Клинико-генетическое исследование больных генитальным эндометриозом

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

КЛИНИКО - ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БОЛЬНЫХ ГЕНИТАЛЬНЫМ ЭНДОМЕТРИОЗОМ

КОНЕВА О.А.

Белгород - 2011

Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Чурносов Михаил Иванович

Официальные оппоненты:

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Иванов Владимир Петрович

доктор медицинских наук, профессор Викторова Татьяна Викторовна

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет» Минздравсоцразвития России

Защита диссертации состоится «27» октября 2011 года в «12» часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 212.015.13 при ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» по адресу: 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет»

Автореферат разослан «_____»___________________2011 г.

Ученый секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций, доктор биологических наук В.И. Кочкаров

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Эндометриоз - это патологический процесс, при котором за пределами полости матки происходит доброкачественное разрастание ткани, по морфологическим и функциональным свойствам подобное эндометрию [Missmer S.A. et al., 2003, Адамян Л.В. и др., 2006]. В структуре гинекологической заболеваемости генитальный эндометриоз прочно удерживает третье место после воспалительных заболеваний и миомы матки [Ищенко А.И. и др., 2003, Тихомиров А.Л. и др., 2004]. Среди оперированных гинекологических больных частота генитального эндометриоза составляет 12-30% [Адамян Л.В. и др., 2001, Стрижаков А.Н. и др., 2009]. Эндометриоз приводит к значительным нарушениям репродуктивной функции, стойкому болевому синдрому, а в тяжелых случаях - к нарушению функции смежных органов и инвалидизации [Баскаков В.П. и др., 2002, Treloar S.A. et al., 2005, Адамян Л.В. и др., 2006].

В настоящее время многие аспекты этиопатогенеза эндометриоза являются дискуссионными и продолжают оставаться в центре внимания отечественных и зарубежных исследователей [Иващенко Т.Э., 2007, Адамян Л.В. и др., 2006, Сидорова И.С. и др., 2007, Бурлев В.А. и др., 2010, Wenger J.M. et al., 2009, Mc Leod B.S. et al., 2010]. Существует значительное число гипотез возникновения эндометриоза, однако, ни одна из них не стала окончательно доказанной и общепризнанной [Дамиров М.М., 2010]. Согласно экспериментальным и клиническим данным, значимую роль в развитии эндометриоза играют факторы некроза опухоли [Ермолова Н.В., 2008, Павлов Р.В., 2009, Гусаева Х.З., 2006]. Эти цитокины, обладая провоспалительным, апоптотическим, пролиферативным механизмами действия [Walker D. et al., 2002, Демьянов А.В. и др., 2003, Harada T. et al., 2004, Томова А.С. и др., 2005], влияют на развитие и прогрессирование эндометриоидных очагов [Dmowski W.P. et al., 2001, Анциферова Ю.А. и др., 2003, Hou Z. et al., 2009].

Важное значение в этиопатогенезе эндометриоза имеют генетические факторы. Изучению генетических основ эндометриоза посвящен ряд работ [Wieser F. et al., 2002, Asghar T. et al., 2004, Адамян Л.В., 2006, Luo M. et al., 2006, Zhao Z. et al., 2007, Chae S.J et al., 2008, Баранов В.С. и др., 2009, Сухих Г.Т. и др., 2009, Dun E.C. et al., 2010, Lakshmi K.V. et al., 2010]. Однако, следует отметить, что большинство этих исследований проведены зарубежом и при этом полученные результаты разными группами исследователей противоречивы и не дают однозначного ответа о роли генетических факторов в патогенезе и клинических особенностях эндометриоза.

Клинико-генетические работы, посвященные молекулярно-генетическим аспектам генитального эндометриоза, в России немногочисленны и затрагивают в основном гены детоксикации [Баранов В.С. и др., 2004, Абазова Э.Ф., 2003, Голубева О.В., 2007, Швед Н.Ю. и др., 2007], главного комплекса гистосовместимости [Сухих Г.Т. и др., 2009], ароматазы [Сонова М.М., 2009], интегринов [Степанова Н.П., 2007], интерлейкинов [Козловская М.А. и др., 2007]. Роль полиморфных маркеров генов факторов некроза опухоли и их рецепторов в отношении генитального эндометриоза в нашей стране изучена крайне слабо, что диктует необходимость проведения данных исследований в Российской Федерации.

Работа выполнена в рамках Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (гос. контракт №П384 «Разработка молекулярно-генетических основ мультифакториальной патологии человека (на модели генов цитокинов)»).

