Возрастная динамика изменений морфологического субстрата, обеспечивающего иммунный гомеостаз слизистой оболочки десны в области протезного ложа

Размещено на http://www.allbest.ru/

1

Возрастная динамика изменений морфологического субстрата, обеспечивающий иммунный гомеостаз слизистой оболочки десны в области протезного ложа

протезирование рот слизистая иммунная

Первов Ю.Ю., заведующий кафедрой ортопедической стоматологии ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет Росздрава»

Целью нашего исследования стало патогенетическое обоснование эффективности протезирования и прогнозирование результатов окклюзионной реабилитации пациентов на основе анализа иммунного гомеостаза слизистой оболочки полости рта. В рамках этих исследований нами были изучены качественные и количественные характеристики иммунного гомеостаза слизистой оболочки полости рта в области протезного ложа.

Нами были использованы клинические и иммунногистохимические методы исследования биопсийного материала. Был обследован 181 человек в возрасте от 25 до 85 лет, которым планировалось изготовление пластиночных съемных протезов. У пациентов проводился забор биопсийного материала до начала протезирования. Исследование материала проводилось с использованием маркеров CD68, CD204 и CD163, обладающих высокой специфичностью к клеткам, обеспечивающим иммунный гомеостаз слизистой оболочки полости рта. Вторым иммуногистохимическим методом исследования, используемым в работе - метод на выявление активности гена Ki-67, характеризующий интенсивность процесса регенерации клеток эпителиального пласта.

На основании полученных результатов нами была составлена модель, характеризующая нормальное состояния иммунного гомеостаза протезного поля у практически здоровых пациентов различного возраста.

Выявлена возрастная динамика изменения морфологического субстракта, поддерживающего иммунный гомеостаз слизистой оболочки полости рта.

Установлена корреляционная зависимость митотического индекса с количественным составом субстракта, обеспечивающий иммунный гомеостаз СОПР.

Проявляемый клинически воспалительный процесс слизистой оболочки полости рта характеризуется изменением количественного соотношения элементов, поддерживающих иммунный гомеостаз данной области, что вызывает в свою очередь значительное повышение митотической активности кератиноцитов в рамках своей возрастной группы.

Ключевые слова:

иммунный гомеостаз, слизистая оболочка протезного ложа, иммунофенотипирование, протезирование зубное, дендритные клетки.

Возрастная динамика изменений морфологического субстрата, обеспечивающий иммунный гомеостаз слизистой оболочки десны в области протезного ложа

Известно, что слизистой оболочка является местом реализации пограничной иммунной защиты организма. Поэтому изучение межклеточных контактов иммунокомпетентных клеток, особенностей местного (локального) иммунитета, ассоциированного со слизистыми оболочками, а также их влияние на процессы пролиферации и апоптоза эпителиальных клеток приобретает особую актуальность. В доступной литературе нами не встречено системных данных о влиянии клеточных элементов собственной иммунной системы слизистой оболочки десны на состояние пролиферативных процессов в кератиноцитах в условиях протезирования стоматологических больных различных возрастных групп.

Мнение авторов по поводу механического и контактного влияния протезов на протезное ложе в зависимости от их химического состава не однозначно. Одни придерживаются точки зрения, что это влияние отсутствует, другие считают развитие воспалительных изменений слизистой оболочки протезного ложа следствием патологии других органов или механической травмой элементами протезов. Ряд работ содержит убедительные доказательства, что любые протезы вызывают патологические изменения слизистой оболочки протезного ложа. Например, установлено, что воспалительная реакция со стороны слизистой на протезы у женщин отмечается чаще, чем у мужчин, особенно в возрасте старше 50 лет.

Целью нашего исследования стало патогенетическое обоснование эффективности протезирования и прогнозирование результатов окклюзионной реабилитации пациентов на основе анализа иммунного гомеостаза слизистой оболочки полости рта.

Задачей нашего исследования стало определения иммунного гомеостаза слизистых оболочек полости рта и его значение для выбора зубных протезов при протезировании.

