белка выше на 4,8-9,4%, каротина - на 10,0-38,5%, глюкозы - на 16,7-36,7%, резервная щелочность - на 6,9-21,3%, бактерицидная активность сыворотки - на 16,8-29,3%, количество лейкоцитов ниже на 6,8-21,3%.

Заболеваемость телят в опытной группе была ниже на 21,5%, отход - на 10,2%, а среднесуточный прирост массы тела выше на 119,9 г, или 17,6% (табл. 1).

2.2.4 Роль факторов естественной резистентности при респираторных болезнях телят

Изучение взаимосвязи проявления респираторных болезней телят с общей резистентностью организма животных в условиях Дагестана проводили в комплексе по выращиванию и откорму молодняка КРС «Правда» Хасавюртовского района, неблагополучном по респираторным заболеваниям. Отход телят в этом комплексе ежегодно составлял от 9,5 до 21,8 %.

Показатели естественной резистентности изучали по сезонам года на 45-телятах 25-40-дневного возраста до поступления в комплекс и на 5-, 20- и 35-е сутки после поступления. Определяли в крови количество лейкоцитов и их фагоцитарную активность, общий белок, бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови.

Проведенными исследованиями установлено, что у телят в зимний период года содержание общего белка было выше на 0,2 г/%, лизоцимная активность на 12%, фагоцитарная - на 11,0% в сравнении с теми же показателями в летние месяцы. В зимний период заболеваемость телят была ниже на 10-15%, а отход - на 5,1-10,3% по сравнению с летним.

После поступления на комплекс у телят основные показатели естественной резистентности снижались к 5-му дню, а затем, к 20-25 дням, нормализовались и к 35-40 превышали показатели 1-го дня. Заболевание телят ОРВИ регистрировали на 7-й-10-й день после их поступления на комплекс.

Одним из факторов снижения естественной резистентности у КРС в Дагестане является лейкоз КРС. Инфицированные вирусом лейкоза животные выявлены как в племенных, так и в товарных хозяйствах, в общественных и индивидуальных стадах. В общественном секторе доля инфицированных животных составляет 30,3% с колебаниями от 0,3% до 85%, а в индивидуальном - 6,4 с колебаниями от 0,8% до 55,8%. Из 64 обследованных общественных хозяйств 58 неблагополучны по лейкозу КРС. В 46,9% хозяйств инфицированность скота превышает 30%, в 28,1% - варьирует от 10 до 30%, в 15,6% - ниже 10% и 9,4% хозяйств не выявили инфицированных вирусом лейкоза животных.

У инфицированных ВЛКРС животных в крови понижено содержание общего белка, гамма-глобулиновой фракции, микроэлементов (магния, цинка, железа), каротина, глюкозы, снижена фагоцитарная активность лейкоцитов, при увеличении количества Т- и В-лимфоцитов снижена функциональная активность продуцентов иммуноглобулина класса М (табл. 2).

Таблица 2 - Иммунологические показатели телок в СПК им. У. Буйнакского Кизилюртовского района (Мm; п=30)

Показатели	Результаты исследований
	Интактные	Инфицированные
ФА, %	27,43,22	24,62,38
ФЧ, ед.	1,950,11	1,620,09*
ФИ, ед.	0,530,06	0,450,06
ФЕ, 109/л	0,6080,21	0,5150,76
Зав. фагоцитоза, ед.	1,330,24	1,10,16
Т-лимфоциты, %	487,29	62,23,09*
Т-лимфоциты, 109/л	2,880,82	3,620,85
В-лимфоциты, %	30,61,94	32,20,58
В-лимфоциты, 109/л	1,640,35	1,740,41
НБТ сп, %	44,40,56	33,43,25
НБТ сп, СЦИ	0,6860,081	0,4640,037*
НБТ ст, %	39,65,24	40,83,86
НБТ ст, СЦИ	0,5980,09	0,590,047
КМ	0,790,131	1,5040,26*
ЛАСК, %	13,183,35	19,622,42
БАСК, %	35,0611,5	57,3612,8
Ig G, г/л	26,31,72	25,73,2
Ig M, г/л	2,40,33	1,970,08

*Р 0,05

Влияние иммуностимуляторов левамизола и иммунофана на иммунобиологические показатели, заболеваемость, сохранность телят и прирост массы тела изучали в двух сериях опытов на телятах красной степной породы на базе СПК им. У.Буйнакского Кизилюртовского района на трех группах коров (2 опытных и контрольная) в возрасте 2-4 отела, со сроком стельности 7-7,5 мес., сформированных по принципу пар-аналогов.

