Особенности ферментного спектра крови и молока у коров в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Введение

Актуальность темы. Значительный экономический урон животноводству наносит массовый убой крупного рогатого скота, позитивно реагирующего на туберкулиновые реакции. Результатом этого является недополучение приплода, снижение продуктивности, увеличение затрат, связанных с проведением комплекса профилактических, диагностических и оздоровительных мероприятий, а также необходимость выбраковки мяса при убое больного скота (А.Н. Шаров, 2000; А.Х. Найманов и др., 2004; Ю.А. Кассич и др., 2004; К.Т. Шенжанов, 2004; T.J. Ryan, 2000; J.M. Polloc, 2000; H. Kohler, 2000; W.I. Morrison, 2000). Несмотря на очевидную актуальность, многие стороны этой проблемы (диагностика, клиника, их взаимосвязь с нарушениями метаболизма и продуктивностью и т.д.) крупного рогатого скота с различной реакцией на туберкулиновые пробы до сих пор исследованы недостаточно. Между тем, реакция на туберкулин и ее модификации имеют фундаментальную значимость для оценки распространенности туберкулеза среди крупного рогатого скота (М.М. Додонов, 2003; C. Pearson et al., 1977; K. Kwiatek, 1988; R. Miciora et al., 1991). Исходя именно из этих диагностических аллергических проб в настоящее время верифицируется диагноз заболевания (И.И. Румачик, 1990; В.Ф. Мартынов и соавт., 1991; А.И. Кузин, 1992; А.Н. Шаров и соавт., 2000; Ю.А. Кассич и соавт., 2004; D.L.Whipple et al., 2001).

Особое место в понимании патогенеза болезни, как известно, принадлежит обмену веществ. Однако сведения о сдвигах метаболизма в организме животных, положительно реагирующих на туберкулиновые пробы немногочисленны, нередко противоречивы и не дифференцированы в зависимости от их вида. Весьма недостаточно сведений о механизмах образования и качественном составе молока таких коров. Так, например, практически отсутствуют данные, об изменении активности ферментов в молоке у животных, реагирующих на КАМ (-), на туберкулин (+) или на туберкулин и КАМ (=). Кроме того, в литературе даже не обсуждается вопрос об индуцибельности и корреляционных взаимосвязях ферментов крови и молока у животных, в зависимости от их реакции на туберкулиновые пробы.

Разработка указанных вопросов может наметить пути нивелирования метаболических расстройств, понять тонкие механизмы образования составных частей молока и осуществлять коррекцию его качественного состава, раскрыть новые стороны влияния аллергических реакций замедленного типа на организм жвачных. Более того, комплексная оценка сдвигов обмена веществ, особенно ферментного спектра крови и молока, позволит разработать дополнительные критерии, характеризующие специфичность процесса, что особенно важно для высокопродуктивных коров. Исходя из этих представлений, актуальность темы расценивается как современная и перспективная.

Цель и задачи исследования. Цель работы состояла в том, чтобы установить особенности спектра ферментов крови и молока коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы и выявить у них отличия индукции ферментов на экзогенные стимулы.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить клиническую картину и активность некоторых ферментов крови коров черно-пестрой породы в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы.

2. Установить особенности субстратной и гормональной индукции ферментов крови коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы.

3. У коров, в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы, изучить качественный состав молока, в т. ч. спектр ферментов, а также степень их индукции под влиянием экзогенных стимулов.

4. Изучить корреляционные взаимосвязи между ферментами крови и молока у коров с различной реакцией на туберкулиновые пробы.

Объект исследования. Крупный рогатый скот с разной реакцией на туберкулиновые пробы.

Предмет исследования. Активность ферментов крови и молока у коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы.

Научная новизна. Впервые установлены различия в активности некоторых ферментов крови и молока у коров в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы. У животных, реагирующих на КАМ (-) ферментный спектр крови и молока, его физико-химические свойства практически не отличаются от здоровых животных. Напротив, у коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и КАМ (=), в крови и молоке развивается дисбаланс ферментов, относящихся к разным классам.

Впервые изучены корреляционные взаимосвязи одноименных и разноименных ферментов крови и молока. Показано, что у коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и КАМ (=) вклад ферментов крови в аналогичные показатели молока оказывается более значительным, чем у здоровых и коров, реагирующих на КАМ (-). У коров подопытных групп корреляционные связи между разноименными ферментами крови и молока изменяются в зависимости от реакции организма на туберкулиновые пробы, свидетельствуя о своеобразии у них механизмов молокообразования.

