Размещено на http://www.allbest.ru/

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

МОРФОЛОГИЯ ТИМУСА, СЕЛЕЗЕНКИ, НАДПОЧЕЧНИКОВ И ОСОБЕННОСТИ ФИЗИЧЕСКОГО РАЗВИТИЯ КРЫС ПОД ВЛИЯНИЕМ ГУМИНОВЫХ СОЕДИНЕНИЙ

Сарыева Ольга Павловна

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

14.00.15 - патологическая анатомия

Москва - 2006

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н.Городкова» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Перетятко Любовь Петровна

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор

Милованов Андрей Петрович

доктор медицинских наук, профессор

Яглов Валентин Васильевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО Московский государственный

медико-стоматологический университет

Защита состоится « _____ » ______________ 2006 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 001.004.01 при ГУ НИИ морфологии человека РАМН по адресу: 117418, г. Москва, ул. Цюрупы, д. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ морфологии человека РАМН

Автореферат разослан « _____ » 2006 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат медицинских наук Л.П. Михайлова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Проблема антенатальной охраны здоровья потомства на фоне снижения демографических показателей, уровня здоровья и высокой перинатальной летальности в последние годы приобретает особую актуальность. Следует учесть увеличившееся число внешних факторов, отрицательно воздействующих на развивающийся плод, в первую очередь это фармакологические препараты. Общеизвестно, что развивающийся организм наиболее чувствителен к влиянию неблагоприятных факторов в антенатальном периоде онтогенеза. Даже относительно слабые воздействия негативных факторов на эмбриональном этапе развития приводят к нарушениям нейроэндокринных и нейрохимических механизмов регуляции (Berczi I., 1998).

Поскольку позитивный исход беременности и здоровье новорожденного в значительной степени определяется течением пренатального периода, по-прежнему актуальна разработка способов профилактики и лечения перинатальной патологии, в том числе и таких наиболее часто встречающихся состояний как гипоксия и гипотрофия плода. Выше обозначенная медицинская проблема расширяет круг специалистов, участвующих в совершенствовании известных и используемых методов терапии, и побуждает осуществлять поиск новых методов коррекции.

Некоторые исследователи (Орджоникидзе Н.В., 1994), занятые решением данной проблемы медицины, считают наиболее перспективными нетрадиционные методы профилактики и лечения, аргументируя это тем, что применение лекарственных препаратов на фоне изменения иммунного статуса сопровождается развитием аллергических реакций у матери и оказывает эмбриотоксическое и тератогенное влияние на плод.

В настоящее время определенный научный интерес представляют поиск новых биологически активных веществ, позитивно влияющих на систему “мать-плацента-плод”. Апробация таких природных препаратов на беременных животных позволяет изучить влияние их на рост и формирование органов и организма в целом, что в последующем помогает обосновать применение препаратов с целью профилактики заболеваемости новорожденных и получения более здорового потомства. К таким новым веществам, подаренным цивилизации природой, можно отнести гуминовые соединения.

В ряде литературных источников приводятся результаты влияния гуминовых соединений на живые организмы, относящиеся к различным таксономическим группам. В экспериментах выявлены такие свойства гуминовых веществ как хлорпоглощающая способность, бактерицидные и фунгицидные свойства (Pempkowiak J., 1990; Rosin H., 1990), антиоксидантная активность (Piotrowska D., 2000), комплексообразовательная способность по отношению к таким солям тяжелых металлов как медь, кадмий, свинец (Sauvant M.P., 1999), иммуномудулирующие свойства (Inglot A.D., 1999; Kawalska M., 1995), способность стимулировать регенераторные процессы (J.Woyton., 1995).

Таким образом, несмотря на полученные в последние годы результаты позитивного воздействия гуминовых соединений на макроорганизм, остаются неизученными многие аспекты их влияния на физическое развитие потомства, на структурные особенности основных систем матери и плода; в публикациях отсутствуют сведения об эмбриотоксичности и тератогенности гуминовых соединений. С учетом актуальности темы и практической необходимости с целью получения новых теоретических знаний проведено настоящее исследование.

Цель исследования

Изучить морфологические изменения в тимусе, селезенке и надпочечниках беременных крыс и их потомства и оценить влияние гуминовых соединений, экстрагированных из торфа, на физическое развитие крысят в динамике.

Задачи исследования:

1. Выявить морфологические изменения в тимусе, селезенке и надпочечниках у самок и плодов крыс, получавших гуминовые соединения.

2. Оценить эмбриотоксичность и тератогенную активность изучаемых соединений.

3. Проследить в динамике с момента рождения до периода половозрелости влияние гуминовых соединений на физическое развитие первого и второго поколений потомства крыс.

