Размещено на http://www.allbest.ru/

Розробка складу та технології гомеопатичних препаратів з лікарської рослини Цикламен ЄВРОПЕЙСЬКИЙ

15.00.01 - технологія ліків, організація

фармацевтичної справи та судова фармація

автореферат

дисертації на здобуття наукового ступеня

кандидата фармацевтичних наук

Олійник Світлана Валентинівна

Харків-2011

Дисертацією є рукопис.

Робота виконана на кафедрі аптечної технології ліків ім. Д.П. Сала Національного фармацевтичного університету Міністерства охорони здоров'я України, м. Харків.

Науковий керівник:	заслужений діяч науки і техніки України, академік Української академії наук, доктор фармацевтичних наук, професор ТИХОНОВ ОЛЕКСАНДР ІВАНОВИЧ, Національний фармацевтичний університет, завідувач кафедри аптечної технології ліків ім. Д.П. Сала.
Офіційні опоненти:	доктор фармацевтичних наук, доцент Рубан Олена Анатоліївна, Національний фармацевтичний університет, завідувач кафедри заводської технології ліків;
	кандидат фармацевтичних наук, старший науковий співробітник Пашнєва Раїса Олександрівна, Державне підприємство «Державний науковий центр лікарських засобів і медичної продукції» МОЗ України, м. Харків, старший науковий співробітник лабораторії таблетованих лікарських засобів.

Захист відбудеться «__» _______ 20__ р. о ____ годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 64.605.02 при Національному фармацевтичному університеті за адресою: 61002, м. Харків, вул. Пушкінська, 53.

З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці Національного фармацевтичного університету (61168, м. Харків, вул. Блюхера, 4).

Автореферат розісланий «__» ______ 20__ р.

Вчений секретар

спеціалізованої вченої ради,

доктор фармацевтичних наук, професор Д.І. Дмитрієвський

загальна характеристика роботи

Актуальність теми. Алергічний риніт (АР) являє собою актуальну проблему у звязку з широким розповсюдженням, щорічним ростом захворюваності, частими ускладненнями, що приводить до зниження працездатності та якості життя хворих. Значна поширеність цього захворювання збільшує попит на антиалергічні засоби, які займають один з важливих сегментів фармацевтичного ринку. Існують різні підходи до терапії АР, однак альтернативою класичним схемам лікування даного захворювання є гомеопатичне лікування.

Гомеопатичні препарати майже не проявляють побічних ефектів та позбавлені алергічного впливу на організм. Завдяки широті фармакологічної дії та низькій токсичності вони виявляють м'яку дію та рідше викликають побічні реакції, ніж синтетичні засоби, що дозволяє проводити тривале лікування при хронічних захворюваннях.

При лікуванні АР у гомеопатії найчастіше використовують рослинну сировину, зокрема лікарську рослину Цикламен європейський, яка з давніх часів застосовується в гомеопатичній практиці при лікуванні невралгії, дісменореї, алергічного риніту, гаймориту, сінуситу, головного болю тощо.

Спектр сучасних гомеопатичних засобів для профілактики та лікування АР на фармацевтичному ринку України представлений переважно препаратами закордонного виробництва та за асортиментом не відповідає потребам споживачів. Вирішення цієї проблеми можливе за рахунок розширення вітчизняного виробництва ефективних, безпечних та доступних за ціною гомеопатичних препаратів.

У зв'язку з цим, розробка нового вітчизняного гомеопатичного препарату для лікування та профілактики АР на основі лікарської рослини Цикламен європейський є актуальною проблемою медицини та фармації.

Зв'язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційна робота виконана відповідно до плану науково-дослідних робіт Національного фармацевтичного університету України (НФаУ) («Створення гомеопатичних лікарських засобів» № держреєстрації 0103U000480) та проблемної комісії «Фармація» МОЗ і АМН України. Тема дисертаційної роботи затверджена на засіданні вченої ради НФаУ (протокол № 3 від 04.12.2007 р.).

Мета і завдання дослідження. Метою роботи є розробка раціональної технології матричної настойки (МН) і науково обґрунтованого складу та технології гомеопатичних гранул на основі лікарської рослини Цикламен європейський для лікування і профілактики АР та їх дослідження.

Реалізація поставленої мети вимагала вирішення наступних завдань:

– проаналізувати та узагальнити дані літератури стосовно етіології, патогенезу та механізму розвитку АР, сучасного стану фармацевтичного ринку лікарських препаратів (ЛП) для лікування даної патології; визначити аспекти застосування лікарської рослини Цикламен європейський;

– вивчити морфологічні та фізико-хімічні властивості лікарської рослини Цикламен європейський, розробити проект методів контролю якості (МКЯ) на рослину;

– експериментально розробити технологію МН з лікарської рослини Цикламен європейський;

– теоретично та експериментально обґрунтувати вибір потенції діючого компоненту та розробити раціональну технологію гомеопатичних гранул на основі МН;

– визначити основні показники якості МН «Цикламін» та гомеопатичних гранул «Циклорин» і розробити проекти МКЯ;

– розробити проекти технологічного промислового регламенту (ТПР) на МН та гомеопатичні гранули, а також проект технологічної інструкції на виробництво гомеопатичних гранул в умовах аптеки;

– обґрунтувати термін придатності, вид упаковки та умови зберігання розроблених препаратів;

– узагальнити результати мікробіологічних та фармакологічних досліджень гомеопатичних гранул «Циклорин».

Об'єкт дослідження - лікарська рослина Цикламен європейський, матрична настойка «Цикламін» та гомеопатичні гранули «Циклорин».

Предмет дослідження - розробка раціональної технології МН на основі лікарської рослини Цикламен європейський. Розробка науково обґрунтованого складу та технології гомеопатичних гранул з даної МН для лікування і профілактики АР. Визначення основних (сапоніни, амінокислоти) діючих речовин.

Методики дослідження. Для вирішення поставлених у роботі завдань були використані загальноприйняті методики дослідження: органолептичні, фармако-технологічні (насипний об'єм, плинність, розчинність, кількість злиплих гранул), фізико-хімічні (втрата в масі при висушуванні, відносна густина, сухий залишок), хроматографічні (тонкошарова та газова хроматографія), спектрофотометричні, мікробіологічні, фармакологічні, математичні (статистична обробка результатів). На підставі експериментально одержаних та статистично оброблених результатів ці методики дозволяють об'єктивно і в повній мірі оцінити якісні та кількісні показники діючих та допоміжних речовин МН «Цикламін» і готового препарату - гомеопатичних гранул «Циклорин».

Наукова новизна одержаних результатів. Вперше на підставі результатів фізичних, фізико-хімічних, фармако-технологічних, мікробіологічних та фармакологічних досліджень теоретично і експериментально обґрунтовано раціональну технологію МН «Цикламін» на основі лікарської рослини Цикламен європейський, а також склад та технологію гомеопатичних гранул «Циклорин» на її основі.