Разработана схема и определены дозы субстратов и гормона для индукции ферментов крови и молока у крупного рогатого скота. Впервые показано, что у коров с позитивной реакцией на туберкулиновые пробы понижена резистентность некоторых ферментов крови и молока к индуцирующему действию экзогенных стимулов.

Теоретическая и практическая значимость работы. На основании изучения ферментного спектра крови и молока коров, их корреляционных взаимосвязей и отчетливых особенностей индукции ферментов, раскрыты ранее неизвестные стороны изменения метаболизма в организме коров в зависимости от их реакции на туберкулиновые пробы. Эти результаты имеют значение для более глубокого понимания патогенеза болезни и могут использоваться для верификации диагноза.

Полученные данные следует использовать в практической деятельности в качестве дополнительных тестов при углубленной диагностике туберкулеза жвачных, что необходимо для обоснованной выбраковки больных животных, особенно среди коров с высокой продуктивностью.

Апробация и реализация результатов исследования. Результаты научных исследований доложены, обсуждены и одобрены на Всероссийских научно-практических конференциях, посвященных 117-й - 119-й годовщинам со дня рождения Н.И. Вавилова (г. Саратов, 24-26 ноября 2004 г.; 23-25 ноября 2005 г.; 4-8 декабря 2006г.), на научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов по итогам научно-исследовательской и учебно-методической работы (г. Саратов, 4-8 февраля 2005; 4-8 февраля 2006), на Международной научно-практической конференции «Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России в рамках межведомственной координационной программы» (г. Дубровици, 18-21 октября, 2005г.), на VI Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина Современные проблемы и перспективы развития» (г. Саратов, 2006г.), на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы развития АПК» (г. Саратов, сентябрь 2006г.), на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных» (г. Саратов, 2007г.).

Публикация результатов исследования. Основные положения диссертации опубликованы в 13 работах. Одна работа опубликована в издании рекомендованном ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 141 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 291 источник литературы, в том числе 56 зарубежных. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 20 рисунками.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Особенности ферментного спектра крови коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы.

2. Субстратная и гормональная индукция ферментов крови коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы.

3. Особенности качественного состава, спектра ферментов молока и их индукции у коров, реагирующих на туберкулиновые пробы.

4. Характерные корреляционные взаимосвязи между ферментами крови и молока у коров с различной реакцией на туберкулиновые пробы.

1. Материал и методы исследования

туберкулиновый фермент рогатый гормональный

Работа выполнена в 2003-2005 гг. на базе СХПК «Штурм» Новобурасского района, СХП «Садомское» Базарнокарабулакского района Саратовской области и в научной лаборатории кафедры биотехнологии, органической и биологической химии ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ».

При постановке диагноза учитывали результаты эпизоотологических исследований, данные патологоанатомического вскрытия, а дифференциацию специфических реакций проводили симультанной пробой с комплексным аллергеном из атипичных микобактерий (КАМ). В опытах находились 82 коровы черно-пестрой породы, которые были разделены следующим образом: 1 группа - контрольная (22 коровы); они не реагировали как на туберкулин, так и на КАМ; 2 группа - животные реагировали в большей степени на КАМ (-), чем на туберкулин (17 коров); 3 группа - животные с ярко выраженной реакцией на туберкулин (+) (24 коровы); 4 группа - животные, которые имели ярко выраженную реакцию на туберкулин и на КАМ (=) (19 коров). В процессе исследования было выполнено несколько разных серий экспериментов и каждая опытная группа для сравнения имела контрольную, т.е. группу аналогов.

В крови и молоке коров определяли активность следующих ферментов: аспартатаминотрансферазы (АСТ) и аланинаминотрансферазы (АЛТ) динитрофенилгидразиновым методом Рейтмана-Френкеля, с помощью наборов фирмы «Lachema» (S .Rietman, 1957); лактатдегидрогеназы (ЛДГ) - реактивами набора «Lachema» (H.S. Spiegel, 1972); щелочной фосфатазы - (ЩФ) набором фирмы Vital Diagnostics, унифицированным методом по «конечной точке» (В.С. Камышников, 2000); каталазы - по методу Баха и Зубковой (О.Д. Кушманова и др., 1983); пероксидазы - методом, основанном на способности фермента катализировать окисление бензидина перекисью водорода в n-хинондиимид (В.С. Камышников, 2000). В молоке, кроме указанных ферментов, определяли содержание общего белка, казеина, лактозы, сухого остатка, золы, а также измеряли его плотность и титруемую кислотность (Г.С. Инихов, 1956; В.А. Блинов, 1995).

