Розповсюдження патогенного стафілококу серед населення Яворівського району

При такому відборі число пропускаються штамів патогенних стафілококів людського походження невелика, культури ж, виділені від тварин, потрібно перевіряти в реакції плазмокоагуляціі. Коагулазная проба є основною ознакою, що визначає хвороботворність стафілококів, тому її постановка вимагає до себе максимальної уваги. Для виявлення коагулазной активності у стафілококів, виділених від людей, можна користуватися як цілісної кров'ю, так і плазмою кроликів або людини. Можна використовувати також кров або плазму, взя результатів проводиться обов'язково двічі: через 2-3 год і 24 год Враховують згортання плазми і утворення згустків. Зазвичай культури, активно продукують коагулазу, дають позитивну реакцію вже через 2-3 год а якщо вони володіють і вираженої фібринолітичною активністю, то спочатку утворилися згустки можуть піддатися розплавлення до кінця доби. Слабокоагулірующіе штами можуть давати позитивну реакцію в пізні терміни-до кінця доби. Досліди, що дали сумнівний результат, необхідно повторити.

Деякі дослідники, отримавши негативну або сумнівний результат, залишають пробірки на столі. Цього робити не можна, так як згортання плазми в більш пізні терміни може носити не специфічний характер і його не слід приймати до уваги. Стафілококи, що дають позитивну коагулазную пробу, повинні розглядатися як потенційно патогенні, незалежно від наявності або відсутності у них гемолітичних властивостей і характеру пігменту, їх відносять до виду St. aureus і надалі піддають фаготіпізаціі і перевірці на чутливість до антибіотиків. Поглиблене вивчення стафілококів показало, що основна ознака па-тогенності - коагулазная реакція може піддаватися мінливості при впливі різних факторів (Г. Н. Чистович, 1961; Є. М. Падеріна, 1966), тому в ряді випадків, при виділенні коагулазонегатівних стафілококів в монокультурі з патологічних вогнищ, доцільно вивчити у них інші ознаки потенційної хвороботворності і перш за все - здатність ферментувати маніт в анаеробних умовах.

Відомо, що серед коагулазоотріцательних частина культур має здатність розщеплювати маніт в анаеробних умовах (8,4%-за даними А. А. Акатова і М. Л. Хатеневер, 1974). Визначення ферментації маніту в анаеробних умовах технічно дуже просто і здійснюється шляхом посіву уколом досліджуваних культур в пробірки з високим стовпчиком напіврідкого агару Хоттннгера, що містить 1% маніту і 0,004% індикатора бромкрезолпурпура або бромтімолблау (рН == 7,2). Цю середу перед посівом "регенерують", тобто кип'ятять на водяній бані, швидко охолоджують, а після посіву заливають шаром стерильного вазелінового масла. Посіви інкубують при 37 ° С протягом 5 днів. Однак у значній кількості випадків результати можуть бути враховані вже через добу. Поряд з реакцією плазмокоагуляціі, велике значення набула ще одна важлива здатність стафілококів, що характеризує їх потенційну патогенність,-дезоксірібонуклеазная активність.

Багато дослідники повідомляють про високу кореляцію цієї ознаки з коагулазной активністю і токсигенних досліджуваних культур; відзначають, що стафілококи, виділені з патологічного матеріалу, як правило, мають ДНК-Азою. Коагуло-зопозітівние штами, отримані від носіїв, можуть не мати цього ферменту, і звичайно відсутність дезоксірібонуклеазной активності поєднується з низькою біохімічної здатністю і атоксігенностью таких культур стафілококів. За спостереженнями деяких дослідників, серед коагулазонегатівних штамів стафілококів, але володіли іншими ознаками патогенності, виділених у ряді випадків від хворих з різними гнійними інфекціями, дезоксірібонуклеазную активність проявляли від 10 до 29% таких культур (І. І. Панишева і співроб., 1967; Franklin та співавт., 1966; Lierd і Golde, 1970).