В рамках этих исследований нами были изучены качественные и количественные характеристики иммунного гомеостаза слизистой оболочки полости рта в области протезного ложа.

В данной области имеются определенные успехи, особенно в разработке повышения качества и эффективного ортопедического стоматологического лечения на основе учета иммунного гомеостаза слизистых оболочек полости рта, контактирующих с различными конструкциями и материалами зубных протезов. При этом установлено, что существуют способы определения биосовместимости организма с инородными материалами до протезирования и после протезирования пациента различными методами - клиническими, визуальными, иммунногистохимическими, рентгенофлюоресцентного анализа костной ткани, биоэлектромагнитной реактивности (БЭМР) [ ]. Так же, проводя анализ иммунного гомеостаза СОПР, очень широко исследуются специфические и неспецифические «факторы защиты иммунитета» по следующим параметрам: реакции бластной трансформации, количеству Ig в сыворотке крови, аутоаллергической повреждаемости нейтрофилов (АПН), реакции агломерации лейкоцитов (РАЛ), реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ), фагоцитарному индексу (ФИ), активности лизоцима сывороточного, сывороточному титру комплементарному, миграционной активности лейкоцитов (МАЛ), общему и фракционному белку сыворотки и т.д. [1].

Тем не менее, все существующие методы не достаточно достоверны и могут лишь гипотетически или опосредованно предполагать наличие изменений в морфологическом субстрате, формирующем иммунный статус слизистой оболочки полости рта в области протезного ложа.

К клеткам, обеспечивающим иммунный гомеостаз СОПР относятся макрофаги, тучные клетки, дендритные клетки, клетки Лангерганса, интраэпителиальные лимфоциты, каждая из которых выполняет ряд функций и при этом обеспечивают поддержание постоянства внутренней среды организма в целом.

Дендритные клетки - это гетерогенная популяция антигенпрезентирующих клеток костно-мозгового происхождения.

Основной функцией дендритных клеток является презентация антигенов Т-клеткам. Дендритные клетки также выполняют важные иммунорегуляторные функции, такие как контроль за дифференцировкой Т-лимфоцитов, регуляция активации и супрессии иммунного ответа. Важной особенностью дендритных клеток является способность захватывать из окружающей среды различные антигены при помощи фагоцитоза, пиноцитоза и рецептор-опосредованного эндоцитоза. Больше всего дендритных клеток находится в тканях, которые соприкасаются с внешней средой, например в толще эпителиального слоя слизистой оболочки кишечника, в подслизистой респираторного, желудочно-кишечного и урогенитального трактов.

Дендритные клетки поглощают антигены, процессируют и представляют на своей поверхности в комплексе с МНС I или МНС II классов. Только в таком виде Т-клетки способны распознать антиген и вслед за этим активироваться и развить иммунный ответ. В зависимости от типа патогена дендритные клетки способны направлять дифференцировку наивных Т-хелперов (ThO) в сторону Т-хелперов 1 типа, Т-хелперов -2 типа, регуляторных Т-клеток или же Т-хелперов.

Так, например, тучные клетки не являются иммунологически компетентными клетками, однако в осуществлении аллергических реакций им косвенно принадлежит существенная роль. Возникают тучные клетки гомопластически, предполагают их гетеропластическое происхождение из лейкоцитов, макрофагов и др. Этих клеток много в матке, тимусе, языке, желудочно-кишечном тракте, по ходу мелких кровеносных и лимфатических сосудов. Важнейшее свойство тучных клеток - высвобождение активных веществ, в том числе гистамина, при соединении антиген - антитело. Тучные клетки играют важнейшую роль в развитии острого аллергического приступа. Выделяя при дегрануляции гистамин, они являются непосредственной причиной местного расширения сосудов, отека, зуда, констрикции гладких мышц, гипотонии и коллапса, наблюдаемых в тяжелых случаях анафилаксии. Введение препаратов, уменьшающих количество тучных клеток, могло полностью ингибировать развитие аллергической реакции. Высвобождение гистамина из тучных клеток происходит в результате сложной цепи ферментативных процессов, так как оно может предотвращаться ингибиторами ферментов.