При проведении опытов были обнаружены существенные различия в активности ферментов крови и молока у коров, неодинаково реагирующих на туберкулиновые пробы. Это позволило предположить о различной степени индукции ферментов у коров контрольной и опытных групп. Подобных исследований у крупного рогатого скота, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы, ранее не проводилось. Исходя из этого нами, сначала на 15 кроликах была разработана технология индукции ферментов и подобраны экзогенные стимулы, способные изменять активность исследованных энзимов. Такими субстратными и гормональными индукторами оказались: фосфатный буфер (Диахим - Буфер-Г), молочная кислота (40%, ОКП 26 3451 0331, Вектон), глицерин (чда, Германия, Лаверна) и гидрокортизон-ацетат (Гедеон-Рихтер, Венгрия).

После получения этих данных, эксперименты были проведены на крупном рогатом скоте. Фосфатный буфер рН 6,8-7,2, вводили коровам внутрь в дозе 2,5 мл на 1 кг живой массы. Молочную кислоту задавали per os из расчета 0,6 мл на кг, предварительно разбавив ее водой в соотношении 1:3. Глицерин также вводили per os из расчета 2 г на 1 кг живой массы коров. Гидрокортизон-ацетат инъецировали в предлопаточную область внутримышечно, из расчета 2,2 мг/кг. Указанные индукторы активности ферментов вводили животным натощак. Забор крови проводили из яремной вены до дачи препаратов, а затем через 3, 6 и 24 часа после их приема. Следует подчеркнуть, что при этих воздействиях активность ферментов крови, а также молока через сутки не отличалась от тощаковых значений.

Статистическую обработку полученных данных осуществляли на персональном компьютере Pentium IV с помощью стандартного пакета статистических программ Microsoft Excel. Достоверность различий определяли методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента. Различия считали достоверными при Р<0,05.

2. Результаты собственных исследований

Активность ферментов крови у коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы.

Установлено (таблица 1), что активность всех исследованных нами ферментов крови у контрольных животных и коров, реагирующих на КАМ (-), была практически одинаковой. У коров, же реагирующих на туберкулин (+) или на туберкулин и КАМ (=) активность АСТ, ЛДГ, ЩФ оказалась выше, чем в контроле на 10,0 - 23,2% (Р<0,02). В то же время активность каталазы и пероксидазы в крови больных животных имела иную направленность, она не повышалась, а понижалась, соответственно на 11,8 - 13,3% и на 32,6 - 34,1% (Р<0,02).

Следовательно, в крови у коров, позитивно реагирующих на туберкулиновые пробы, развивается явный дисбаланс ферментов, относящихся к разным классам. Полученные данные позволяют считать, что изменение активности ферментов следует использовать в качестве дополнительного диагностического теста у коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы. Они предполагают также применение соответствующих, патогенетически обоснованных корригирующих мероприятий.

Таблица 1 - Активность ферментов крови у обследованных коров

Особенности индукции ферментов крови.

Установлено, что после введения коровам per os фосфатного буфера в крови у них лишь незначительно и статистически не достоверно изменялась активность АСТ, АЛТ, ЛДГ, каталазы и пероксидазы. Иная картина оказалась характерной для щелочной фосфатазы. Активность этого фермента статистически достоверно повышалась через 3 часа после введения фосфатного буфера только у контрольных коров и коров, реагирующих на КАМ (-), соответственно на 33,3 и 27,8% (Р<0,05). У коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и КАМ (=) полностью отсутствовала индукция щелочной фосфатазы в ответ на введение фосфатного буфера. Оказалось (рисунок 1), что общий подъем активности ЩФ в контрольной группе коров составил 22,9%, тогда как у животных 2 и 4 групп он был равен соответственно 19,3 и 2,3%. Что касается животных 3 группы, то у них общая активность этого фермента было даже пониженной, на 3,4%. Иными словами, у больных коров развивается отчетливо выраженная резистентность щелочной фосфатазы в ответ на действие специфического индуктора.

Далее, в качестве субстратного индуктора была использована молочная кислота. После ее введения не наблюдалось достоверных изменений активности АСТ, ЩФ, каталазы и пероксидазы у животных всех групп. Под действием лактата у коров контрольной группы и коров, реагирующих на КАМ (-), статистически достоверно повысилась только активность ЛДГ: через 3 часа на 18,8-20,3% (Р<0,05), а через 6 часов - на 30,6-26,3% (Р<0,01). У коров же 3 и 4 подопытных групп активность ЛДГ под влиянием лактата не изменялась. Расчетные данные показали (рисунок 1), что общий подъем активности ЛДГ в контрольной группе коров составил 18%, тогда как у животных 2 и 3 групп он был равен соответственно 15,9 и 2,1%. Что касается животных 4 группы, то у них общая активность этого фермента оказалась сниженной - на 1%.