В даний час цей тест може служити надійним диференціальною ознакою між патогенними та непатогенними стафілококами і в той же час може допомогти в диференціації ступеня патогенності коагулазопозітівних штамів і, безумовно, приверне увагу до коагулазонегатівних, але що володіє цим ферментом культурам стафілококів і в ряді випадків дозволить віднести останні до хвороботворних формам з більшою впевненістю. Методика визначення дезоксірібонуклеазной активності нескладна, в основу її покладено метод Джеффріса. Готують про запас 2% МПА (рН-8, 6), що містить ДНК (2 мг / мл середовища), розливають по флаконах і стерилізують текучою парою протягом 30 хв. Перед розливом в чашки до середовища додають CaCIa (0,8 мг / мл). На подсе деполімеризації ДНК. Після 18-20-годинної інкубації поверхню агару заливають 5 мл IN розчину НС1 і через 3-5 хв враховують зони просвітління. Реакції оцінюють в хрестах.

При цьому слід врахувати, що інтенсивність зони деполімеризації на щільному середовищі не завжди збігається з кількістю продукції цього ферменту у досліджуваних стафілококів у рідких середовищах. Для виявлення фибринолизина використовують декілька удосконалений метод Крісті з співр. Середа Крісті-Чепмена має наступний склад: м'ясний екстракт-0, 45 г, пептони-0, 75 г, хлористий натрій-1, 2 г, агар-2, 75 г, вода-130 мл, рН середовища == 7,0 . Стерилізується в автоклаві і зберігається запас. Перед досвідом середу розтоплюють, остуджують до 50 ° С і додають 15-20% стерильною цитратної людської плазми. Суміш прогрівається у водяній бані при 65-70 ° С протягом 2 - 5 хв до появи ясною каламуті, а потім розливається в чашки. Піддослідні культури засівають "плямами" по 15-20 на чашку. Посіви інкубують при 37 ° С. Враховується утворення зон просвітлення навколо колонії спочатку через 14 год, потім через 24 і 48 год, так як реакція в різних культур тече неоднаково швидко і в деяких штамів вона розвивається в більш пізні терміни. Фібринолітичний тест ми вважаємо вельми придатним для визначення потенційної хвороботворності стафілококів, але оцінюємо тільки в комплексі з іншими ознаками активності. Гіалуронідазною активність визначається за методом Мак-Клину в модифікації М. Ш. Могильовського і Л. С. Коган (1949). Розчин гіалуронату дає в присутності 2 N оцтової кислоти типовий згусток, розливається по 0,5 мл в стерильні пробірки. Додається 0,5 мл добової культури стафілококу в пептонов воді. Контролями служать: гіалуропат + дистильована вода і гіалуропат + незасіяній середовище. Суміші струшують і витримуються при 37 ° С 15-20 хв. Потім в кожну пробірку додається по дві краплі 2 N розчину оцтової кислоти і струшується. У контролях повинен утворитися слизовий грудочку. У досвіді при наявності гіалуронідази він відсутній, що свідчить про деполімеризації гіалуронової кислоти мікробним ферментом.

Для вивчення токсигенності стафілококів зручно користуватися методом, запропонованим Ілека і Леві (1950), що дозволяє визначити типи гемолізинів. З цією метою готуються чашки з поживним агаром, що містить 5% відмитих фізіологічним розчином еритроцитів барана, кролика і людини. На поверхню живильного середовища по діаметру поміщають стерильну смужку фільтрувального паперу, змочену альфа-антитоксичної сироваткою. Відступивши 1-2 мл від краю смужки, перпендикулярно до неї засівають штрихами досліджувані культури. Посіви інкубують при 37 ° С протягом доби, після чого враховують результати. Альфа-гемоліз проявляється у вигляді повного просвітлення середовища навколо штриха культури і нейтралізується альфа-антитоксичної сироваткою. Він виявляється на середовищах з кролячими і баранячими еритроцитами Бета-гемоліз на агарі з баранячою кров'ю дає часткове просвітлення, зона якого має буро-пурпурний відтінок. Це "тепло-холодовий" токсин і краще виявляється після додаткового добового витримування чашок в холодильнику при температурі +4 ° С по характерному пошаровому гемолізу баранячих еритроцитів і не централізується альфа-антитоксичної сироваткою. На кролячих еритроцитах він не активний. Дельта-гемолізини визначається по вузькій смужці гемолізу баранячих і кролячих еритроцитів, не нейтралізується альфа-антитоксичної сироваткою.