Научная новизна исследования

Впервые у беременных самок крыс, получавших гуминовые соединения, в тимусе выявлены гипертрофия коркового вещества с увеличением корково-мозгового индекса, увеличение удельной доли сосудистого компонента в органе и количества дифференцированных лимфоцитов в корковом и мозговом веществе. В селезенке самок под влиянием данных соединений происходит гиперплазия В-зон, в надпочечниках - увеличение удельной доли сосудов и функциональной активности спонгиоцитов всех зон. У потомства от самок, получавших изучаемые соединения, выявлено ускорение дифференцировки лимфоцитов в тимусе, активация гемопоэза и усиление митотической активности клеток в селезенке, увеличение удельной доли сосудов в надпочечниках.

Впервые установлено, что гуминовые соединения в дозе 10 мг/кг веса не оказывают эмбриотоксического и тератогенного действия.

Впервые в динамике выявлено опережающее физическое развитие I и II поколений потомства крыс, получавших гуминовые соединения.

Научно-практическая значимость исследования

Выявленные морфологические изменения в органах иммунной и эндокринной систем у самок крыс и их плодов позволяют обосновать необходимость проведения дальнейших экспериментальных исследований по применению гуминовых соединений с целью коррекции перинатальной патологии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В центральном органе иммуногенеза самок и плодов крыс под влиянием гуминовых соединений происходит стимуляция пролиферации и дифференцировки лимфоцитов, в селезенке самок - гиперплазия В-зон, в селезенке плодов - активация гемопоэза.

2. В тимусе, селезенке и надпочечниках самок и плодов крыс под влиянием изучаемых соединений происходит увеличение удельной доли сосудистого компонента.

3. Гуминовые соединения в дозе 10 мг/кг массы тела не обладают эмбриотоксичностью и не оказывают тератогенного действия на потомство крыс.

Апробация диссертационного материала:

Основные положения работы доложены и обсуждены на научных конференциях молодых ученых ГУ ИвНИИ МиД (Иваново, 2002-2004), Республиканской научно-практической конференции «Актуальные проблемы лабораторной и функциональной диагностики в акушерстве, гинекологии и перинатологии» (Иваново, 2002), Республиканской конференции «Новые медико-социальные и медико-организационные технологии охраны здоровья семьи» (Иваново, 2002), Всероссийской конференции «Молодые ученые - медицине» (Самара, 2003), конференции «Актуальные проблемы клинической патологии», посвященной 100-летию со дня рождения профессора П.П.Ерофеева и 70-летию кафедры патологической анатомии ГОУ ВПО “ИвГМА” МЗ РФ (Иваново, 2003), Всероссийской научной конференции «Молодые женщины в науке» (Иваново, 2004), научной конференции «Молодая наука - развитию Ивановской области» (Иваново, 2005), V Всероссийском научном семинаре «Химия и медицина» (Уфа, 2005), межлабораторной конференции ГУ НИИ морфологии человека РАМН (Москва, март 2006).

Получена серебряная медаль на VII Международном салоне промышленной собственности «Архимед-2004» в разделе медицина и бронзовая медаль на V Московском международном салоне инноваций и инвестиций за разработку «Новые препараты из торфа» (2005 г.).

Работа выполнялась при поддержке гранта РФФИ № 05-04-96405 и гранта Президента РФ НШ-2245.2003.4.

Личное участие автора

Автором лично проведен эксперимент, анализ данных, статистическая обработка полученных результатов.

Публикация результатов исследования

По результатам диссертационного исследования опубликовано 9 работ, из них 1 в журнале, рецензируемом ВАК.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 16 таблицами, 25 рисунками и фотографиями. Библиографический указатель содержит 120 отечественных и 70 иностранных источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

тимус селезенка надпочечник гуминовый

В эксперименте использованы 28 лабораторных беременных крыс линии Вистар, 196 плодов и 120 новорожденных крысят, полученных от самок. Согласно цели исследования, экспериментальные животные разделены на 2 группы: 1 группа - интактные беременные крысы, контроль, n=14; 2 группа - крысы, получавшие гуминовые соединения, n=14. От 20 беременных самок получено 196 плодов. Остальные самки оставлены для получения потомства. В первом и втором поколениях от 16 крыс из двух групп получено 120 новорожденных крысят. За физическим развитием потомства осуществляли динамическое наблюдение до 3-месячного возраста.

Протокол экспериментов, содержание животных и выведение их из опыта были составлены в соответствии с принципами биоэтики, изложенными в «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и приказе МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики».

Для получения потомства к самкам в стадии проэструса-эструса подсаживали самцов в соотношении 1:4. Первый день беременности устанавливали на основании обнаружения сперматозоидов в мазках из влагалища самок.

Самки 1 группы (контроль) на протяжении всей физиологически протекающей беременности получали чистую воду в стандартных поилках.

