Розповсюдження патогенного стафілококу серед населення Яворівського району

Пили гонококів складаються з ланцюжків білкових субодиниць, залишків Сахаров і фосфорної кислоти; порушення послідовності з'єднання субодиниць змінює антигенні властивості in vivo і in vitro.

Генетично обумовлена варіабельність будови пілей забезпечує прикріплення і виживання гонококів на клітинах епітелію при зміні господаря і впливі AT. Пили забезпечують адгезію гонококів до клітин епітелію. Відокремлені від клітин, вони так само ефективно прикріплюються до субстратів, як і в умовах інфекційного процесу[26;c.245].

Пили гонококів є і у непатогенних нейсерій, у авірулентних штамів N. gonorrhoeae вони відсутні.

ЛПС гонококів складається з ліпіду А і центрального ядра (антигенної детермінанти) - олігосахариду, що не має бічних ланцюгів.

ЛПС N. gonorrhoeae проявляють сильні імуногенні властивості. AT до них володіють бактерицидною активністю.

Гонококки не продукують екзотоксинів. Клітинна стінка містить термолабільних токсичний компонент (ендотоксин) ліпополісахарідной природи. Ендотоксин N. gonorrhoeae проявляє сильні імуногенні властивості. AT до них володіють бактерицидною активністю.

Білки клітинної стінки гонококів проявляють сильні імуногенні властивості. AT до них обумовлюють комплементзавісімий цитолиз бактерій. По складу білків клітинної стінки виділяють 16 сероварів гонококів. Білок I обумовлює стійкість до бактерицидну факторам слизових оболонок, а також інвазивні властивості бактерій і їх здатність викликати системні інфекції. Білок II утворює окрему білкову фракцію, звану протеїнами каламутності або ора-протеїнами. Їх вважають первинними факторами вірулентності гонококів, вони обумовлюють прикріплення до епітелію / та інгібують фагоцитарні реакції.

1.4 Виділення та ідентифікація збудника

Стафілококи -- факультативні анаероби, але краще розвиваються в аеробних умовах. На поверхні щільнихпоживних середовищ утворюють круглі, опуклі, пігментовані (золотисті, лимонно-жовті, білі) колонії з рівними краями; у рідких середовищах дають рівномірне помутніння. Колір обумовлений наявністю ліпохромного пігменту, утворення якого відбувається за наявності кисню на середовищах, що містять кров, вуглеводи та молоко. Але характерно є те, що пігментоутворення -- це не видова ознака. У лабораторіях використовують здатність стафілококів розмножуватися в середовищах зі значним вмістом хлориду натрію (6-10%). Таку концентрацію солі інші бактерії не витримують, внаслідок чого сольові середовища (жовтково-сольовий агар, молочно-сольовий агар) є елективними для стафілококів. Штами золотистих стафілококів продукують гемолізини, що утворюють на кров'яному агарі колонії, оточені зоною гемолізу. Стафілококи виявляють високу біохімічну властивість. Вони продукують каталазу, більшість штамів утворюють ацетоїн на середовищах із глюкозою, також відновлюють нітрати до нітритів, гідролізують білки та жири, ферментують вуглеводи (лактозу, мальтозу, глюкозу, сахарозу) до оцтової кислоти та СО2. Специфічною родовою властивістю є ферментація глюкози в анаеробних умовах з утворенням лактату -- це важливий тест для диференціації Staphylococcus від Micrococcus.

Збудником стафілококових інфекцій частіше буває S. aureus, дещо рідше - S. epidermidis, дуже рідко - S. saprophyticus. Стафілококи є представниками нормальної мікрофлори людського тіла, тому мікробіологічна діагностика стафілококових інфекцій не може обмежуватися виділенням і ідентифікацією збудників; необхідні кількісні методи дослідження, тобто визначення кількості мікроорганізмів в пробі[27;c.13].

Таблиця 4. Основні збудники стафілококу аерус та стафілококу епідермального

4.1. Збудники Staphylococcus aureus

№	Staphylococcus aureus
	Збудник	Стафілококова інфекція
1	Staphylococcus aureus	Захворювання шкіри і підшкірної клітковини
2	Staphylococcus aureus	Стафілококовий синдром "обпеченої шкіри
3	Staphylococcus aureus	Подібний до опіку шкіряний синдром (синдром Лайелла)
4	Staphylococcus aureus	Ураження кісток та суглобів (остеомієліти, артрити)
5	Staphylococcus aureus	Імпетиго
6	Staphylococcus aureus	Синдром токсичного шоку
7	Staphylococcus aureus	Пневмонії та плеврити
8	Staphylococcus aureus	Гострі стафілококові ентерити та ентероколіти
9	Staphylococcus aureus	Стафілококовий менінгіт та абсцес мозку
10	Staphylococcus aureus	Стафілококовий сепсис
11	Staphylococcus aureus	Стафілококова ангіна

4.2.Збудники Staphylococcus saprophyticus

Staphylococcus saprophyticus
Збудник	Стафілококова інфекція
Staphylococcus epidermidis	Стафілококовий ендокардит
Staphylococcus saprophyticus	Стафілококові захворювання сечовидільних шляхів
, Staphylococcus saprophyticus	Отруєння стафілококовим ентеротоксином

Тобто з таблиці 4 ми бачимо, що стафілокок аерус є збудником значно більшої кількості аніж стафілокок епідемальний чи стафілокок сапропутикус.

Стафілококи секретують кілька токсинів, що відрізняються один від одного механізмом дії. Особливе місце серед факторів патогенності посідаютьекзотоксини. До них належать мембранопошкоджуючі токсини або мембранотоксини. Вони утворюють канали в цитоплазматичній мембраніеритроцитів, лейкоцитів та інших клітин, що призводить до порушення осмотичного тиску й лізису відповідних клітин. Раніше ці токсини називалигемолізинами, вважаючи, що вони лізують лише еритроцити. Мембранотоксини відрізняються один від одного за антигенними властивостями, «мішенями» та іншими ознаками. Виділяють 4 антигенні типи, які викликають повний гемолізна середовищі з кров'ю: б,в,г,д.

б-гемолізин -- неактивний стосовно еритроцитів людини, але лізує еритроцити барана; також має дермонекротичну та кардіотоксичну дію. Він являє собою білок із вираженими імуногенними властивостями. З нього отримано анатоксин, що використовується дня лікування й профілактики стафілококових захворювань.

в-гемолізин -- справляє помірну дію на еритроцити людини та характеризується властивістю «холодового гемолізину», тобто максимальну активність виявляє при низьких температурах; також пригнічує хемотаксисполіморфноядерних лейкоцитів.

г-гемолізин -- це двокомпонентний гемолізин із помірною активністю, але на кров'яному агарі не виявляється, тому що один із компонентів інактивує полімери агару.

д-гемолізин -- агрегат із низькомолекулярних сполук, який викликає цитотоксичність широкого спектру дії[28;c.306].