Проте освіту дельта-гемоли-зіна на цих чашках може бути замасковано дією альфа-токсину і тому його слід перевіряти на середовищах з еритроцитами людини або коня. Таким чином, для визначення всіх 3 типів гемолізинів досить використовувати еритроцити барана і людини або коня. Для визначення вірулентності стафілококів існують кілька різних методів зараження білих мишей. Найбільш простим є введення 0,1 мл добової бульонной культури випробуваного стафілокока в хвостову вену. Облік загибелі тварин здійснюється протягом 10 діб, реєструю дельта-токсигенних. Для порівняння вірулентності стафілококових культур можна використовувати їх здатність викликати дермонекротіческую реакцію у кролів. Готують 4-мільярдну суспензію добової агарної культури стафілокока у фізіологічному розчині, а з отриманої густоти роблять розведення, щоб отримати 2 - та 1-мільярдні суспензії. З кожного розведення в об'ємі 0,1 мл, що становить 100, 200, 400 мільйонів мікробних тіл, вводять кролику в вистрижені або депілірованную напередодні шкіру. На одному кролика можна одночасно поставити до 8 внутрішньошкірних проб. Щодня відзначають прояви дермонекротіческой реакції, а остаточно на 4-ту добу. За мінімальну дермонекротіческую дозу приймають те найменшу кількість культури, яке дає некроз на 4-ту добу (Г. В. Вигодчіков, 1963).

Список використаної літератури

1. Куцик Р.В. Скринінгове дослідження протимікробної активності лікарських рослин Прикарпаття відносно поліантибіотикорезистентних клінічних штамів стафілококів: Повідомлення 1 // Галицький лікарський вісник. - 2004. -Т.11, №4. -С.44-48.

2. Куцик Р.В. Дослідження чутливості до офіцинальних препаратів лікарських рослин штамів метіцилінорезистентних стафілококів, виділених від пацієнтів з фурункульозом і неспецифічними уретритами // Арх. клін. мед. - 2005. -№2(8). -С. -65-69.

3. Куцик Р.В. Скринінгове дослідження протимікробної активності лікарських рослин Прикарпаття відносно поліантибіотикорезистентних клінічних штамів стафілококів: Повідомлення 2 // Галицький лікарський вісник. - 2005. -Т.12, №3. -С.52-58.

4. Куцик Р.В. Протимікробна активність екстрактів лишайників Cetraria islandica (L) Ach. і Evernia prunastri (L) Ach. відносно стафілококів з різним рівнем метіцилінорезистентності // Анали Мечниківського інституту. - 2008. -№1. -С.42-46. -Режим доступу: http: // www. nbuv. gov. ua/ e-journals/AMI/2008/j12008. htm.

5. Куцик Р.В. Антибіотикопотенціююча активність бруньок берези бородавчастої Betula verrucosa Ehrl. // Акт. питання фармацевт. та мед. науки та практики. -2006. -Вип.15, Т.1. -С. 205-211.

6. Кучеренко К.В., Куцик Р.В. Етіологічна структура та особливості антибіотикограми збудників при деяких фонових та передракових станах шийки матки // Галицький лікарський вісник. - 1999. -Т.6, №2. -С.51-54. 7. Куцик Р.В., Куровець Л.М. Видовий спектр і чутливість до антибіотиків стафілококів, виділених від пацієнтів з фурункульозом // Мікробіол. журн. - 2002. -Т.64, №5. -С.60-63.

8. Нозокоміальні пневмонії у хірургічних хворих / Р.Б. Костирко, І.І. Тітов, Р.В. Куцик, Р.М. Мізюк, Т.І. Клюфінська, О.О. Янків // Галицький лікарський вісник. - 2002. -Т.9, №3. -С.162-164.

9. Поточний контроль санепідрежиму, як складова реалізації нового підходу до управління якістю медичної допомоги та профілактики внутрішньолікарняних інфекцій / С.К. Борщ, Р.В. Куцик, О.В. Борщ, Б.І. Васильчук, В.М. Вовчук, І.С. Грибовська, К.М. Грибовський, Л.Б. Ярич // Галицький лікарський вісник. - 2003. -Т.10, №3. -С.106-111.