Роль макрофагов в иммунитете исключительно важна - они обеспечивают фагоцитоз, переработку и представление антигена Т-клеткам. Макрофаги вырабатывают ферменты, некоторые белки сыворотки, кислородные радикалы, простагландины и лейкотриены, цитокины ( интерлейкины, фактор некроза опухолей и другие). Макрофаги секретируют лизоцим, нейтральные протеазы, кислые гидролазы, аргиназу, многие компоненты комплемента, ингибиторы ферментов ( антиактиватор плазминогена , альфа2-макроглобулин ), транспортные белки ( трансферрин , фибронектин , транскобаламин II ), нуклеозиды и цитокины ( ФНО альфа , ИЛ-1 , ИЛ-8 , ИЛ-12 ). ИЛ-1 выполняет много важных функций: воздействуя на гипоталамус, вызывает лихорадку ; стимулирует выход нейтрофилов из костного мозга; активирует лимфоциты и нейтрофилы . ФНОальфа (называемый также кахектином ) - это пироген . Во многом он дублирует действие ИЛ-1, но кроме того, играет важную роль в патогенезе септического шока , вызванного грамотрицательными бактериями. Под влиянием ФНОальфа резко увеличивается образование макрофагами и нейтрофилами перекиси водорода и других свободных радикалов . При хроническом воспалении ФНОальфа активирует катаболические процессы и тем самым способствует развитию кахексии - симптома многих хронических заболеваний.

Макрофаги продуцируют также активные формы кислорода, производные арахидоновой кислоты, фактор активации тромбоцитов, хемокины, колониестимулирующие факторы, факторы, стимулирующие пролиферацию фибробластов и разрастание мелких сосудов. Макрофаги регулируют пролиферацию лимфоцитов, разрушают опухолевые клетки, вирусы и некоторых бактерий (Mycobacterium tuberculosis , Listeria monocytogenes ). В уничтожении внутриклеточных паразитов макрофагам принадлежит ключевая роль. Для этого они сливаются в гигантские клетки, которые под влиянием провоспалительных цитокинов объединяются в гранулемы. Образование гигантских клеток, возможно, регулирует интерферон гамма.

Основная функция макрофагов сводится к борьбе с теми бактериями, вирусами и простейшими, которые могут существовать внутри клетки-хозяина, при помощи мощных бактерицидных механизмов, которыми обладают макрофаги.

Таким образом, макрофаги являются одним из орудий врожденного иммунитета. Кроме того макрофаги наряду с В- и Т-лимфоцитами участвуют и в приобретенном иммунном ответе, являясь "дополнительным" типом клеток иммунного ответа: макрофаги являются фагоцитирующими клетками, чья функция - "проглатывание" иммунногенов и процессирование их для представления Т-лимфоцитам в форме, пригодной для иммунного ответа

И это далеко не полный перечень «обязанностей» клеток, представленных в СОПР и обеспечивающих поддержание иммунного гомеостаза на местном уровне. Безусловно, все клинические проявления в полости рта являются результатом их функционального и своевременного взаимодействия, что несомненно оказывает влияние и реализуется через регуляцию пролиферативных процессов в кератиноцитах слизистой оболочки.

Все это дало нам основание продолжать работу в данном направлении. Нами были использованы клинические и иммунногистохимические методы исследования. Особенно значимым, по нашему мнению, явился метод иммунного фенотипирования.

В целом, иммуногистохимия - это метод морфологической диагностики, в основе которого лежит визуализация и оценка с помощью микроскопа результатов реакции антиген-антитело в срезах биопсированной ткани. В качестве антигена выступают компоненты клеточных структур или межклеточного вещества ткани. Антитела получают из сыворотки крови животных, иммунизированных интересующим антигеном, или от культуры ткани гибридомы, которую создают слиянием "бессмертных" клеток плазмоцитарной опухоли (миеломы) и активированных интересующим антигеном В-лимфоцитов. Уникальность последнего метода состоит в том, что все клетки гибридомы являются потомками одной единственной клетки и поэтому синтезируют абсолютно идентичные молекулы антител. Такие антитела называют моноклональными, в отличие от поликлональных, получаемых иммунизацией животных.