Також досить важливе значення мають такі токсини як:

1. Ексфоліатини А і В -- руйнують міжклітинні контакти в епідермісі, що веде до відшарування поверхневих структур епідермісу (ексфоліації) і утворенню виразкових бульбашок -- синдрому «обпеченої шкіри». Найчастіше зустрічається в новонароджених та дітей молодшого віку.

2. Токсин синдрому токсичного шоку (TSST-1) -- інгібує всмоктування води, активуючи синтез цАМФ, що призводить до розвитку діареї та токсичного шоку.

3. Лейкоцидин -- справляє цитотоксичну дію на поліморфноядерні лейкоцити.

Стафілококи можуть утворювати гістотоксини, до яких належать ентеротоксини, що викликають харчову інтоксикацію. Ентеротоксини є суперантигенанами -- викликають поліклональну стимуляцію Т-лімфоцитів із подальшою гіперсекрецією цитокінів та вторинною інтоксикацією. Ентеротоксини характеризуються високою термостабільністю (витримують кип'ятіння) і стійкістю до протеолітичних ферментів. Відомо 6 ентеротоксинів (А, В, С, D, Е, F), що розрізняються за антигенними властивостями.

Рис. 5. Сезонна динаміка захворюваності на стафілококовий дерматит

Висновки до 1 розділу

Збудником стафілококової інфекції є бактерії роду Staphylococcus, які входять до родини Staphylococcaceae. Відповідно до міжнародної класифікації до нього належать три види стафілококів -- S. aureus (стафілокок золотистий), S. epidermidis (стафілокок епідермальний), S. saprophyticus (стафілокок сапрофітний). Представники роду поширені в усьому світі й характеризуються різноманітною локалізацією -- від шкірних покривів до поверхні слизової оболонки людини та тварин.

Вперше представників цього роду виділив Кох Роберт і Пастер із вогнищ гнійного ураження людини. Бактерії роду Staphylococcus -- це нерухомі, грампозитивні бактерії кулястої форми діаметром 0,5-1,5мкм. Вони діляться в кількох площинах, утворюючи скупчення у вигляді грон винограду. У препаратах із патологічного матеріалу, зокрема з гною, стафілококи розташовуються парами або невеликими скупченнями. Золотисті стафілококи утворюють мікрокапсулу.

Стафілококи є хемоорганотрофами з окислювальним і бродильним типами метаболізму. Вони розщеплюють багато вуглеводів в аеробних й анаеробних умовах. Діагностичне значення має здатність зброджувати глюкозу й маніт в анаеробних умовах.

Розділ 2. Розповсюдження патогенного стафілококу серед населення Яворівського району

2.1 Збудники стафілококу серед населення Яворівського району

Лише на людині живе чотирнадцять різновидів стафілококів. З них - одинадцять абсолютно нешкідливі, зате решта - можуть бути смертельно небезпечними.

Ось три небезпечних для здоров`я стафілокока:

1. Cапрофітний стафілокок (S. saprophyticus)

Є частою причиною циститів і уретритів, особливо у жінок. Живе на шкірі інтимних місць, а також на поверхні слизової оболонки сечовивідних шляхів.

2. Епідермальний (шкірний) стафілокок (S. epidermidis)

Може жити на будь-якій ділянці шкіри або слизової людини. Цей стафілокок проявляє себе тільки в ослабленому організмі. Як не дивно, ніяких уражень шкіри цей вид не викликає, зате дуже любить оселятися на клапанах серця, взагалі будь-яких протезах і імплантатах. Проникає всередину організму через рани, тріщини на шкірі і слизових. Фактично, якщо при установці клапана або протеза розвивається інфекція, в більшій частині випадків - постарався епідермальний стафілокок.

Стафілокок не є мікроорганізмом, що викликає якесь конкретне захворювання. Прояви стафілококової інфекції можуть бути різноманітними, вони залежать від місця впровадження інфекції і стану організму. Термін «стафілококові хвороби» об'єднує ряд захворювань, які вивчають різні галузі медицини і лікують лікарі різних спеціальностей. Проте є речі, які об'єднують захворювання, що викликаються стафілококом, в єдину групу, на них ми і зробимо основний акцент[29;c.52].

Стафілокок може вражати багато органів і є збудником близько 120 різних захворювань. Постараємося описати найбільш часто зустрічаються: Захворювання шкіри та підшкірної клітковини - велика група захворювань. До неї відносяться фурункули, карбункули, абсцеси, флегмони, піодерпіі, фолікуліт, «стафілококова рожа» та інші. Крім цього, до поразок шкіри належать скарлатиноподібної висипки при інших стафілококових захворюваннях. Ожогоподобний шкірний синдром - частіше вражає дітей до 5 років. Він являє собою запалення значною за площею поверхні шкіри, з відшаровуванням верхніх її шарів. Ураження кісток і суглобів частіше відбувається при генералізованої інфекції, коли стафілокок циркулює в крові. Синдром токсичного шоку виникає при важких формах інфекції, коли в кров потрапляє дуже велика кількість токсинів. Стафілококкова ангіна має мало особливо характерних рис. Стафілококовий ендокардит характеризується ураженням клапанів серця, наростаючою серцевою недостатністю. Він часто супроводжується інфарктами (омертвінням ділянок) легких. Пневмонії і плеврити мають тяжкий перебіг. Вогнища інфекції в легенях мають тенденцію зливатися, з'являються гнійні ускладнення, виражені дихальна недостатність і інтоксикація. Гострі стафілококові ентерити і ентероколіти Про причину їх виникнення згадувалося вище. Вони супроводжуються рясною водянистою діареєю, що загрожує швидким зневодненням організму. Отруєння стафілококових ентеротоксин відбувається при вживанні в їжу продуктів, заражених стафілококом. Токсин може накопичуватися у великих кількостях в їжі, що несе в собі велику небезпеку. Найбільш небезпечні в цьому відношенні молочні продукти. Стафілококовий менінгіт і абсцес мозку розвиваються в результаті стафілококового сепсису (зараження крові). Стафілококові захворювання сечових шляхів зазвичай не відрізняються від патології іншого походження. Їх збудниками частіше є сапрофітні стафілокок.

Нами было досліджено розповсюдження стафілококу серед населення Яворівського району Львівської області.

Мікробіологічні методи. При виконанні мікробіологічних досліджень користувались загальноприйнятими методами. Для вивчення мікроценозу верхніх дихальних шляхів слиз з глотки та носа окремо забирали стерильними ватними тампонами, які поміщали в пробірки з 5,0 мл фізіологічного розчину. Вміст тампона ретельно відмивали і одержували вихідне розведення слизу 101, з якого проводили посів на чашки з селективними твердими поживними середовищами. Посів здійснювали петлею у вигляді послідовних секторів, що перетиналися. Це дозволяло підрахувати кількість колоній мікроорганізмів на чашці. Використовували наступні поживні середовища: кров'яний агар з ристоміцином (30 одиниць/мл) - для нейсерій, гемофілів, бранхамелл; середовище Гарро з поліміксином (50 одиниць/мл) - для стрептококів та пневмококів; манітно-жовточно-сольовий агар - для стафілококів[30;c.81].