Цели и задачи исследования. Изучить клиническое значение полиморфизмов генов факторов некроза опухоли и их рецепторов при генитальном эндометриозе.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить распределение полиморфизмов генов фактора некроза опухоли б (-308 G/A TNFб), лимфотоксина б (+250 А/G Ltб), рецептора фактора некроза опухоли 1-го (+36 А/G TNFR1) и 2-го (+1663 А/G TNFR2) типов у больных генитальным эндометриозом и в популяционном контроле.

2. Исследовать влияние генетических вариантов факторов некроза опухоли и их рецепторов на возраст манифестации генитального эндометриоза.

3. Рассмотреть ассоциации полиморфных маркеров с клиническими проявлениями генитального эндометриоза.

4. Определить роль генов-кандидатов в формировании генитального эндометриоза, сочетающегося с гиперплазией эндометрия.

5. Выявить взаимосвязи молекулярно-генетических маркеров с возникновением и клиническими особенностями генитального эндометриоза, сочетающегося с мастопатией.

6. Проанализировать роль наследственной отягощенности в характере взаимосвязей генетических полиморфизмов с генитальным эндометриозом и его клиническими проявлениями.

Научная новизна работы. Впервые исследованы молекулярно-генетические маркеры фактора некроза опухоли б (-308 G/A TNFб), лимфотоксина б (+250 А/G Ltб), рецепторов фактора некроза опухоли 1-го (+36 А/G TNFR1) и 2-го (+1663 А/G TNFR2) типов у больных генитальным эндометриозом русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья Российской Федерации.

Впервые показана значимая роль генетических полиморфизмов в ранней манифестации генитального эндометриоза.

Впервые установлен генетический фактор риска формирования генитального эндометриоза, сочетающегося с гиперплазией эндометрия (-308 A TNFб) и протективный фактор развития генитального эндометриоза, сочетающегося с мастопатией (+36 GG TNFR1). Определены ассоциации генов-кандидатов с клиническими особенностями генитального эндометриоза и выявлено влияние наследственной отягощенности на характер этих взаимосвязей.

Научно - практическое значение. Полученные результаты вносят вклад в расшифровку молекулярно-генетических механизмов формирования генитального эндометриоза. Для выделения пациенток группы риска по развитию генитального эндометриоза, сочетающегося с гиперплазией эндометрия может быть использован генетический полиморфизм -308 G/A TNFб, а в качестве протективного маркера формирования генитального эндометриоза, сочетающегося с мастопатией, рекомендуется применять генотип +36 GG TNFR1.

Установленные в работе генетические факторы риска развития перименструальных выделений, бесплодия, болевого синдрома при генитальном эндометриозе могут быть использованы в женских консультациях и гинекологических стационарах при определении индивидуальной тактики ведения больной с генитальным эндометриозом.

Положения выносимые на защиту.

1. Гены-кандидаты определяют возраст манифестации генитального эндометриоза.

2. Генетические полиморфизмы фактора некроза опухоли б, лимфотоксина б, рецептора фактора некроза опухоли 1-го типа связаны с клиническими особенностями генитального эндометриоза.

3. Молекулярно-генетические маркеры ассоциированы с генитальным эндометриозом, сочетающимся с мастопатией.

4. Генетические детерминанты генитального эндометриоза, сочетающегося с гиперплазией эндометрия.

5. Ассоциации полиморфных вариантов генов факторов некроза опухоли и их рецепторов с формированием генитального эндометриоза и его клиническими проявлениями наблюдаются у женщин с неотягощенной наследственностью и отсутствуют при отягощенной наследственности.

Апробация работы. Результаты диссертационного исследования доложены и обсуждены на: XV-ом Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008), 73-й итоговой научной межвузовской конференции студентов и молодых ученых Курского государственного медицинского университета (Курск, 2008), V-ом съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Москва, 2009), 2-ой межрегиональной научно-практической конференции акушеров-гинекологов и перинатологов «Актуальные проблемы современного акушерства, гинекологии и перинатологии» (Белгород, 2009), 63-ей итоговой научной конференции молодых ученых Ростовского государственного медицинского университета (Ростов-на-Дону, 2009), 74-ой итоговой научной межвузовской конференции студентов и молодых ученых Курского государственного медицинского университета (Курск, 2009), III-ей международной конференции молодых ученых «Современные вопросы акушерства и гинекологии» (Москва, 2009), 43-ей Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых (Тюмень, 2009), IV-ой Международной Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2009), IX-ой окружной конференции молодых ученых «Наука и инновация 21 века» (Сургут, 2009), Всероссийской конференции с международным участием «Охрана репродуктивного здоровья - будущее России» (Белгород, 2010), V-ой Международной Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2010), VI-ом съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 2010), Третьей международной научно-практической конференции «Геронтологические чтения - 2010» (Белгород, 2010), Всероссийской конференции с элементами научной школы для молодежи «Репродуктология: новые технологии, проблемы, перспективы» (Белгород, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 печатных работ, в том числе 5 в журналах из перечня ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, описание использованных материалов и методов, результаты и их обсуждение, а также выводы, практические рекомендации и список литературы. Материалы диссертации изложены на 152 страницах машинописного текста и содержат 20 таблиц и 24 рисунка. Библиографический указатель содержит 233 наименования, из которых 145 иностранных.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Клиническая характеристика исследованных больных