В то же время у животных, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=), под действием лактата произошла индукция АЛТ. Так, у коров, реагирующих на туберкулин (+) активность этого фермента через 6 часов после введения молочной кислоты увеличилась на 24,6% (Р<0,02), у реагирующих на туберкулин и КАМ (=) через 3 часа - на 15,9% (Р<0,05), а через 6 часов - на 29,8% (Р<0,02). Итак, у больных животных на введение молочной кислоты увеличивается активность не лактатдегидрогеназы, а индуцируется активность аланинаминотрансферазы.

Под влиянием нагрузки глицерином, статистически значимо изменялась активность лишь АСТ и АЛТ. Причем эти сдвиги были весьма своеобразными. У контрольных коров и коров, реагирующих на КАМ (-) активность трансаминаз увеличилась, по сравнению с тощаковыми показателями, через 3 и 6 часов. А у коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и КАМ (=), лишь через 6 часов и в гораздо меньшей степени. При анализе общего подъема активности АСТ оказалось (рисунок 1), что в контрольной группе коров и у животных 2-й группы он составил 31,5% и 53,2%. В то же время у животных 3 и 4 групп подъем активности АСТ под влиянием глицерина был равен соответственно 16,5 и 10,9%. Следовательно, животные с явной положительной реакцией на туберкулиновые пробы весьма неадекватно реагировали повышением активности АСТ и АЛТ в ответ на введение глицерина.

Гидрокортизон у коров контрольной и подопытных групп более широко изменял спектр ферментов крови. У контрольных коров и коров, реагирующих на КАМ (-) наблюдалось увеличение активности АСТ и АЛТ через 3 и 6 часов после его введения. У животных, реагирующих на туберкулин (+) и туберкулин и КАМ (=), активность АСТ и АЛТ под влиянием гормона повышалась лишь к 6-му часу, причем в гораздо меньшей степени. Иными словами, для животных 3 и 4 групп была характерна запоздалая реакция в ответ на гормональный стимул. Общий подъем активности АЛТ (рисунок 1) составил у контрольных коров и коров, реагирующих на КАМ (-) 22,9 и 24,8%, а у реагирующих на туберкулин (+) и туберкулин и КАМ (=) - 13 и 11,6%. Введение гидрокортизона способствовало статистически достоверному возрастанию активности ЛДГ через 3 и 6 часов только у коров первых двух групп. У коров, же положительно реагирующих на туберкулиновые пробы, напротив, активность этого фермента снижалась на 6,3-8%.

Таким образом, впервые показано, что у коров, положительно реагирующих на туберкулиновые пробы а) понижена чувствительность ряда ферментов к индуцирующему действию внешних стимулов, б) развивается дисбаланс в ферментном спектре крови, в) в ответ на специфический индуктор может повышаться активность ряда других ферментов.

Рисунок 1 - Изменение в крови коров общей активности ЩФ (I) под влиянием фосфатного буфера, ЛДГ (II) - лактата, АСТ (III) - глицерина и АЛТ(IV) - гидрокортизона

Сдвиги качественного состава молока.

При анализе физико-химических показателей молока было установлено, что они у контрольных коров и коров, реагирующих на КАМ (-), оказались практически одинаковыми. В то же время у коров, реагирующих на туберкулин (+) и реагирующих на туберкулин и КАМ (=), нами отмечено снижение плотности молока, титруемой кислотности, на 14%-17% (Р<0,01), сухих веществ, на 8,0-10,3% (Р<0,02). В молоке у этих коров, содержание белка и казеина было ниже на 4,0-8,6% (Р<0,02), а уровня лактозы - на 2,3-3,0% (Р<0,02).

Своеобразные изменения были присущи и ферментам молока (таблица 2). Так, в молоке у коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и КАМ (=) статистически достоверно по сравнению с контролем была повышена активность АСТ, АЛТ и ЛДГ. В то же время у них активность щелочной фосфатазы и пероксидазы в молоке была на 24,3-48,8% (Р<0,02) ниже, чем в норме.

Таблица 2 - Активность ферментов молока у обследованных коров

Таким образом, впервые нами установлено, что у коров 3 и 4 групп активность АСТ, АЛТ и ЛДГ оказалась статистически достоверно выше, как в крови, так и в молоке, по сравнению с контрольными животными. Причем, активность этих ферментов в молоке повышалась значительнее, чем в крови. Это с большой долей вероятности указывает на повышенный синтез АСТ, АЛТ и ЛДГ в молочной железе коров, явно реагирующих на туберкулиновые пробы.