Крысы 2 группы получали per os гуминовые соединения, экстрагированные из торфа, с водой в стандартных поилках, в дозе 10 мг/кг массы тела в течение всей беременности. Соединения представляют собой раствор без вкуса и запаха, темно-бурой окраски. В состав последних входят микро- и макроэлементы: Fe, Na, Mg, K, Mn, Cu. LD0 данных соединений для крыс и мышей равна 10000 мг/кг веса. Новорожденные крысята 2 группы на протяжении всего периода наблюдения также получали с питьевой водой изучаемые соединения в дозе 10 мг/кг веса.

На 21 день беременности, за день до предполагаемых родов, проводили эвтаназию 10 животных из каждой группы с помощью этаминал-натрия в дозе 60 мг/кг. Затем осуществляли аутопсию самок и плодов контрольной и основной групп. Пороки развития органов диагностировали на системном, органном и тканевом уровнях как во время аутопсии, так и при гистологическом исследовании тканей.

У самок и извлеченных плодов определяли основные параметры физического развития (массу и длину тела). Осуществляли органометрию (массу и линейные размеры) тимуса, селезенки и надпочечников самок и плодов крыс.

Для изучения исследуемых органов самок крыс и плодов на тканевом, клеточном и субклеточном уровнях использовали обзорные методы (окраска гематоксилином и эозином, по ван Гизону, по Маллори, азуром-II-эозином), морфометрию (по модифицированной методике Г.Г.Автандилова (1990) и с помощью автоматизированной программы Видео-ТесТ Мастер «Морфология 4.0»), элективные методы (выявление ДНК по методу Фельгена-Россенбека и РНК по методу Браше с соответствующими контролями) и трансмиссионную электронную микроскопию.

Гистостереометрию осуществляли на обзорных и полутонких препаратах, окрашенных метиленовым синим в сочетании с азуром II и фуксином основным. Из морфометрических параметров определяли: удельный объем коркового и мозгового вещества, стромы и сосудов в тимусе; удельный объем красной и белой пульпы, диаметр лимфоидных фолликулов в селезенке; толщину слоев и площадь сосудов в надпочечниках. В иммунных органах, используя 100-точечную измерительную сетку, определяли процентное соотношение клеточных популяций.

Для получения полутонких и ультратонких срезов кусочки тканей исследуемых органов размером 0,3х0,3 см фиксировали в растворе Караганова. Полутонкие и ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме УМТП-6. Ультратонкие срезы контрастировали 3%-ным раствором уранилацетата в 100% метиловом спирте и цитратом свинца по общепринятой методике, изучали и фотографировали в электронном микроскопе ЭВМ-100 АК.

Для оценки эмбриотоксического действия изучаемых соединений рассчитывали следующие показатели: преимплантационную гибель (количество желтых тел в яичниках, относительно числа мест имплантации яйцеклеток в матке); постимплантационную гибель (количество участков резорбции яйцеклеток в матке, относительно общего числа мест имплантации); продолжительность беременности; численность приплода и его состояние, пол и соматометрические параметры (масса и длина тела) новорожденных крысят, наличие видимых уродств. Физиологическую зрелость потомства оценивали по времени появления основных физических признаков развития. Кроме того, физическое развитие потомства оценивали в динамике. С этой целью на 15, 30, 45, 60 и 90 дни постнатальной жизни определяли массу и длину тела крысят.

Цифровой материал обработан статистическими методами с помощью персонального компьютера с использованием программного обеспечения “Excel-2000”. Предварительно определяли тип распределения вариационного ряда. При правильном распределении достоверность различий определяли по t-критерию Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Нами сопоставлены и проанализированы соматометрические параметры потомства крыс, а также параметры тимусов, селезенок и надпочечных желез беременных самок крыс и их плодов из двух экспериментальных групп, изученные на различных уровнях структурной организации.

1. Морфология органов иммунной и эндокринной систем и физическое развитие крыс в контрольной группе

Согласно полученным результатам, от каждого животного из группы с физиологическим течением беременности получено от 8 до 12 плодов, масса и длина которых свидетельствуют об их зрелости. Средняя плодовитость крыс составила 9,2?0,66 особей на одну крысу. У 4 животных в ходе аутопсии обнаружена резорбция 1-2 плодов (всего 7 плодов). Преимплантационная гибель составила - 3,74±1,25%, постимплантационная гибель - 8,75±4,68%. Полученные результаты согласуются с данными Н.А.Чеботарь с соавторами (1995). Внешних и внутренних пороков развития при визуальном осмотре и тканевых пороков при гистологическом исследовании у плодов не выявлено.

Тимус самок контрольной группы имеет отчетливое дольчатое строение, в органе сформированы корковое и мозговое вещество. Средняя масса тимуса составила 345,8±30,08 мг. В вилочковой железе в зависимости от локализации, структурных особенностей и функциональной активности нами выделено пять типов ретикулоэпителиальных клеток, что согласуется с результатами исследований Г.В. Половцевой (1993). Полученные нами данные противоречат результатам исследований Ю.И. Афанасьева (1976), который в тимусе крыс выделял 3 типа ретикулоэпителиальных клеток, и Marinova T. и Boshnacova E. (1986), которые идентифицировали 4 типа ретикулоэпителиоцитов.

