2

Размещено на http://www.allbest.ru/

ГЛАВНОЕ УПРАВЛЕНИЕ ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ

МОГИЛЁВСКОГО ОБЛАСТНОГО ИСПОЛНИТЕЛЬНОГО КОМИТЕТА

УЧРЕЖДЕНИЯ ОБРАЗОВАНИЯ

«МОГИЛЁВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ»

РЕФЕРАТАТИВНОЕ СООБЩЕНИЕ

На тему «Морфологические, культуральные, биохимические свойства и токсинобразование холеры»

Подготовила: Бондарева Ксения Николаевна

Уч-ся группы 4СД20

Руководитель: Пойда Ольга Викторовна

Могилёв

2020

Морфологические и тинкториальные свойства

V. cholerae представляет собой изогнутые короткие подвижные палочки. Размеры клеток холерного вибриона составляют 1,5-4,0х0,2-0,6 мкм. Для холерных вибрионов характерен полиморфизм - в клиническом материале обнаруживаются типичные изогнутые формы, а в препаратах с питательных сред преобладают прямые палочковидные формы (рисунок 14).

2

Размещено на http://www.allbest.ru/

Холерный вибрион под электронным микроскопом

Холерный вибрион является монотрихом, так как имеет один длинный жгутик, расположенный на конце клетки. Жгутик в 2-3 раза длиннее тела клетки (рисунок 15).

Жгутик у холерного вибриона, электронная микрофотография

Жгутик снабжён чехликом и продольным выростом, напоминающим ундулирующую мембрану. Жгутики хорошо выявляются при окраске препаратов по методу Лейфсона (рисунок 16).

Жгутики V. cholerae. Окраска по методу Лейфсона

Подвижность холерных вибрионов является одним из диагностических признаков возбудителя.

Пили (фимбрии) представляют собой тонкие гибкие нитевидные образования на поверхности бактериальной клетки (рисунок 17).

2

Размещено на http://www.allbest.ru/

Пили на поверхности клеток холерного вибриона, компьютерное изображение.

Пили являются рецепторами для фага СТХц. Они необходимы для колонизации микроворсинок тонкого кишечника и принимают участие в образовании биопленки на поверхности тела гидробионтов.

Клетки холерного вибриона хорошо окрашиваются основными анилиновыми красителями, грамотрицательные (рисунок 18).

Холерный вибрион, окраска по Граму

Широко используется окраска препаратов разведенным карболовым фуксином Циля. При этом вибрионы приобретают интенсивный розовый цвет (рисунок 19).

Холерный вибрион, окраска карболовым фуксином Циля

Холерный вибрион не образует спор. Клетки V. cholerae серогруппы О1 не образуют капсулы, а клетки V. cholerae серогруппы О139 имеют полисахаридную капсулу.

Культуральные свойства

Холерные вибрионы являются факультативными анаэробами, но предпочитают аэробные условия выращивания. Оптимальная температура культивирования составляет 37°С. Холерные вибрионы относятся к группе щелочелюбивых микроорганизмов. Они хорошо растут на простых питательных средах с высоким значением рН (7,6-8,2). Это свойство используется при подборе питательных сред для выращивания холерного микроба. Элективными питательными средами для культивирования холерного вибриона являются щелочной МПА, ТСВS-агар (питательный агар с тиосульфатом натрия, цитратом, бромтимоловым синим и сахарозой), среда СЭДХ (сухая элективнодифференциальная среда для выделения холерного вибриона) или СЭДХ-М (модернизированная среда СЭДХ), среда Монсура (таурохолат-теллуритовый агар с желатином). Состав питательных сред, применяемых для выращивания холерного вибриона, представлен в приложении №1.

Чаще всего используют щелочной МПА, на котором холерный вибрион образует круглые гладкие стекловидно-прозрачные с голубоватым оттенком и слабой опалесценцией колонии S-формы вязкой консистенции (рисунок 20). Размер колоний на щелочном агаре через 10-12 часов культивирования не превышает 1 мм в диаметре, а через 18-24 часа достигает 2-3 мм.

Рост холерного вибриона на щелочном МПА

На TCBS-агаре возбудитель холеры образует плоские полупрозрачные желтые колонии размером 2-3 мм в диаметре на сине-зеленом фоне среды (рисунок 21).