Отчетливо выраженный дисбаланс установлен нами и в отношении других ферментов. Так, активность пероксидазы у больных коров оказалась в одинаковой степени пониженной как в крови, так и в молоке. Это может свидетельствовать о беспрепятственном переходе фермента из крови в молоко. Вместе с тем, активность щелочной фосфатазы увеличивалась в крови коров 3 и 4-й групп, но была снижена в молоке этих животных. Иными словами, транспорт щелочной фосфатазы в молоко больных коров был затруднен. Что касается каталазы, то ее активность в крови коров с подозрением на туберкулез значительно снижалась, оставаясь, однако, неизменной в молоке у этих животных, по-видимому, за счет адекватного синтеза в самой молочной железе.

Влияние индукторов на активность ферментов молока.

Было установлено, что фосфатный буфер, введенный коровам per os, практически не изменял в молоке у них активность исследованных нами ферментов, даже щелочной фосфатазы. В то же время под влиянием лактата в молоке коров контрольной группы и коров, реагирующих на КАМ (-) через 6 часов активность лактатдегидрогеназы увеличивалась соответственно на 52,2% (Р<0,02) и 45,8% (Р<0,05). Однако, она совершенно не изменялась в молоке коров, реагирующих на туберкулин (+) или туберкулин и КАМ (=). Общий подъем активности ЛДГ молока (рисунок 2) под действием молочной кислоты был равен у контрольных коров 28,9, у коров реагирующих на КАМ (-) - 22,2, а у коров 3 и 4 группы соответственно 8,1 и 4,9%. Иными словами, у коров последних двух групп развивается своеобразная «глухота», резистентность ЛДГ к индуцирующему действию лактата. Как установлено далее, у коров не только в крови, но и в молоке под влиянием лактата повышалась активность АЛТ. Однако только у коров 3 и 4 групп. Так, у животных, реагирующих на туберкулин (+) она оказалась больше, чем натощак на 59,4% (Р<0,05), а у реагирующих на туберкулин и КАМ (=) - на 62,2% (Р<0,05). Активность АСТ, ЩФ, каталазы и пероксидазы в молоке под влиянием лактата изменялась незначительно и статистически не достоверно.

Для некоторых групп коров весьма эффективным индуктором ферментов молока оказался глицерин. После его введения у коров контрольной группы активность АСТ молока через 3 часа увеличилась в 2,5 раза (Р<0,02), а через 6 часов - в 2 раза (Р<0,05). У коров, реагирующих на КАМ (-) через 3 часа активность АСТ молока увеличилась в 2,7 раза (Р<0,05), а через 6 часов - в 3 раза (Р<0,05). Вместе с тем у животных, реагирующих на туберкулин (+) активность АСТ в молоке повысилась только через 6 часов, причем, всего на 47% (Р<0,05). У животных же, реагирующих на туберкулин и КАМ (=), индукции АСТ мы не наблюдали вовсе. Общий подъем активности АСТ молока под действием глицерина (рисунок 2) составлял у контрольных коров 82,6%, у коров, реагирующих на КАМ (-) активность фермента увеличилась в 1,5 раза, а у коров 3 и 4 группы соответственно на 18,9 и 10,7%. Повышение активности другой трансаминазы, АЛТ, под влиянием глицерина мы зафиксировали лишь у коров, реагирующих на КАМ (-), в 2 раза (Р<0,05). Остальные исследованные нами ферменты молока под влиянием глицерина статистически значимо не изменялись.

Наконец, под влиянием гормонального стимула, у контрольной группы коров активность АСТ молока увеличилась к 6-му часу эксперимента, в 2 раза (Р<0,05), а у коров, реагирующих на КАМ (-) - на 59,4% (Р<0,05). У коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=) инъекция гидрокортизона никакого влияния на активность этого фермента молока не оказала. Близкая к описанной картина наблюдалась нами также в отношении АЛТ и ЛДГ молока. Под влиянием гидрокортизона активность АЛТ молока статистически достоверно увеличивалась в 2 раза (Р<0,05), но только через 6 часов опыта и только у коров, реагирующих на КАМ (-). Общий подъем активности АЛТ молока под действием гидрокортизона (рисунок 2) составлял у контрольных коров 79,6%, у коров, реагирующих на КАМ (-) - 55%, а у коров 3 и 4 группы соответственно 13,5 и 10,4 %. Активность ЛДГ также возрастала лишь к 6-му часу эксперимента, как у коров контрольной группы, так и коров, реагирующих на КАМ (-), соответственно на 54,2% (Р<0,01) и 47,9% (Р<0,02). У коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и КАМ (=) этот фермент молока индукции не подвергался.