В корковом веществе тимуса самок преобладают дифференцированные формы лимфоцитов (малые и средние), а в мозговом - малые тимоциты и ретикулоэпителиальные клетки, что согласуется с данными Г.Г. Касымовой, К.Р. Тухтаева (2001). Кроме того, в мозговом веществе визуализируются «юные», «зрелые» и «старые» тимические тельца.

Тимус плодов контрольной группы имеет дольчатое строение, средняя масса равна 7,3±0,2 мг. Сформированное корковое вещество имеет характерный вид за счет плотного расположения лимфоцитов. Дифференцировка мозгового вещества не завершена, что согласуется с данными Т.Б. Петровой (1996). В дольках в зависимости от структуры, зоны локализации и функциональной активности нами идентифицировано три типа ретикулоэпителиальных клеток. Наши данные не согласуются с результатами исследований В.Э. Торбек и Н.А. Юриной (2000), которые в тимусе нелинейных крысят описывают 4 типа эпителиоцитов. В мозговом веществе формирование тимических телец находится на начальных этапах. Клеточный состав паренхимы полиморфный с незначительным преобладанием высокодифференцированных лимфоцитов, что согласуется с данными В.Э. Торбек (1988), Т.Б. Петровой (1996).

Селезенка самок крыс покрыта капсулой, состоящей из преобладающих эластических и небольшого числа гладкомышечных волокон. Средняя масса органа составила 817,9±26,83 мг. Паренхима селезенки представлена сформированной белой и красной пульпой. Последняя, в 2 раза преобладающая по площади, образована сетью ретикулиновых волокон, среди которой расположены синусоиды. Белая пульпа представлена лимфоидными фолликулами с герминативными центрами и без них и периартериальными лимфоидными муфтами. Представленная гистологическая картина соответствует структуре селезенки взрослых экспериментальных животных (Барта И., 1976; Хем А., Кормак Д., 1982). В красной пульпе между синусоидами располагаются лимфоциты, макрофаги, плазмоциты и мегакариоциты, в белой - преобладают дифференцированные лимфоциты. Результаты наших исследований согласуются с данными ряда авторов (Барта И., 1976; Хем А., Кормак Д., 1982; Григоренко Д.Е. с соавт., 2003).

Селезенка плодов крыс контрольной группы структурно незрелая, о чем свидетельствует несформированность белой пульпы. Средняя масса органа составила 4,0±0,13 мг. Подобная гистологическая картина соответствует селезенке доношенных плодов, описанной И. Барта (1976) и А. Хемом, Д. Кормаком (1982). Между спавшимися, функционально пассивными артериальными и венозными капиллярами в красной пульпе визуализируется большое количество клеток различных ростков гемопоэза, что свидетельствует о выполнении селезенкой такой важной функции как кроветворение. Полученные результаты согласуются с данными А. Хема и Д. Кормака (1982).

Средняя масса левой и правой надпочечных желез самок крыс контрольной группы составляет 55,3±5,28 мг и 51,8±4,96 мг, объем - 57,46±5,48 мм3 и 53,82±5,15 мм3 соответственно. Гистологически в надпочечниках самок контрольной группы выделены корковое и мозговое вещество. Корковое вещество представлено клубочковым, пучковым и сетчатым слоями. Клубочковый слой с учетом структурных особенностей и функционального состояния представлен двумя типа адренокортикоцитов. Клетки первого типа - это активные, делящиеся клетки, с округлыми, умеренно гиперхромными ядрами с равномерным распределением хроматина. Второй тип клеток - крупные, округлые по форме, с оптически пустой цитоплазмой. Ядра в клетках либо смещены на периферию, либо взвешены в оптически светлой цитоплазме. Электронная плотность ядер различна. Большая часть ядер содержит конденсированный и маргинированный гетерохроматин, меньшая - эухроматин и одно-два ядрышка. Степень функциональной активности спонгиоцитов позволила нам выделить в пучковом и сетчатом слоях также два типа клеток - «светлые» и «темные», что согласуется с данными Е.В. Колдышевой с соавторами (1999). Первый тип спонгиоцитов имеет развитый агранулярный ретикулум, округлые везикулярные митохондрии, липидные капли, а также единичные цистерны гранулярного ретикулума, на основании чего мы предполагаем, что основной специализацией этих клеток является стероидогенез. «Темные» спонгиоциты содержат в цитоплазме множество свободных рибосом и небольшое количество пузырьков гранулярного эндоплазматического ретикулума, что указывает на белоксинтезирующую специализацию этих клеток. Необходимо отметить, что кроме представленного объяснения различий между «темными» и «светлыми» клетками имеются работы, в которых данный феномен связывают с проявлением различных фаз секреторного цикла, а также с процессами дегенерации и гибели клеток (Журавлева Т.Б. с соавт., 1976).

