Санитарно-ветеринарная экспертиза туш и органов животных, подвергшихся радиационному воздействию

В лаборатории ветеринарно-санитарной экспертизы МГУПБ была изучена чувствительность различных штаммов микроорганизмов к концентрациям основных видов антибиотиков, применяемых для лечения и откорма скота и птицы. На основании этих данных разработана методика, позволяющая определять количество антибиотических препаратов в продуктах животного происхождения, в частность мясе.

Сущность метода заключается в том, что адсорбирующие бумажные диски, смоченные изучаемым экстрактом из мышечной ткани мяса, бульоном и растворами антибиотика разной концентрации размещают на поверхности твердой питательной среды, содержащей тест - культуру. Тест - культурой называют штамм микроорганизма, который не способен расти в среде, в которой количество антибиотика ничтожно малое.

Рост тест - культуры при термостатировании приводит к помутнению агара. Отсутствие зоны помутнения вокруг диска с изучаемым образцом (нет роста микроорганизмов) свидетельствует о наличии в изучаемом субстрате антибиотического вещества. Диаметр этой зоны сравнивают с диаметром зоны отсутствия роста микроорганизмов вокруг дисков, содержащих разные концентрации антибиотиков.

Для подобных исследований следует использовать готовые и сухие среды, дистиллированную воду. Среды, реактивы и физиологический раствор не должны содержать ингибиторов микроорганизмов.

В проводимых исследованиях были использованы мясо - пептонный агар (рН среды после стерилизации - 7,2-7,4) и среда, состоящая из агар - агара - 20г, бульона Хоттингера (130 - 140 мг% аминного азота) - 1000 мл, глюкозы - 0,1% в виде 40% - ного раствора. Компоненты растворяли в бульоне и смешивали. Среду стерилизовали при температуре 120*С в течение 15 мин, рН среды после стерилизации составляла 7,2 - 7,4.

Основные растворы антибиотиков готовили из очищенных стандартных образцов препаратов. Использовали антибиотики, выпускаемые Всероссийским государственным научным контрольным институтом.

Для обнаружения в мышечной ткани и бульоне тетрациклина и неомицина использовали штамм B. subtillis L2. Культуру M. luteus АТСС 9341 применяли для обнаружения левомицетина.

Для приготовления тест - системы вносили 1 мл суспензии тест - культуры в 10 мл расплавленной агаризированной среды, приготовленной на бульоне Хоттингера, перемешивали и переносили в чашку Петри, расположенную на строго горизонтальной поверхности. Во избежание скопления конденсата, чашки с застывшим агаром в перевернутом вверх дном виде подсушивали в термостате. При исследовании в тушки птиц вводили тетрациклин, левомицетин и неомицин согласно инструкции по применению этих препаратов. Образцы для исследований отбирали в день последнего введения препарата и через 7 сут после этого.

От каждой тушки птицы были взяты образцы мышечной ткани из бедра до и после варки (тушку разрубали вдоль позвоночного столба на две половины и варили при 100*С в течение 1 ч).

Образцы отбирали согласно методам взятия проб для микробиологических анализов (ГОСТ №26668 - 85), затем очищали от серозных оболочек, взвешивали, измельчали, добавляли физраствор в соотношении 1:1 и тщательно перемешивали.

Кроме того, исследовали содержание антибиотиков в бульоне, полученном после варки тушек.

Образцы мышечной ткани выдерживали в течение 2 часов при комнатной температуре для экстракции антибиотика, периодически перемешивая, затем переносили его в пробирки и центрифугировали (при 3000 об./мин) в течение 10 минут. Надосадочную жидкость проверяли на наличие антибиотика.

На чашку Петри, содержащую агаризированную питательную среду, приготовленную на бульоне Хоттингера и суспензию тест - культуры, размещали по трафарету бумажные диски, смоченные в надосадочной жидкости, полученной от проверяемого образца, и в растворах антибиотика с концентрацией от 0,001 мкг/мл до 10 мкг/мл. Чашки термостатировали при температуре 37*С в течение 3 - 5 ч. После инкубации чашки просматривали в проходящем свете с целью определения размеров зоны задержки роста тест - культуры вокруг бумажных дисков.

Концентрация антибиотика в исследуемом образце должна быть равна концентрации в растворе, у которого зона отсутствия роста тест - культуры будет равняться зоне вокруг исследуемого образца.

Для расчёта антибиотической активности брали средние значения диаметров зоны отсутствия роста микроорганизмов одного и того же разведения как для антибиотика, так и для испытуемого гомогената. Например, при концентрации тетрациклина в растворе 0,001 - 10 мкг/мл были получены следующие средние значения диаметров зон (в мм): для 0,001 - 1,5, для 0,01 - 3,5, для 0,1 - 7,5, для 1 - 14, для 10 - 22.