Рисунок 2 - Изменение в молоке коров общей активности ЛДГ (I) под влиянием лактата, АСТ (II) - глицерина и АЛТ(III) - гидрокортизона

Корреляционные взаимосвязи ферментов крови и молока.

Взаимосвязи ферментов крови и молока у обследуемых коров оценивались нами в двух направлениях. Сначала были проанализированы корреляционные связи между разноименными ферментами крови и молока у коров всех четырех групп. У контрольной группы коров из 30 исследуемых признаков высокие и средние корреляционные взаимосвязи обнаружены нами в 11 случаях. Это, высокие положительные и отрицательные, взаимосвязи между АЛТ крови и АСТ молока, ЛДГ крови и АСТ молока, каталазой крови и АСТ, АЛТ молока (r соответственно 0,841, -0,716, -0,775, -0,732). У этих животных средние положительные и отрицательные связи установлены между АСТ крови и АЛТ, каталазой молока (r 0,677 и -0,633); между ЛДГ крови и АЛТ, щелочной фосфатазой, каталазой молока (r соответственно -0,694, -0,505, 0,619); между щелочной фосфатазой крови и АЛТ молока (r -0,551); каталазой крови и щелочной фосфатазой молока (r -0,645).

У коров, реагирующих на КАМ (-) описываемых взаимосвязей оказалось больше - 17 из 30. Так, статистически значимая корреляция установлена между АСТ крови и АЛТ, ЛДГ и щелочной фосфатазой молока (r 0,845, 0,915, 3,040); АЛТ крови и АСТ и ЛДГ молока (r 0,845, 0,880); ЛДГ крови и щелочной фосфатазой молока (r -0,980); щелочной фосфатазой крови и каталазой молока (r 0,975); каталазой крови и щелочной фосфатазой молока (r 0,752); пероксидазой крови и ЛДГ молока (r 0,787). Средние взаимосвязи оказались характерными между АСТ крови и пероксидазой молока (r 0,522); АЛТ крови и пероксидазой молока (r 0,597); ЛДГ крови и каталазой молока (r 0,657); щелочной фосфатазой крови и АЛТ, пероксидазой молока (r соответственно -0,648 и 0,528); пероксидазой крови и АСТ, АЛТ и щелочной фосфатазой молока (r 0,612, 0,558, -0,518). Полученные данные позволяют предположить, что у коров, реагирующих на КАМ (-) увеличена лабильность взаимосвязей исследованных нами признаков.

Что касается коров, реагирующих на туберкулин (+), то у них исследуемые признаки оказались взаимосвязаны гораздо реже, чем у контрольных коров и коров, реагирующих на КАМ (-). Высоких и средних, положительных и отрицательных взаимосвязей у них было всего 4 из 30-ти. Это взаимосвязи между АСТ крови и АЛТ молока (r 0,720); АЛТ крови и АСТ молока (r 0,866); ЛДГ крови и пероксидазой молока (r -0,632); щелочной фосфатазой крови и каталазой молока (r -0,761). По нашему мнению, такие результаты свидетельствуют о «разбалансировке» ферментного спектра крови, а значит и метаболизма больных коров.

В последней группе коров, которые реагировали на туберкулин и КАМ (=), взаимосвязей между ферментами крови и молока, оказалось - 13 из 30. Так, высокие связи установлены между АСТ крови и АЛТ, щелочной фосфатазой, каталазой молока (r 0,836, -4,900, 0,572); АЛТ крови и АСТ, каталазой молока (r 0,917, 0,660); ЛДГ крови и АСТ, АЛТ, щелочной фосфатазой, каталазой и пероксидазой молока (r соответственно 0,591, 0,552, -0,519, 0,590, -0,699); щелочной фосфатазой крови и каталазой молока (r -0,532); пероксидазой крови и ЛДГ, щелочной фосфатазой молока (r -0,590, 0,582).

Следовательно, у обследованных коров корреляционные связи между разноименными ферментами крови и молока изменяются в зависимости от реакции организма на туберкулиновые пробы. Причем, у них развивается более широкая и менее регулируемая лабильность таких важных метаболитов гомеостаза как ферменты.

Далее были изучены корреляционные связи между одноименными ферментами крови и молока (таблица 3). Установлено, что с увеличением активности АСТ и АЛТ в крови у всех обследованных животных возрастает активность этих ферментов и в молоке. Причем, корреляционные связи всегда были более тесными у коров 3 и 4-й групп. Четких коррелятивных различий между ЛДГ крови и молока у коров контрольной группы и коров, реагирующих на КАМ (-) нам установить не удалось. В то же время у коров, реагирующих на туберкулин (+) корреляция оказалась средней положительной, а у коров, реагирующих на туберкулин и КАМ (=) - высокой положительной. Следовательно, в процессе заболевания, изменяются взаимосвязи между ЛДГ крови и молока. Причем, корреляция по мере усугубления болезни, становится более выраженной и тесной, отражая возможность индукции синтеза ЛДГ в самой молочной железе.