Проведен анализ результатов наблюдений 489 человек: 241 пациентки с генитальным эндометриозом и 248 женщин популяционного контроля. В выборки больных (средний возраст 36,8 ±8,5 лет, варьировал от 18 лет до 60 лет) и популяционного контроля (средний возраст 41,2±7,51 лет, варьировал от 20 до 60 лет, р>0,05) включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья России и не имеющие родства между собой.

Клинико-лабораторное обследование больных проводилось на базе гинекологического отделения перинатального центра Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа. Пациенткам с генитальным эндометриозом выполнялось ультразвуковое исследование органов малого таза, гистероскопия с последующим прицельным диагностическим выскабливанием полости матки и гистологическим исследованием соскоба, применялись общеклинические и лабораторные методы исследования.

Всем больным с генитальным эндометриозом и индивидуумам популяционного контроля проводилось типирование однонуклеотидных полиморфизмов генов фактора некроза опухоли б (-308 G/A TNFб), лимфотоксина б (+250 A/G Ltб), рецептора фактора некроза опухоли 1 типа (+36 A/G TNFR1) и рецептора фактора некроза опухоли 2 типа (+1663 A/G ТNFR2). Выбор данных локусов для исследования обусловлен их возможной вовлеченностью в патогенез генитального эндометриоза за счет способности изучаемых полиморфизмов изменять продукцию соответствующих цитокинов (Fernandez Н. et al., 2002, Hollegaard M.V., 2006).

Молекулярно-генетические методы

Материалом для исследования послужила венозная кровь в объеме 8-9 мл, взятая из локтевой вены пробанда. Забор венозной крови производили в пробирки с консервантом, содержащим 0,5М раствор ЭДТА (рН=8.0).

Выделение геномной ДНК из периферической крови проведено методом фенольно-хлороформной экстракции (Mathew С.G., 1985).

Анализ всех локусов осуществлялся методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК. ПЦР проводилась на амплификаторе «Терцик-МС4» производства компании “ДНК-технология” и амплификаторе с флюоресцентной детекцией IQ5 (Bio-Rad) с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы “Силекс-М”, олигонуклеотидных праймеров и зондов, синтезированных фирмой «Синтол».

Генотипирование ДНК-маркеров производилось методами анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) продуктов ПЦР-амплификации специфических участков генома с использованием соответствующих ферментов рестрикции производства ООО "Сибэнзим" (Новосибирск) и дискриминации аллелей на основе Tag Man зондов с использованием программного обеспечения - Standart Edition Version 2.0 (Bio-Rad).

Статистические методы

Формирование базы данных и статистические расчеты осуществлялись с использованием программы «STATISTICA 6.0». Определение фенотипических и генных частот проводили стандартными методами (Животовский Л.А., 1983). Для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому, исходя из равновесия Харди-Вайнберга, использован критерий ?2 (Вейр Б., 1995).

Об ассоциации молекулярно-генетических маркеров с предрасположенностью к генитальному эндометриозу, а также с качественными признаками, характеризующими его клиническое течение (формы и стадии эндометриоза, наличие определенных симптомов заболевания, сочетание генитального эндометриоза с мастопатией и гиперпластическими процессами эндометрия, наличие наследственной отягощенности) оценивали с помощью анализа таблиц сопряженности 2х2 с расчетом критерия ч2 с поправкой Йетса на непрерывность и отношения шансов (OR) с 95% доверительными интервалами (CI) (Schlesselman J., 1982). Оценку уровня статистической значимости полученных результатов проводили с использованием поправки Бонферрони (Реброва О.Ю., 2006).