Вперше науково обґрунтовано доцільність використання соку не тільки з підземної, а й з надземної частин рослини Цикламен європейський при виготовленні МН «Цикламін», яка в подальшому використана при розробці гомеопатичних гранул для лікування та профілактики АР.

Запропоновано методики визначення якісного складу та кількісного вмісту біологічно активних речовин (БАР) у МН та гомеопатичних гранулах. Визначено оптимальні умови зберігання, термін придатності МН «Цикламін» та гомеопатичних гранул «Циклорин».

За результатами досліджень одержано патент № 53451 від 11.10.2010 р. «Спосіб одержання гомеопатичної матричної настойки з Cyclamen europaeum (Цикламен європейський)», а також патент № 54661 від 25.11.2010 р. «Гомеопатичний засіб для лікування та профілактики алергічного риніту».

Практичне значення одержаних результатів. Створено та запропоновано для практичної медицини новий вітчизняний лікарський препарат у формі гомеопатичних гранул, що містить сік з лікарської рослини Цикламен європейський, для лікування та профілактики АР. Розроблено технологію та стандартизовано МН «Цикламін» з лікарської рослини Цикламен європейський, яка є базисним препаратом для виготовлення гомеопатичного препарату «Циклорин».

Розроблено, а також затверджено (Укрмедпатентінформом) інформаційний лист «Технологія виготовлення гомеопатичного базисного препарату з лікарської рослини Цикламен в умовах аптек» (№ 112. - 2007 р.), який впроваджено в роботу ТОВ «Гомеопатична аптека Vita» (м. Одеса) (акт впровадження від 20.04.2010 р.).

Розроблено проект технологічної інструкції на виробництво гомеопатичних гранул «Циклорин» в умовах аптеки, який апробовано на ТОВ «Гомеопатична аптека» (м. Харків) (акт апробації від 17.05.2010 р.).

Розроблено проект МКЯ на лікарську рослину Цикламен європейський, який апробовано на ТОВ «Арніка» (м. Харків) (акт апробації від 02.04.2009 р.).

Розроблено та впроваджено проекти МКЯ та ТПР на виробництво МН «Цикламін» (акт апробації від 02.04.2009 р.) та гомеопатичних гранул «Циклорин» (акт апробації від 02.04.2009 р.), які апробовано на ТОВ «Арніка» (м. Харків).

Фрагменти роботи впроваджені до навчального процесу кафедри промислової фармації Національного фармацевтичного університету (акт впровадження від 12.04.2010 р.); кафедри фармацевтичної технології і біофармації Національної медичної академії післядипломної освіти ім. П. Л. Шупика (акт впровадження від 21.01.2010 р.); кафедри технології лікарських засобів Одеського державного медичного університету (акт впровадження від

16.12.2009 р.); кафедри фармації Кримського державного медичного університету ім. С. І. Георгіївського (акт впровадження від 11.11.2009 р.); кафедри фармації Вінницького національного медичного університету ім. М. І. Пирогова (акт впровадження від 08.10.2009 р.); курсу технології ліків Тернопільського державного медичного університету ім. І. Я. Горбачевського (акт впровадження від 28.09.2009 р.); кафедри технології ліків Запорізького державного медичного університету (акт впровадження від 07.12.2007 р.).

Особистий внесок здобувача. Автором особисто проаналізовано та узагальнено дані літератури стосовно досліджуваної проблеми. Розроблено раціональну технологію МН «Цикламін» з лікарської рослини Цикламен європейський, а також обґрунтовано та розроблено склад і технологію нового лікарського препарату у формі гомеопатичних гранул «Циклорин» на її основі. Досліджено органолептичні, фізико-хімічні, фармако-технологічні та мікробіологічні показники якості розроблених МН і гомеопатичних гранул, досліджена їх стабільність протягом 27 місяців зберігання. Розроблено проекти МКЯ та ТПР на виробництво МН «Цикламін» і гомеопатичних гранул «Циклорин» в умовах промислового виробництва, а також проект технологічної інструкції на виробництво гомеопатичних гранул в умовах аптеки. Розроблено проект МКЯ на лікарську рослину Цикламен європейський.

Статистично оброблені, систематизовані та проаналізовані результати експериментальних досліджень.

За участю дисертанта досліджені: мікробіологічна чистота МН «Цикламін» та гомеопатичних гранул «Циклорин», специфічна активність і гостра токсичність гомеопатичних гранул «Циклорин».

Наукові праці, опубліковані у співавторстві з О. І. Тихоновим,

С. О. Тихоновою, Г. Б. Ходарченко, В. М. Чушенко, О. О. Гайдуковою,

О. Б. Леницькою, О. М. Колос. Особистий внесок автора наведений за текстом дисертації, а також у авторефераті у списку фахових публікацій.

Апробація результатів дисертації. Основні положення дисертаційної роботи викладені та обговорені на: ІІІ Міжнародній медико-фармацевтичній конференції студентів та молодих вчених, присвяченій 20-річчю Чорнобильської аварії (м. Чернівці, 2006); ХІ Ювілейному міжнародному медичному конгресі студентів і молодих учених, присвяченому 50-річчю заснування ТДМУ (м. Тернопіль, 2007); Всеукраїнській науково-практичній конференції студентів та молодих вчених «Актуальні питання створення нових лікарських засобів» (м. Харків, 2007); науково-практичній конференції «Сучасні проблеми екстемпоральної рецептури» (м. Харків, 2007); Міжнародній науково-практичній конференції «Современные проблемы и пути их решения в науке, транспорте, производстве и образовании `2007» (м. Одеса, 2007); ІІІ Міжнародній науково-практичній конференції «Наука и образование без граница - 2007» (м. Софія, 2007); ХХV Ювілейній науково-практичній конференції з міжнародною участю «Лекарства - человеку. Современные проблемы создания, исследования и апробации лекарственных средств» (м. Харків, 2008); Всеукраїнській науково-практичній конференції студентів та молодих вчених «Актуальні питання створення нових лікарських засобів» (м. Харків, 2008); VІІ Всеукраїнській науково-практичній конференції за участю міжнародних спеціалістів «Клінічна фармація в Україні» (м. Харків, 2008); науково-практичній конференції з міжнародною участю, присвяченій 85-річчю з дня народження ректора ХФІ (1971-1980 рр.) д.фарм.н., проф. Сала Д. П. «Фармацевтична технологія. Історія розвитку та погляд у майбутнє» (м. Харків, 2008); Ювілейній науково-практичній конференції з міжнародною участю «Фармакогнозія ХХІ століття. Досягнення та перспективи», присвяченій пам'яті к.фарм.н., доц. Борисова М. І. (до 80-річчя від дня народження) (м. Харків, 2009); Українській науково-практичній конференції, присвяченій пам'яті д.хім.н., проф. Петюніна П. О. (до 95-річчя з дня народження) «Проблеми синтезу біологічно активних речовин та створення на їх основі лікарських субстанцій» (м. Харків, 2009); Всеукраїнській науково-практичній конференції з міжнародною участю «Сучасні проблеми судово-токсикологічної науки і практики» (м. Харків, 2009); науково-практичній інтернет-конференції «Сучасні напрямки розвитку гомеопатії в Україні» (м. Харків, 2009).