Впервые, A. Coons с соавт. в 1941 году предложили способ окрашивания клеточных и тканевых компонентов с помощью специфических антител для микроскопического исследования. Антитела были мечены флюоресцирующей краской, что позволяло обнаружить комплекс тканевого антигена и диагностического антитела в гистологических срезах с помощью люминисцентного микроскопа. Следующий шаг в развитии иммуногистохимии был связан с разработкой антител, меченных не флюорохромами, а ферментами. Для обнаружения места связывания меченных ферментом антител применяют субстрат, в котором под воздействием ферментных меток образуются окрашенные продукты. Ферментные метки позволяют получить постоянные гистологические препараты, которые могут длительно храниться, и в которых результаты иммуногистохимической реакции точнее привязаны к структуре тканей. Принципиальным отличием иммуногистохимии от других методов иммунологической диагностики, использующих реакцию антиген-антитело, является структурная специфичность исследования.

Именно на реакции антиген-антитело основан метод иммунного фенотипирования клеток, широко применяемый в медицине. Иммунофенотипирование клеток это определение совокупности поверхностных маркёров и, как следствие, принадлежности клеток к той или иной популяции. Иммунофенотипирование используется для определения специфических типов клеток в биологических образцах тканей. К антителам, которые реагируют со специфическими антигенами клеток, присоединена особая флуоресцентная метка. Эту метку можно обнаружить с помощью специальных приборов - проточных цитофлюориметров или люминесцентных микроскопов.

Как известно, например, лейкоциты экспрессируют особые, характерные для каждой субпопуляции поверхностные молекулы, которые могут служить маркерами (метками). Разработана систематизированная номенклатура маркерных молекул; в ней группы моноклональных антител, каждая их которых специфически связывается с определенной маркерной молекулой, обозначены символом CD (Cluster Designation). Поскольку набор антигенов клеточной поверхности лимфоцитов зависит не только от типа и стадии дифференцировки, но и от их функционального состояния, с помощью моноклональных антител можно не только выявлять разные субпопуляции клеток, но и отличать покоящиеся клетки от активированных.

В настоящее время иммунофенотипирование клеток крови и костного мозга с применением метода проточной цитометрии является "золотым стандартом" в диагностике иммунодефицитов, лимфопролиферативных, аутоиммунных и инфекционных заболеваний.

Достаточно широко в повседневной медицинской практики для оценки иммунного статуса изучаются образцы крови с использованием маркеров CD3, CD4, CD8, CD19,CD16,CD56, CD25. И лишь в немногих лабораториях мира, в научных целях, используются маркеры CD68, CD204 и CD163 обладающие высокой специфичностью, которые и были использованы в нашей работе.

Нами было обследовано 181 человек в возрасте от 25до 85 лет, которым планировалось изготовление пластиночных съемных протезов. У пациентов проводился забор биопсийного материала до начала протезирования. Для исследования брали участки слизистой оболочки десны размером 1 1мм, иссекаемые при удалении зубов либо их корней под проводниковой анестезией по строгим медицинским показаниям с целью санации полости рта. Поскольку показания для забора биоптатов ограничены, забор материала производили только после предварительной беседы с пациентами и с их письменного согласия. Забор материала производили приблизительно в одно время, приблизительно в 10 часов утра.

Идентификация иммунокомпетентных клеток проводилась по одинаковой схеме, несмотря на различную локализацию антигена в клеточных структурах: мембраны, лизосомы, ядра, комплекс Гольджи.