Мікробіологічна діагностика стафілококових інфекцій складається з бактеріоскопічного та бактеріологічного аналізів.

Матеріалом для дослідження найчастіше буває: кров, гній, слиз, сеча, промивні води шлунку, випорожнення, залишки харчових продуктів, ліквор (спинномозкова рідина) - при підозрі на менінгіт.

Гній і ліквор досліджують бактеріоскопічним і бактеріологічним методами. Решту матеріалів - бактерілогічним.

Для бактеріоскопічного дослідження - з гною, ліквору готують мазки, забарвлюють їх за Грамом. В мазках виявляється виявляється велика кількість лейкоцитів і грампозитивний коків, розташованих у вигляді скупчень, вони забарвлені у темно-фіолетовий колір. Потім роблять посів досліджуваного матеріалу на живильні середовища:

- на м'ясо-пептонному агарі - колонії правильної круглої форми, опуклі, непрозорі, з блискучою, ніби полірованою поверхнею, забарвлені в золотистий, лимонно-жовтий колір ( це залежить від кольору пігменту);

на кров'яному агарі колонії оточені зоною гемолізу на м'ясо-пептонному бульоні - ростуть добре, утворюють спочатку рівномірне помутніння, а потім рихлий осад на дні.

У бактеріологічних лабораторіях стафілококи часто культивують на середовищах із 7-10% хлоридом натрію. Таку високу концентрацію солі інші бактерії не витримують. Отже, сольовий агар є селективним середовищем для стафілококів. Використовують жовточно-сольовий агар, молочно-жовточний сольовий агар.

Стафілококи, особливo S. aureus, виділяють екзотоксини. Токсини їх досить складні. Є багато варіантів токсинів: гемотоксини, некротоксини, летальний токсин, лейкоцидини.

Гемотоксини викликають гемоліз еритроцитів людини і тварини.

Гемотоксичну функцію токсину можна виявити на 5% кров'яному агарі, вона проявляється у розчиненні еритроцитів крові барана, кролика або морської свинки.

Дермонекротоксину функцію - вивчають на кролях, шляхом введення культури внутрішньошкірно - на місці ін'єкції через 2-3 доби утворюється некроз.

Летальний токсин - при внутрішньовенному введенні викликає майже миттєву смерть піддослідної тварини.

Стафілококи здатні рости на простих живильних середовищах. Це значно спрощує мікробіологічну діагностику і інші процедури, пов'язані із культивуванням бактерій.

Невипадково, стафілокок був в числі перших бактерій, ізольованих від людини. Це зробив Бекер у 1883р. назву "стафілокок" запропонував Огстон у 1881р.

Стійкість і невибагливість стафілококів проявляється в тому, що вони розмножуються в присутності високих концентрацій хлориду натрію (до 10-15%). Цю ознаку використовують при виготовленні диференційно-діагностичних середовищ: до них додають надлишок кухонної солі, для того, щоби подавити ріст інших бактерій.

Стафілококи стійкі у зовнішньому середовищі, але вони надзвичайно чутливі до анілінових барвників, наприклад б до кристалів іолету (1:500000), до брильянтового зеленого (1:1000000) - і це використовують для лікування стафілококових піодермій.

Посіви інкубували при 37 °C на протязі 24 - 48 годин. Виділення чистих культур, їх родову та видову ідентифікацію здійснювали з використанням загальноприйнятих мікробіологічних методів у відповідності з даними таксономії мікроорганізмів (Bergey's, 1984).

Показник інтенсивності колонізації мікробами слизової оболонки глотки та носа (мікробне число) визначали шляхом підрахунку колоній - КУО. Мікробне число різних представників мікрофлори верхніх дихальних шляхів коливалось в межах 101-109 КУО/мл носоглоткового слизу. Для зручності викладу інтенсивність колонізації виражали у вигляді десяткового логарифму - 1-9 lg КУО/мл.

Нами сформовано таблицю обстежених по Яворівському району Львівської області.

Таблиця 4.1. Група обстежених Яворівського району Львівської області Staphylococcus Aureus

Група обстежуваних	Дослідження на стафілокок
	Усього досліджено	Позитивний результат
	Staphylococcus Aureus	Staphylococcus aureus
Хворі та особи з підозрою на захворювання	осіб	Дослід	роки	Осіб	дослід
	170 240 320 350	170 240 320 350	2010 2011 2012 2013	53 65 70 60	53 65 70 60
Особи обстежувані за епідпоказами	- - - -	- - - -	- - - -	- - - -	- - - -
Особи обстежувані з профілактичною метою	6046 6226 3406 5650	3010 2500 2500 5650	2010 2011 2012 2013	102 108 120 98	102 108 90 98

біологічний стафілокок захворювання

Таблиця.4.2 Група обстежених Яворівського району Львівської області

Staphylococcus epidermidis

Група обстежуваних	Дослідження на стафілокок
	Усього Досліджено	Із них позитивний результат
	Staphylococcus epidermidis	Staphylococcus epidermidis
Хворі та особи з підозрою на захворювання	Осіб	дослід	Осіб	дослід	Роки
	151 235 292 338	151 235 292 338	48 60 54 52	48 60 54 58	2010 2011 2012 2013
Особи обстежувані за епідпоказами	- - - -	- - - -	- - - -	- - - -	- - - -
Особи обстежувані з профілактичною метою	5670 6102 3025 5580	5670 6102 3025 5580	92 98 113 85	92 98 113 85	2010 2011 2012 2013

За таблицями 4.1.та 4.2 ми можемо побачити, що по Staphylococcus Aureus було обстежено в 2013 році найбільшу кількість осіб 350 хворих та осіб з підозрою на захворювання викликані даним збудником за усі 4 роки. Серед них найбільший позитивний результат за збудниками був в 2012році - 70 осіб, в 2013 році - 60 осіб, що вказує на те, що кількість хворих осіб, хвороби яких викликані збудником Staphylococcus Aureus зменшилося в 2013році в порівнянні з 2011-2012роками.

Згідно таблиці 4.2. можемо відмітити, що по Staphylococcus epidermidis було обстежено в 2013році 38 осіб, що зворіють чи мають підозру на захворювання викликані даним збудником. Найбільший позитивний результат зафіксовано в 2011році - 60 осіб хворих через даний збідник. Тобто кількість позитивного результату на збудник також в 2013 році зменшилося в порівнянні з минулими роками.