Публікації. За матеріалами дисертації опубліковано 25 наукових робіт: 2 патенти, 8 статей, з них 7 статей - у фахових виданнях, 1 інформаційний лист, 14 тез доповідей в матеріалах конференцій.

Об'єм та структура дисертації. Дисертаційна робота викладена на 197 сторінках друкованого тексту (обсяг основного тексту 142 сторінки), складається зі вступу, огляду літератури, 4 розділів експериментальної частини, висновків, списку використаних джерел, додатків. Робота проілюстрована 34 таблицями та 30 рисунками. Бібліографія включає 186 джерел літератури, з них 56 іноземні.

Основний зміст роботи

цикламен європейський гранула гомеопатичний

У розділі 1 «Сучасні аспекти застосування лікарської рослини Цикламен європейський для лікування алергічного риніту» наведено узагальнені сучасні літературні дані стосовно класифікації, етіології, патогенезу, функціональних порушень і клінічних проявів, проблем та перспектив фармакотерапії АР в алопатичній медицині та гомеопатичній практиці. Доведено раціональність використання саме гомеопатичного методу при терапії АР. Проаналізовано стан фармацевтичного ринку України гомеопатичних препаратів для лікування алергічних захворювань носової порожнини та визначено його обмеженість. Узагальнено дані літератури про лікарську рослину Цикламен європейський та встановлено доцільність подальших наукових досліджень з розробки гомеопатичного препарату на її основі для лікування АР.

У розділі 2 «Обґрунтування загальної концепції досліджень. Об'єкти та методи досліджень» представлено загальну методологію досліджень, що здійснювалися за двома основними напрямками: розробка раціональної технології базисного препарату (матричної настойки) з лікарської рослини Цикламен європейський для подальшого його використання при виготовленні гомеопатичних гранул; розробка складу та технології гомеопатичних гранул на основі МН і визначення оптимальної потенції для діючого компоненту. Наведено характеристику допоміжних та діючих речовин (лікарська рослина Цикламен європейський, МН «Цикламін», гомеопатичні гранули «Циклорин»). Наведено основні методи та методики фізичних, фізико-хімічних, фармако-технологічних, мікробіологічних і фармакологічних досліджень, а також умови їх проведення.

У розділі 3 «Розробка раціональної технології матричної настойки і науково обґрунтованого складу та технології гомеопатичних гранул з лікарської рослини Цикламен європейський» представлено дані з розробки та експериментального обґрунтування технології МН з лікарської рослини Цикламен європейський, а також гомеопатичних гранул на основі МН для лікування та профілактики АР.

В Україні виробництво гомеопатичних лікарських засобів (ГомЛЗ) проводять згідно Державній Фармакопеї України (ДФУ), що містить лише загальні статті. У зв'язку з відсутністю в ДФУ монографій на окремі ГомЛЗ тимчасово дозволено також користуватися керівництвом д-ра В. Швабе та Німецькою гомеопатичною фармакопеєю. У відповідності з вищенаведеними нормативними документами для виготовлення гомеопатичних препаратів використовують сік з бульб лікарської рослини Цикламен європейський.

Зважаючи на недостатню соковитість бульб Цикламену, виготовлення МН здійснюють у декілька етапів. Недоліками цієї технології є велика кількість відходів сировини, невеликий вихід продукту, досить складна технологія та тривалий час одержання готового продукту.

Тому першочерговим завданням стало вивчення можливості використання як підземної так і надземної частин рослини Цикламен європейський з метою збільшення виходу продукту, зменшення кількості відходів, спрощення технологічного процесу та комплексного використання сировини. З метою обґрунтування раціональності застосування всієї рослини при виготовленні МН порівняно вміст соку у бульбах та всієї рослини.

За результатами дослідження визначено, що вся рослина Цикламен європейський містить 68,18 ± 1,79 % соку, а бульби досліджуваної сировини містять 15,24 ± 0,76 % соку, тому одержання МН раціонально проводити використовуючи всі частини рослини.

Для підтвердження цього, також були проведені дослідження з визначення кількісного вмісту основних БАР - сапонінів та амінокислот, у соках всієї рослини Цикламен та окремо в бульбах спектрофотометричним методом.



Рис. 1. УФ-спектри соків з лікарської рослини Цикламен європейський та РСЗ есцину

З результатів дослідження видно, що максимуми поглинання продуктів реакції розчину стандартного зразку (РСЗ) есцину та сапонінів рослини Цикламен європейський у кислому середовищі (рис. 1) співпадають і знаходяться в межах (420 ± 2) нм. Вміст суми сапонінів в 1,0 г соку рослини складає 0,105 ± 0,003 г (в перерахунку на есцин). Метрологічні характеристики методики визначення суми сапонінів у соці рослини Цикламен європейський представлені в табл. 1.

Таблиця 1

Результати кількісного визначення суми сапонінів у соці лікарської рослини Цикламен європейський (Р=95 %, n=5)

№ з/п	Кількісний вміст в 1,0 г соку, г	Метрологічні характеристики
1	0,102	0,1046 S = 0,001077 S= 0,000006 ? 0,003 е = 2,86 %
2	0,104
3	0,103
4	0,108
5	0,106

Максимуми поглинання продуктів реакції для РСЗ кислоти глутамінової та досліджуваної сировини (соків з рослини Цикламен) з алоксангідратом (рис. 2) співпадають і знаходяться в межах (522 ± 2) нм.

Рис. 2. УФ-спектри соків з лікарської рослини Цикламен європейський та РСЗ кислоти глутамінової

Вміст суми амінокислот в 1,0 г соку рослини складає 0,090 ± 0,002 г (в перерахунку на кислоту глутамінову). Метрологічні характеристики методики визначення суми амінокислот у соці рослини Цикламен європейський представлені в табл. 2.

Таблиця 2

Результати кількісного визначення суми амінокислот у соці лікарської рослини Цикламен європейський (Р=95 %, n=5)

№ з/п	Кількісний вміст в 1,0 г соку, г	Метрологічні характеристики
1	0,090	0,090 S = 0,000872 S= 0,000004 ? 0,002 е = 2,67 %
2	0,093
3	0,092
4	0,090
5	0,088

Отримані експериментальні дані свідчать, що кількісний вміст амінокислот та сапонінів у соці всієї рослини Цикламен більший, ніж у бульбах цієї сировини, що дозволяє використовувати всю рослину при виготовленні МН.

Оскільки ця рослина є неофіцинальною, тому виникла необхідність розробки нормативно-технічної документації (проекту МКЯ) на лікарську рослину Цикламен європейський. Стандартизацію сировини проводили згідно вимог ДФУ (доп. 3) монографії «Лікарська рослинна сировина для гомеопатичних лікарських засобів». Визначені показники свіжої сировини (мікроскопія, ідентифікація, вологість, вміст золи загальної, сторонніх домішок, залишкова кількість пестицидів, кількісний вміст сапонінів та амінокислот, мікробіологічна чистота) відповідають вимогам ДФУ до лікарської рослинної сировини (ЛРС) для ГомЛЗ. Отримані дані покладені в основу проекту МКЯ на лікарську рослину Цикламен європейський.