С целью определения фенотипа иммунокомпетентных клеток методом иммунной гистохимии биоптаты фиксировали в 10% формалине на фосфатном буфере рН 6,8-7,2 в течение 24 часов. Затем промывали в проточной воде в течение 2-х часов и обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации в течение 1часа в каждой порции спирта. В спирте 96 градусов выдерживали в течение 1, 2-х, 1 часа и 4-х часов, а затем помещали в абсолютный спирт 5 раз по 30 минут и оставляли в последней порции абсолютного спирта на ночь. После этого материал погружали в смесь абсолютного спирта и ксилола в соотношении 1:1 на 0,5 часа, а затем проводили в 3 сменах ксилола в термостате при 37 градусах по 0,5 часа в каждой. Затем использовали смесь ксилол/парафин (1:1) при 56 градусах по 20 минут в 2-х порциях, а затем в 2-х порциях парафина при 56 градусах в течение 1 часа в обеих порциях. После этого производили заливку. Парафиновые блоки выдерживали в течение суток в термостате при температуре 37 градусов, а затем приготавливали срезы. Срезы и вся дальнейшая обработка материала (депарафинирование и обезвоживание) производились на автоматизированной аппаратуре лаборатории патоморфологии Медицинского университета Ниигаты (Япония), дающей высокую чувствительность к маркировке, En Vision -системе. С помощью моноклональных антител (МКА) клон КР1, код № М 0814, лот 119, выявляли макрофаги по маркёру CD68 (высокогликозилированный трансмембранный гликопротеин, который локализуется в лизосомах). Молекулярный клон CD68 показал, что LGP (семейство лизосомальных гликопротеинов) с плазматическими мембранными белками играют роль в лизосомальных трафиках и эндоцитзе, включая лизосомальные ассоциации мембранных протеинов-1 и 2 (LAMP-1 и LAMP-2). Для маркировки CD163 использовали клон 10 D6, класс иммуноглобулинов igG1.

Демаскировка антигенных детерминант проводилась в стеклянном контейнере, заполненном восстанавливающим раствором и созданием условий водяной бани в течение 1 часа. Часть препаратов обработана с помощью микроволнового излучения, которое даёт лучший демаскировочный эффект, в течение получаса. Использовали для демаскировки антигенов 10 ммоль/л цитратный буфер, рН 6,0 или DАКО TRS (Target retrieval solution, сode № S 1700) Остывшие препараты промывали в дистиллированной воде. Использовали антитела в разведении 1:50 и 1:100. Окрашивание коричневого цвета свидетельствовало о положительной реакции.

Фиксация и проводка материала: - фиксация в 10% забуференном формалине в течение суток; - промывка в проточной воде - 3 часа; - этанол 96 градусов-1 час; - этанол 96 градусов-2 часа; - этанол 96 градусов - 1 час; - три смены этанола по 0,5 часа; - Абсолютный этанол - на ночь; - Смесь абсолютный этанол/ксилол-(1:1) - 30минут; - три смены ксилола при 37 градусах - по 30 минут; - смесь ксилол/парафин (1:1) при 56 градусах 30 минут; - парафин-1 при 56 градусах - 1 час; - парафин- 2 при 56 градусах - 1 час; Заливка.

Депарафинирование и обезвоживание препаратов: - ксилол - 2 смены по 5 минут; -этанол абсолютный - 2 смены по 5 минут; - этанол 96 градусов - две смены по 3 минуты; - этанол 70 градусов - 3 минуты; - ополаскиваем в дистиллированной воде; - помещаем в фосфатно-солевой буфер (ТБС).

Маркировка иммуноцитов:

Демаскировку антигенов и усиление иммуногистохимической маркировки антигенов проводили по методу (HIAR) с использованием водяной бани и ТRS (Target retrieval solution фирмы Dako, код S 1700) в течение 2-х часов; если по протоколу HIAR проводили с использованием микроволновой печи, то демаскировка антигенов проводилась 2 раза по 5 минут. Открывание антигенов, индуциованное HIAR, даёт хорошие результаты даже в том случае, если антиген после фиксации и заливки в парафин вообще не выявляется, что связано с энергозависимым разрушением мостиков между белками, которые образовались в процессе фиксации в формалине.

