Метод вакцины "в яйцо". Орнитобактериоз

1. Преимущества применения вакцины "в яйцо" перед традиционным методом

Вакцинация «в яйцо» имеет ряд преимуществ перед другими методами вакцинаций, главным из которых является образование высокого уровня иммунитета у цыплят и высокой производительности труда при вакцинации. Вакцинация проводится только перед переносом эмбрионов из инкубационных машин в выводные на 18-й день инкубации. В начале прокалывается специальной иглой отверстие в скорлупе, с тупого конца яйца, а затем под углом 45 градусов при помощи тонкой иглы вводится вакцина под оболочку хорионаллантоиса. После введения, иглы для прокалывания скорлупы и иглы для инъекции, очищаются и дезинфицируются в растворе хлора.

В настоящее время имеются программы для вакцинации против болезни Марека, инфекционного бронхита, болезни Ньюкасла. В перспективе с биологической точки зрения вакцинация «в яйцо» возможна против кокцидиоза, оспы, инфекционного ларинготрахеита, пневмовирусной инфекции и инфекционной анемии цыплят. Возможны также комбинации различных вакцин: болезнь Ньюкасла + инфекционный бронхит или болезнь Ньюкасла +оспа или болезнь Ньюкасла + инфекционный ларинготрахеит или болезнь Ньюкасла + болезнь Гамборо и другие.

Для вакцинации «в яйцо» против болезни Ньюкасла обеспечивает более ранний иммунитет, чем при других методах вакцинации. Исследования с применением вакцины против болезни Марека из штамма герпесвирус индейки и/или Риспенс-988, показало защиту против заражения полевым вирусом уже в день вывода. Вероятно, вакцинация «в яйцо» вызывает такую же быструю реакцию образования антител в организме как при вакцинации после вывода цыплят. Известно также, что масляные эмульсии убитых вакцин, введенных «в яйцо», вырабатывают такую же хорошую иммунную реакцию (титр антител), как убитые вакцины, введенные цыплятам после вывода.

Вспышки болезни Ньюкасла могут быть объяснены попаданием полевого вирулентного вируса этой инфекции от птиц частных подворий и/или отказа многих фермеров от вакцинации против болезни Ньюкасла, и/или очень низкого уровня иммунитета у птиц после вакцинации. Очень важно усилить меры по профилактике болезни Ньюкасла на фермы за счет высокого уровня биобезопасности с тем, чтобы защитить бройлеров от полевого вируса болезни Ньюкасла и снизить поствакцинальные респираторные реакции и поддерживать высокий уровень иммунитета.

Вакцинация «в яйцо» против болезни Ньюкасла подтверждает выполнение большинства целей, которые ставятся перед проведением профилактической вакцинации. Итак, использование метода вакцинации «в яйцо» с использованием автоматического аппарата «Иновоинсепт» снижает степень потерь при вакцинации и обеспечивает более высокую иммунную защиту против заражения полевыми агентами и исключает контакт человека с цыплятами, который неизбежен при вакцинации методом «спрей» в день вывода; снижает время, требуемое на обработку цыплят и их доставку до птичника, а также улучшает процесс выращивания птиц.

В результате значительно сокращаются затраты на проведение вакцинации как в инкубаториях, так и на фермах по выращиванию бройлеров.

2. Орнитобактериоз и борьба с Ornithobacterium rhinotracheale в мясном птицеводстве

Одна из основных проблем птицеводческой отрасли -- это респираторные болезни. Среди них особое место занимает инфекция Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) -- недавно открытый орнитобактериоз, серьезно угрожающий мясному птицеводству.

Европейские исследования показали, что все родительские стада бройлеров в Германии серопозитивны по ORT, а в Бельгии ORT была культурально подтверждена у 80% поголовья бройлеров финишного возраста. Возбудитель был впервые изолирован в 1991 году от бройлеров в Южной Африке и позднее подтвержден в Голландии, где этой неизвестной ранее бактерии было присвоено название ORT. Интересно, что затем ORT обнаружили в архивных культурах 80-х годов из многих стран мира, однако тогда роль этой бактерии в инфекционных патологиях была недооценена.