Розроблені методики кількісного визначення сапонінів та амінокислот в рослині також дозволили вивчити динаміку накопичення цих БАР в сировині, заготовленій на різних стадіях вегетації: розетки, бутонізація, цвітіння, плодоношення. В результаті досліджень встановлено, що найбільша кількість їх в рослині Цикламен європейський накопичується у фазі цвітіння, тому, раціональним часом збору сировини є час масового цвітіння рослини.

Досить важливим показником у технологічній обробці ЛРС є ступінь подрібнення, оскільки від нього залежить кількість вихідного продукту, об'єми відходів та процес екстрагування (табл. 3).

Таблиця 3

Дослідження впливу ступеня подрібнення сировини на вихід БАР

Розмір подрібнених часток, мм	Вихід соку, %	Вміст сапонінів в 1,0 г соку, г	Вміст амінокислот в 1,0 г соку, г
3,0 ± 0,3	76,18 ± 1,38	0,109 ± 0,001	0,094 ± 0,001
5,0 ± 0,2	74,70 ± 2,41	0,105 ± 0,003	0,091 ± 0,002
7,0 ± 0,3	70,44 ± 1,96	0,097 ± 0,001	0,081 ± 0,002
10,0 ± 0,4	68,49 ± 2,04	0,088 ± 0,002	0,073 ± 0,001
15,0 ± 0,3	53,48 ± 1,50	0,070 ± 0,001	0,061 ± 0,001

Примітки: n = 5; Р=95 %

Тому наступним етапом нашої роботи стало визначення раціонального ступеня подрібнення свіжої рослини Цикламен для одержання максимальної кількості соку. За результатами проведених досліджень встановлено, що раціональний розмір часток складає 5 мм, так як було отримано найбільший вихід соку в процесі віджимання і не виникло труднощів при проціджуванні.

Оскільки вся рослина Цикламен європейський містить більше 60 % соку, то виготовлення МН необхідно проводити згідно методу 1а ДФУ (доп. 3) загальної статті «Методи приготування гомеопатичних базисних препаратів і потенціювання». У вищенаведеній статті зазначено, що час настоювання при одержанні МН повинен бути не менше 5 діб. А згідно технології одержання МН за § 1 керівництва д-ра В. Швабе час настоювання повинен складати 8 діб.

Тому, з метою встановлення часу приготування, було досліджено фізико-хімічні показники МН, які одержували в термін від 4 до 8 діб (табл. 4).

Таблиця 4

Фізико-хімічні показники МН в залежності від часу настоювання

Показники	Час настоювання
	8 діб	7 діб	6 діб	5 діб	4 доби
Колір	жовто-коричневий	світло-жовтий
Запах	терпкий, солодкуватий, специфічний	слабкий
Смак	гіркий, пекучий
Прозорість	рідина прозора, механічні включення відсутні
Вміст етанолу, %	44,65 ± 0,15	44,50 ± 0,32	44,60 ± 0,25	44,50 ± 0,36	44,55 ± 0,28
Відносна густина, відн.	0,934 ± 0,002	0,934 ± 0,002	0,933 ± 0,001	0,934 ± 0,001	0,932 ± 0,002
Сухий залишок, %	1,400 ± 0,042	1,430 ± 0,038	1,450 ± 0,034	1,420 ± 0,040	1,430 ± 0,031
Ідентифікація: - з хлороформом у кислому середовищі (сапоніни)	- забарвлення органічного шару в яскраво-оранжевий колір	- жовте забарвлення органічного шару
- зі спиртовим розчином ваніліну в кислому середовищі (сапоніни)	- темно-червоне забарвлення	- оранжеве забарвлення
- з нінгідрином (амінокислоти)	- темно-фіолетове забарвлення	- блакитне забарвлення
Кількісний вміст в 1 мл: - сапоніни, г;	0,051 ± 0,002	0,050 ± 0,003	0,051 ± 0,002	0,050 ± 0,001	0,044 ± 0,002
- амінокислоти, г	0,045 ± 0,003	0,045 ± 0,002	0,046 ± 0,001	0,046 ± 0,002	0,039 ± 0,001

Примітки: n = 5; Р=95 %

Одержані дані свідчать, що при настоюванні протягом 4 діб спостерігається недостатнє вивільнення діючих речовин з ЛРС, вміст амінокислот та сапонінів в МН найменший, а збільшення часу настоювання МН від 5 до 8 діб суттєво не впливає на показники якості та кількісний вміст БАР.

Таким чином, експериментально встановлено доцільність використання всієї рослини Цикламен європейський для отримання МН за методом 1а (ДФУ, доп. 3), при цьому сировину необхідно подрібнювати до розміру часток 5 мм, а настоювання скоротити до 5 діб.

Технологічна схема виробництва МН з лікарської рослини Цикламен європейський наведена на рис. 3.

Вихідна сировина, проміжна продукція та матеріали		Виготовлення матричної настойки		Контроль у процесі виробництва
Лікарська рослина Цикламен європейський		Стадія 1 Підготовка виробництва. Відважування компонентів. Ваги, збірник		Вага компонентів, вхідний контроль сировини
Спирт етиловий ректифікований, вода очищена		Стадія 2 Одержання 90 % спирту етилового. Мірники, збірник		Кількість завантаженої сировини, концентрація спирту
		Стадія 3 Одержання соку. Млин ножевий, сито, прес, фільтр, збірник		Кількість завантаженої сировини, розмір часток
90 % спирт етиловий зі стадії 2		Стадія 4 Приготування матричної настойки. Реактор, ваги, НУТЧ-фільтр, збірник		Вага компонентів, глибина вакууму, час настоювання, частота та тривалість перемішування, контроль проміжної продукції
	Пакування матричної настойки
Флакони темного скла, пробки, кришки із полімерних матеріалів		Стадія 5 Фасування матричної настойки. Апарат універсальний фасувальний		Точність дозування, якість первинних пакувальних матеріалів, правильність друку на етикетках (номер серії, термін придатності)
Пачки		Стадія 6 Пакування флаконів із матричною настойкою у пачки. Апарат універсальний фасувальний		Комплектність, правильність друку, (номер серії, термін придатності)
Коробки, групові етикетки		Стадія 7 Пакування пачок у коробки. Стіл пакувальний		Кількість пачок у коробці, правильність друку
	Готова продукція		Контроль готової продукції

Рис. 3. Блок-схема технологічного процесу виробництва гомеопатичної матричної настойки «Цикламін» у промислових умовах

За результатами досліджень одержано патент № 53451 від 11.10.2010 р. «Спосіб одержання гомеопатичної матричної настойки з Cyclamen europaeum (Цикламен європейський)».