Все животные получали общий для данной физиологической группы рацион с добавлением минерально-витаминного кормового премикса, нормализующего обменные процессы.

Коровам 1-й опытной группы дважды, с интервалом 14 дней внутри- мышечно вводили 10%-ный раствор левомизола из расчета 1 мг/кг массы тела и вакцину против ПГ-3 и ИРТ КРС инактивированную сорбированную (ВНИИЗЖ, г. Владимир) в дозе 5,0 см3, дважды, с интервалом 14 дней. Телятам, полученным от коров 1-й опытной группы (с 14-дневного возраста) дважды с интервалом 14 дней вводили левамизол, в той же дозе. Коровам и телятам 2-й опытной группы по аналогичной схеме вводили иммунофан (НПП «Бионокс», серия 1410204) в объеме 5,0 см3 и 1,0 см3 соответственно. Животным контрольных групп вместо иммуностимуляторов вводили стерильный физиологический раствор.

Телят, полученных от коров опытных и контрольной групп в 14-20-дневном возрасте дважды, с интервалом 14 дней вакцинировали против ПГ-3 и ИРТ. Кровь для проведения гематологических, биохимических, иммунологических серологических исследований брали до применения иммуностимуляторов и через 14 дней после повторного введения препарата. Критериями оценки эффективности применения иммунофана были показатели живого веса телят при рождении, а также заболеваемости, сохранности, прироста живой массы, титры специфических антител к виру ПГ-3.

Установили, что у телят опытных групп нормализовались морфологические и биохимические показатели крови, повысились иммунологические параметры: бактерицидная активность сыворотки крови возросла в среднем на 44,5% по отношению к фоновым показателям и была на 40,1-97% выше чем у телят контрольных групп в тот же период. Активность фагоцитоза у подопытных и контрольных животных увеличилась по сравнению с фоновыми показателями, однако у телят опытных групп это увеличение было более значительным

Титры поствакцинальных антител к ПГ-3 КРС у телят первой опытной группы (левамизол) находились в пределах 8,6 lg2 и колебались от 1:64 до 1:512, у телят второй опытной группы (иммунофан) - 8,8 lg2 с колебаниями в пределах 1:64 - 1:1024. У телят контрольной группы этот показатель составлял соответственно 7,8 lg2, с колебанием титров специфических антител от 1:32 до 1:256.

Заболеваемость телят 1-й опытной группы была ниже, чем контрольной, на 13,3% и составляла в среднем по группам 33,3%, тогда как в контрольной группе этот показатель был равен 46,6%. Во второй опытной группе заболеваемость телят составила 20%, что ниже показателей контроля на 26,6%. Сохранность телят в первой опытной группе также была выше, чем в контрольной, на 6,7%, что составило 86,7% против 80% в контрольной группе. Во второй опытной группе этот показатель был на 20% выше по сравнению с контролем и равнялся 100% - не пал ни один теленок.

2.2.5 Влияние обменных процессов на развитие болезней органов дыхания

Анализ результатов биохимических исследований сыворотки крови коров из хозяйств-поставщиков в различные сезоны года, свидетельствует, что наиболее серьезные нарушения в организме животных регистрируются в зимний и ранневесенний периоды, тогда же отмечаются вспышки респираторных болезней у молодняка. В эти периоды у коров снижено содержание общего белка по сравнению с летним показателем на 24,6% и 18,0% соответственно, нарушен его фракционный состав за счет снижения гамма-глобулиновой фракции, понижено содержание цинка и каротина, что свидетельствует о наличии дефицита иммунитета (таб. 3).