В настоящее время установлено, что у бройлерных цыплят и индюшат ОРТ может проявляться респираторными и суставными патологиями разной степени тяжести. Клинически инфекция ORT напоминает микоплазмоз, а степень тяжести клинических проявлений зависит от вирулентности штамма ORT и усугубляется при нарушениях микроклимата. Хотя летальность при инфекции ORT у родительского поголовья может достигать 10%, орнитобактериоз зачастую протекает бессимптомно, выражаясь лишь на пике яйцекладки снижением продуктивности и размера яйца (хотя оплодотворяемость и выводимость не страдают). Поскольку ORT обладает тропизмом к яйцеводам и клоаке, инфекция распространяется вертикально через оболочки яйца и скорлупу.

В настоящее время для родительского поголовья бройлеров разработана и широко применяется инактивированная вакцина, однако только рациональное использование антибиотиков позволяет ликвидировать инфекцию как у родительского, так и у товарного стада бройлеров.

Для сравнения эффективности схем применения антибиотиков при орнитобактериозе был проведен эксперимент (табл. 1).

Четыре опытные группы были укомплектованы суточными цыплятами коммерческой поставки.

Контрольная группа (группа №4) не получала дополнительных обработок, кроме выпаивания потенцированного сульфаниламида в первые трое суток жизни.

Таблица 1

Наблюдение проводилось с суточного возраста и до убоя в 49 дней. Птица, павшая с клиническими проявлениями респираторной инфекции, была исследована патоморфологически. Сыворотка крови и смывы из трахеи были отобраны во время убоя. Обнаружение антител к ORT в сыворотке проводилось методом сэндвич-ИФА. Выявление ДНК ORT в смывах проводилось методом ПЦР с использованием Taq-полимеразы и праймеров OR16S-F1 и OR16S-R1 фрагмента 784bp гена 16S рРНК ORT.

Первые симптомы респираторной инфекции (угнетение, затрудненное дыхание с раскрытым клювом, отеки инфраорбитальных синусов) появились в контрольной группе на 21-25-й дни. На вскрытии наиболее часто обнаруживались аэросаккулиты с сероватым творожистым экссудатом, а также артриты, пневмония, трахеит и перикардит/перигепатит с характерными для E. coli фибринозными наложениями.

Как оказалось, чистую культуру ORT невозможно было выделить из патматериала в связи с наличием вторичной микрофлоры, однако ПЦР выявила ДНК ORT у всех птиц контрольной группы.

Наибольшее число положительных в ИФА/ELISA сывороток также было в контрольной группе, не получавшей специфической терапии против ORT.

Как видно из результатов опыта только комбинация Родотиума с тетрациклином была эффективна в предотвращении клинических проявлений ОРТ; показатели продуктивности в этой группе также были выше. Это согласуется с данными De Herdt et al. (2001), который рекомендует использовать антибиотики плевромутилиновой группы для борьбы с ОРТ. Энрофлоксацин и доксициклин оказались неэффективны в борьбе против ORT. Аналогичные данные были получены Le Carrou et al. (2006), который обнаружил причину резистентности к энрофлоксацину в мутации гена parC ДНК-топоизомеразы бактерий. Таким образом, только использование Родотиума является эффективным средством борьбы с орнитобактериозом в мясном птицеводстве.

На фото: трек neg -- отрицательный контроль, трек pos -- положительный контроль, трек vacc -- ДНК вакцинного штамма ORT, трек control -- контрольная группа в опыте, треки I, II и III -- номера групп в опыте. Нижний фрагмент -- внутренний контроль прохождения ПЦР.

3. Постановление координационного совещания ВНИВИП по проблеме "Ветеринарная профилактика в промышленном птицеводстве"

Промышленное птицеводство является наиболее динамично развивающейся отраслью сельскохозяйственного производства. Как следует из доклада академика Фисинина В.И. на годичном собрании Росптицесоюза 8 февраля 2008 года в 2007 году, завершился первый этап реализации «Отраслевой целевой программы развития птицеводства в Российской Федерации в 2005-2007 гг. и на период до 2010 года», принятой коллегией Минсельхоза в мае 2004 года.