Центрально расположенное мозговое вещество представлено полнокровными синусоидными капиллярами, вокруг которых располагаются в виде неравномерных клеточных тяжей хромаффинные клетки.

Паренхима надпочечных желез плодов контрольной группы дифференцирована на корковое и мозговое вещество. Корковый слой разделен на клубочковую и пучково-сетчатую зоны, что согласуется с данными И.М. Саматовой с соавторами (2005). Адренокортикоциты клубочкового слоя находятся в различном функциональном состоянии. Преобладают функционально активные клетки, содержащие эухроматичные ядра и значительное количество органелл в цитоплазме. Мозговое вещество представлено группами клеток, расположенными между расширенными капиллярами. Подобная гистологическая картина надпочечников плодов описана М.С. Мицкевич (1981).

В контрольной группе родились крысята с массой тела 6,99±0,25 г, длиной тела - 5,37±0,08 см, длиной хвоста - 1,87±0,02 см. Продолжительность беременности самок составила 23,2±0,2 дня, а плодовитость самок - 8,5±0,654 особей на одну крысу, что согласуется с данными Г.В. Брюхина (1995). Сравнительный анализ контрольных пометов по полу плодов позволил выявить преобладание женских особей (доля самок - 53,33±2,11%, доля самцов - 46,66±2,11%), что соответствует литературным данным о соотношении новорожденных разного пола в норме (Брюхин Г.В., 1995). Время наступления физических признаков развития у потомства интактных животных согласуется с данными ряда авторов (Смольникова Н.М., 1982; Брюхин Г.В., 1995).

2. Морфологические изменения в органах иммунной и эндокринной систем и особенности физического развития крыс под влиянием гуминовых соединений

В группе животных, получавших гуминовые соединения, всего получено 104 плода. При этом средняя плодовитость крыс значимо не отличается от контроля. Масса и длина тела плодов превышает показатели контрольной группы соответственно на 14,14% и 3,37% (p<0,01), что свидетельствует об опережающем физическом развитии плодов данной группы. Преимплантационная и постимплантационная гибель достоверно не отличаются от показателей контрольной группы, что подтверждает отсутствие у данных соединений эмбриотоксического эффекта. Внешних и внутренних пороков развития при визуальном и гистологическом исследовании у плодов также не обнаружено, что указывает на отсутствие тератогенного эффекта у изучаемых соединений в дозе 10 мг/кг массы тела.

Органометрические параметры вилочковой железы и гистостереометрические изменения удельной площади коркового вещества тимуса у беременных самок основной группы и их плодов носят однонаправленный характер. Увеличение массы тимуса у беременных самок на 9,2% и у плодов на 9,7% сопровождается достоверным увеличением удельной доли коркового вещества по сравнению с группой контроля (самки 1 гр. - 64,9±1,1%; 2 гр. - 71,2±1,9%; p<0,001; плоды 1 гр. - 74,4±0,78%; 2 гр. - 78,2±0,75%; p<0,01). Последнее косвенно указывает на стимулирующее действие изучаемых соединений на клеточное звено иммунитета, поскольку, по мнению ряда авторов, масса органов иммуногенеза тесно коррелирует с их структурно-функциональным состоянием (Брюхин Г.В., 1989; Гринцевич Ю.А. с соавт., 1989).

Результаты проведенных исследований показывают, что корково-мозговой индекс в тимусе самок и плодов крыс основной группы значимо больше величины аналогичного показателя у животных группы контроля (самки 1 гр. - 1,85±0,11; 2 гр. - 2,47±0,09; p<0,001; плоды 1 гр. - 2,91±0,12; 2 гр. - 3,59±0,17; p<0,01). Это совпадает с литературными данными, показывающими, что иммуномодулирующие препараты, наряду со стимулирующим действием на гуморальное звено иммунитета, обладают способностью вызывать пролиферативный ответ Т-лимфоцитов (Ярилин А.А. с соавт., 1999; Сапин М.Р. с соавт., 2001).

При морфометрическом исследовании в тимусе самок выявлено достоверное увеличение удельной доли сосудистого компонента (1 гр. - 7,35±0,118%; 2 гр. - 9,59±0,118%; p<0,001), что свидетельствует о стимулирующем влиянии изучаемых соединений на васкуляризацию органа.

Изучение клеточных популяций тимуса самок характеризуется увеличением дифференцированных форм лимфоцитов (малых и средних) в корковом веществе (1 гр. - 46,1±1,3% и 26,2±0,9%; 2 гр. - 50,9±0,9% и 30,3±0,7%; p<0,01), что связано с усилением пролиферативной активности корковых тимоцитов (Бугаева И.О. с соавт., 2003). Мозговое вещество также содержит значимо большее по сравнению с контролем количество малых и средних тимоцитов (1 гр. - 38,4±0,6% и 20,4±0,6; 2 гр. - 46,0±0,5% и 24,2±0,3%; p<0,001), что указывает на усиление процессов дифференцировки и миграции зрелых клеток в мозговое вещество (Бугаева И.О. с соавт., 2003).