При изучении взаимосвязей генетических полиморфизмов с патогенетически значимыми количественными признаками вначале оценивали характер распределения исследуемых признаков с использованием критерия Шапиро-Уилка (Реброва О.Ю., 2006). Получено, что распределение всех исследуемых количественных признаков (возраст манифестации заболевания, возраст появления основных клинических симптомов) не соответствовало закону нормального распределения и поэтому для их описания применяли медиану (Me) и интерквартильный размах (Q25-Q75), а для сравнительного анализа - критерий Манна-Уитни (Реброва О.Ю., 2006). генетический некроз опухоль эндометриоз

Результаты исследования и их обсуждение

1. Генетический полиморфизм и возраст манифестации генитального эндометриоза

В связи с особой значимостью для практической гинекологии проблемы разработки индивидуальной тактики ведения больных с генитальным эндометриозом, которая в значительной степени зависит от репродуктивных планов пациенток и возраста установления диагноза (Адамян Л.В., 2006), мы провели анализ ассоциаций исследуемых полиморфных генетических маркеров с возрастом манифестации заболевания при различных стадиях патологического процесса.

Установлены значимые ассоциации двух (-308 G/A TNFб и +36 A/G TNFR1) из четырех анализируемых молекулярно-генетических маркеров с возрастом манифестации генитального эндометриоза. Выявлено, что у пациенток c I-ой стадией распространения патологического процесса, имеющих генотипы +36 AG и +36 GG TNFR1 наблюдается более раннее начало заболевания (медиана 27,0 лет, нижний квартиль - 21,0 лет, верхний квартиль - 32,0 лет) в сравнении с больными, имеющими генотип +36 АА TNFR1 (медиана 34,5 лет, нижний квартиль - 25,0 лет, верхний квартиль - 40,0 лет, р=0,02) (рис. 1).

В группе больных генитальным эндометриозом со II-ой стадией распространенности процесса выявлены ассоциации возраста появления циклических болей с полиморфным маркером -308 G/А TNFб. Женщины с высокопродуктивным аллелем -308 А TNFб (генотипы -308 АА и -308 GА) характеризуются ранним появлением циклических болей (медиана - 25,0 лет, интерквартильный размах 24,0 - 30,0 лет) по сравнению с индивидуумами с генотипом -308 GG TNFб (медиана - 32,0 лет, нижний квартиль - 25,0 лет, верхний квартиль - 42,5 лет, р=0,02).

У пациенток с III-IV-ой стадиями заболевания возраст дебюта генитального эндометриоза связан с генетическим полиморфизмом -308 G/А фактора некроза опухоли б: у больных с генотипами -308 АА и -308 GА возраст манифестации первых симптомов генитального эндометриоза составляет 20,0 лет (нижний квартиль - 13,0 лет, верхний квартиль - 22,0 лет), что достоверно меньше аналогичного показателя пациенток, имеющих генотип -308 GG TNFб (медиана возраста появления первых симптомов составляет 27,0 лет, при интерквартильном размахе 23,0 - 40,0 лет, p =0,015).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о важной роли генетических маркеров, связанных с провоспалительными эффектами (Вarash J., 2003, Harada T. еt al., 2004, Павлов Р.В., 2009) в ранней манифестации генитального эндометриоза.

Рис. 1. Возраст появления первых симптомов генитального эндометриоза у больных с I-ой стадией распространенности процесса в зависимости от генетического полиморфизма +36А/G TNFR1

2. Изучение ассоциаций генов-кандидатов с клиническими проявлениями генитального эндометриоза

Среди обследованных 241 больных генитальным эндометриозом жалобы на тазовые боли предъявляли 152 пациентки (65,5%), бесплодие выявлено у 121 женщины (52,2%), перименструальные кровянистые выделения имели 131 женщина (56,4%), дисменорея зарегистрирована у 120 больных (51,7%), гиперменоррея - у 51 (22,0%), диспареуния - у 81 (34,9%) пациентки.

Установлено, что у пациенток с перименструальными кровянистыми выделениями концентрация генотипа +250 GG Ltб cоставила 12,98% и была в 2,5 раза выше в сравнении с женщинами контрольной группы (5,27%, ч2=5,96, р=0,015, с учетом поправки Бонфферони рcor=0,045, ОR=2,68, 95%СI 1,19-6,10). У женщин с бесплодием при генитальном эндометриозе выявлена высокая частота аллеля -308 А TNFб (15,29%) по сравнению с контрольной группой (10,08%, р=0,05, ОR=1,61, 95%СI 1,01-2,60) и больными генитальным эндометриозом без бесплодия (9,17%, р=0,05) (рис. 2).