За весь период первого этапа реализации программы прирост производства мяса птицы увеличен на 702 тыс. т и 2,0 млрд. яиц. В расчёте на душу населения эта прибавка составила 6,3 кг мяса и 12 яиц. А если брать весь период стабилизации птицеводства в РФ, начиная с 1997 года, то прирост мяса составил 1258 тыс. т (1997 г.-630 тыс. т и 2007 г. - 1888 тыс. т). Впервые превышен уровень производства мяса птицы в бывшем СССР.

Немаловажное значение в поддержании стабильного развития птицеводства имеет современное и качественное проведение мероприятий, направленных на обеспечение ветеринарного благополучия птицехозяйств.

В 2007 году гибель птицы составила в пределах 50 млн. голов или 5,5% от общего поголовья. Надо отметить, что за последние годы уровень падежа от инфекционных болезней неуклонно снижается (около 2%). Однако потенциальная опасность возникновения инфекционных болезней остаётся высокой, особенно по гриппу птиц и ньюкаслской болезни.

Это определяет задачи научных учреждений Россельхозакадемии и других ведомств, участвующих в выполнении Межведомственной программы «Ветеринарная профилактика в промышленном птицеводстве».

Заслушав и обсудив доклад председателя координационного совета, директора ВНИВИП, доктора ветеринарных наук Э.Д. Джавадова по Межведомственной координационной программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК Российской Федерации на 2006-2010 гг., проблеме VIII «Разработка новых методов и средств диагностики лечения и профилактики болезней животных и рыб по обеспечению устойчивого ветеринарного благополучия и получения продукции АПК высокого санитарного качества, направленной на научное обеспечение приоритетного национального проекта «Развитие АПК» и реализации приоритета «Ускоренное развитие животноводства», этапу VIII.07. «Изучить особенности эпизоотического процесса и разработать высокоэффективные средства и оптимальные способы их применения для диагностики, профилактики и борьбы с инфекционными и паразитарными болезнями птиц» и доклады и выступления представителей НИУ-соисполнителей, координационное совещание отмечает, что научно-исследовательские работы были направлены на изучение эпизоотологии особо опасных инфекционных болезней птиц (гриппа, ньюкаслская болезнь) и смешанных форм их течения, создание нового поколения средств диагностики, специфической и неспецифической профилактики, терапии и дезинфекции, методов обеспечения биобезопасности продукции птицеводства обеспечивающих устойчивое ветеринарное благополучие промышленного птицеводства.

В выполнении этапа VIII.07 участвовало 9 учреждений-соисполнителей, из них:

- НИУ Россельхозакадемии: ВНИВИП, ВНИИВВиМ, ВНИТИП, ВНИИВСГиЭ, ВНИИПП, УНИВИ, СибНИИП, ПрикаспЗНИВИ, СтНИИЖК;

- 3 Вуза: МГАВМиБ, СПбГАВМ, Брянская ГСХА.

Научные исследования проводили 30 научных сотрудников, в т.ч. 10 докторов наук и 25 кандидатов наук.

При проведении исследований использовались современные вирусологические, бактериологические и паразитологические методы (ИФА, ПЦР, применение гибридом для получения МКА и др.).

В ходе реализации Межведомственной координационной программы были изучены закономерности течения эпизоотического процесса при наиболее опасных и малоизученных вирусных болезнях птиц, созданы новые и усовершенствованы существующие средства диагностики и специфической профилактики, предложены новые пробиотики, дезинфектанты.

В этом направлении активно работали НИУ Отделения ветеринарной медицины. ВНИВИП совместно с Зоологическим институтом РАН получены данные о носительстве антител (в РТГА) к серотипу H5 более чем у 300 видов птиц, обитающих на Куршской косе. Выявлено от 15 до 40% положительных проб у разных видов.

Во ВНИИВВиМ во всех 24 пробах от диких гусей из ГК «Завидово» обнаружены положительные титры к H5 серотипу. Из внутренних органов вирус не выделен. Показано также, что антитела к серотипу H1 выделяются значительно чаще (80%), чем к серотипу H5 (20%).