Стафілококи часто інвазують зовнішні покриви через закупорені волосяні фолікули і сальні залози або місця опіків, поранень, саден, укусів комахами або ділянки дерматитів. Колонізірованіе і інвазія в легені можуть відбутися в тих випадках, коли механізм видалення слизу війчастим епітелієм або виключений, що відбувається при ендотрахеальної інтубації, або пригнічений, наприклад при вірусній інфекції органів дихання (грип) або муковісцидозі. Пошкодження слизової оболонки шлунково-кишкового тракту цитотоксичними хіміопрепаратами або в результаті променевої терапії привертає до інфекції, що виходить з цих вогнищ[32;c.59].

При порушенні цілісності зовнішніх покривів місцеве розмноження бактерій супроводжується запальною реакцією і некрозом тканин. У цьому вогнищі швидко з'являються нейтрофіли, захоплюючі велике число стафілококів. Відбувається тромбоз прилеглих капілярів, по периферії відкладається фібрин, потім фібробласти утворюють бессосудистого стінку навколо цієї зони. Повністю розвинувся стафілококовий абсцес складається з центрально розташованого ядра, зруйнованих і руйнуються лейкоцитів і мікроорганізмів, які поступово розплавляються, перетворюючись на характерний густий, кремоподібний гній, оточений фібробластами. Коли захисні механізми макроорганізму не в змозі обмежити інфекцію в межах шкіри або підслизового шару, стафілококи можуть проникати в лімфа тичні систему і кровотік. Звичайними ділянками обсіменіння бувають діафіз довгих кісток у дітей, а також легені, нирки, клапани серця, міокард, печінка, селезінка та головний мозок.

Незважаючи на те що ці інфекції зустрічаються в осіб віку, важко вони протікають найчастіше у дітей та людей похилого віку, особливо у страждаючих хронічними захворюваннями. Первинна стафілококова пневмонія зустрічається зазвичай у дітей і рідше у дорослих. Гострий стафілококовий остеомієліт реєструється тільки у дітей, поверхнева стафілококова піодермія - частіше у новонароджених, тоді як абсцедування відбувається в основному у дорослих. У той час як ці приклади дозволяють припустити деяку роль імунної системи в резистентності до стафілококової інфекції, досі не отримано задовільного підтвердження того, що у людини вона супроводжується розвитком ефективного імунітету або що вакцинація може істотно змінити її перебіг. Фактично у 100% дорослих в сироватці визначаються антитіла до стафілококів. Вплив гуморального імунітету на перебіг інфекції і формування захисту проти неї вивчено недостатньо, за винятком ролі нейтралізують антитіл до ексфоліативних токсину і вказівок на захисний ефект антитіл проти токсину-1, що викликає токсичний шок[33;c.78].

Сторонні тіла, наприклад шовний матеріал або протези, істотно впливають на число стафілококів, необхідне для того, щоб викликати експериментальну інфекцію. Лікування в цьому випадку вельми утруднене, якщо не видалити стороннє тіло. Штами епідермального стафілокока мають виражену здатність прилипати до пластикових катетерам і розмножуватися на них, секретуючи захисний гликокаликс, що покриває утворилися колонії. Функція нейтрофілів також змінюється в присутності стороннього тіла; здатність до фагоцитозу і знищенню золотистого стафілокока знижується.

З метою діагностики стафілококових інфекцій було досліджено під мікроскопом мазки гною, забарвлені по Граму, а також виробляють бактеріологічне дослідження аспірованого гною, уражених тканин або звичайно стерильних рідин організму людини. У клінічних матеріалах не завжди виявляється типове скупчення бактерій; вони можуть розташовуватися окремо і у вигляді однакових коротких ланцюжків по три або чотири бактерії. Бактерії у фазі спокою або всередині лейкоцитів можуть бути грамнегативними. Зазвичай визначається велика кількість нейтрофілів, з яких багато містять бактерії, за винятком хворих з вираженою нейтропенією.

За результатами дослідження видно, що в 2013 році всього було досліджено 720 осіб, у яких було виділено 59 ізолятів від різних клінічних матеріалів.

Було виділено 18 штамів стрептококів, серед яких Streptococcus agalactiae (8 ізолятів, 44,4 % штамів), Streptococcus pyogenes (6 ізолятів, 33,3 % штамів) і Streptococcus pneumoniae ( 4 ізоляти, 22,2 % штамів) та 41 штам стафілококів, які були віднесені до Staphylococcus aureus (26 ізолятів, 63,4 % штамів), Staphylococcus epidermidis (9 ізолятів, 22 %штамів) і Staphylococcus saprophyticus (6 ізолятів, 14,6 % штамів).

Виділені штами стрептококів не відрізнялись високою стійкістю до пеніцилінів, найвищий відсоток стійких штамів спостерігався для S. pneumoniae по відношенню до оксациліну - 42,8 %, для штамів S. agalactiae цей показник склав 37,6 %, а для S. pyogenes - 40,1% (рис. 2.1).

Також виділені штами показали досить помірні відсотки стійкості до природних пеніцилінів, зокрема бензилпеніциліну.

Рис.2.1.Виділені штампи стафілококів

Позначення: n - кількість виділених штамів стрептококів.

Найвищий відсоток спостерігався серед штамів S. pneumoniae - 40,8 %, а самий низький у штамів S. agalactiae - 35,7 %. Це досить низькі показники, якщо порівнювати зі штамами стафілококів, але досить високі як для штамів стрептококів, у яких резистентність до -лактамних антибіотиків зумовлена не синтезом -лактамаз, а гіперпродукцією пеніцилінзв'язуючих білків [3]. Внаслідок цього захищені пеніциліни не мають особливої переваги перед незахищеними, що також можна прослідкувати і у нашому дослідженні.

2.2 Особливості стафілококу серед населення Яворівського району

Особливостями розвитку стафілококу серед населення Яворівського району Львіської області є поширення поверхневих інфекцій. Інфекцію волосяних фолікулів, яка виявляється дрібними еритематозними вузликами без залучення в процес навколишніх ділянок шкіри або глибоких тканин, називають фолікулітом. Більш велику і глибоку інфекцію фолікулів або сальних залоз з частковим залученням у процес підшкірних тканин називають фурункулом. Спочатку в ураженому вогнищі з'являються свербіж і незначний біль, потім у ньому посилюється набряклість і еритема, при натисканні на нього або при русі виникає гостра хворобливість. Після мимовільного прориву або хірургічного розтину фурункула болю швидко припиняються[34;c.97].

Фурункули найчастіше утворюються на ділянках тіла, що піддаються мацерації або тертю, при недотриманні правил особистої гігієни, при вуграх або дерматиті. Зазвичай вони локалізуються в області обличчя, шиї, пахвовій западини, на сідницях і в області стегна. Стафілококова інфекція може поширюватися на апокріновие потові залози в пахвовій западині або паховій області (гнійні гідраденіти). При цьому можлива глибока локалізація фурункула, його млявий перебіг і пізній прорив, відзначається схильність до рецидивів і рубцюванню.