Наступним етапом роботи став вибір потенції для виготовлення гомеопатичних гранул. Оскільки виникнення та розвиток АР пов'язані з порушеннями як метаболічної, так й імунної регулюючих систем організму, тому згідно ієрархії регулюючих систем за І. В. Тираспольським, найбільш ефективними розведеннями для лікування цієї патології є саме низькі потенції - Х3 та С3. До того ж, основними рекомендованими розведеннями для прийому гомеопатичних препаратів Цикламену європейського є Х3 та С3 відповідно до стану захворювання. Тому, враховуючи вищенаведене, найбільш раціональним є вибір потенції Х3, оскільки саме ця потенція швидко усуває гостру симптоматику, притаманну АР.

Таким чином, нами запропоновано наступний склад гомеопатичних гранул «Циклорин» для лікування та профілактики АР:

Cyclamen europaeum Х3 0,15 г

Цукрова крупка 15,00 г

Запропонований склад захищено патентом № 54661 від 25.11.2010 р. «Гомеопатичний засіб для лікування та профілактики алергічного риніту».

Дослідження останніх років, проведені науковцями на кафедрі аптечної технології ліків НФаУ, довели, що традиційна технологія виготовлення гомеопатичних гранул є найбільш раціональною та найменш енергоємною.

Таким чином, для одержання гомеопатичних гранул ми обрали традиційний спосіб виготовлення. Технологічна схема виробництва у промислових умовах наведена на рис. 4.

Вихідна сировина, проміжна продукція та матеріали		Виготовлення гомеопатичних гранул		Контроль у процесі виробництва
Матрична настойка «Цикламін», крупка цукрова		Стадія 1 Підготовка виробництва. Відважування компонентів. Ваги, збірники		Вага компонентів, вхідний контроль сировини
Спирт етиловий ректифікований		Стадія 2 Одержання спирту етилового 60 %, 45 %. Мірники, збірники		Кількість завантаженої сировини, концентрація спирту, відсутність механічних домішок
Крупка цукрова зі стадії 1		Стадія 3 Фракціювання цукрової крупки Сито, збірник		Вхідний контроль крупки цукрової, однорідність маси, відповідність розміру гранул
45 % спирт етиловий зі стадії 2, МН «Цикламін» зі стадії 1		Стадія 4 Виготовлення гомеопатичних розведень Х1, Х2 Ваги, збірник		Відсутність механічних домішок, час струшування
Цукрові гранули зі стадії 3, 60 % спирт етиловий зі стадії 2		Стадія 5 Насичення та висушування гранул Збірники, лотки для сушки		Час струшування, товщина шару гранул, температура висушування, контроль злиплих гранул
Пакування гомеопатичних гранул
Пластикові контейнери або флакони скляні		Стадія 6 Фасування гранул у пластикові контейнери або флакони скляні Універсальний фасувальний апарат		Точність дозування, якість первинних пакувальних матеріалів, правильність друку на етикетках (номер серії, термін придатності)
Інструкції для медичного застосування, коробки		Стадія 7 Пакування пластикових контейнерів або флаконів скляних з гранулами у коробки. Пакувальний стіл		Комплектність, правильність друку, (номер серії, термін придатності)
	Готова продукція		Контроль готової продукції

Рис. 4. Блок-схема технологічного процесу виробництва гомеопатичних гранул «Циклорин» у промислових умовах

У розділі 4 «Розробка методик контролю якості гомеопатичних препаратів з лікарської рослини Цикламен європейський» представлено результати досліджень МН «Цикламін» та гомеопатичних гранул «Циклорин».

Наступним етапом нашої роботи став аналіз фізико-хімічних, фармако-технологічних і мікробіологічних показників якості, а також розробка методик якісного та кількісного аналізу одержаної МН «Цикламін» та розроблених гомеопатичних гранул «Циклорин» за допомогою реакцій ідентифікації, хроматографічного та спектрофотометричного аналізу.

З метою одержання даних для розробки проекту МКЯ були досліджені фізико-хімічні властивості МН «Цикламін» (табл. 5).

Таблиця 5

Фізико-хімічні показники матричної настойки «Цикламін»

Показники	Матрична настойка «Цикламін»
Колір	жовто-коричневий
Запах	терпкий, злегка солодкуватий, специфічний
Смак	гіркий, пекучий
Прозорість	рідина прозора, механічні включення відсутні
Вміст етанолу, %	44,50 ± 0,36
Відносна густина, свідн.	0,934 ± 0,003
Сухий залишок, %	1,420 ± 0,040

Примітки: n = 5; Р=95 %

За результатами дослідження встановлено, що МН «Цикламін» представляє собою рідину жовто-коричневого кольору з терпким солодкуватим запахом та гірким смаком. Вміст етанолу знаходиться в межах 43-45 %, відносна густина та вміст екстрактивних речовин відповідають нормам показників стандартних МН зі свіжої рослинної сировини. На основі отриманих даних розроблено проект МКЯ.

Згідно вимог ДФУ, для стандартизації гомеопатичних МН висуваються також вимоги, щодо обов'язкового проведення ідентифікації та кількісного вмісту БАР. Тому наступним етапом нашої роботи стало проведення якісного та кількісного аналізу МН «Цикламін».

Для визначення якісного складу БАР (сапонінів, амінокислот, вуглеводів, дубильних речовин та флавоноїдів) проведено реакції ідентифікації, які підтвердили їх наявність в МН «Цикламін», внаслідок утворення характерних продуктів хімічної реакції.

З метою вивчення амінокислотного складу МН, проведено аналіз амінокислот за допомогою газової хроматографії. Результати досліджень показали, що МН «Цикламін» містить 17 амінокислот, серед яких 8 незамінних. Досліджувана настойка містить значну кількість (від загальної суми амінокислот) глутамінової кислоти (25,5 %) та аспарагінової кислоти (20,3 %).

Визначення кількісного вмісту суми амінокислот у перерахунку на кислоту глутамінову в МН «Цикламін» проводили спектрофотометричним методом. Одержані дані показують, що максимум поглинання продуктів реакції для РСЗ кислоти глутамінової та МН з алоксангідратом співпадає і знаходиться в межах (522 ± 2) нм. Вміст суми амінокислот в настойці різних серій складає 0,046 0,002 г/мл (в перерахунку на кислоту глутамінову). Метрологічні характеристики методики визначення суми амінокислот в МН «Цикламін» представлені в табл. 6.

Таблиця 6

Результати кількісного визначення суми амінокислот в

МН «Цикламін» (Р=95 %, n=5)

№ з/п	Кількісний вміст, г/мл	Метрологічні характеристики
1	0,044	0,0464 S = 0,000927 S= 0,000004 ? 0,002 е = 5,56 %
2	0,048
3	0,049
4	0,045
5	0,046

Також проведено визначення вільних жирних кислот методом газорідинної хроматографії (ГРХ) в МН і встановлено, що до її складу входять 11 жирних кислот з домінуванням лінолевої (23,6 %) та ліноленової (20,5 %) кислот.