Во ВНИВИП совместно с НИИ гриппа РАМН впервые в мире создана бивалентная адъювантная инактивированная вакцина, которая может использоваться как в моно- (H5N3), так и бивалентном варианте (H5N3+ H7N3). Тем не менее, Россельхознадзор уже в течение двух лет не принимает решений по этой разработке. Вопрос, между прочим, как показывают данные УрНИВИ уже назрел. Разрешённая к применению инактивированная вакцина из подтипа H5N1 вызывает у цыплят только 50% необходимого уровня антител (1:16), а у 27% - антитела вообще отсутствуют. Ещё хуже вырабатывают антитела гусята (10%).

ВНИВИП проводит перспективную разработку инактивированной сорбированной и рекомбинантной вакцин, которые можно будет рекомендовать для применения у молодой птицы и путём выпаивания или инстилляции в частном секторе.

ВНИИВСГиЭ в качестве экологически безопасного дезинфектанта при гриппе птиц предложен кислый анолит.

Заслуживают внимания данные о противовирусной активности препарата Абактан-Р при гриппе птиц (ВНИИВВиМ).

Острые вспышки ньюкаслской болезни на сегодня не так часты в промышленном птицеводстве, поэтому важно вести постоянный мониторинг с целью выявления вирусоносительства. Как показывают исследования ВНИИВВиМ, максимум выявления у перелётных птиц выпадает на лето-осень (80-100%). Отсюда необходимо соблюдать мероприятия по биозащите, особенно в это время.

Для профилактики НБ ВНИВИП совместно с ООО «Кронвет» разработал адъювантную инактивированную вакцину «Авикрон», которая в различных сочетаниях может применяться одновременно для профилактики 6 инфекций (ИБК, ИББ, Рео, ССЯ-76, РМ) и зарегистрирована в РФ. Рассматривается возможность включения в неё антигенов ещё трёх инфекций.

Важной задачей, которую решает ВНИВИП, является разработка непрямого метода ИФА для детекции пневмовирусной инфекции (ПВП) и вирусного энтерита гусей (ВЭГ). Успешно ведутся работы по созданию инактивированной вакцины против ПВП.

УрНИВИ предложена комплексная программа борьбы с инфекционным энцефаломиелитом птиц (ИЭМ), а ВНИВИП на основе выделенных изолятов разрабатывает диагностикум.

В ходе выполнения НИР проведены мониторинговые исследования эпизоотической ситуации по бактериальным болезням в птицехозяйствах яичного и мясного направления. Установлена доминирующая роль кишечной палочки и сальмонеллы энтеритидис в патологии птиц. Выявлен высокий уровень инфицированности кур кампилобактериями. Для снижения инфицированности птиц условно-патогенной и эпидемиологически опасной микрофлорой, как альтернатива применению антибиотикам изучается возможность использования препаратов других классов: бактериофагов, полученных в отделе, пре- и пробиотиков (субгитал и др.), препарата на основе йода - монклавита.

Прикаспийским ЗНИВИ с положительным результатом испытана у бройлеров анатоксин-вакцина при колибактериозе, а СибНИИП - комплексный Пробиотик «Астра-М».

ВНИИПП разработаны «Рекомендации по снижению обсеменённости тушек птицы листериями в ваннах охлаждения».

В отделе паразитологии ВНИВИП ресинтезирован перспективный для комплексной профилактики кокцидиостатик никарбазин. ООО «Фармакон» разработал регламент синтеза препарата, но производство его пока что не начато. Единственной альтернативой применению кокцидиостатиков остаётся разработанная институтом трёх- и четырёхвидовая культура кокцидий.

Продолжается разработка ассоциированной липосомальной вакцины против НБ, ИЛТ и ИБК на основе полученного патента РФ № 2306949.

Одним из перспективных направлений научных исследований в птицеводстве может стать нанотехнологии. Во ВНИВИП продолжаются исследования по цитокинам, которые на 15 Конгрессе ВВПО в Пекине (2007 г.) рассматриваются одними из перспективных адъювантов при создании рекомбинантных вакцин.

