Анализ СО2-экстрактов из растений и гранул "редисол" методами хроматографии и производной спектрофотометрии

Размещено на http://www.allbest.ru

Пятигорская государственная фармакадемия

Анализ СО2 - экстрактов из растений и гранул «редисол» методами хроматографии и производной спектрофотометрии

Арчинова Т.Ю., Лукашова Л.А., Биляч Я.И.

Обнаружение и количественное содержание флавоноидов, кумаринов, аминокислот, витаминов, терпеноидов и др. БАВ в сложных лекарственных формах сопряжено с большими трудностями. Поэтому целью настоящей работы явилась разработка оптимальных методик идентификации и количественного определения суммы флавоноидов, полисахаридов, аминокислот в гранулах "Редисол" (смесь порошков девясила, солодки, расторопши), а также суммы кумаринов, каротиноидов, хлорофиллов, терпеноидов, в СО2 - экстрактах тысячелистника и лавра.

Для разделения и идентификации флавоноидов и аминокислот применен метод ТСХ. В качестве системы растворителей использовалась смесь н-бутанола - ледяной уксусной кислоты - воды (4:1:2). Чтобы обнаружить кумарины, оксикоричные кислоты, каротиноиды, хлорофиллы, терпеноиды в СО2-экстрактах тысячелистника и лавра была использована система растворителей: гексан - этилацетат (17:3). В результате обнаружены: кумарин (Rf=0,52), цинеол (Rf=0,25),б - и в - пинены (Rf=0,62), в - каротин (Rf=0,98), хлорофилл В (Rf=0,04), рутин (Rf=0,5), кверцетин (Rf=0,82), глютаминовая кислота (Rf=0,31), аспарагин (Rf=0,16), триптофан (Rf=0,63), метионин (Rf=0,39).

Так как в структуре флавоноидов и кумаринов содержатся хромофорные и ауксохромные группы, то логичным является применение спектрофотометрического метода для их количественного определения. Однако, в спектрах спиртового извлечения из гранул "Редисол" и хлороформных растворов СО2 - экстрактов тысячелистника и лавра наблюдается сильное наложение полос поглощения, особенно в УФ-области. Проблема количественного определения флавоноидов и кумариновбыла решена путем использования производной и дифференциальной cпектрофотометрии.

Сумму флавоноидов в гранулах "Редисол" определяли дифференциальным спектрофотометрическим методом, используя реакцию с раствором алюминия хлорида в уксусно - кислой среде [1,2] по методике: точную массу растертых гранул (около 2г) экстрагируют 70% спиртом этиловым. Экстракты объединяют в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят 70% спиртом до метки (раствор А). В мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл раствора А, 0,1 мл разведенной уксусной кислоты и доводят объем раствора этанолом до метки (раствор сравнения).

В мерную колбу вместимостью 25мл помещают 2 мл раствора А, 10 мл этанола, 0,1 мл разведенной уксусной кислоты, 2 мл 2% спиртового раствора алюминия хлорида, доводят этанолом до метки и оставляют на 40 минут (анализируемый раствор). Оптическую плотность анализируемого раствора измеряют относительно раствора сравнения при лmax=405 нм с помощью спектрофотометра. Проводят семь параллельных измерений. Результаты приведены в таблице.

Для количественного определения суммы кумаринов в присутствии каротиноидов, хлорофиллов и других поглощающих БАВ был применен метод расчета ортогонального комбинированного полинома Чебышева.

В литературе приведены различные варианты расчета комбинированных полиномов с использованием цифровых фильтров и коэффициентов 1, 2, 3 и 4 производных [3 - 5].

С целью расчета комбинированного полинома кумарина были измерены спектры поглощения 0,001% хлороформных растворов кумарина (лmax=274 нм; Е1%1см = 770), в-каротина (лmax=268 нм; Е1%1см = 410), хлорофилла В (лmax=270 нм; Е1%1см =420). Полученные результаты позволили нам установить оптимальную область определения (л: 266; 270; 274; 278 и 282 нм) и использовать для расчетов пять значений Е1%1см для всех трех веществ.

Далее были рассчитаны рабочие полиномы в - каротина, хлорофилла В, коэффициенты комбинированного полинома и комбинированный полином кумарина стандартного образца (Вст = -1,3467).

Сумму кумаринов в СО2 - экстрактах тысячелистника и лавра благородного определяли по методике: точную массу около 0,5 г СО2-экстракта тысячелистника или около 0,1 г СО2-экстракта лавра помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в хлороформе и доводят хлороформом до метки (исходные растворы). Затем путем разведения хлороформом готовят анализируемые растворы (~0,08% тысячелистника и ~0,016% лавра) и измеряют их оптическую плотность относительно растворителя при длинах волн 266, 270, 274, 278 и 282 нм. Проводят семь параллельных определений.Содержание суммы кумаринов рассчитывают по формуле

,

экстракт растение спектрофотометрия флавоноид

где Bx - рассчитанный комбинированный полином (Bx =-0,2501 для тысячелистника, Bx =-0,4402 для лавра);

Вст - стандартный комбинированный полином кумарина РСО (Вст = -1,3467);

0,001 - концентрация стандартного раствора кумарина, г/мл;

W1 и W2 - объемы мерных колб, мл

V - аликвота, мл;

a - навеска, г.

Результаты приведены в таблице 1.

Таблица 1 - Результаты количественного спектрофотометрического определения суммы кумаринов в СО2 - экстрактах тысячелистника и лавра; суммы флавоноидов в гранулах «Редисол».(n=7)

Полученные результаты свидетельствуют о том, что нами разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов и кумаринов в сложных фитокомплексах без предварительного разделения с достаточно высокой точностью. Относительная погрешность не превышает ±5%.

Литература

Беликов В.В. Методы анализа флавоноидных соединений /В.В.Беликов, М.С.Шрайбер / Фармация. - 1970. - № 1. - С.66-68.

Беликов В.В., Точкова Т.В., Колесник Л.Г. Избирательный метод анализа флавоноидов в фитохимических препаратах. Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств: материалы докл. Всесоюз. конф. - М., 1991. - Т.2. -Ч.2. - С.13-14.

Бернштейн И.Я., Калинский Ю.Л. Спектрофотометрический анализ в органической химии / И.Я.Бернштейн, Ю.Л.Калинский. -Л.: Химия, 1986. - 200 с.

Количественный анализ таблеток кофеина-бензоата натрия методом производной спектрофотометрии / Е.Н. Вергейчик, А.С. [и др.] |/Фармация/ - 2006. - № 5. - С.43-47.

Сами А.А. Использование комбинированного полинома в спектрофотометрическом анализе лекарственных форм, содержащих парацетамол // А.А. Сами, В.Г. Беликов, С.В. Клочков // Охрана окружающей среды. - М.: НИИТЭХИМ, 1994. - Вып.1. - С. 5-7.

Размещено на Allbest.ru