Рост холерного вибриона на TCBS-агаре

На среде Монсура (желтого цвета) через 12-18 часов культивирования формируются колонии серого или черного цвета (за счет восстановления теллурита) диаметром 2,0-2,5 см (рисунок 22).

Компьютерное изображение роста холерного вибриона на среде Монсура

В щелочной пептонной воде (рН 8,6-9,0), содержащей 0,5-1,0% натрия хлорида, холерный вибрион уже через 6-8 часов вызывает легкое помутнение и образование нежной голубоватой плёнки на поверхности среды, края пленки приподняты вдоль стенок пробирки (рисунок 23), при встряхивании пленка легко разрушается и оседает на дно пробирки.

Пептонная вода с добавлением 0,5-1% натрия хлорида является оптимальной средой накопления при выделении возбудителя холеры из исследуемого материала.

Биохимические свойства

Возбудители холеры обладают сахаролитической и протеолитической активностью. Холерные вибрионы сбраживают с образованием кислоты без газа глюкозу, сахарозу, маннозу, маннит, лактозу (медленно), крахмал. Ферментация глюкозы может протекать как в аэробных, так и в анаэробных условиях. Эта способность выявляется на среде Хью-Лейфсона. Среда содержит питательный агар, глюкозу и индикатор. Посев производится вглубь столбика агара в две пробирки. В одну из пробирок вносят вазелиновое масло для создания анаэробных условий. При росте холерного вибриона цвет среды за счет разложения глюкозы до кислоты изменяется в обеих пробирках.

Холерный вибрион не ферментируют арабинозу, лактозу и инозит. По способности ферментировать маннозу, сахарозу и арабинозу Б. Хейберг распределил все вибрионы (холерные и холероподобные) на несколько групп (таблица 3).

Классификация вибрионов по Б. Хейбергу

Холерные вибрионы относятся к первой группе Б. Хейберга (ферментируют маннозу и сахарозу и не разлагают арабинозу).

Протеолитическая активность холерного вибриона выявляется при посеве культуры уколом в столбик желатина. Холерные вибрионы обладают плазмокоагулирующим (свёртывают плазму крови) и фибринолитическим (разжижают свёрнутую сыворотку) действием. Они свёртывают молоко, разлагают белки до аммиака и индола, сероводорода не образуют, восстанавливают нитраты в нитриты (положительная нитрозо-индоловая реакция).

Биовар Эль-Тор обладает гемолитической активностью в отношении эритроцитов барана. Лизис эритроцитов барана определяется в пробе Грейга. Гемолизин действует как порообразующий токсин. Однако в настоящее время выделяются штаммы V. cholerae eltor, утратившие гемолитические свойства. Такие штаммы отличаются от классических холерных вибрионов только способностью агглютинировать эритроциты и устойчивостью к полимиксину В. Вибрионы серогруппы О139 также не обладают гемолитической активностью и устойчивы к полимиксину В, но в отличие от V. cholerae eltor имеют капсулу.

Методы изучения свойств холерного вибриона представлены в приложении №2. Биохимические признаки позволяют дифференцировать возбудителей холеры (таблица 4).

холера возбудитель вибрион токсинообразование

Дифференциальные признаки возбудителей холеры

Реакция Фогеса-Проскауэра основана на том, что при культивировании бактерий семейства Vibrionaceae на среде Кларка накапливается ацетоин (продукт анаэробного превращения глюкозы), который обнаруживается по розовой окраске среды после добавления раствора едкого калия.

Способность к росту на среде с полимиксином (50 ед./мл) определяют путем посева культуры на агар с антибиотиком в чашке Петри с последующим инкубированием посевов при температуре 37ОС в течение 18 часов. Холерные вибрионы классического биовара (V. cholerae биовар cholerae) не растут на полимиксиновом агаре, а для других холерных вибрионов этот признак является положительным (отмечается рост культуры) или вариабельным.

Гемолиз эритроцитов барана (проба Грейга) выявляют путем добавления к бульонной культуре вибрионов взвеси эритроцитов с последующим инкубированием в течение 2 часов в термостате при температуре 37ОС, а затем - в холодильнике в течение суток. Положительный результат проявляется частичным или полным лизисом эритроцитов (лаковая кровь). В контроле (взвесь эритроцитов в бульоне) гемолиз отсутствует, отмечается осадок эритроцитов на дне пробирки, надосадочная жидкость прозрачная.