В результате проведённых исследований по Тематическому плану Межведомственной координационной программы этапа VIII.07. в 2007 г. разработана следующая научно-техническая продукция:

? вакцина против высокопатогенного гриппа птиц (ВПГП) подтипов H5 и H7;

? Инструкция по применению Дезонтэна для дезинфекции объектов ветнадзора и профилактики инфекционных болезней птиц;

? Рекомендации по снижению обсеменённости тушек птицы листериями в ваннах охлаждения;

? Рекомендации по снижению обсеменённости поверхности скорлупы яиц листериями при производстве меланжа и яичного порошка;

? проекты НД на:

- инактивированную сорбент-вакцину против ВПГП;

- диагностикум вирусного энтерита гусей в ИФА;

- метод иммунохимиопрофилактики кокцидиозов у ремонтного молодняка кур;

- антикокцидийный премикс никарбазин-25.

? данные мониторинга опасных вирусных и бактериальных болезней птиц;

? опытные образцы нового комплексного препарата «Брокарсепт»»

? Свод правил экологически безопасной сельскохозяйственной практики (Свод правил ЭСП) - «Птицеводство».

Координационное совещание отмечает, что запланированный объём исследований в целом выполнен. Однако результаты исследований могли быть существенно дополнены, если бы от выполнения координационной программы не отказались НИУ МСХ РФ (ВНИИЗЖ, ВГНКИ ветпрепаратов), ссылаясь на отсутствие финансирования по программе.

Следует отметить, что систематическое недофинансирование НИР не позволяет создать современную материально-техническую базу НИУ, не способствует притоку молодых кадров, снижает уровень научных исследований.

Координационное совещание постановляет:

1. Одобрить доклад председателя Координационного совета, директора ВНИВИП Э.Д. Джавадова по Межведомственной координационной программе «Итоги выполнения научно-исследовательских работ за 2006-2008 гг. и перспективы научных исследований по проблеме «Ветеринарная профилактика в промышленном птицеводстве на 2006-2010 гг.».

2. Основными направлениями научных исследований в сложившейся эпизоотической ситуации считать:

- разработку и усовершенствование методов эпизоотологического мониторинга предприятий промышленного птицеводства Российской Федерации с целью прогнозирования и предотвращения заноса возбудителей инфекционных болезней;

- усиление эпизоотологического мониторинга гриппа А птиц в птицехозяйствах РФ, а также среди диких, мигрирующих и синантропных птиц;

- разработку и усовершенствование средств и методов диагностики и индикации возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственной птицы;

- разработку и внедрение новых и усовершенствование существующих биологических препаратов для птицеводства, кормовых добавок, дезинфицирующих средств и методов дезинфекции предприятия;

3. Считать необходимым усилить работу по повышению конкурентоспособности исследований, более активно участвовать в конкурсах на получение грантов РФФИ, Минсельхоза, Роснауки и др. Рассмотреть возможность создания комплексного мегапроекта по теме: «Создать новые средства, обеспечивающие устойчивое ветеринарное благополучие в промышленном птицеводстве, в том числе на основе нано- и биотехнологий».

4. Обратить внимание руководителей НИУ на необходимость совершенствования методологии научных исследований, изыскание финансовых средств для оснащения отделов и лабораторий современным научным оборудованием, а также подготовки кадров через аспирантуру. Для повышения результативности НИР необходимо укреплять интеграционные связи с головными организациями и международное научно-техническое сотрудничество с зарубежными странами.

5. Головной организации ВНИВИП с целью существенного улучшения координации НИР по проблеме «Ветеринарная профилактика в промышленном птицеводстве» совместно с Отделением ветеринарной медицины РАСХН изыскивать новые формы координации научных исследований ветеринарных НИУ и ВУЗов.

6. Для своевременного подведения итогов НИР за 2008 г. рекомендовать руководителям координируемых НИУ представить отчёты во ВНИВИП к 20 ноября 2008 г. К отчётам приложить список выходной научной продукции и копии патентов.

7. Просить Президиум и Отделение ветеринарной медицины Россельхозакадемии выйти с ходатайством перед Правительством РФ об увеличении финансирования научных исследований по нанотехнологиям, целью которых является обеспечение стойкого ветеринарного благополучия в промышленном птицеводстве РФ.