Експериментальними дослідженнями встановлено, що рослина Цикламен європейський містить значну кількість сапонінів, тому було проведено їх кількісне визначення у МН «Цикламін» спектрофотометричним методом.

За результатами кількісного аналізу сапонінів у МН визначено, що максимум поглинання продуктів реакції для РСЗ есцину та МН з кислотою сірчаною співпадає і знаходиться в межах (420 ± 2) нм та вміст суми сапонінів в базисному препараті складає 0,050 0,002 г/мл (в перерахунку на есцин). Метрологічні характеристики методики визначення суми сапонінів в МН «Цикламін» представлені в табл. 7.

Таблиця 7

Результати кількісного визначення суми сапонінів в

МН «Цикламін» (Р=95 %, n=5)

№ з/п	Кількісний вміст, г/мл	Метрологічні характеристики
1	0,048	0,0502 S = 0,000735 S= 0,000003 ? 0,002 е = 4,07 %
2	0,051
3	0,052
4	0,049
5	0,051

Проведені дослідження дозволили визначити стабільність препарату в процесі зберігання. Для встановлення терміну придатності МН «Цикламін» дослідні зразки спостерігали протягом 27 місяців зберігання у флаконах темного скла при двох температурних режимах (815 °С; 1525 °С).

Отримані результати свідчать про те, що МН, при зазначених умовах зберігання, не змінила своїх фізичних, фізико-хімічних та мікробіологічних показників, а це дозволяє встановити термін придатності - 2 роки.

З метою розробки проекту МКЯ наступним етапом нашої роботи стало вивчення показників якості гомеопатичних гранул «Циклорин» (табл. 8).

Таблиця 8

Фізико-хімічні та фармако-технологічні показники

гомеопатичних гранул «Циклорин»

Показники	Цукрова крупка	Гранули «Циклорин»
Зовнішній вигляд	гранули білого кольору, кулеподібної форми	гранули білого кольору, кулеподібної форми, зі солодким терпким запахом
Однорідність забарвлення	гранули однорідні за забарвленням
Кількість злиплих гранул, %	не більше 1	0,70 ± 0,03
Середня маса однієї гранули, мг	61,6 ± 0,5	67,4 ± 0,5
Втрата в масі при висушуванні, %	не більше 2	0,75 ± 0,04
Кількість гранул в 1,0 г, шт.	29-33	31 ± 2
Розпадання, хв	не більше 5 хв	3,35 ± 0,11
Насипний об'єм, г/см3	0,96 ± 0,10	0,93 ± 0,10
Плинність, с	6,11 ± 0,30	6,57 ± 0,20

Примітка: n = 5; Р=95 %

Результати проведених досліджень показують, що кількість злиплих гранул складає менше 1 %, втрата в масі при висушуванні - 0,75 %, а їх розпадання відбувається майже за 3 хв. Тобто розроблені гранули «Циклорин» за фізико-хімічними та фармако-технологічними показниками відповідають вимогам до гранул гомеопатичних, що дозволяє їх стандартизувати.

Ідентифікацію основних груп БАР в гранулах проводили за допомогою кольорових та осадових реакцій. З метою виключення взаємодії допоміжних речовин з реактивами також проведено реакції з цукрової крупкою.

В ході дослідження якісного складу БАР гранул «Циклорин» встановлено наявність сапонінів, амінокислот, дубильних речовин та флавоноїдів.

З метою кількісного визначення БАР у гомеопатичних гранулах «Циклорин» на амінокислотному аналізаторі визначено наявність вільних амінокислот, а також сумарний їх вміст (табл. 9).

Таблиця 9

Вміст вільних амінокислот у гомеопатичних гранулах «Циклорин»

Амінокислота	Вміст, мкг/мг	Амінокислота	Вміст, мкг/мг
Глутамінова кислота	0,740	Метіонін*	0,300
Аспарагінова кислота	0,250	Фенілаланін*	0,280
Аланін	0,430	Ізолейцин*	0,210
Гліцин	0,360	Тирозин	0,260
Серін	0,320	Гістидин*	0,185
Треонін*	0,320	Лізин*	0,115
Лейцин*	0,315	Аргінін	сліди
Пролін	0,275	Цистеїн	сліди
Валін*	0,210
Всього: 1,089

Примітка. «*» - незамінна амінокислота

Як видно з результатів дослідження, гомеопатичні гранули «Циклорин» містять 17 амінокислот, серед яких 8 є незамінними для організму людини. Переважаючими амінокислотами за кількісним вмістом є кислота глутамінова (16 %), кислота аспарагінова (13 %), аланін (11 %), гліцин (11 %).

Крім того, методом ГРХ в гомеопатичних гранулах ідентифіковано 7 жирних кислот, у тому числі незамінна - лінолева кислота. Визначена домінуюча кількість пальмітинової (36 %) та олеїнової (33 %) кислот (табл. 10).

Таблиця 10

Вміст жирних кислот у гомеопатичних гранулах «Циклорин»

Жирна кислота	Вміст в гранулах, мкг/мг	Жирна кислота	Вміст в гранулах, мкг/мг
Лаурінова	0,06	Стеаринова	0,40
Мірістинова	0,06	Олеїнова	0,90
Пентадеканова	0,02	Лінолева*	0,30
Пальмітинова	1,00
Всього: 2,74

Примітка. «*» - незамінна жирна кислота

Таким чином, запропоновані методики визначення якісного складу і кількісного вмісту амінокислот та жирних кислот дозволяють стандартизувати гомеопатичні гранули «Циклорин» за вказаними БАР.

Для встановлення терміну придатності дослідні зразки гомеопатичних гранул «Циклорин» спостерігали протягом 27 місяців зберігання при температурному режимі 1525 °С у двох видах упаковки (пластикові контейнери та скляні флакони) (табл. 11).

Результати досліджень свідчать про те, що гранули, які зберігалися впродовж 27 місяців при температурі 1525 °С як у пластикових контейнерах, так і в скляних флаконах не змінили своїх фізико-хімічних та фармако-технологічних показників, а це дозволяє встановити термін придатності - 2 роки.

Розділ 5 «Фармакологічні дослідження гомеопатичних гранул «Циклорин» містить результати вивчення специфічної активності та гострої токсичності препарату «Циклорин».

Фармакологічні дослідження лікарського засобу проводили під керівництвом проф., д.фарм.н. Л. В. Яковлєвої на базі ЦНДЛ НФаУ. За результатами проведених досліджень встановлено, що гомеопатичні гранули «Циклорин» при внутрішньошлунковому введенні відносяться до V класу токсичності - практично нетоксичних речовин (ЛД50>5000 мг/кг).

Вивчення специфічної фармакологічної активності гомеопатичних гранул «Циклорин» проводили на мурчаках на моделі АР.