Також досить поширеними в районі є стафілококові інфекції в межах товстих, фіброзних, нееластичних шкірних покривів тильного боку шиї і верхньої частини спини супроводжуються утворенням карбункула. Зважаючи відносної товщини і непроникності шкіри патологічний процес поширюється вшир з утворенням дрібних порожнин і зрештою великого щільного хворобливого конгломерату, що складається з численних гнійних, насилу дренуються, осередків. Клінічно карбункул супроводжується лихоманкою, лейкоцитозом, різким болем і прострацією. При цьому часто визначається бактеріємія.

Стафілококи часто осідають на импетигинозная шкірних ділянках, але в більшій частині випадків імпетиго викликають стрептококи групи А. Проте іноді імпетиго буває обумовлено стафілококової інфекцією, і хоча клінічно його важко диференціювати від стрептококкового, для стафілококового імпетиго типові множинні поверхневі, локалізовані елементи на різних стадіях розвитку, вкриті частіше сіркою, а не золотистого кольору скоринкою, температура тіла підвищується рідко.

При лікуванні призначати антибіотики, , не потрібно. Зазвичай буває достатньо місцевих зігріваючих компресів, дотримання правил особистої гігієни та миття бактерицидним милом, діючі компоненти якого осідають на шкірі (гексахлорофен, хлоргексидин, тріклодан). При більш тяжких або рецидивуючих інфекціях ефективним може виявитися прийом діклоксаціллін або клоксациліну (2 г / сут в 4 прийоми) протягом 7-10 днів. Іноді потрібні розріз абсцесу і дренування його порожнини. При вираженої загальної симптоматиці або локалізації інфекції на обличчі або в окологлазничной області протибактерійні препарати слід вводити внутрішньовенно (див. бактеріеміческого форми хвороби)[35;c.41].

2.3 Частота виявлення збудників та кількість зареєстрованих випадків

За даними Санепідемстанції Яворівського району Львівської області на 2013рік було виявлено. За 6 місяців 2013 р. в районі відмічається ріст загальної інфекційної захворюваності на 12,2% в порівнянні з аналогічним періодом минулого року (6606,6 проти 5798,1 на 100 тис. населення району). Зростання показників захворюваності обумовлене збільшенням кількості випадків крапельних інфекцій.

Так, захворюваність крапельними інфекціями зросла на 12,5% (6485,8 проти 5674,3 на 100 тис. населення), зокрема, рівень захворюваності вітряною віспою зріс на 79,6% (549,6 проти 112,2 на 100 тис. населення), захворюваність гострими респіраторними інфекціями - на 7,6% (5933,3 проти 5484,4 на 100 тис. населення). Також, відмічено підвищення захворюваності шкіряно-венерологічними захворюваннями на 21,0% (54,7 проти 43,2 на 100 тис. населення) та гострими кишковими інфекційними захворюваннями на 66,3% (8,6 проти 2,9 на 100 тис. нас.). Зокрема, захворюваність на мікроспорією зросла на 66,5% (17,3 проти 5,8 на 100 тис. нас.) та гонококову інфекцію на 66,3% (8,6 проти 2,9 на 100 тис. нас.). На рівні минулого року залишаються показники захворюваності рота вірусною інфекцією (1 випадок, 2,9 на 100 тис. нас. ). Крім того, на відміну від минулого року, зареєстровано по 1 випадку сифілісу та трихофітії (2,9 на 100 тис. населення) та 2 випадки гастроентероколіту невстановленої етіології (5,8 на 100 тис. нас.).

Разом з тим, відмічено зниження рівня захворюваності краснухою на 87,4% (2,9 проти 23,0 на 100 тис. населення), туберкульозом на 22,2% (40,3 проти 51,8 на 100 тис. населення), педикульозом на 33,2% (17,3 проти 25,9 на 100 тис. населення), коростою на 27,4% (23,0 проти 31,7 на 100 тис. нас.).

На відміну від аналогічного періоду минулого року, в районі не реєструвались випадки захворюваності грипом (46,0 на 100 тис. населення в минулому році), паротитом (8,6 на 100 тис. нас.), дерматофітією (2,9). За червень 2013 р. працівниками Бобровицького ВСП КМУ ГУ ДСЕС проведено перевірку 52 об'єктів нагляду, в тому числі 27 планових перевірок та 25 позапланових. В ході перевірок виявлено 17 порушень санітарного законодавства, накладено 17 штрафів, відсторонено від роботи 12 осіб[36;c.88].

За червень 2013 р. було доставлено та досліджено 145 проб по санітарно-хімічним показникам, в тому числі:

- харчових продуктів - 83, без відхилень;

- води централізованого водопостачання - 43, без відхилень; - води децентралізованого водопостачання - 8, без відхилень;

- грунту - 3, без відхилень;

- повітря - 9, без відхилень.

За червень доставлено та досліджено 573 проби по санітарно- бактеріологічним показникам, в тому числі:

- харчових продуктів - 72, негативні;

- води централізованого водопостачання - 37, негативні;

- води децентралізованого водопостачання - 7, негативні;

- на кишкову групу інфекцій - 60, негативні;

- на стафілокок - 50, негативні;

- на носійство збудників черевного тифу - 17, негативні;

- змивів - 320, позитивних -12.

Серед виявлених випадків поширеним є стафілококовий ожогоподобний шкірний синдром. Цей синдром являє собою генералізований ексфоліативний дерматит, ускладнюючий інфекцію, викликану продукують токсин (ексфоліатін) штамами золотистого стафілокока. Хворіють переважно новонароджені (хвороба Ріттера) і діти віком до 5 років, рідше дорослі. Штами золотистого стафілокока, що викликають ожогоподобний шкірний синдром (ГКС), відносяться частіше до фаговой групі II, тип 71. Захворювання починається з місцевої шкірної інфекції, часто супроводжуваної неспецифічної продромой, подібно вірусному захворюванню. Лихоманка і лейкоцитоз виражені слабо. Скарлатиноподобная висип покриває всі ділянки тіла, рук і ніг, після чого настає лущення шкіри. Хвороба може виявлятися тільки висипом (стафілококова скарлатина) або ж можуть утворюватися великі, в'ялі бульбашки на обмежених ділянках (частіше у дорослих) або поширені. Бульбашки розкриваються, набувають червоний відтінок, шкіра нагадує обпалену. Якщо потерти ділянку практично здорової шкіри, епідерміс зморщується і відшаровується (симптом Нікольського). Золотистий стафілокок зазвичай виділяють з шкіри і з носоглотки. Лікування полягає у введенні антистафілококових антибіотиків та місцевої обробці шкіри. Захворювання зазвичай закінчується одужанням.

У дорослих стафілококовий ОКС поєднується з іншими важкими ожогоподобнимй ураженнями, такими як токсичний епідермальний некроліз (хвороба Лайєлла). До найчастішою причини токсичного епідермального некролізу у дорослих відноситься побічна дія лікарських речовин, синдром можна диференціювати від стафілококового ОКС при вивченні біоптату шкіри. Шкіра при лікарському токсичному епідермальнийнекроліз відшаровується на рівні базального шару, в результаті чого оголюються глибокі тканини, що сприяє розвитку суперінфекції і значної втрати рідини і електролітів. При стафілококової ОКС відшарування відбувається в межах епідермісу. При диференціальної діагностики слід мати на увазі хвороба Кавасакі і синдром токсичного шоку[37;c.13].