Используя полученное данные, вычертили контрольные кривые с помощью которых определяли содержание антибиотиков в испытываемом гомогенате мышечной ткани или бульоне (рис. 1).

Диаметр зоны отверстия роста тест-культуры и содержание антибиотиков в исследуемых образцах представлены в таблицах 2 и 3.

Таблица 2

Таблица 3.

Опытом путём было установлено, что количество тетрациклина и неомицина в мышечной ткани бедра тушки птицы и в последний день введения препарата было второе выше, чем через 7 сут (содержание тетрациклина снизилось с 1,5 до 0,5 мкг/мл, а неомицина - с 1 до 0,3 мкг/мл). По истечению срока запрещения сдачи птиц на убой количество левомицетина уменьшилась в 6 раз (с 3 до 0,5 мкг/мл).

При варке тушек концентрация антибиотиков значительно уменьшилась. Так, содержание тетрациклина в мышечной ткани птицы, подвергшейся убою в последний день введения препарата, снизилось с 1,5 до 0,1 мкг/мл, т.е. на 93% (в бульон диффундировало 70% антибиотика, остальная часть - 23% была разрушена).

В мышечной ткани тушек птицы, подвергшейся убою через 7 сут после последнего введения антибиотиков, после варки тетрациклин не обнаружили. Причем 80% антибиотиков (0,4 мкг/мл) перешло в бульон, 20% антибиотиков было разрушено.

После варки содержание левомицетина снизилось соответственно на 90% и 80% в мясе птицы, подвергшейся убою в последний день введения препарата и через 7 сут; в бульон диффундировало соответственно 90% и 60% левомицетина.

Количество неомицина в мышечной ткани птицы, подвергшейся убою в последний день введения препарата, снизилось после варки соответственно на 80% и на 96%. В бульон перешло около 70% антибиотика. Часть была разрушена при варке (рис. 3 и 4).

Следовательно, предложенный метод определения содержания антибиотического препарата подтверждает, что с течением времени их количество в организма уменьшается, но семи суток, как принято, не достаточно для полного его выведения из мышечной ткани.

Варка при температуре 100*С в течение 1 часа позволяет снизить содержание антибиотика в мышечной ткани приблизительно на 70 - 80%. Большая часть препарата диффундирует в бульон, а около 10% при варке разрушается.

Таким образом, продукты убоя, содержащие повышенное количество антибиотика, могут быть использованы после варки при обычных параметрах обеззараживания и повторном контроле на содержание антибиотика в мышечной ткани.

Бульон содержит около 70% антибиотика от первоначального количества, потому на пищевые цели использоваться не может и должен быть утилизирован.

Предложенная методика по сравнению с общепринятой (МУ 3049-84) является более упрощенной. Она может быть использована в производственных условиях для определения остаточного содержания антибиотиков, например, в случаях при решении реализации мясного скота, подвергнутого вынужденному убою; при определении остаточных количеств антибиотиков-консервантов, применяемых против бактериальной порчи мяса во время его хранения и транспортировки; введение антибиотика в организм животного непосредственно перед убоем; а также во многих других случаях.

ПРИЛОЖЕНИЯ

ПРИЛОЖЕНИЕ № 1

Временные методические рекомендации по экспресс-методу прижизненного контроля радиоактивной загрязненности животных.

Экспресс-метод прижизненного контроля радиоактивной загрязненности мышечной ткани крупного рогатого скота с помощью дозиметрических приборов СРП-68-01, ДРГЗ-02, ДП-5 и др. основан на определении объемной радиоактивности тела животного. Метод может быть использован в условиях колхозов, совхозов, на скотоприемных пунктах, убойных площадках и мясокомбинатах.

Замеры радиоактивности производятся в области ягодичных мышц

и мышц плеча у верхнего края средней части плечевой кости. Для расчета берут среднюю величину по двум замерам в указанных областях, время определения радиоактивного загрязнения мышечной ткани одного животного около 1 минуты.

Правила техники безопасности и личной гигиены идентичны требованиям к работе в животноводстве.

Спецодежда: халат, чепчик, прорезиненный или из полиэтиленовой пленки фартук, сапоги, мягкие резиновые перчатки. На одну рабочую смену необходимо иметь около 100 шт. лоскутов из полиэтиленовой пленки размером 15х15 или 20х20 (см), 50 г этанола, 50г ваты, рабочий журнал для записей.

ПОРЯДОК РАБОТЫ

Для измерений используется СРП-68-01 с датчиком, оборудованным защитным экраном из свинца (защитным кожухом) с толщиной стенки 10-12 мм.