Таким образом, генетические полиморфизмы -308 G/А TNFб и +250 А/G Ltб имеют важное клиническое значение при генитальном эндометриозе. В основе их ассоциаций с формированием бесплодия, появлением перименструальных кровянистых выделений при генитальном эндометриозе могут лежать провоспалительные механизмы действия фактора некроза опухоли б и лимфотоксина б (Braun D.P. et al., 2002, Noda T. et al., 2003).

Рис. 2. Распределение аллеля -308 А TNFб в группах больных генитальным эндометриозом в зависимости от наличия бесплодия и в контрольной группе,%

3. Анализ распределения молекулярно-генетических маркеров у женщин с генитальным эндометриозом, сочетающимся с гиперпластическими процессами эндометрия

Современные представления о патогенезе генитального эндометриоза и гиперпластических процессов эндометрия свидетельствуют о наличии общих механизмов развития данных патологических процессов: снижение апоптоза в клетках эндометрия, повышение пролиферативной активности эндометрия, гиперпродукция факторов роста и цитокинов и др. (Pierro E. еt al., 2001, Сидорова И.С. и др, 2007). В связи с этим нами проведен анализ распределения исследуемых молекулярно-генетических маркеров у женщин с генитальным эндометриозом в зависимости от его сочетания с гиперпластическими процессами эндометрия. Среди 232 пациенток с эндометриозом гиперпластические процессы эндометрия встречались у 35,34% больных (n=82).

Установлено, что у пациенток с генитальным эндометриозом, имеющих гиперплазию эндометрия частота аллеля -308 А TNFб составляет 19,05%, что в 1,9 раза превышает аналогичный показатель в группе контроля (10,08%, ч2 = 4,87, р=0,03, ОR = 2,10 95% СI 1,08-4,05) (рис. 3).

Рис. 3. Частота аллеля - 308 А TNFб среди больных генитальным эндометриозом, сочетающимся с гиперплазией эндометрия, и в контрольной группе, %.

Итак, молекулярно-генетическим фактором риска развития гиперплазии эндометрия у женщин, страдающих генитальным эндометриозом является высокопродуктивный аллель -308 А фактора некроза опухоли б. Полученные нами результаты согласуются с литературными данными о важной роли этого генетического маркера в развитии гиперпластических процессов эндометрия, сочетающихся с миомой матки (Алтухова О.Б., 2009). Обладая провоспалительным эффектом, фактор некроза опухоли б усиливает пролиферативные изменения в эндометрии, что может приводить к его гиперплазии (Pierro E. еt al., 2001, Сидорова И.С., 2007).

4. Оценка ассоциаций генетических вариантов факторов некроза опухоли и их рецепторов с формированием и клиническими особенностями генитального эндометриоза, сочетающегося с мастопатией

Согласно данным литературы, генитальный эндометриоз рассматривают как гормонозависимую патологию (Айламазян Э.К, 2007, Ищенко А.И., 2008). Развитие генитального эндометриоза происходит на фоне нарушений функционирования гипоталамо - гипофизарно - яичниковой системы, что может привести к возникновению патологических состояний в молочных железах у больных эндометриозом [Адамян Л.В. и др., 2006]. Среди обследуемых нами 232 пациенток с генитальным эндометриозом мастопатия встречалась у 51 женщины (22,0%).

Рис. 4. Частота генотипа +36 GG TNFR1 в группах больных генитальным эндометриозом в зависимости от наличия мастопатии и в контрольной группе, %.

При сравнительном анализе распределения генетических полиморфизмов факторов некроза опухоли и их рецепторов в группах больных эндометриозом в зависимости от наличия мастопатии установлено, что больные генитальным эндометриозом с мастопатией отличаются существенно более низкой (более чем в 2,5 раза) частотой генотипа +36 GG рецептора фактора некроза опухоли 1-ого типа (10,20%) по сравнению как с женщинами с эндометриозом без мастопатии (28,74%, ч2 =6,1, р=0,01, рcor =0,03), так и с популяционным контролем (26,83%, ч2 =5,3, р=0,016, рcor =0,048, ОR = 0,31, 95% СI 0,10-0,86) (рис. 4).

Согласно данным литературы (Bazzoni F. et al., 1996), рецептор фактора некроза опухоли 1-ого типа участвует в реализации TNF зависимого апоптоза. В соответствии с этим низкий уровень продукции TNFR1 (характерен для индивидуумов с генотипами +36 АА и +36 АG TNFR1) может обуславливать снижение TNF зависимого апоптоза, что клинически будет проявляться развитием, наряду с генитальным эндометриозом, пролиферативных процессов в молочной железе. Данный фенотипический эффект мы и зарегистрировали в нашем исследовании.