Эти практически значимые факты, установленные нами впервые, могут иметь несколько объяснений. По-видимому, у животных с отчетливой реакцией на туберкулиновые пробы увеличивается проницаемость молочных цистерн вымени для ряда ферментов крови. В результате, в молоке у них повышается активность АСТ, АЛТ и особенно ЛДГ. Не исключено также, что сама молочная железа больных коров оказывается способной к биосинтезу указанных ферментов.

Отрицательные коррелятивные взаимосвязи в отношении щелочной фосфатазы крови и молока обнаружены нами у всех обследованных групп животных. Это подтверждает сделанное нами ранее заключение об уменьшении активности щелочной фосфатазы в молоке животных с разной реакцией на туберкулиновые пробы. Кроме того, корреляционные взаимосвязи твердо свидетельствуют о том, что ЩФ не синтезируется молочной железой коров, а заболевание этот синтез не индуцирует.

У больных животных постепенно ослабевают корреляционные связи между каталазой крови и молока: они из средних положительных становятся слабыми положительными. Такие взаимосвязи, вероятнее всего характеризуют возможность синтеза каталазы в молочной железе коров с явно выраженной реакцией на туберкулиновые пробы.

Корреляционные взаимосвязи между пероксидазой крови и молока у контрольных коров были слабо отрицательными, у коров, реагирующих на КАМ (-) - слабо положительными, а у животных, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и КАМ (=) - более тесными, вплоть до высоких положительных. Это, на наш взгляд, отражает значительную степень индукции пероксидазы в молочной железе коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и КАМ (=).

Таким образом, результаты наших исследований позволили установить ранее неизвестные изменения ферментного спектра в организме коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы. Выявлены особенности сдвигов активности ферментов крови и молока коров, реагирующих на КАМ (-), туберкулин (+) и туберкулин и КАМ (=) под влиянием субстратных и гормональных индукторов. Установлены особенности ферментного спектра молока и

Таблица 3 - Взаимосвязь одноименных ферментов крови и молока (r)

Раскрыты новые механизмы образования составных частей молока у коров, в зависимости от их реакции на туберкулиновые пробы. Полученные данные могут иметь значение для более глубокого понимания механизма действия туберкулиновых проб, а также служить дополнительными диагностическими критериями при постановке соответствующего диагноза.

Заключение

ВЫВОДЫ

1. В крови у коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=), по сравнению со здоровыми и реагирующими на КАМ (-) животными, повышается активность аспартатаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы и щелочной фосфатазы, при одновременном существенном снижении активности каталазы и пероксидазы.

2. Впервые установлено, что у коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы понижена чувствительность ряда ферментов к индуцирующему действию внешних стимулов. У коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=) отсутствовала индукция щелочной фосфатазы в ответ на введение фосфатного буфера, лактатдегидрогеназы - на введение молочной кислоты, глицерина и гидрокортизона, развивалась запоздалая и ослабленная реакция аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы на введение глицерина и гидрокортизона.

3. Молоко коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=), по сравнению с контрольными и коровами, реагирующими на КАМ (-), имеет меньшую плотность и титруемую кислотность, в нем снижено содержание общего белка, казеина, лактозы и сухих веществ.

4. Установлено, что в молоке у коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=) увеличивается активность аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы и лактатдегидрогеназы и снижается активность щелочной фосфатазы и пероксидазы.

5. Установлено ранее не известное влияние субстратных (фосфатный буфер, лактат, глицерин) и гормональных (гидрокортизон-ацетат) индукторов на активность ферментов молока коров. У коров, реагирующих на туберкулин (+) под влиянием лактата в молоке увеличивается активность аланинаминотрансферазы, но не лактатдегидрогеназы, глицерина - активность аспартатаминотрансферазы. У коров, реагирующих на туберкулин и КАМ (=) после введения лактата наблюдается увеличение активности аланинаминотрансферазы, а не лактатдегидрогеназы.

6. Впервые показано, что из 30 разноименных признаков (ферментов) у контрольной группы коров взаимосвязаны 11, у коров, реагирующих на КАМ (-) - 17, на туберкулин (+) - 4, а на туберкулин и КАМ (=) - 13. У коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=), ослабляется регулирующее влияние организма на качественный состав молока.