Таблица 3 - Биохимические показатели крови коров в репродукторных хозяйствах-поставщиках

№ п/п	Показатели	Ед. измерения	Сезоны года
			весенний	летний	зимний
1.	Белок	г/л	62,8±1,74	85,2±1,37	69,7±3,3
2.	Альбумины	%	43,81±1,96	36,46±3,61	42,5±3,9
3.	Альфа-глобулины	%	9,59±0,73	12,6±1,16	13,9±1,1
4.	Бета-глобулины	%	18,06±1,09	15,4±0,9	10,2±0,9
5.	Гамма-глобулины	%	21,14±2,15	35,6±2,28	34,1±3,3
6.	Глюкоза	ммоль/л	1,53±0,11	1,55±0,15	1,35±1,1
7.	АST	Ед/мл	46,2±2,38	47,14±0,76	46,3±1,8
8.	ALT	Ед/мл	24,2±34,31	26,9±2,93	30,4±2,8
9.	Кальций	ммоль/л	2,51±0,03	2,67±0,03	2,57±0,1
10.	Фосфор	ммоль/л	1,89±0,12	2,31±0,08	1,44±0,06
11.	Са/Р	Ед.	1,49±0,12	1,17±0,04	1,89±0,14
12.	Магний	ммоль/л	0,93±0,09	1,05±0,03	0,97±0,07
13.	Цинк	мкг/%	53,8±4,9	94,1±5,8	83,1±4,2
14.	Железо	Мкмоль/л	16,62±1,59	29,0±7,4	26,6±2,1
15.	Медь	мкг/%	82,63±7,62	96,7±8,9	104,1±7,6
16.	Каротин	мг/%	0,15±0,02	2,4±0,04	0,24±0,03

При изучении биохимических показателей телят, поступающих на комплексы в весенний период, у них также установили низкое содержание общего белка - 62,8±1,74 г/л, гамма-глобулинов - 21,14±2,15%, цинка - 53,8±4,9 мкг/% и каротина - 0,15±0,02. Приведенные нарушения негативно влияют на резистентность организма и могут привести к развитию болезней органов дыхания.

2.2.6 Клинико-эпизоотологические и патологоанатомические особенности вирусных респираторных заболеваний молодняка КРС

Клинические признаки респираторных заболеваний молодняка КРС с положительной сероконверсией в большинстве обследованных хозяйств были отнотипными: угнетение, повышение температуры тела до 40-410С, учащение пульса и дыхания, серозно-катаральный ринит, конъюнктивит, сухой кашель, расстройство желудочно-кишечного тракта. У 15-20% телят процесс осложнялся бактериальной микрофлорой и развивалась серозно-катаральная, а затем катарально-гнойная бронхопневмония. При патологоанатомическом вскрытии вынужденно убитых и павших телят отмечали истощение, взъерошенность шерстного покрова, гиперемию слизистых оболочек верхних дыхательных путей, конъюнктивит, гиперплазию региональных лимфоузлов, катарально-гнойную бронхопневмонию с преимущественным поражением верхушечных, сердечных и краниальных участков диафрагмальных долей легких, катаральный энтерит, острый серозный лимфаденит подчелюстных, средостенных и бронхиальных лимфоузлов.

2.2.7 Применение клеточных культур в диагностике вирусных респираторных заболеваний крупного рогатого скота

Поскольку используемые для вирусологических исследований перевиваемые и диплоидные клеточные культуры часто контаминированы микоплазмами, а первично-трипсинизированные культуры клеток из тканей плода КРС содержат ингибиторы и возбудителей вирусных болезней, нами были разработаны методы получения первичных культур и субкультур клеток из тканей легкого плода буйволицы, изучены чувствительность полученных культур к вирусам ИРТ и ПГ-3 и особенности ЦПД респираторных вирусов на культуру.

Культуру клеток из ткани легкого готовили методом трипсинизации и эксплантирования тканевых фрагментов.

Оптимальные результаты получили при 10-минутной трипсинизации, рН в пределах 7,2-7,4, температуре +30…+330С и воздействии смеси 0,25% растворов трипсина и Хенкса в соотношении 1:1 и 2:1. Общий выход составил, соответственно, 197,3 и 247,2 тыс. клеток/мл, а их жизнеспособность - в пределах 66,1 и 78,3%.

В качестве ростовой среды использовали равные объемы ГЛА и среды 199 с 10% сыворотки крови КРС.