Проведен анализ взаимосвязей генетических полиморфизмов с клиническими особенностями генитального эндометриоза, сочетающегося с мастопатией. Показано, что среди пациенток с мастопатией, имеющих болевой синдром, концентрация генотипа +250 GG Ltб (21,74%) в 4 раза выше в сравнении с женщинами контрольной группы (5,27%, ч2 =6,72, р=0,01, рcor =0,03, ОR = 5,00, 95%СI 1,38-17,45). Установлено, что у больных генитальным эндометриозом с мастопатией, имеющих перименструальные выделения, наблюдается наибольшая частота генотипа +250 GG Ltб (18,75%), которая достоверно превышает соответствующий показатель контрольной группы (5,27%, ч2 =6,13, р=0,01, рcor =0,03, ОR = 4,15, 95%СI 1,28-13,09).

5. Исследование роли наследственной отягощенности в характере взаимосвязей генетических маркеров с клиническими характеристиками генитального эндометриоза

В этиологии генитального эндометриоза важная роль отводится наследственной предрасположенности (Тихомиров А.Л., 2007, Адамян Л.В., 2006). Проведено изучение особенностей взаимосвязей генетических полиморфизмов факторов некроза опухоли и их рецепторов с формированием и клиническими характеристиками эндометриоза в зависимости от наследственной отягощенности по гиперпластическим процессам матки. В исследуемой выборке больных (n=232) у 26,7% (n=62) зарегистрировано наличие наследственной отягощенности по гиперпластическим процессам гениталий, у 73,3% (n=170) наследственность была не отягощена.

Выявлены ассоциации генетических маркеров с формированием и клиническими признаками эндометриоза только среди женщин без наследственной отягощенности по гиперпластическим процессам гениталий. Установлено, что фактором риска формирования генитального эндометриоза при неотягощенной наследственности по гиперпластическим процессам матки является генотип +250 GG Ltб, концентрация которого в этой группе (12,36%) была в 3,8 раз больше, чем среди больных с наследственной отягощенностью (3,23%, ч2 =3,23, р=0,07) и в 2 раза превышала показатель контрольной группы (5,27%, ч2 =5,85, р=0,016, рсоr=0,048, ОR=2,54, 95% СI 1,17-5,55) (рис. 5).

Детальный анализ ассоциаций молекулярно-генетических маркеров с клиническими симптомами генитального эндометриоза среди пациенток без наследственной отягощенности по гиперпластическим процессам гениталий показал, что у женщин этой группы, имеющих дисменорею, частота генотипа +250 GG Ltб составила 16,45% и была более чем в 3 раза выше по сравнению с группой контроля (5,27%, ч2 =8,3, р=0,005, рсоr=0,015, ОR=3,44, 95% СI 1,42-8,35). Обнаружена наибольшая частота аллеля +250 G Ltб в исследуемой группе больных (33,33%) в сравнении с женщинами контрольной группы (25,1%, ч2 =3,78, р=0,05, ОR=1,49, 95% СI 1,01-2,23). Концентрация генотипа - 308 GG TNFб у женщин без наследственной отягощенности по гиперпластическим процессам матки, имеющих бесплодие, составила 67,05% и была достоверно меньше аналогичного показателя контрольной группы (80,65%, ч2 =6,05, р=0,01, рсоr=0,03, ОR=0,49, 95% СI 0,27-0,87). Также выявлена высокая распространенность генотипа +250 GG Ltб в группе пациенток с перименструальными выделениями (15,31%) в сравнении с контрольной группой (5,27%, ч2 =8,19, р=0,005, рсоr=0,015, ОR=3,25, 95% СI 1,39-7,63).

Рис. 5. Частота генотипа +250 GG Ltб в группе больных генитальным эндометриозом без наследственной отягощенности и в контрольной группе, %.