10. Синтез та мікробіологічний скринінг четвертинних солей циклопента [с] хінолінію / Р.В. Куцик, З.Л. Новіцький, М.В. Мельник, А.О. Стецьків, Л.М. Куровець, О.В. Боднарчук // Вісн. Вінницького Націон. мед. ун-ту. - 2004. -№8(2). -С.430-434.

11. Вивчення антагоністичної активності лактобацил, введених у пробіотичний препарат лактобактерин, щодо етіологічних чинників дисбактеріозу кишечника, гнійно-запальних процесів та пробіотичних штамів мікроорганізмів / С.К. Борщ, Н.М. Середюк, Р.В. Куцик, О.Д. Матейчук, Р.М. Мізюк // Галицький лікарський вісник. - 2004. -Т.11, №3. -С.16-19.

12. Антиінфекційна резистентність школярів м. Івано-Франківська в сучасних екологічних умовах / А.П. Юрцева, Р.В. Куцик, Б.М. Павликівська, О.В. Фофанова, З.О. Ціхонь, Р.М. Мізюк // Арх. клін. мед. - 2004. -№1(5). -С. -69-71.

13. Борщ С.К., Середюк Н.М., Куцик Р.В. Вивчення на прикладі E. coli шт. М-17, введеної в препарат біфікол, закономірностей прояву антагоністичних властивостей мікроорганізмів, що належать до різних таксономічних одиниць, є збудниками дисбактеріозу кишечника, гнійно-запальних процесів та пробіотичними штамами // Галицький лікарський вісник. - 2004. -Т.11, №4. -С.9-11.

14. Спосіб визначення антиколонізаційної резистентності слизової оболонки порожнини рота / У.Р. Никифорчин, М.М. Рожко, Р.В. Куцик, Т.М. Михайленко, Г.С. Орнат. - Інформ. лист №70-2004. -Київ, 2004. -2c.

15. Куцик Р.В., Куровець Л.М., Зузук Б.М. Дослідження протистафілококової активності екстрактів гірчака зміїного (Polygonum bistorta L) // Вісн. Одеського національного університету. Сер. біол. - 2005. -Т.10, Вип.7. -С. -137-143.

16. Клінічні та мікробіологічні прояви дисбактеріозу кишечника у пацієнтів із гастроінтестінальною патологією / С.К. Борщ, Н.М. Середюк, Р.В. Куцик, Л.С. Малофій, В.М. Вовчук, В.М. Благодатний, Р.М. Мізюк, Н.С. Духович // Арх. клін. мед. - 2005. -№2(8). -С. -44-48.

17. Мізюк Р.М., Куцик Р.В., Борщ С.К. Особливості мікробного спектру та резистентності до антибіотиків мікроорганізмів, виділених в стаціонарах Івано-Франківської області // Галицький лікарський вісник. - 2005. -Т.12, №2. -С.36-41.

18. Скринінгове дослідження протимікробної активності спиртових екстрактів лікарських рослин / Р.М. Мізюк, Р.В. Куцик, Б.М. Зузук, С.К. Борщ, Н.І. Фрич // Галицький лікарський вісник. - 2005. -Т.12, №4. -С.66-71. 19. Борщ С.К., Куцик Р.В. Обгрунтування патогенетичних варіантів синдрому дисбактеріозу кишечнику для вибору схем базової пробіотичної терапії // Ліки України. - 2005. -№12(101). -С.113-119.

20. Кукурудз Н.І., Герелюк В.І., Куцик Р.В. Клініко-мікробіологічна ефективність застосування композиції амізон-етоній імобілізованої на кремнеземі "Силлард-П" у лікуванні генералізованого пародонтиту // Ліки. - 2006. -№3-4. -С.93-102.

21. Кукурудз Н.І., Куцик Р.В., Луцак Л.В. Мікробіологічне обгрунтування застосування композиції амізон-етоній, імобілізованої на сорбенті "Силлард-П", для лікування генералізованого пародонтиту // Укр. мед. альманах. - 2006. -Т.9, №5. -С.67-70.

22. Курбатова С.С., Куцик Р.В., Герелюк В.І. Мікробіологічне обгрунтування застосування зинаксину в комплексному лікуванні генералізованого пародонтиту // Вісн. стоматол. -2006. -№2(52). -С.50-54.