Для выявления чувствительности культур клеток ЛПБ к респираторным вирусам провели 5 последовательных пассажей. ЦПД возбудителя ИРТ в этой культуре наступало через 44 ч после заражения и характеризовалось округлением клеток, разрыхлением и разрушением монослоя с последующим отторжением клеток от стекла. Цитопатогенное действие вируса ПГ-3 проявлялось через 48 ч (рис. 3)

Титры вируса в субкультуре клеток ЛПБ достигали для ИРТ 5,5 и ПГ-3 - 6,6 lg ТЦД 50/мл.

Таким образом, разработаны методы выделения и длительного субкультивирования клеток эпителиоподобного типа из тканей ЛПБ, чувствительности к респираторным вирусам КРС, использованные в дальнейшем для первичного выделения вирусов из патологического материала, идентификации возбудителей и накопления антигенов.

Нами впервые установлена пригодность сыворотки крови плодов буйволиц и буйволят в составе питательных сред для выращивания первичных культур, субкультур и перевиваемых линий клеток.

2.2.8 Профилактика болезней органов дыхания

Для профилактики и терапии ОРВИ в условиях хозяйств Дагестана были отработаны схемы получения сыворотки крови реконвалесцентов и гипериммунных лечебных сывороток. Для повышения титров специфических антител использовали левамизол, нуклеинат натрия и пирогенал. Левамизол вводили животным перед гипериммунизацией внутримышечно в дозе 3 мг/кг массы тела трехкратно с интервалом двое суток. Нуклеинат натрия и пирогенал вводили внутримышечно одновременно с вакциной в дозах 60, 100, 200 мг и 200, 400, 600 МЕ на животное.

При использовании стимуляторов антителообразования титры полученной сыворотки повышались на 2-4 lg.

Профилактическая эффективность сыворотки крови реконвалесцентов обеспечила сохранность телят опытных групп 90,2%, 89,7%, 92,1%, 89,5% и 96,4%, в сравнении с контролем - 76,5%, 80,9%, 81,8%, 81,7% и 75,0%.

При профилактической аэрозольной обработке 363 телят в карантинном отделении откормочного комплекса «Правда» Хасавюртовского района отход снизился в 8 раз по сравнению с контролем.

Профилактическая эффективность гипериммунной сыворотки против ПГ-3 при аэрозольной обработке 114 телят из расчета 5 мл на 1 м3 помещения при экспозиции 60 мин была на 13,1% выше, чем в контроле, где применяли аналогичный коммерческий препарат.

Сравнительную профилактическую эффективность гипериммунной поливалентной сыворотки против ИРТ, ПГ-3, ВД-БС при подкожном введении в дозе 1,0 мл/кг массы тела в сравнении с аналогичной коммерческой сывороткой проводили на двух группах клинически здоровых телят 1,5-2-месячного возраста с массой тела 45-50 кг по 180 гол. в каждой.

Анализируя полученные результаты, установили, что профилактическая эффективность полученной сыворотки на 11,1% выше по сравнению с испытанным коммерческим препаратом.

При изучении в молочном комплексе совхоза «Сафаралиевский» Хивского района профилактического действия поливалентной лечебной сыворотки на 378 клинически здоровых телятах в возрасте 1,5-2 мес массой тела 45-55 кг, установили, что в группе телят, обработанных полиспецифической сывороткой, отход составил 8,3%, что в 3,4 раза меньше по сравнению с группой животных, не подвергнутой профилактической обработке (табл. 4).

Таблица 4 - Профилактическая эффективность применения поливалентной сыворотки в молочном комплексе совхоза «Сафаралиевский»

Группы животных	Кол-во живот. в группе, гол	В течение 4-х месяцев
		Заболело	Пало	В/убито	Сохранность	Среднесут. прирост жив. массы, г
		гол.	%	гол.	%	гол.	%	гол.	%
1-я опытная	228	66	28,9	6	2,6	13	5,7	209	91,7	688
2-я контрольная	150	83	55,3	13	8,7	29	19,3	108	72,0	568
Р < 0,05

При проведении широкого производственного опыта по определению профилактической эффективности лечебной сыворотки на 1088 телятах сохранность составила 97,5%, что на 11,2% выше, чем в контроле.

Профилактическая эффективность полученной поливалентной гипериммунной сыворотки в широком производственном опыте была на 23,8% выше коммерческой (Щелковской биофабрики).