Под влиянием гуминовых соединений в тимусе самок крыс усиливается функциональная активность клеток ретикулоэпителия. В пользу последнего свидетельствуют гипертрофия клеток, увеличение ядра, равномерное распределение гетерохроматина, эухроматизация ядер, увеличение количества митозов. Клетки отличаются высокой гистохимической активностью ДНК и РНК. Выявленная гипертрофия ретикулоэпителиальных клеток в тимусе и увеличение числа тимических телец, по мнению ряда авторов, являются признаком повышения его секреторной активности (Arya S. et al., 1982; Aita M. et al., 1984; Кончугова Т.В. с соавт., 1995). Вместе с тем некоторые авторы отрицают эндокринную функцию тимуса, не обнаружив в эпителиальных клетках тимических телец признаков секреции (Зайратьянц О.В., 1987; Волошин Н.А., 1990). Известно, что взаимодействие созревающих лимфоцитов с ретикулоэпителиальными клетками служит условием процесса положительной селекции тимоцитов, их дифференцировки и миграции (Ярилин А.А. с соавт., 1996; Ярилин А.А., 1999).

Выявленное достоверное увеличение удельной доли дифференцированных лимфоцитов (малых и средних) в корковом и мозговом веществе тимуса плодов крыс (рис. 1) свидетельствует об усилении процессов пролиферации, дифференцировки и миграции тимоцитов и соответственно о стимулирующем действии изучаемых соединений на клеточное звено иммунитета (Бугаева И.О. с соавт., 2003).



* - различия достоверны по сравнению с контролем при p<0,05

Рис. 1 Удельная доля клеток в тимусе плодов крыс

Усиление функциональной активности ретикулоэпителиальных клеток и увеличение количества тимических телец в тимусе плодов, как и у взрослых экспериментальных животных, свидетельствуют об усилении секреторной активности органа (Arya S. et al., 1982; Aita M. et al., 1984; Кончугова Т.В. с соавт., 1995) и его активном функциональном состоянии (Кемилева З., 1984). В то же время, по мнению ряда авторов, активизация эпителиальных структур тимуса является проявлением защитной реакции организма (Гусман Б.С., 1975; Itoh T. et al., 1982).

Увеличение массы селезенки самок основной группы на 13% сопровождается достоверным увеличением объема белой пульпы в органе (1 гр. - 33,10,6%; 2 гр. - 37,80,5; p<0,001). Это подтверждается увеличением в органе количества и размеров лимфоидных фолликулов (диаметр лимфоидных фолликулов в 1 гр. - 65,62,0 мкм; во 2 гр. - 76,32,2 мкм; p<0,01) и периартериальных лимфоидных муфт. Увеличение количества лимфоидных узелков с герминативными центрами свидетельствует, по мнению ряда авторов, об усилении функциональной активности лимфоидной ткани, уровня лимфоцитопоэза в ней и является морфологическим отражением усиления функции гуморального звена иммунной системы (Петров Р.В. с соавт., 1987; Сапин М.Р., Этинген Л.Е., 1996; Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2000).

В белой пульпе селезенки под влиянием изучаемых соединений происходят перестройки в кооперации лимфоидных клеток (табл. 1). Увеличение количества малых и средних лимфоцитов в белой пульпе селезенки является проявлением развития неспецифической реакции (Шарецкий А.Н. с соавт., 1999; Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2000). Увеличение доли макрофагов свидетельствует о повышении фагоцитарной активности клеток (Серов В.В., Шехтер Б.А., 1981), а увеличение доли плазматических клеток - об усилении гуморального звена иммунитета (Гарунова К.А., Аминова Г.Г., 2004).

Таблица 1

Удельная доля клеток в селезенке самок крыс

Клетки	Группы животных
	1 (контроль)	2
	Белая пульпа	Красная пульпа	Белая пульпа	Красная пульпа
Малые лимфоциты	30,91,1	25,40,6	34,71,0 *	30,90,6 **
Средние лимфоциты	21,70,5	11,50,5	26,10,7 ***	16,00,6 ***
Большие лимфоциты	7,40,5	4,60,3	3,50,5 ***	2,10,2 ***
Плазматические клетки	5,80,5	7,90,6	9,70,6 ***	11,30,6 ***
Деструктивно измененные	10,00,7	14,00,5	5,00,5 ***	10,00,5 ***
Ретикулярные	13,40,7	20,10,5	8,30,5 ***	16,00,5 ***
Макрофаги	4,50,4	8,50,6	7,50,5 **	7,20,5
Бласты	6,30,4	8,00,9	5,20,6	6,50,8

Достоверность различий между группами 1-2:

* - p<0,05 ** - p<0,01 *** - p<0,001

Органометрические параметры селезенки плодов основной группы достоверно больше, чем в группе сравнения (1 гр. - 4,00,13 мг; 2 гр. - 5,00,25; p<0,001). В селезенке увеличено количество капилляров-лакун и сосудов артериального и венозного русла. Обнаруженное в эксперименте увеличение количества клеток-предшественниц и промежуточных форм гемопоэза свидетельствует о напряжении функции кроветворения в органе (Гарунова К.А., Аминова Г.Г., 2004), а плазматических клеток - о благоприятном влиянии гуминовых соединений на гуморальное звено иммунитета (рис. 2). Большое количество бластов и высокая митотическая активность клеток лимфоидного ряда (рис. 2), по мнению ряда авторов, свидетельствует о высоком уровне лимфоцитопоэза в органе (Савельева Л.В., 2002; Шаршембиев Ж.А., 2004).

* - различия достоверны по сравнению с контролем при p<0,05

Рис. 2 Удельная доля клеток в селезенке плодов крыс

У самок основной группы выявлено достоверное снижение на 22,9% массы надпочечных желез и их объема. Однако гистологически отмечается увеличение толщины коркового вещества за счет гиперплазии и повышения функциональной активности клеток клубочкового слоя. По-видимому, уменьшение массы органа связано со стимуляцией симпато-адреналовой системы и значительным выбросом гормонов (Науменко Е.В., 1991). В пучковом и сетчатом слоях преобладают «светлые», функционально активные спонгиоциты. При этом клетки коры находятся на стадии функционального напряжения, о чем свидетельствуют активные диплоидные ядра с преобладанием в них эухроматина и «просветление» эозинофильной цитоплазмы, объясняемое гиперплазией агранулярного эндоплазматического ретикулума, участвующего в стероидогенезе. Большую часть мозгового вещества занимает дилятированная тонкостенная венула с периваскулярным скоплением гиперплазированных хромаффинных клеток. Часть хромаффиноцитов с дистрофическими и некробиотическими изменениями, что свидетельствует о функциональном напряжении клеток (Basset J.R., 1997).

Следует отметить, что как в корковом, так и мозговом веществе надпочечников самок увеличена удельная доля сосудов (рис. 3).

Рис. 3 Удельная доля сосудов в различных зонах надпочечников самок

Органометрические параметры надпочечников плодов основной группы не отличаются от контрольной. Однако в надпочечных железах наблюдается гипоплазия коры, что, по-видимому, связано с увеличением уровня кортикостероидов в крови матери (Козлов В.И., 1990). Уменьшение толщины клубочковой и пучково-сетчатой зон коры сопровождается ускоренным формированием, по сравнению с контрольной группой, мозгового вещества за счет гиперплазии хромаффинных клеток. Подобные структурные изменения, по нашему мнению, являются морфологическим эквивалентом ускоренного созревания надпочечников, что не противоречит взглядам В.И. Козлова (1990). Следует отметить, что в корковом и мозговом веществе достоверно увеличена доля капилляров, находящихся на различных стадиях функциональной активности (корковое вещество 1 гр. - 40,2±0,6 мкм2; 2 гр. - 43,4±0,7 мкм2; мозговое вещество 1 гр. - 54,4±2,7 мкм2; 2 гр. - 67,3±3,1 мкм2; p<0,01).

Электронномикроскопически клетки пучково-сетчатой зоны надпочечников плодов обладают эухроматичным ядром, функционально активные. В цитоплазме содержатся многочисленные рибосомы, липидные капли и везикулярные митохондрии. Такая ультраструктурная организация свидетельствует об интенсификации анаболических процессов в клетках и, как следствие, усилении секреторной активности органа (Колдышева Е.В. с соавт., 1999).

Плодовитость самок и соматометрические параметры плодов основной группы не отличаются от контрольной. В пометах, также как и в группе контроля, выявлено преобладание самок (доля самок - 54,0±2,45%, самцов - 46,0±2,45%).

Динамическое наблюдение за крысятами основной группы выявило опережение физического развития по сравнению с группой контроля. Последнее нашло свое отражение в более раннем исчезновении признаков имматурантности (раскрытие внешнего уха, появление первичного шерстного покрова, открытие ушного отверстия и глаз, опускание яичек у самцов и открытие влагалища у самок наступало на 1 день раньше, чем в группе контроля). Данный факт можно связать с более ранним началом функционирования гипофиза плода (Науменко Е.В., 1991). Следует отметить, что реакция на стресс у животных основной группы была менее выраженной: они спокойнее переносили хэндлинг и помещение их на открытую поверхность. При этом подопытные крысята в период новорожденности характеризовались активностью, подвижностью, что свидетельствует о физиологической зрелости потомства (Брюхин Г.В., 1995).