Результати дослідження свідчать, що гомеопатичні гранули «Циклорин» при внутрішньошлунковому введенні в дозі 37 мг/кг проявляють виражену антиалергічну активність. Також визначено, що «Циклорин» перевищує ефективність референтного препарату «Ринітал» («Дойче Хомеопаті-Уніон ДХУ-Арцнайміттель ГмбХ&Ко.КГ», Німеччина) за здатністю попереджати прояви АР. Крім того, за допомогою гістоморфологічних досліджень слизової оболонки дихальної порожнини носу мурчаків доведено, що гранули «Циклорин», як і таблетки «Ринітал», знижують виразність морфологічних ознак АР.

Таблиця 11

Дослідження стабільності гомеопатичних гранул «Циклорин»

Найменування показників

Первин-ний аналіз

Зберігання при температурі +(15ч25) °С, міс.

Пластикові контейнери

Скляні флакони

6

12

18

24

27

6

12

18

24

27

Зовнішній вигляд

Гранули однорідні за забарвленням та розміром, кулеподібної форми, білого кольору з кремуватим або жовтуватим відтінком, зі солодким терпким запахом

Ідентифікація:- сахароза

- фіолетове забарвлення (з кобальту хлоридом)

- амінокислоти

- фіолетово-бузкове забарвлення (з нінгідрином)

- сапоніни

- органічний шар оранжевого кольору (реакція Сальковського)

Кількість злиплих гранул, % (не більше 1 згідно проекту МКЯ)

0,70 ± 0,03

0,68 ± 0,07

0,70 ± 0,08

0,67 ± 0,05

0,71 ± 0,04

0,72 ± 0,03

0,74 ± 0,03

0,71 ± 0,05

0,72 ± 0,04

0,72 ± 0,05

0,70 ± 0,07

Розпадання, хв. (не більше 5 хв згідно проекту МКЯ)

3,35 ± 0,11

3,20 ± 0,13

3,40 ± 0,12

3,23 ± 0,14

3,36 ± 0,17

3,35 ± 0,15

3,32 ± 0,14

3,25 ± 0,16

3,33 ± 0,12

3,27 ± 0,14

3,32 ± 0,13

Втрата в масі при висушуванні, % (не більше 2 згідно проекту МКЯ)

0,75 ± 0,04

0,79 ± 0,03

0,71 ± 0,05

0,74 ± 0,04

0,74 ± 0,03

0,71 ± 0,06

0,72 ± 0,05

0,70 ± 0,08

0,75 ± 0,03

0,73 ± 0,05

0,76 ± 0,03

Середня кількість гранул в 1,0 г, шт. (від 29 до 33 згідно проекту МКЯ)

31 ± 2

31 ± 2

30 ± 1

31 ± 2

32 ± 1

32 ± 1

31 ± 2

30 ± 1

31 ± 2

30 ± 1

30 ± 1

Маса вмісту упаковки, г (від 14,85 до 15,15 згідно проекту МКЯ)

15,01± 0,13

14,96± 0,09

15,03± 0,08

14,99± 0,10

14,98± 0,13

15,01± 0,12

14,95± 0,07

15,01± 0,07

15,00± 0,12

15,02± 0,09

15,04± 0,09

Мікробіологічна чистота: аеробних бактерій і грибів сумарно

<103

P. aeruginosa, S. aureus

Відсутність росту

Enterobacteriacea

Відсутність росту

Примітки: n = 5; Р=95 % +(8ч15) °С - температура зберігання у прохолодному місці згідно ДФУ;

+(15ч25) °С - зберігання при кімнатній температурі згідно ДФУ.

загальні висновки

1. Вперше розроблено раціональну технологію матричної настойки і науково обґрунтовано склад та технологію гомеопатичних гранул на основі лікарської рослини Цикламен європейський для лікування і профілактики алергічного риніту, які містять Cyclamen europaeum Х3 - 0,15 г, крупки цукрової - 15,0 г.

2. Визначено показники якості лікарської рослини Цикламен європейський. За результатами досліджень розроблено проект МКЯ.

3. Експериментально встановлено вміст соку у всій рослині Цикламен та окремо в бульбах і доведено, що використання всіх частин рослини є раціональним для одержання матричної настойки.

4. На основі експериментальних досліджень обґрунтовано технологію виготовлення матричної настойки «Цикламін». Встановлено розмір подрібнених часток - 5 мм, а раціональний час настоювання - 5 діб.

5. За допомогою фізичних, фізико-хімічних, фармако-технологічних методів аналізу досліджено показники якості матричної настойки та гомеопатичних гранул з лікарської рослини Цикламен європейський. За результатами спектрофотометричного аналізу встановлено кількісний вміст в матричній настойці сапонінів (0,050 0,002 г/мл) та амінокислот (0,046 0,002 г/мл).

6. Запропоновано методики стандартизації та розроблено проекти МКЯ на матричну настойку під умовною назвою «Цикламін» та гомеопатичні гранули під умовною назвою «Циклорин».

7. Досліджена стабільність матричної настойки та гомеопатичних гранул протягом 27 місяців зберігання. Доведено термін придатності настойки у флаконах темного скла та гранул у двох видах упаковки (пластикові контейнери та скляні флакони) при температурі 15ч25 °С - 2 роки.

8. Визначено, що розроблені гомеопатичні препарати за рівнем мікробної контамінації відповідають вимогам ДФУ (1-е вид.).

9. Встановлена протиалергічна активність гомеопатичних гранул «Циклорин», що дозволяє рекомендувати цей препарат для лікування та профілактики алергічного риніту. Визначено, що розроблені гранули відносяться до V класу токсичності, тобто практично нетоксичних речовин.

10. За результатами досліджень одержано патент № 53451 від 11.10.2010 р. «Спосіб одержання гомеопатичної матричної настойки з Cyclamen europaeum (Цикламен європейський)», а також патент № 54661 від 25.11.2010 р. «Гомеопатичний засіб для лікування та профілактики алергічного риніту».

11. Розроблено проекти технологічного промислового регламенту на матричну настойку «Цикламін» та гомеопатичні гранули «Циклорин», які апробовано в умовах промислового виробництва ТОВ «Арніка» (м. Харків). Розроблено проект технологічної інструкції на гомеопатичні гранули «Циклорин», який апробовано в умовах аптечного виробництва ТОВ «Гомеопатична аптека» (м. Харків).

12. Фрагменти роботи впроваджено до навчального процесу ряду медичних та фармацевтичних вузів України.

Список опублікованих праць за темою дисертації

Фахові публікації

1. Олійник С. В. Дослідження з розробки складу та технології гомеопатичних препаратів «Цикламен» / С. В. Олійник, О. І. Тихонов // Вісник фармації. - 2006. - № 4 (48). - С. 40 - 44. (Особистий внесок - аналіз фармацевтичного ринку, проведення експериментальної частини, статистична обробка результатів, оформлення статті).

2. Олійник С. В. Розробка та дослідження гомеопатичних препаратів з надземної частини лікарської рослини Цикламен / С. В. Олійник, О. І. Тихонов // Фармац. журн. - 2008. - № 2. - С. 117 - 122. (Особистий внесок - планування, проведення експериментальної частини, статистична обробка результатів, оформлення статті).