Діагностика заснована на клінічних проявах, у тому числі на високій температурі тіла, дифузної еритеми у вигляді сонячного засмаги з лущенням шкіри на долонних і підошовних поверхнях протягом наступних 1-2 тижнів, ортостатическом зниженні артеріального тиску на тлі ознак ураження трьох систем органів або більше. При цьому зазвичай порушується функція шлунково-кишкового тракту (блювота, або діарея), розвивається ниркова або печінкова недостатність, відзначаються гіперемія слизових оболонок, тромбоцитопенія, міалгія, збільшення кількості креатинфосфокінази і дезорієнтація на фоні не зміненої спинномозкової рідини. Відомі випадки більш легкого перебігу цього синдрому.

2.4 Засоби профілактики та лікування

Лікування слід починати з внутрішньовенного введення стійкого до пеніцилінази препарату. Нафциллин (1,5 г кожні 4 год) і оксацилін (2,0 г кожні 4 год) більше кращі, ніж метицилін, оскільки він часто викликає інтерстиціальний нефрит. У перші 48-72 год до цих препаратів нерідко додають гентаміцин (1 мг / кг кожні 8 год при обліку функції нирок), оскільки є дані про його синергізмі з р-лактамовое антибіотиками, які діють на золотистий стафілокок, і про те, що при лікуванні двома препаратами у хворих швидше нормалізується температура тіла і купірується бактеріємія. При інфекції, що викликається мікроорганізмами, які не продукують р-лактамазу, рекомендується внутрішньовенне введення пеніциліну G (4x106 ОД кожні 4 год). Перше покоління цефалоспоринів (цефалотин, цефазолін) також ефективно при інфекціях, що викликаються як пенициллиназоположительными, так і пенициллиназоотрицательными штамами золотистого стафілокока. При вираженій алергії до пеніциліну або при інфекціях, викликаних метіціллінрезістентних штамами стафілокока, призначають ванкоміцин (0,5 г кожні 6 год при постійному спостереженні за рівнем препарату в крові).

Хворих з неускладненій бактериемией можна лікувати протягом 2 тижнів. За ними потрібне ретельне спостереження: при рецидивах призначають те ж лікування, що і при ендокардиті. При залученні в процес правих відділів серця у хворих на наркоманію ефективно внутрішньовенне введення протягом 2 тижнів препаратів з наступним прийомом внутрішньо діклоксаціллін протягом 4 тижнів (1-1,5 г кожні 6 год). При інших видах ендокардиту лікування необхідно проводити протягом 4-6 тижнів (парентерально). Хворих з ендокардитом, обумовленим клапанним протезом, слід лікувати протягом 6 тижнів відповідними препаратами пеніциліну або ванкоміцину в поєднанні з гентаміцином і рифампіцином або без нього. У багатьох випадках потрібне хірургічне втручання[39;c.4].

Таблиця 5. Додаткові варіанти угрупувань протиепідемічних заходів

Група заходів	Заходи
Ті, що вимагають протиепідемічних засобів (препаратів)	Лікування Дератизація Дезінфекція Дезінсекція Імунокорекція Імунопрофілактика Екстрена профілактика
Ті, що не вимагають протиепідемічних засобів (препаратів)	Ізоляція Режимно-обмежувальні Санітарно-ветеринарні Санітарно-гігієнічні
Диспозиційні	Запобігання захворюванням у разі зараження: імунокорекція, імунопрофілактика, екстрена профілактика
Експозиційні	Запобігання зараженням людей: ізоляція і лікування, режимно-обмежувальні, санітарно-ветеринарні, санітарно-гігієнічні, дератизація, дезінфекція, дезінсекція
Профілактичні	Запобігання формуванню епідемічного варіанту збудника
В епідемічних осередках	Запобігання розповсюдженню епідемічного варіанту збудника

З таблиці 5 бачимо, що існує декілька угрупувань протиепідемічних заходів, серед них є : ті, що вимагають протиепідемічних заходів таких як лікування, дезінфекція, імунокорекція та інші; ті, що не вимагають протиепідемічних заходів таких як ізоляція, санітарно -ветеринарні заходи; диспозиційні протиепідемічні заходи та профілактичні заходи.

Таблиця 6. Протиепідемічні заходи щодо інфекційного хворого та заразоносія

Захід	Джерело збудника
	хворий	носій
Виявлення	активне чи пасивне	активне (обстеження планові та за епідемічними показаннями)
Рання діагностика	клінічна, епідеміологічна, лабораторна	епідеміологічна, лабораторна
Ізоляція	а) госпіталізація до інфекційного стаціонару (обов'язкова, за клінічними, за епідемічними показаннями); б) ізоляція в домашніх умовах	а) госпіталізація за епідемічними показаннями; б) ізоляція в домашніх умовах
Лікування	Етіотропне	санація
Лабораторний контроль після лікування	при виписуванні зі стаціонару або після закінчення лікування в домашніх умовах	після санації
Лабораторний контроль для допуску до роботи	декретованих контингентів	декретованих контингентів
Диспансерний нагляд після виписування зі стаціонару (у КІЗі)	згідно з нормативними документами	протягом періоду носійства
Заключний лабораторний контроль	при знятті з диспансерного обліку	при знятті з диспансерного обліку
Переведення на іншу роботу	-	на роботу, яка не пов'язана з епідемічною небезпекою (стосується хронічних носіїв декретованих груп)

Реакція на протибактерійні препарати при стафілококових ендокардітах може бути уповільненою. Гарячковий стан може зберігатися до 2-го тижня лікування. Стійке гарячковий стан або ознаки сепсису свідчать про необхідність пошуку метастатичних абсцесів, при яких потрібно дренування порожнини.

Часто причиною бактеріємії буває епідермальний стафілокок, найчастіше забруднює пристосування для внутрішньовенних вливань. У ракових хворих з нейтропенією його вважають основною причиною бактеріємії при постійній катетеризації центральних судин або її джерелом служить шлунково-кишковий тракт. Якщо при цьому ускладненні лікування не проводиться, у хворих триває гарячковий стан, прогресує сепсис, з'являються множинні абсцеси в легенях і настає смерть.

Епідермальний стафілокок, рідко викликаючи нативний клапанний ендокардит, являє собою найбільш часту причину (40%) ендокардитів при клапанних протезах. У більшій частині випадків захворювання обумовлено проникненням збудника під час операції, причому клінічно воно може проявитися через 1 рік після неї. Інфекція часто гніздиться в області клапанного кільця, хворого в цьому випадку необхідно оперувати. Більше 50% хворих помирають.