- промывка в дистиллированной воде;

- помещаем срезы в ТБС; - помещаем стёкла в перекись водорода на 15 минут;

- промывка в ТБС; раскапать блокирующий реагент на 5 минут во влажной камере;

- раскапать МКА (моноклональные антитела) на 45 минут;

- промыть в 3-х порциях ТБС;

- раскапать связывающие антитела - 30 минут;

- промыть в 3-х сменах ТБС;

- раскапать коньюгированный с пероксидазой стрептавидин- 30 минут;

-промыть в 3-х сменах ТБС;

- нанести ДАБ на срезы от 10 до 20минут под визуальным контролем;

- промыть в дистиллированной воде;

- докрасить гематоксилином ядра;

- заключить в бальзам.

Подсчёт клеток производили в 100 полях зрения в 60 срезах. При этом подсчитывали общее количество иммуноцитов в поле зрения и анализировали степень их окрашивания.

Фон и неспецифическое окрашивание исключали, строго соблюдая условия окрашивания - температуру, рН, время. Для блокирования неспецифического окрашивания срезы в течение 20 минут инкубировали с неиммунной сывороткой, а уже затем инкубировали с первичными антителами. Для контроля и исключения артефактов при выполнении исследований, часть препаратов обрабатывали дважды только неиммунной сывороткой

Табл №1.

Характеристика моноклональных антител фирмы Dako (Denmark), использованных для выявления популяций и субпопуляций клеток

Вторым иммуногистохимическим методом исследования, используемым в нашей работе стал метод на выявление активности гена Ki-67

Состояние СОПР, ее тканевой гомеостаз определяется балансом между вновь образующими и существующими клетками. Детерминирующим фактором в процессе размножения клеток является вступление их в фазу синтеза ДНК. Доказано, что наиболее адекватное и точное представление о процессе синтеза ДНК дает метод иммунной гистохимии на выявление активности гена Кi-67, свидетельствующего о необратимом вступлении клетки в митоз. Обновление эпителиального пласта происходит постоянно (полностью смена происходит за 80 дней) - и этот показатель как раз и характеризуется так называемым митотическим индексом - определяемым по соотношению клеток не делящихся и клеток находящихся в состоянии митоза. В норме этот показатель зависит от возраста и имеет среднее значение равное приблизительно 5-7

Парафиновые срезы толщиной 5 мкм монтировали на стекла, предварительно обработанные в течение 5 минут 0,01% раствором поли-л-лизина (Poly-l-Lizine solution 0/01%, Sigma USA) и высушенные в термостате при 56 С? в течение часа. После стандартной процедуры депарафинирования в толуолах и спиртах, срезы для восстановления антигенной структуры, подвергали термической обработке в специальном растворе (Target Retrieval Solution, DAKO, Denmark) на водяной бане при температуре 95-97С? в течение 30 минут. Затем стекла охлаждали до комнатной температуры, промывали 5 минут 3% раствором перекиси водорода для подавления эндогенной пероксидазы, после чего промывали в 3-х сменах 0,02 М фосфатного буфера рН 7,5 по 5 минут в каждой. После этого наносили первичные антитела к белку Ki-67 (DAKO, Denmark), инкубировали в течение 30 минут во влажной камере в термостате при 37С^о, промывали в 3-х сменах 0,02 М фосфатного буфера рН 7,5 по 5 минут в каждой. Наносили стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (Streptavidin Peroxidase Conjugated, DAKO, Denmark). Интенсивность окрашивания контролировали под микроскопом (инкубировали с ДАБом в течение 3-5 минут). После появления коричневого окрашивания ядер срезы промывали в дистиллированной воде 5 минут, докрашивали гематоксилином, заключали в бальзам. В результате обработки препаратов выявляются ядра пролиферирующих клеток, находящихся в S-периоде, когда наблюдается максимум синтеза белка гена Ki-67, коррелирующего с концентрацией ДНК.

Именно, сравнительный анализ данных полученных клиническими и иммуногистохимическими методами в совокупности с современным представлением о морфологическом субстракте иммунного гомеостаза позволил нам обосновать представленные ниже выводы.