Вo избежание загрязнения на датчик прибора надеть полиэтиленовый пакет.

Проверить работу прибора и его чувствительность согласно описанию и прилагаемому эталону.

3. Определить гамма-фон на месте дозиметрии животных (скотный двор, убойный пункт, скотобаза мясокомбината и др.).

4. Установить датчик прибора на чистую поверхность кожи в области ягодичных мышц и провести замеры радиоактивной загрязненности (мкР/час). Затем выполнить замер в точке мышц плеча выше верхнего края середины плечевой кости. Определить среднюю мощность излучения по этим замерам и вычесть из него значение уровня "фона". Полученную разность умножить на коэффициент пересчета 4.4.

Результат получают в мКи/кг удельной активности мышечной ткани животного

Пример: Мощность дозы излучения от мышц ягодичной области составляет 29 мкР/час, от плечевых мышц 27 мкр/час, гамма-фон в помещении 19 мкР/час, коэффициент равен 4,4.

(29+27)/2 = 28; 28-19=9 (мкР/час)

9х4,4=39,6 мКи/кг =3,96 . 10 Ки/кг

Заключение: Удельная активность мяса при убое данного

животного составит 3,96.10 Ки/кг

Результаты и расчеты записываются в рабочий журнал.

ПРИЛОЖЕНИЕ № 2

Временные методические рекомендации по экспресс-методу контроля радиоактивной загрязненности туш, полутуш и отрубов мяса.

Экспресс-метод контроля радиоактивной загрязненности туш, полутуш отрубов говядины, свинины и баранины с помощью дозиметрических приборов СРП-68-01, ДП-5, ДРГЗ-02 и др. основан на определении объемной радиоактивности продукта.

Метод прост в исполнении, выполняется одним дозиметристом, в обычных условиях на конвейере разделочного цеха или камеры охлаждения мясокомбинатов, боен, лабораторий ветеринарно-санитарной экспертизы.

Замеры туш, полутуш производятся в ягодичной области, области бедренных мышц и мышц плеча. Масса отрубов для замеров должна быть не менее 10 кг.

Правила техники безопасности и личной гигиены обычные.

Спецодежда: халат, чепчик, прорезиненный или из полиэтиленовой пленки фартук, сапоги, мягкие резиновые или хлорвиниловые перчатки. Для работы нужно иметь на одну смену 20 шт. полиэтиленовых пакетов, 50 г этанола, 5Ог ваты, рабочий журнал.

1. Подготовка СРП-68-01 к работе

1.1 Настоящая методика предполагает проведение измерений мощности дозы прибором СРП-68-01, датчик которого закрыт специальным свинцовым цилиндрическим экраном.

1.2 Для предотвращения загрязнения датчик закрывается полиэтиленовым пакетом.

1.3 В остальном подготовка к работе прибора осуществляется в соответствии и инструкцией по эксплуатации, входящей в комплект поставки аппаратуры.

2. Порядок работы.

2.1 Включить и проверить работу прибора согласно инструкции по эксплуатации.

2.2 Определить уровень "фона" на месте измерения (помещение разделочного цеха, Холодильная камера и т.д.).

2.3 Установить торец датчика прибора на поверхность одной из указанных областей туши.

2.4 Произвести отсчет показаний по шкале стрелочного индикатора прибора в соответствии с положением переключателя диапазонов измерений (30,100,300,1t,3т) .

2.5 Расчет удельной активности провести по формуле:

А мКи/кг = К (Ри - Рф), где

Рф мкР/час - измеренный уровень «фона»

Ри мкР/час - мощность дозы, измеренная на туше,

К=4 - коэффициент пересчета мощности дозы в удельную активность.

2.6 Результаты измерений и расчетов записываются в рабочий журнал.

Пример: Мощность дозы излучения от мышц ягодичной группы (Ри)

составила 34мкр/час;

уровень "фона" в помещении (Рф) 15мкР/час

А = 4(34-15) = 76нКи/кг = 7,6*10 Ки/кг

Заключение: Удельная активность мяса составляет 7,6х10 Ки/кг

Периодический контроль измерений удельной активности с помощью СРП-68-01 производится на радиометрической установке ДП-100 методом "толстого слоя". Для этого с измеряемого объекта (туша, полутуша) отбирается 5-6 проб, удельная активность которых определяется на установке ДП-100 в соответствии с существующей методикой.

Мясо, прошедшее радиационный контроль экспресс-методом, при отправке на мясоперерабатывающие предприятия или другие адреса должно быть подвергнуто радиационному лабораторному контролю на установке ДП-100.