Таблиця 7. Інкубаційний період при деяких інфекційних хворобах

Хвороба	Тривалість інкубаційного періоду	Оцінка тривалості
	мінімальна	максимальна	середня
Харчові токсикоінфекції Ботулізм Сальмонельоз Холера	0,5 год 6 год 6 год 12 год	2 доби 5 діб 3 доби 5 діб	1-12 год 18 год 1 доба 1-3 доби	дуже короткий
Шигельоз Чума Сибірка Стафілококові хвороби ГРВІ: грип риновірусна інфекція РС-інфекція парагрип аденовірусні хвороби Менінгококова хвороба Ентеровірусні хвороби Ящур Ротавірусна хвороба Дифтерія Гонококова інфекція Ешерихіоз Скарлатина	1 доба 12 год 12 год 2 год 12 год 1 доба 3 доби 2 доби 4 доби 2 доби 2 доби 2 доби 2 доби 2 доби 1 доба 3 доби 1 доба	7 діб 10 діб 8 діб 7 діб 2 доби 6 діб 6 діб 7 діб 14 діб 10 діб 10 діб 12 діб 7 діб 10 діб 15 діб 6 діб 12 діб	2-3 доби 2-3 доби 2-3 доби 2-4 доби 1 доба 2-3 доби 4-5 діб 5-7 діб 5-7 діб 2-4 доби 3-4 доби 3-4 доби 3-5 діб 3-5 діб 3-5 діб 4-5 діб 3-6 діб	короткий

В таблиці 7 нами розглянуті інкубаційні періоди окремих інфекційних хвород, викликаних стафілококами.

Внаслідок того що коагулазоотріцательних стафілококами часто забруднюються культури крові, диференціювати збудника інфекції буває важко. При отриманні позитивних результатів посівів крові необхідно ретельно перевірити місця постійної катетеризації з повторним посівом крові навіть за відсутності симптомів або при клапанних протезах серця або судинних трансплантатах. При виділенні декількох мікроорганізмів доцільно провести їх видову ідентифікацію, для чого може знадобитися аналіз плазмід. Катетери слід витягти і призвести бактеріологічне дослідження, незважаючи на ефективність лікування при бактеріеміческого формах інфекції, обумовлених катетеризацією, тільки антибіотиками. При внутрішньо-лікарняних інфекцій, спричинених епідермальним стафілококом, звичайно відзначається стійкість до багатьох антибіотиків. Стійкість до метіцікліну гетеротіпічна і її важко попередити. З цієї причини у важких випадках хворого слід лікувати ванкоміцином в дозах, що використовуються при інфекції золотистим стафілококом. При ендокардітах, пов'язаних з клапанним протезом, лікування проводять протягом 6 тижнів ванкоміцином в поєднанні з гентаміцином, рифампіцином або без нього[40;c.7].

У більшості випадків гострий остеомієліт викликає золотистий стафілокок. Найчастіше хворіють діти у віці до 12 років, однак нерідкі випадки захворювання гострим остеомієлітом, особливо хребта, і у дорослих. Приблизно у 50% хворих в анамнезі є вказівки на фурункульоз або поверхневі стафілококові інфекції, попередні остеомієліту. У дітей часта локалізація процесу в діафіза довгих трубчастих кісток обумовлена особливостями його внутрішньоартеріального кровопостачання. У багатьох хворих в анамнезі були відзначені травми в області поразки. Остеомієліт ключиці ускладнюється септичним тромбозом катетерізіровать підключичної вени.

Лікування слід починати з парентерального введення пеніцілліназоустойчівого синтетичного пеніциліну, подібно лікуванню при бактеріємії і ендокардиті, і проводити його протягом 4-6 тижнів. У цих цілях використовують також цефалоспорини та кліндаміцин. При неускладненому остеомієліті дітей протягом перших 2 тижнів лікують внутрішньовенним введенням антибіотиків, а потім протягом 2-4 тижнів їх приймають всередину. Для лікування хворих з алергією до пеніциліну і з інфекцією, викликаної метицилінстійкі мікроорганізмами, може бути використаний ванкоміцин. При некрозах кістки, м'яких тканин і періостальних абсцесах може знадобитися оперативне лікування. На ранніх етапах до його допомоги вдаються при появі неврологічної симптоматики, зумовленої епідуральним абсцесом і компресією спинного мозку, ускладнилася ющими остеомієліт хребта. Активне лікування при гострому остеомієліті знизило частоту хронічного остеомієліту з типовими для нього схильністю до рецидивів і формуванню фістули. Показник лікування при гострому поліомієліті досягає 90%, летальні випадки рідкісні.

Пневмонія. Золотистий стафілокок відповідальний приблизно за 1% всіх випадків бактеріальної пневмонії. Вона зустрічається спорадично за винятком випадків захворювання під час спалахів грипу, коли стафілококова пневмонія реєструється відносно частіше, хоча й не настільки, наскільки пневмококової пневмонія[41;c.12].

Протікати стафілококова пневмонія може бурхливо, незважаючи на адекватне лікування протибактеріальними засобами. Звичайно через 48-72 год після початку лікування поступово починає нормалізуватися температура тіла.

Стафілококову пневмонію слід диференціювати від інших видів пневмоній. Первинну стафілококову пневмонію слід запідозрити, якщо їй передувала грипоподібні інфекція, швидко з'явилися плевральні болю, ціаноз і тяжкість стану не відповідають даним фізикального обстеження. Діагноз підтверджується при виявленні в мокроті (мазок, пофарбований за Грамом) великої кількості нейтрофілів і грампозитивних коків, розташованих усередині лейкоцитів. Зазвичай визначається лейкоцитоз. Стафілококову етіологію слід мати на увазі при проведенні диференціальної діагностики, якщо пневмонія розвивається раптово або непомітно у ослаблених госпіталізованих хворих.

Заходи по боротьбі з спалахами інфекції полягають у швидкому виявленні хворих, службовців її резервуаром. З цією метою проводять бактеріологічне дослідження вмісту ран, виділень з носа і матеріалу, отриманого з області промежини. Проби сечі для посіву слід забирати з допомогою постійного катетера. Ізоляція хворих, у яких отримані позитивні результати посівів, і підвищення вимог до персоналу лікарень з дотримання правил асептики і миття рук зменшують можливість поширення інфекції. Збирання приміщень, в яких знаходяться інфіковані хворі, слід проводити з використанням препаратів фенолового ряду. Рекомендується якомога раніше виписувати інфікованого хворого. Необхідно маркувати медичні карти, а хворого при повторному надходженні у відділення слід ізолювати до отримання негативного результату посівів[42;c.2].

Незважаючи на те що носії мікроорганізмів в носових ходах з числа медичного персоналу лікарень можуть служити джерелом інфекції, її поширення частіше відбувається від осіб з шкірними хворобами (екзема, аллер гические дерматити), легко ускладнюються колонізацією золотистим стафілококом. Їх слід усувати від роботи до тих пір, поки не будуть отримані негативні результати посівів або внаслідок спонтанного вилікування, або в результаті лікування.