Пролонгированное наблюдение за крысятами первого поколения позволило выявить опережающее физическое развитие крысят основной группы по сравнению с контрольной начиная с 1 месяца постнатального развития, а второго поколения - с 15-дневного возраста.

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о стимулирующем действии гуминовых соединений на клеточное и гуморальное звено иммунитета, на гемопоэтическую функцию селезенки, на васкуляризацию иммунных и эндокринных органов и физическое развитие плодов.

ВЫВОДЫ

1. Под влиянием гуминовых соединений в тимусе самок происходит гипертрофия коркового вещества с увеличением корково-мозгового индекса, увеличение удельной доли сосудистого компонента, количества дифференцированных лимфоцитов в корковом и мозговом веществе; в тимусе плодов - ускорение дифференцировки лимфоцитов.

2. В селезенке плодов под влиянием гуминовых соединений увеличивается количество клеток-предшественников эритро- и гранулоцитопоэза, бластов, усиливается митотическая активность клеток лимфоидного ряда, происходит ускорение дифференцировки сосудов. В селезенке самок увеличивается объем белой пульпы, количество дифференцированных лимфоцитов, макрофагов и плазматических клеток, усиливается кровоснабжение красной пульпы.

3. Структурные перестройки надпочечников самок, получавших изучаемые соединения, обусловлены увеличением удельной доли сосудистого компонента и функциональной активности спонгиоцитов всех зон. Гиперваскуляризация надпочечников плодов основной группы сопровождается ускоренным формированием мозгового вещества.

4. Гуминовые соединения в дозе 10 мг/кг веса не оказывают эмбриотоксического действия и не вызывают формирования внешних и внутренних пороков развития у плодов.

5. Наблюдение в динамике за крысятами первого поколения, получавшими на анте- и постнатальном этапах до периода половозрелости изучаемые соединения, выявило опережающее физическое развитие по сравнению с контрольной группой с 1 месяца постнатального развития, а второго поколения - с 15 дня постнатального периода.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Позитивное влияние гуминовых соединений на органы иммунной и эндокринной систем и физическое развитие потомства позволяет рекомендовать их для проведения дальнейших экспериментальных исследований с целью изучения патогенетических механизмов.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Балашова М.О., Курицына О.П., Кузнецов Р.А., Перетятко Л.П. Органометрические параметры самок и плодов белых крыс при экспериментальной гипоксии и применении пищевой добавки //Материалы междунар. научно-практ. конф.: “Современные технологии фитонутрициологии в акушерстве, гинекологии и педиатрии”. - Москва, 2003. - С. 3-9.

2. Балашова М.О., Курицына О.П., Кузнецов Р.А., Перетятко Л.П. Влияние препарата гуминовых кислот на формирование последов, плодовитость самок и физическое развитие плодов экспериментальных животных //Материалы V Российского форума “Мать и дитя”. - Москва, 2003. - С. 21-22.

3. Балашова М.О., Курицына О.П., Кузнецов Р.А., Перетятко Л.П. Влияние препарата гуминовых кислот на плодовитость, сомато- и органометрические параметры лабораторных животных в эксперименте //Вестник медицинской академии. - 2003. - Т. 8. - № 3-4. - С. 19-24.

4. Курицына О.П. Органометрические параметры органов иммунной и эндокринной систем самок белых крыс и их плодов в условиях применения препарата гуминовых кислот //В сб.: “Молодые ученые - медицине”. - Самара, 2003. - С. 156-158.

5. Сарыева О.П. Механизмы влияния гуминовых соединений на тимус экспериментальных животных //Тез. докл. науч.конф. «Молодая наука - развитию Ивановской области». - Иваново. - 2005. - С. 219-221.

6. Сарыева О.П., Кузнецов Р.А., Перетятко Л.П., Вашурина И.Ю., Калинников Ю.А., Погорелова А.С. Влияние гуминовых соединений различного происхождения на иммунные органы экспериментальных животных //Тез. на V Всеросс.научн.семинар «Химия и медицина». - Уфа, 2005. - С. 204-207.

7. Погорелова А.С., Кузнецов Р.А., Сарыева О.П., Вашурина И.Ю., Калинников Ю.А., Перетятко Л.П. Препарат из торфа для акушерства, гинекологии и перинатологии //Тез. на V Всеросс.научн.семинар «Химия и медицина». - Уфа, 2005. - С. 198-201.

8. Кузнецов Р.А., Курицына О.П., Баринова О.М., Перетятко Л.П. Влияние природных гуминовых соединений на маточно-плацентарное кровообращение у крыс в эксперименте //Нижегородский медицинский журнал. - 2005. - № 3. - С. 61-64.

9. Сарыева О.П., Кузнецов Р.А., Перетятко Л.П. Механизмы влияния природных гуминовых соединений на иммунные органы экспериментальных животных // В сб. науч. тр. «Современные проблемы материнства и детства». - Иваново, 2005. - С. 100-105.

Размещено на Allbest.ru