На основании полученных результатов нами была составлена модель, характеризующая нормальное состояния иммунного гомеостаза протезного поля у практически здоровых пациентов различного возраста. Полученные данные предоставлены в таблицах 1, 2

Таблица №2

Количественная характеристика клеточного состава слизистой оболочки полости рта в области протезного ложа у практически здоровых людей разных возрастных групп.

Диаграмма №1

Количественная характеристика клеточного состава слизистой оболочки полости рта в области протезного ложа у практически здоровых людей разных возрастных групп

Также объектами наших исследований стали материалы полученные у пациентов с клиническими симптомами хронического гингивита катаральной формы, средней степени тяжести.

Табл №2

Количественная характеристика клеточного состава слизистой оболочки полости рта в области протезного ложа у людей разных возрастных групп с клиническими симптомами катарального гингивита средней степени тяжести

Характеризуя полученные результаты видим значительное количественное увеличение активированных макрофагов, тучных клеток, клеток Лангерганса. При этом наблюдается уменьшение или такие же количественные значения содержания предшественников дендритных клеток, увеличение интраэпителиальных лимфоцитов. На фоне данных изменений это характеризуется значительным увеличением митотического индекса (определяемым по соотношению клеток не делящихся и клеток находящихся в состоянии митоза)

Анализируя полученные данные можно четко сказать, что в норме имеется зависимость между количественным составом клеток обеспечивающих иммунный гомеостаз слизистой оболочки полости рта, регенераторным потенциалом эпителиоцитов слизистой оболочки десны и возрастом пациентов проходивших обследование. Прослеживается четкая коррелятивная связь между морфологическим субстратом, поддерживающий иммунный гомеостаз СОПР и регенераторной активностью кератиноцитов СОД.

Таким образом из вышеуказанного можно сделать следующие выводы:

Имеется возрастная динамика изменения морфологического субстракта, поддерживающего иммунный гомеостаз слизистой оболочки полости рта.

Прослеживается корреляционная зависимость митотического индекса (МИ) с количественным составом субстракта, обеспечивающий иммунный гомеостаз СОПР.

Наличие видимого воспалительного процесса слизистой оболочки полости рта обусловлено изменением количественного соотношения элементов, поддерживающих иммунный гомеостаз данной области, что вызывает в свою очередь значительное повышение митотической активности кератиноцитов в рамках своей возрастной группы.

Обращает на себя внимание различия в количественном составе КЛ при видимом «клиническом здоровье» - видимо будет разница при процессе адаптации к частичным съемным протезам на видимом клиническом уровне.

Добавить 2-3 фотографии (иммуногистохимия).

Современная ортопедическая стоматология (№11, апрель 2009) Амираев У.А.

Состояние иммунитета у пациентов с непереносимостью к зубным протезам из разнородных сплавов металла. (Кыргызская гос.мед.академия. г. Бишкек)

Исследовались специфические факторы защиты иммунитета по следующим параметрам:

1. реакция бластной трансформации.

2. по кол-ву Ig в сыворотке крови.

3. аутоаллергическая повреждаемость нейтрофилов (АПН)

4. реакция агломерации лейкоцитов (РАЛ)

5. реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ)

Для изучения неспецефических факторов иммунной защиты использовали параметры:

1.фагоцитарный индекс (ФИ)

2. активность лизоцима сывороточного.

3.сывороточный титр комплементарный

4.миграционная активность лейкоцитов (МАЛ)

5. Общий и фракционный белок сыворотки.