3. Олійник С. В. Розробка технології та методик аналізу гомеопатичних гранул з лікарської рослини Цикламен європейський (Cyclamen europaeum) /

4. С. В. Олійник, О. І. Тихонов // Фармацевтичний часопис. - 2008. - № 2 (6). - С. 5 - 8. (Особистий внесок - планування, проведення експериментальної частини, статистична обробка результатів, оформлення статті).

5. Олійник С. В. Дослідження амінокислотного складу гомеопатичної матричної настойки під умовною назвою «Цикламен» / С. В. Олійник, О. І. Тихонов, В. М. Чушенко // Вісник фармації. - 2009. - № 2 (58). - С. 46 - 51. (Особистий внесок - аналіз фармацевтичного ринку, проведення експериментальної частини, статистична обробка результатів, оформлення статті).

6. Олійник С. В. Дослідження жирно-кислотного складу гомеопатичної матричної настойки з лікарської рослини Цикламен європейський / С. В. Олійник, О. І. Тихонов // Збірник наукових праць співробітників НМАПО

7. ім. П. Л. Шупика. - К., 2009. - Вип. 18, Кн. 3. - С. 619 - 623. (Особистий внесок - планування, проведення експериментальної частини, статистична обробка результатів, оформлення статті).

8. Олійник С. В. Фізико-хімічні дослідження гомеопатичних препаратів з лікарської рослини Цикламен європейський / С. В. Олійник, О. І. Тихонов // Актуальні питання фармацевтичної та медичної науки та практики : зб. наук. ст. - Запоріжжя : Вид-во ЗДМУ, 2009. - Т. 2, вип. XXII. - С. 153 - 157. (Особистий внесок - планування, проведення експериментальної частини, статистична обробка результатів, оформлення статті).

9. Олійник С. В. Експериментальне обґрунтування клінічного застосування гомеопатичних гранул «Циклорин» при алергічному риніті / С. В. Олійник, О. І. Тихонов, О. Б. Леницька // Вісник фармації. - 2010. - № 4 (64). -

10. С. 27 - 29. (Особистий внесок - планування, участь у проведенні експериментальної частини, статистична обробка результатів, оформлення статті).

Патенти

11. Патент 53451 України на корисну модель, МПК (2009) А61К 36/00. Спосіб одержання гомеопатичної матричної настойки з Cyclamen europaeum (Цикламен європейський) / О. І. Тихонов, С. В. Олійник, Л. В. Яковлєва,

12. О. Б. Леницька, О. М. Колос. - № u 201003378; заявл. 23.03.2010; опубл. 11.10.2010, Бюл. 19.

13. Патент 54661 України на корисну модель, МПК (2009) А61К 9/16,

14. А 61 К 36/00, А 61 Р 37/08. Гомеопатичний засіб для лікування та профілактики алергічного риніту / О. І. Тихонов, С. В. Олійник, С. О. Тихонова, Т. Г. Ярних. - № u 201003362; заявл. 23.03.2010; опубл. 25.11.2010, Бюл. 22.

Інформаційні листи, статті в науково-практичних виданнях

15. Олійник С. В. Технологія виготовлення гомеопатичного базисного препарату з лікарської рослини Цикламен в умовах аптек : інформ. лист /

16. С. В. Олійник, О. І. Тихонов. - К. : Укрмедпатентінформ, 2007. - № 112. - 4 с.

17. Олійник С. В. Якісний аналіз вуглеводного складу гомеопатичних препаратів з лікарської рослини Цикламен європейський / С. В. Олійник,

18. О. І. Тихонов // Український вісник психоневрології. - 2008. - Т. 16, вип. 3 (56) (дод.). - С. 93 - 94.

Тези доповідей, матеріали конференцій

19. Олейник С. В. Разработка технологии и анализ базисных гомеопатических препаратов Cyclamen / С. В. Олейник, А. И. Тихонов, А. Б. Ходарченко // Ювілейний 80-й науковий форум студентів і молодих вчених БДМУ: матеріали ІІІ міжнар. мед.-фармац. конф. студентів і молодих вчених, м. Чернівці, 3 квіт. 2006 р. // Хист. - 2006. - Вип. 8. - С. 152.

20. Олейник С. В. Физико-химический анализ гомеопатических эссенций Цикламен / С. В. Олейник, А. И. Тихонов // Матеріали ХІ Ювілейного міжнар. медичного конгресу студентів і молодих учених (присвяченого 50-річчю заснування ТДМУ), м. Тернопіль, 10 - 12 трав. 2007 р. - Тернопіль : Укрмедкнига, 2007. - С. 266.

21. Олейник С. В. Изучение химического состава лекарственного растения Цикламен / С. В. Олейник, А. И. Тихонов // Актуальні питання створення нових лікарських засобів: матеріали Всеукр. наук.-практ. конф., м. Харків, 17 - 18 трав. 2007 р. - Х. : Вид-во НФаУ, 2007. - С. 126.

22. Олійник С. В. Сучасні аспекти створення екстемпоральних гомеопатичних препаратів на основі лікарської рослини Цикламен / С. В. Олійник,

23. О. І. Тихонов // Сучасні проблеми екстемпоральної рецептури: матеріали наук.-практ. семінару, м. Харків, 27 - 28 верес. 2007 р. - Х. : Вид-во НФаУ, 2007. - С. 66 - 72.

24. Олійник С. В. Цикламен - цінний гомеопатичний лікарський засіб /

25. С. В. Олійник, О. І. Тихонов // Наука и образование без граница - 2007 : материалы III междунар. науч.-практ. конф., г. София, 16 - 27 дек. 2007 г. - София : Изд-во «Бял ГРАД-БГ» ООД, 2007. - Т. 14. - С. 56 - 58.

26. Олійник С. В. Сучасні аспекти розробки гомеопатичних препаратів / С. В. Олійник, О. І. Тихонов // Современные проблемы и пути их решения в науке, транспорте, производстве и образовании ` 2007: сб. науч. тр. по материалам междунар. науч.-практ. конф., г. Одесса, 15 - 25 дек. 2007 г. - Одесса, 2007. - Т. 18. - С. 40 - 41.

27. Олійник С. В. Фармакотерапія гомеопатичними препаратами на основі лікарської рослини цикламен європейський / С. В. Олійник, О. І. Тихонов // Лекарства человеку. Современные проблемы создания, исследования и апробации лекарственных средств: материалы XXV Юбилейной науч.-практ. конф. с междунар. участием, г. Харьков, 19 марта 2008 г. - Х. : Изд-во НФаУ, 2008. - С. 119 - 121.

28. Олійник С. В. Сучасні аспекти лікування алергійного риніту /

29. С. В. Олійник, О. І. Тихонов // Актуальні питання створення нових лікарських засобів: материалы Всеукр. наук.-практ. конф. студентів та молодих вчених, м. Харків, 16 - 17 квіт. 2008 г. - Х. : Вид-во НФаУ, 2008. - С. 151.