Резюмируя полученные результаты, следует отметить, что взаимосвязи генетических полиморфизмов с формированием и клиническими особенностями генитального эндометриоза оказываются значимыми среди больных без наследственной отягощенности по гиперпластическим процессам гениталий и отсутствуют в группе женщин с наследственной отягощенностью. Эти данные могут свидетельствовать о том, что есть иные генетические факторы, определяющие в большей степени, чем генетические полиморфизмы факторов некроза опухоли и их рецепторов особенности наследования гиперпластических процессов матки (и в том числе эндометриоза) в исследуемой нами группе больных генитальным эндометриозом (к этим генетическим факторам, согласно данным литературы можно отнести полиморфизмы генов факторов роста (Hsieh Y.Y. et al., 2005, Attar R. et al., 2010), рецепторов эстрогенов и прогестерона (Georgiou I. et al., 1999, Luisi S. et al., 2006, Juhas-Boss I. et al., 2010, Near A.M. et al., 2011), супрессоров онкогенов (Chang C.C. et al., 2002), детоксикации ксенобиотиков (Баранов В.С. и др., 2004, Абазова Э.Ф., 2005, Голубева О.В, 2007, Сонова М.М., 2009), главного комплекса гистосовместимости (Сухих Г.Т. и др.,2009).

ВЫВОДЫ

1. Генетические полиморфизмы фактора некроза опухоли б (-308 G/A TNFб), лимфотоксина б (+250 А/G Ltб), рецептора фактора некроза опухоли 1-го типа (+36 А/G TNFR1) ассоциированы с формированием генитального эндометриоза, возрастом манифестации заболевания и особенностями его клинического проявления.

2. Ранний возраст манифестации генитального эндометриоза связан с генетическими вариантами -308 АА, -308 GА фактора некроза опухоли б и +36 GG, +36 АG рецептора фактора некроза опухоли 1-го типа.

3. Молекулярно-генетическим маркером появления перименструальных

выделений при генитальном эндометриозе является +250 GG Ltб (OR=2,7), развитие бесплодия связано с -308 A TNFб (OR=1,6).

4. Распространенность аллеля -308 A TNFб у женщин с генитальным эндометриозом, сочетающимся с гиперплазией эндометрия, в 1,9 раза больше по сравнению с популяционным контролем. Протективным фактором развития генитального эндометриоза, сочетающегося с мастопатией, служит +36 GG TNFR1 (OR=0,3), а формирование болевого синдрома и перименструальных выделений у женщин этой группы связано с маркером +250 GG Ltб (OR=5,0 и OR=4,2 соответственно).

5. Среди больных генитальным эндометриозом с неотягощенной наследственностью фактором риска формирования заболевания является +250 GG Ltб (OR=2,5), маркерами развития дисменореи служат +250 GG Ltб (OR=3,4) и +250 G Ltб (OR=1,5), формирование бесплодия ассоциировано с -308 GG TNFб (OR=0,5), появление перименструальных выделений ? с +250 GG Ltб (OR=3,2).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В женских консультациях рекомендуется проводить молекулярно-генетическое тестирование больных генитальным эндометриозом для выявления групп повышенного риска развития сочетанной патологии по гиперплазии эндометрия (-308 G/А TNFб) и мастопатии (+36 А/G TNFR1).

2. При обследовании пациенток с генитальным эндометриозом в качестве маркеров появления перименструальных выделений использовать +250 GG Ltб, формирования бесплодия ? -308 А TNFб.

3. При использовании генетических полиморфизмов факторов некроза опухоли и их рецепторов для индивидуального прогноза клинического проявления генитального эндометриоза следует учитывать наличие наследственной отягощенности по гиперпластическим процессам матки.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Конева О.А. Некоторые клинические характеристики генитального эндометриоза / О.А. Конева, М.И. Чурносов // Материалы XV-ого Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2008. - С. 459.

Конева О.А. К вопросу о генитальном эндометриозе у женщин с бесплодием / О.А. Конева, М.И. Чурносов // Материалы 73-й итоговой научной межвузовской конференции студентов и молодых ученых Курского государственного медицинского университета «Молодежная наука: от фундаментальной идеи до инновационных проектов». - Курск, 2008. - С. 289.

Конева О.А. Анализ взаимосвязей генетического маркера -308G/A TNFб с особенностями клиники при эндометриозе / О.А. Конева, Е.В. Кузнеченко, И.В. Батлуцкая // Материалы V съезда Вавиловского общества генетиков и селекционеров. - М., 2009. - Ч. I. - С. 436.

Конева О.А. Генетический полиморфизм и клинические проявления генитального эндометриоза / О.А. Конева, Е.В. Кузнеченко, М.И. Чурносов // Материалы II межрегиональной научно-практической конференции акушеров-гинекологов и перинатологов: «Актуальные проблемы современного акушерства, гинекологии и перинатологии». - Белгород, 2009. - С. 106-107.

Конева О.А. Молекулярно-генетические маркеры и гормональный профиль у больных с генитальным эндометриозом / О.А. Конева // Материалы 63-ей итоговой конференции молодых ученых Ростовского государственного медицинского университета с международным участием, посвященной 70-летию СНО. - Ростов-на-Дону, 2009. - С. 19.