23. Борщ С.К., Куцик Р.В. Класифікація різновидів антагністичної активності мікроорганізмів при виборі пробіотичних препаратів для хворих із синдромом дисбактеріозу кишечника // Ліки України. - 2007. -№10(114). -С.66-71.

24. Порівняльний аналіз чутливості до антибіотиків золотистих стафілококів і грибів, виділених у пацієнтів із дисбактеріозом кишечника / С.К. Борщ, В.Г. Войцеховський, Р.В. Куцик, В.П. Борщ // Галицький лікарський вісник. - 2007. -Т.14, №4. -С.17-21.

25. Синтез и антимикробная активность 5(R1-бензил-) - 2-(R2-бензилиденгидразоно) - 3-фурфурил-4-тиазолидинонов / В.М. Цялковский, В.С. Матийчук, Р.В. Куцык, Н.Д. Обушак, Т.И. Клюфинская // Хим. -фарм. журн. - 2005. -Т.39, №5. -С. 20-22.

26. Synthesis and antimicrobial activity of 5-(R1-benzyl) - 2-(R2-benzylidenehydrazono) - 3-(2-furylmethyl) thiazolidin-4-ones / V. M. Tsyalkovsky, V. S. Matiychuk, R. V. Kutsyk, N. D. Obushak, T.I. Klyufinskaya // Pharmacuetical Cemistry J. - 2005. -Vol.39, №5. -P.245-247.

27. Синтез и противомикробная активность амидов 2,4-диоксотиазолидин-5-уксусной кислоты / Б.С. Зименковский, Р.В. Куцик, Р.Б. Лесык, В.М. Цялковский, В.С. Матийчук, Н.Д. Обушак, Т.И. Клюфинская // Хим. -фарм. журн. - 2006. -Т.40, №6. -С.13-16.

28. Synthesis and antimicrobial activity of 2,4-dioxothiazolidine-5-acetic acid amides / B. S. Zimenkovskii, R. V. Kutsyk, R. B. Lesyk, V. S. Matyichuk, N. D. Obushak, T.I. Klyufinska // Pharm. Chemstry J. - 2006. -Vol.40, №6. -P.303-306.

29. Синтез та вивчення антимікробної активності похідних азолідину з 2-(2-хлорбензилокси) - 5-нітрофенільним фрагментом в молекулах / Р.Б. Лесик, Б.С. Зіменковський, Р.В. Куцик, Д.В. Атаманюк, Г.М. Семенців // Фармацевт. журн. - 2003. -№2. -С.52-56.

30. Куцик Р.В. Протистафілококова активність екстрактів грінделії розчепіреної Grindelia squarrosa (Pursh) Dun. // Фармацевт. журн. - 2005. -№1. -С.81-88. 31. Куцик Р.В. Вивчення протимікробної активності екстрактів бруньок берези бородавчастої відносно стафілококів з різними детермінантами антибіотикорезистентності // Фармацевт. журн. - 2006. -№.2-С.74-82. 32. Мельник М.В., Куцик Р.В., Клюфінська Т.І. Протимікробна активність солей оксотетрагідроакридинію і їх фенілгідразонів // Фармацевт. журн. - 2004. -№2. -С.59-62.

33. Мельник М.В., Куцик Р.В., Калин Т.І. Дослідження протимікробної активності похідних діоксодекагідроакридинів // Фармацевт. журн. - 2004. -№4. -С.78-83.

34. Вивчення протимікробної активності рослин родини вересові (Ericaceae Juss) / Н.І. Фрич, Л.М. Вівчарук, Р.М. Мізюк, Л.М. Куровець, Р.В. Куцик // Фармацевт. журн. - 2005. -№2. -С.97-104.

35. Вивчення антимікробної активності та молекулярне моделювання похідних тіазолідину з піразолобензоксазиновим фрагментом в молекулі як потенційних інгібіторів MurB ферменту / Б.С. Зіменковський, Д.Я. Гаврилюк, Р.Б. Лесик, Р.В. Куцик, Д.В. Атаманюк // Фармацевт. журн. - 2006. -№.6-С.41-48. 36. Куцик Р.В., Мізюк Р.М., Куровець Л.М. Протимікробні властивості рослин роду кермек (Limonium spp) // Фармацевт. журн. - 2007. -№.2-С.88-98. 37. Виникнення нозокоміальної пневмонії у хворих після виконання планових реконструктивних операцій / Р.Б. Костирко, І.І. Тітов, О.В. Волошинський, Р.В. Куцик // Клінічна хірургія. - 2002. -№5-6. -С.13-14.