Очистити шкіру і порожнину носа у хворих та медичного персоналу можна шляхом миття всього тіла з використанням антисептичного мила, опади якого (гексахлорофен, хлоргексидин або тріклосан) на шкірі пригнічують розвиток мікроорганізмів. Місцеве застосування антибіотиків неефективно. Для припинення носійства антибіотики можна призначати для прийому всередину. Рифампіцин (600 мг / добу протягом 5 днів) з успіхом використовувався окремо або (залежно від чутливості стафілококів) у поєднанні з бактріма, доксицикліном або діклоксаціллін з метою попередження розвитку стійкості до рифампіцину[44;c.10].

Висновки до 2 розділу

Підвищення неспецифічної резистентності організму людини (повноцінне харчування, вітамінотерапія, загартовування). Важливу роль у підвищенні несприйнятливості дітей до стафілококової, особливо кишкової, інфекції відіграє грудне вигодовування.

Актуальною та основною проблемою -- є профілактика стафілококової інфекції в новонароджених. У них ще досі стафілокок є одним із головних збудників інфекції. До профілактики включають імунізацію породіль стафілококовим анатоксином або стафілококовим імуноглобуліном (екстрена профілактика), визначають показник мікробного обсіменіння та наявність стафілокока в молоці породіль і на пелюшках.

Для лікування стафілококових інфекцій застосовують антибіотики, вибір яких визначається чутливістю виділеної культури до певних препаратів. У зв'язку з широким розповсюдженням серед стафілококів множинної антибіотикорезистентності слід призначати комбіновані препарати, що містять блокатори в-лактамази -- оксацилін, метицилін та ін. В останні роки з'явилися метициліностійкі штами. Їх стійкість на відміну від інших штамів не контролюється R-плазмідами, а пояснюється хромосомними мутаціями. Для лікування таких хворих застосовують глікопептиди -- ванкоміцин і тейкопланін. Глікопептиди мають однаковий механізм дії, що порушує другу стадію синтезу клітинної стінки грам-позитивних бактерій -- полімеризацію пептидоглікану. Загибель клітини відбувається в результаті активації гідролітичних ферментів клітинної стінки у відповідь на інгібування синтезу пептидоглікану.

Висновки

Попередня діагностика стафілококів може грунтуватися на бактеріоскопічному вивченні препаратів - мазків, пофарбованих за Грамом. Патогенні стафілококи, крім гроноподібна розташування, характеризуються правильної сферичної формою клітин. Виявлення стафілококів, що знаходяться усередині кліток, дозволяє дати відповідь про наявність стафілококової інфекції. У більшості ж випадків для точного встановлення патогенності виявлених стафілококів потрібно виділити ці мікроорганізми в чистій культурі шляхом посіву досліджуваного матеріалу на щільні живильні середовища. В даний час асортимент диференціальних, елективних і накопичувальних середовищ, запропонованих для виділення патогенних стафілококів, є дуже значним і продовжує розширюватися.

Багато дослідників на основі знання основних біохімічних характеристик і поживних потреб патогенних стафілококів при конструюванні середовищ прагнуть підвищити їх висівання та забезпечити можливість здійснювати їх кількісний облік, отримати надійний спосіб відрізняти потенційно хвороботворні стафілококи від сапрофітів. Вживання рідких накопичувальних середовищ для пер гемолітичну активність стафілококів. При цьому необхідно пам'ятати, що гемолітична здатність, що визначається на чашках з кров'яним агаром, залежить від багатьох факторів - виду крові, її концентрації, наявності в ній антитоксинів, товщини шару середовища, вмісту вуглекислого газу в атмосфері культивування, густоти посіву, присутності і характеру супутньої флори і т. д.

При відборі колоній з кров'яного агару необхідно отвівать як гемолітичні, так і не дають гемолізу, особливо якщо дослідження проводиться на середовищі з людською або кінської кров'ю, а відсутність гемолізу на таких середовищах не дозволяє укласти про відсутність взагалі гемолітичної активності. Тому використання кров'яного агару для первинного посіву доцільно тільки при обстеженні об'єктів, що не містять сторонньої мікрофлори, і бажано додавати в поживне середовище кров кролика або барана.

Якщо ж проводиться дослідження гною відкритих ран або відокремлюваного виразок або свищів, то слід користуватися елективної-диференціальної середовищем для стафілококів - желточно-сольовим агаром (ЖСА) Г. М. Чистовича. Елективної цього середовища забезпечується високим вмістом хлористого натрію, а доданий яєчний жовток дозволяє виявляти лецитовителлазную активність, яка є одним з показників патогенності стафілококів і в силу цього ЖСА більш чітко диференціює патогенних представників, ніж кров'яний агар. Приготування ЖСА нескладно. Заготовляють про запас і стерилізують в автоклаві при 120 ° С "протягом 20 хв поживний агар (МПА або Хоттингера) рН 7,2-7,4, що містить 10% кухонної солі. Перед вживанням сольовий поживний агар розтоплюють, остуджують до 45-50 ° С і додають до нього 20% за обсягом стерильною желточной суспензії (1 жовток курячого яйця на 200 мл фізіологічного розчину). Для кращого емульсірованія бажано мати колби зі скляними бусами. Після ретельного перемішування середовище розливають по 20-25 мл в чашки, які можуть зберігатися в холодильнику протягом кількох днів. Слід виробляти масивний посів досліджуваного матеріалу на чашки з ЖСА, а інкубацію вести протягом 2 діб при 35-37 ° С. Стороння флора різко пригнічується, стафілококи ж на ЖСА виростають практично в чистій культурі. Безпосередньо при перегляді чашок навколо колоній відзначається утворення райдужних віночків і каламутній зони - лецитовителлазная реакція. Такі колонії, не менше двох з кожного посіву, отвівают на скошений м'ясо-пептонний агар для подальшої перевірки виросли культур в реакції плазмо-коагуляції.

Щоб уникнути помилок у визначенні желточной реакції, необхідно мати на увазі, що іноді спостерігається помутніння середовища без райдужного обідка, в цьому випадку проба на лецітовітеллазу вважається негативною. Якщо ж колонії, що виросли на ЖСА, не дають лецитовителлазной реакції, тобто не оточені райдужним віночком, але є ріст стафілококів, то їх теж вважають підозрілими і також отвівают не менше двох з кожного такого посіву на чашки з простим поживним агаром плямами діаметром 5-10 мм. Після добового інкубування при 37 ° С отримані макроколоніі перевіряють в реакції плазмоагглютінаціі, для чого мікробну масу розмішують петлею на склі в краплях цитратної кролячої або людської плазми, розведеної 1: 4. Освіта пластівців враховують протягом 30с-1 хв. При наявності плазмоагглютінаціі такі штами вважають підозрілими і отвівают на скошений агар для подальшого вивчення в коагулазной реакції.