Конева О.А. Реализация менструальной функции у женщин с эндометриозом в зависимости от генетического полиморфизма / О.А. Конева // Материалы 74-й итоговой научной межвузовской конференции студентов и молодых ученых Курского государственного медицинского университета «Молодежная наука и современность». - Курск, 2009. - Ч. I. - С. 62-63.

Сравнительный анализ распределения молекулярно-генетических маркеров при различных гиперпластических процессах матки / Л.А. Цапкова, О.Б. Алтухова, О.А. Конева и др. // Лечебное дело. - спец. выпуск. Материалы III международной конференции молодых ученых «Современные вопросы акушерства и гинекологии». - М., 2009. - С. 122.

Конева О.А. Изучение ассоциаций полиморфизма -308G/A TNFб с бесплодием при генитальном эндометриозе / О.А. Конева, Е.В. Калмыкова, А.А. Должиков // Лечебное дело. - спец. выпуск. Материалы III международной конференции молодых ученых «Современные вопросы акушерства и гинекологии». - М., 2009.- С. 99.

Конева О.А. Особенности акушерско-гинекологического статуса женщин с генитальным эндометриозом при различных вариантах молекулярно-генетических маркеров / О.А. Конева // Материалы 43-й Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». - Тюмень, 2009. - С. 72.

Популяционно-генетический анализ полиморфизма гена лимфотоксина б / С.С. Демин, О.Б. Алтухова, О.А. Конева и др. // Вестник РГМУ. - 2009. - №3. - С. 22. (из списка ВАК)

К вопросу о полиморфизме гена фактора некроза опухоли б среди населения / Е.В. Калмыкова, О.Б. Алтухова, О.А. Конева и др. // Вестник РГМУ. - 2009. - №3. - С. 34. (из списка ВАК)

Генетический полиморфизм и гиперпластические процессы матки / Н.А. Горяинова, О.Б. Алтухова, О.А. Конева и др. // Материалы V съезда Вавиловского общества генетиков и селекционеров. - М., 2009. - Ч. I. - С. 405.

Распространенность полиморфизмов -308G/A TNFб, -250G/A Ltб, -869T/C TGFB1, C-703T IL-5, -4257G/A IL -13 среди населения Центральной России / Е.В. Калмыкова, М.И. Чурносов, О.Б. Алтухова, О.А. Конева и др. // Материалы IX окружной конференции молодых ученых «Наука и инновации ХХI века». - Сургут, 2009. - Т.I. - С. 77-79.

Изучение роли генетического разнообразия фактора некроза опухоли при гиперпластических процессах матки / Н.А. Горяинова, О.Б. Алтухова, О.А. Конева и др. // Вестник РУДН. Серия «Медицина». - 2009. - №4. - С. 528-529. (из списка ВАК)

Конева О.А. Клинико-генетическое исследование генитального эндометриоза / О.А. Конева, М.И. Чурносов // Материалы Всероссийской конференции с международным участием «Охрана репродуктивного здоровья - будущее России». - Белгород, 2010. - С. 143-144.

Конева О.А. О генетическом полиморфизме рецептора TNF 1 типа у женщин с бесплодием при генитальном эндометриозе / О.А. Конева // Вестник РГМУ. - 2010. - №2. - С. 266. (из списка ВАК)

Конева О.А. Бесплодие при генитальном эндометриозе и генетический полиморфизм цитокина Ltб / О.А. Конева, М.И. Чурносов // Материалы VI съезда Российского общества медицинских генетиков/ Медицинская генетика. - 2010. - С.89.

Конева О.А. Исследование роли наследственной отягощенности в характере взаимосвязей молекулярно-генетических маркеров с симптомами эндометриоза / О.А. Конева // Материалы третьей международной научно-практической конференции «Геронтологические чтения - 2010». - Белгород, 2010. - С. 17-18.

Конева О.А. Распределение молекулярно-генетических маркеров у больных генитальным эндометриозом / О.А. Конева // Материалы Всероссийской конференции с элементами научной школы для молодежи «Репродуктология: новые технологии, проблемы, перспективы». - Белгород, 2010. - С. 153-155.

Конева О.А. Генетические маркеры и возраст манифестации генитального эндометриоза / О.А. Конева // Научные ведомости НИУ «БелГУ». Серия «Медицина. Фармация». - 2011. -№10 (105), вып. 14. - С. 247-253. (из списка ВАК)

Размещено на Allbest.ru