38. Пат. №27939 Україна, МПК С12 Q 1/04, G 01 N 33/15. Спосіб скринінгу рослинних екстрактів на предмет виявлення їх здатності модифікувати резистентність мікроорганізмів до антибіотиків: Пат. №27939 Україна, МПК С12 Q 1/04, G 01 N 33/15. Р.В. Куцик. -№u200705188; Заявл.11.05. 2007; Опубл.26.11. 2007, Бюл. №19. -7с. 39. Пат. №37874А Україна, МПК G 01 N 33/50. Спосіб визначення рівня антиколонізаційної резистентності слизової оболонки порожнини рота: Пат. №37874А Україна, МКВ G 01 N 33/50. У.Р. Никифорчин, М.М. Рожко, Р.В. Куцик, Р.М. Никифорчин, І.В. Палійчук, З.Р. Ожоган, Г.С. Орнат, О.В. Бугерчук. -№2000042396; Заявл.26.04. 2000; Опубл.15.05. 2001, Бюл. №4. -5с.

40. Пат. №19175 Україна, МПК А 61 К 6/00. Спосіб одержання засобу для місцевого лікування хронічного генералізованого пародонтиту: Пат. №19175 Україна, МКВ А 61 К 6/00. Н.І. Кукурудз, В.І. Герелюк, Р.В. Куцик, Я.С. Гудивок. -Заявл.13.04. 2006; Опубл.15.12. 2006, Бюл. №12. -7с. 41. Пат. №23769 Україна, МПК С07D 215/00; С07D 307/34; С07D 405/04; С07D 209/00.2-(5-Арил-2-фурил) - 4-хінолінкарбонові кислоти, які виявляють протимікробну активність: Пат. №23769 Україна, МПК С07D 215/00; С07D 307/34; С07D 405/04; С07D 209/00. М.Д. Обушак, Р.В. Куцик, В.С. Матійчук, Ю.І. Горак; Львівський національний університет ім.І. Франка (UA). - № 200613987; Заявл.28.12. 2006; Опубл.11.06. 2007, Бюл. № 8.

42. Пат. №26076 Україна, МПК А 61 В 10/02. Спосіб забору матеріалу для діагностики мікробного біоценозу ротової порожнини у осіб із знімними протезами: Пат. №26076 Україна, МКВ А 61 В 10/02. Т.М. Михайленко, М.М. Рожко, Р.В. Куцик. -№а20070006; Заявл.02.01. 2007; Опубл.10.09. 2007, Бюл. №14. -2с.

43. Пат. №27940 Україна, МПК А 61 К 36/00. Спосіб одержання екстракту бруньок берези, що володіє протимікробною активністю і зменшує рівень резистентності стафілококів до антибіотиків: Пат. №27940 Україна, МПК А 61 К 36/00. Куцик Р.В., Зузук Б.М. . -№u200705188; Заявл.11.05. 2007; Опубл.26.11. 2007, Бюл. №19. -4с.

44. Патент України за заявкою №а200512420, МПК A 61 K 31/435. Спосіб синтезу нових стирилових похідних четвертинних солей циклопента [c] хінолінію з високим рівнем протистафілококової і антикандидозної активності: Пат. за заявкою №а200512420 Україна, МПК A 61 K 31/435. Р.В. Куцик, З.Л. Новіцький, М.В. Мельник, Л.М. Куровець, О.В. Боднарчук. -№а200512420; Заявл.23.12. 2005; Опубл.25.06. 2007, Бюл. №9 45. Куцык Р.В., Зузук Б.М. Береза бородавчатая (син. Береза повислая) Betula verrucosa Ehrh. (син. Betula pendula Roth): Аналитический обзор // Провизор. - 2001. -№10. -С.17-20; 2001. -№11. -С.23-27.

Размещено на Allbest.ru