Тучные клетки

Современная физиология располагает значительными фактическими данными, отражающими разные стороны адаптации организма к действию экстремальных факторов [Селье Г, 1960, Юшков и соавт., 1999]. Достаточно хорошо исследована роль нервной системы, накоплены обширные данные, касающиеся эндокринной регуляции адаптивных реакций, в последние годы широко обсуждается роль иммунной системы в этих процессах [Струков А.И., 1981, Фрейдлин И.С., 2001]. Однако обращает на себя внимание чрезвычайная неравномерность в исследованиях касающихся иммунологических механизмов повышения резистентности организма к неблагоприятным воздействиям. Дана достаточно детальная характеристика роли различных типов лимфоидных клеток в регуляции регенерации тканей и метаболических процессов [Бабаева А.Г., 1995, Данилова И.Г., 2006]. Обсуждается значение системы фагоцитирующих мононуклеаров для этих процессов. В тоже время, практически совершенно не исследованы тучные клетки, несмотря на то, что уже Г.Селье [H. Selye, 1966] отметил их участие в формировании общего адаптационного синдрома, а клиническая практика свидетельствует о повышении реактивности и снижении резистентности организма при аллергических реакциях немедленного типа, в которых мастоциты играют центральную роль.

Лишь в последние годы тучные клетки все больше стали привлекать внимание исследователей. Это обусловлено тем, что этот тип клеток широко представлен практически во всех органах и тканях, они участвуют во многих физиологических реакциях, выделяя разнообразные биологически активные вещества.

Тучные клетки также не являются иммунологически компетентными клетками, однако в осуществлении аллергических реакций им косвенно принадлежит существенная роль. Возникают тучные клетки гомопластически, предполагают их гетеропластическое происхождение из лейкоцитов, макрофагов и др. Этих клеток много в матке, тимусе, языке, желудочно-кишечном тракте, по ходу мелких кровеносных и лимфатических сосудов. Данные клетки овальные или неправильной формы, размеры 22X3,5--14 ц.. Имеют небольшое овальное ядро, богатое хроматином. В цитоплазме содержатся гранулы, метахроматически окрашивающиеся анилиновыми красками. Тучные клетки -- один из главных резервуаров гистамина. В одной тучной клетке собаки находится 7 ммг (микромикрограммов) гистамина. При уменьшении количества тучных клеток снижается и содержание гистамина и, наоборот, в тучноклеточных опухолях его очень много. Кроме гистамина, эти клетки содержат гепарин, серотонин, 5-окситриптамин, ферменты и т. д. Важнейшее свойство тучных клеток -- высвобождение активных веществ, в том числе гистамина, при соединении антиген -- антитело. Отсюда ясна их роль в развитии аллергических реакций. По всей видимости, в сыворотке животных с состоянием гиперчувствительности находятся антитела, сенсибилизирующие тучные клетки и соединяющиеся с ними. Их удалось выявить при иммунизации альбуминами и глобулинами. Пассивная сенсибилизация тучных клеток этими и другими различными антителами и добавление соответствующих антигенов вызывают дегрануляцию клеток и. высвобождение гистамина. У сенсибилизированных животных антитела тесно связаны с плазматической оболочкой тучных клеток, поскольку многократное отмывание не снимает с последних способности дегранулироваться и выделять гистамин при контакте с антигеном.

Тучные клетки играют важнейшую роль в развитии острого аллергического приступа. Выделяя при дегрануляции гистамин, они являются непосредственной причиной местного расширения сосудов, отека, зуда, констрикции гладких мышц, гипотонии и коллапса, наблюдаемых в тяжелых случаях анафилаксии. Введение препаратов, уменьшающих количество тучных клеток, могло полностью ингибировать развитие аллергической реакции. Высвобождение гистамина из тучных клеток происходит в результате сложной цепи ферментативных процессов, так как оно может предотвращаться ингибиторами ферментов. После выделения гистамина нужен весьма длительный срок для его восстановления. Например, период накопления половины количества гистамина в тучных клетках приблизительно равен 50 дням.

Наконец, при иммунизации некоторыми антигенами обнаружена в регионарных лимфоузлах пролиферация тучных клеток. Некоторые исследователи сообщают о большой роли тучных клеток в возникновении язвенного колита и паразитарных заболеваний. Описано появление тучных клеток, содержащих антиген, спустя длительное время после иммунизации

Литература

1 Амираев У.А Состояние иммунитета у пациентов с непереносимостью к зубным протезам из разнородных сплавов металла // Современная ортопедическая стоматология. - 2009. - №11. - С.43-45

Размещено на Allbest.ru