7. У коров, реагирующих на туберкулиновые пробы вклад ферментов крови в аналогичные ферменты молока существенно отличается от нормы. Высокие корреляционные связи между трансаминазами, лактатдегидрогеназой и пероксидазой крови и молока у коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=) свидетельствуют о более значительном вкладе активности указанных ферментов крови в аналогичные ферменты молока, чем у коров контрольной группы и реагирующих на КАМ (-).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Изменение ферментного спектра крови коров с различной реакцией на туберкулиновые пробы следует использовать в качестве дополнительного диагностического критерия при дифференциации неспецифических реакций у крупного рогатого скота, обследуемого на наличие туберкулеза.

2. Полученные результаты необходимы для оценки метаболического, resp. ферментативного, статуса коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы. При проведении углубленной верификации диагноза у крупного рогатого скота, особенно высокопродуктивных пород, впервые предложено использовать субстратную и гормональную индукцию ферментов, которая значительно отличается у больных животных от нормы.

3. Данные об изменении составных частей молока коров, реагирующих на туберкулиновые пробы, следует учитывать при использовании такого молока в технологических процессах.

4. Материалы диссертации рекомендуется использовать в учебном процессе при подготовке специалистов ветеринарного профиля, на курсах повышения квалификации, а также при подготовке учебников и учебно-методических пособий.

Литература

1. Платонова, Ю.В. Изменение активности ферментов крови коров больных туберкулезом / Ю.В. Платонова // Материалы Всероссийской научно-практической конференции посвященной 117-й годовщине со дня рождения академика Николая Ивановича Вавилова. - Саратов: СГАУ, 2004. - С.42-44.

2. Платонова, Ю.В. Изменение составных частей молока у коров реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю.В. Платонова, В.А. Блинов // "Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России в рамках межведомственной координационной программы": Материалы 3 Международной научно-практической конференции - Т.1. - Дубровици, 2005. - С.269-270.

3. Платонова, Ю.В. Ферментный спектр молока у коров, подозреваемых в заболевании туберкулезом // Молодые учёные АПК Поволжского региона: Сб. науч. работ / Ю.В. Платонова. - Саратов: СГАУ, 2005. - С. 209-212.

4. Платонова, Ю.В. Субстратная и гормональная индукция ферментов у кроликов породы шиншилла / Ю.В. Платонова // Материалы конференции посвящённой 118-й годовщине со дня рождения академика Николая Ивановича Вавилова. - Саратов: СГАУ, 2005. - C.84-86.

5. Платонова, Ю.В. Индукция ферментов молока у коров, реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю.В. Платонова // Ветеринарная медицина Современные проблемы и перспективы развития: Материалы VI Всероссийской научно-практической конференции. - Саратов, 2006. - С.272-275.

6. Платонова, Ю.В. Субстратная и гормональная индукция ферментов крови, у коров реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю.В. Платонова // Ветеринарная медицина Современные проблемы и перспективы развития: Материалы VI Всероссийской научно-практической конференции. - Саратов, 2006. - С.275-279.

7. Платонова, Ю.В. Характеристика ферментного спектра крови коров с подозрением на туберкулез / Ю.В. Платонова, В.А. Блинов // Ветеринария Поволжья. - 2006. - №2(11) - C.46-48.

8. Платонова, Ю.В. Определение активности ферментов крови у коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю.В. Платонова // Информационный листок №8 -2006. - Саратов: Саратовский ЦНТИ, 2006. - 2с.

9. Платонова, Ю.В. Изменение составных частей и ферментного спектра молока у коров, реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю.В. Платонова // «Актуальные проблемы развития АПК»: Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Саратов: СГАУ, 2006. - С.74-76.

10. Платонова Ю.В. Ферментный спектр крови и молока у коров, реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю.В. Платонова, В.А. Блинов // Практик. - 2006. - №4 - C.62-67.

11. Платонова, Ю.В. Корреляционные взаимосвязи ферментов крови и молока у коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю.В. Платонова // Материалы конференции посвящённой 119-й годовщине со дня рождения академика Николая Ивановича Вавилова. - Саратов: СГАУ, 2006. - C.77-82.

12. Платонова Ю.В. Особенности ферментного спектра крови у коров положительно реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю.В. Платонова, В.А. Блинов // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. - Саратов: СГАУ, 2006. - №6. Выпуск 2. - C.6-8.

13. Платонова Ю.В. Индукция ферментов крови у коров, реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю.В. Платонова // Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных: Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Саратов: «Саратовский источник», 2007. - С. 103-106.

Размещено на Allbest.ru