Агглютинацию куриных эритроцитов определяют на предметном стекле (слайд-агглютинация), смешивая суспензию агаровой культуры с куриными эритроцитами. При положительной реакции отмечается склеивание эритроцитов. В контролях (взвесь эритроцитов в растворе хлорида натрия и суспензия исследуемой культуры в растворе хлорида натрия) агглютинация отсутствует.

Чувствительность к бактериофагам выявляют следующим образом. На поверхность щелочного агара в чашке Петри наносят смесь 0,5-0,7%-ного агара и бульонной культуры возбудителя. После застывания агара с помощью петли или пастеровской пипетки на поверхность наносят капли диагностических бактериофагов. Инкубируют в термостате при температуре 37ОС в течение 18-20 часов. Положительный результат проявляется в виде одного стерильного пятна или группы мелких негативных колоний в месте нанесения капли бактериофага.

Восстановление нитратов и образование индола учитывает нитрозоиндоловая реакция (холера-рот-реакция). Для постановки этого теста в пептонную воду добавляют 0,1% калия или натрия нитрата и высевают исследуемую культуру. К выросшей культуре добавляют 1-2 капли концентрированной серной кислоты. Положительная реакция проявляется в изменении первоначального желтого цвета среды на ярко-красный, что свидетельствует об образовании нитрозоиндола. Механизм реакции заключается в том, что холерный вибрион восстанавливает нитрат в нитрит, а добавленная серная кислота вытесняет из нитрита азотистую кислоту, которая соединяется с индолом с образованием нитрозоиндола, придающего среде красный цвет.

Протеолитические свойства определяются путем посева культуры уколом в столбик желатина. Положительный результат проявляется разжижением желатина после культивирования при температуре 37ОС.

Токсинообразование холеры

В ответ на проникновение бактерий холеры эпителиальные клетки выделяют щелочной секрет, служащий идеальной средой для размножения возбудителя. Основной фактор патогенности -- способность к токсинообразованию. Холерные вибрионы образуют эндо-и экзотоксины.

Эндотоксин холеры -- термостабильный ЛПС, сходный по структуре и активности с эндотоксинами прочих грамотрицательных бактерий. Он проявляет иммуногенные свойства, индуцируя синтез вибриоцидных AT.

Однако этот токсин холеры не играет существенной роли в развитии характерных проявлений.

Экзотоксин холеры (холероген) -- термолабильный белок; его образование кодируют как хромосомные, так и плазмидные гены. Молекула токсина включает 2 компонента -- А и Б. Компонент Б взаимодействует с рецепторами эпителия тонкой кишки, облегчая проникновение в клетку компонента А. Компонент А составляют субъединица A1(активный центр) и субъединица А2, связывающая компоненты А и Б. Субъединица А1 активирует адснилатциклазу, приводя к увеличению внутриклеточного содержания цАМФ и выходу жидкости и электролитов из клеток либеркюновых желёз в просвет кишечника. Токсин не способен реализовать своё действие на каких-либо других клетках. Бактерии серовара 0139 также синтезируют экзотоксин с аналогичными свойствами, но в меньшем количеств

Учебная и методическая литература

1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии:

Учебное пособие для студентов медицинских вузов / Под ред. А.А. Воробьева, А.С. Быкова - М.: Медицинское информационное агентство, 2003. - 236 с.: ил.

8. Медицинская микробиология: учебник. 4-е изд. Поздеев О.К. / Под ред.

В.И. Покровского. - 2010. - 768 с.

9. Методические указания. МУК 4.2.2218-07. Лабораторная диагностика холеры.

10. Методические указания МУК 4.2.2315-08. Серологические методы в диагностике холеры. Дополнение к МУК 4.2.2218-07 Лабораторная диагностика холеры.

11. Мотавкина Н.С., Артемкин В.Д. Атлас по микробиологии и вирусологии. М.: Медицина, 1976. - 307 с.: ил.

12. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / Под ред В.И. Покровского. - 3-е изд., стереотип. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 768 с.: ил.

13. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / Под ред. акад. РАМН О.В. Бухарина. М.: Медицина; УрО РАН, 2002. 342 с.

14. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.1.2521-09. Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору за холерой на территории Российской Федерации.

Размещено на Allbest.ru