Основи мікробіології

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

1. Визначення мікробіології як науки. Галузі мікробіології. Предмет і завдання медичної мікробіології. Основні риси та тенденції розвитку сучасної мікробіології

Мікробіологія - галузь науки, яка займається дослідженням мрфології, фізіології, біохімії, молекулярної біології, генетики, екології мікроорганізмів, їх ролі і значення в кругообігу речовин, у патології людини, тварин і рослин. Галузі мікробіології:

- бактеріологія

- мікологія

- протозоологія

- вірусологія

-імунологія

Завдання медичної мікробіології-вивчення етіології інфекційних хвороб, практичне застсування методів мікробіологічної діагностики, специфічної профілактики та терапії

Предмет медичної мікробіології-такі види мо, які в процесі еволюційного розвитку адаптувалися до людського організму, в ньому накопичуються, розмножуються, ведуть паразитичну діяльність, викликаючи інфекційні захворювання.

Зараз активно прогресує галузь синтетичної мікробіології, створюються нові генетично змінені форми мікробів, проводяться маніпуляції з різними генами.

2. Основні відмінності прокаріотичних та еукаріотичних мікроорганізмів. Форми бактерій з дефектом синтезу клітинної стінки (протопласти, сферопласти, L-формибактерій).

Основні відмінності між прокаріотичної і еукаріотичної клітинами. Бактеріальна (прокаріотів) клітина оточена клітинною стінкою. Цитоплазма рясно насичена рибосомами. Молекула ДНК зазвичай розташована в центрі клітини. Цитоплазма еукаріотичної клітини оточена цитоплазматичної мембраною, включає мітохондрії, вакуолі, шорстку ендоплазматичну мережу з рибосомами, гладку ендоплазматичну сітку, запасні гранули і ядро.

Здатність до L-трансформації властива багатьом видам бактерій. L-форми утворюються незалежно від їхньої видової приналежності при впливах, які блокують синтез основних компонентів клітинної стінки, або при її руйнуванні відповідними ферментами в умовах підвищеної осмотичної концентрації середовища. Відомий L-трансформувальний ефект пеніциліну. Механізм дії цього антибіотика пов'язаний з порушенням перехресного з'єднання пептидних ланцюгів муреїну, що забезпечує ригідність клітинної стінки бактерій. Муреїн складається з повторюваних муко-пептидних одиниць і одиниць пептидоглікану.

L-варіанти можуть індукуватися пеніциліном у грампозитив-них і грамнегативних бактерій.

Морфологія L-варіантів бактерій вивчається за допомогою світлової мікроскопії, забарвлених препаратів, фазово-контрастної мікроскопії із серійною і цейтраферною кінозйомкою, люмінесцентної мікроскопії з негативним контрастуванням і ультратонкими зрізами.

Нестабільні L-форми бактерій мають дві периферичні мембрани, з них зовнішня, мабуть, являє собою деградовану клітинну стінку, а внутрішня - цитоплазматичну мембрану. Стабільні L-форми мають тільки цитоплазматичну мембрану.

Цитоплазма L-форм структурно подібна до цитоплазми інтактних бактерій, але в-формах у ній є великі вакуолі і гранули всередині вакуолей. У - формах мезосоми втрачаються, і відбувається безпосереднє прикріплення нуклеоїду до мембрани. Унаслідок цього L-форми втрачають клітинну стінку, іноді зберігаючи змінені її фрагменти; відзначається примхливість конфігурації мембран і наявність безлічі тілець і волокон, що містяться в бульбашках, обмежених мембраною. Структурні елементиL - форм підрозділяють на прості і комплексні. їх розміри варіюють від великих (10 мк) до субмікроскопічних гранул (250 ммк) форм, що фільтруються. Здатність L-форм проростати через дрібні пори бактеріальних фільтрів пов'язана не тільки з їхніми розмірами, але і з пластичністю - великі структури, легко деформуючись, проходять через пори більш дрібних фільтрів.

Мікроструктури L-форм представлені РНК- і ДНК-вмісними елементами, переважають останні.

L-форми іноді зберігають деякі види ферментативної активності. Наприклад, деякі штами L-форм стрептокока продукують О-стрептолізин, стрептокіназу, ДНК-азу, М-білок; Ь-форми холерних вібріонів продукують нейрамінідазу, L-форми Єї. ґєґапі - правцевий екзотоксин.

1У зв'язку з відсутністю клітинної стінки L-форми мають антигенні особливості. У L-форм переважають антигенні детермінанти цитоплазматичної мембрани і цитоплазми.

Здатність бактерій культивуватися в L-формі незалежно від наявності в середовищі L-трансформувальних агентів називається стабілізацією. При цьому відбувається необоротна втрата певних ланок біосинтезу клітинної стінки і здатності їхнього відновлення. Нестабільні L-форми відрізняються тим, що при їх культивувані на середовищах, які не містять індукуючого чинника, відбувається реверсія бактерій вихідного виду.

Питання про природу спадкоємних механізмів, що обумовлюють індукцію, стабілізацію і реверсію L-форм бактерій, мало вивчене. Імовірно, перетворення в L-форми і їхню реверсію можуть відбуватися в результаті мутацій. Крім мутаційного механізму, існує масова конверсія L-форм у результаті безпосереднього впливу різних агентів на клітинну стінку.

Утворення L-форм і близьких варіантів бактерій під дією антибіотиків та інших чинників в організмі, тривала їх персистенція і можливість реверсії вихідних видів бактерій показує, що L-форми далеко не байдужі для організму хазяїна. Є дані про L-форми, які зберегли вихідний ступінь патогенності, наприклад, вірулентні штами L-форм холерного вібріона, Clostridium tetani, Cl. perfringens. Здатність L-форм продукувати ферменти агресії, екзо- і ендотоксини свідчить про збереження багатьох факторів вірулентності.

Сферопласти (від грец. Sphaira - куля і plastos - створений, утворений) - бактеріальна клітина з частково зруйнованою (скороченою) клітинною стінкою, що характеризується нестійкістю до змін осмотичного тиску. У гіпертонічному середовищі зазвичай сферопласти приймають сферичну форму, а в ізотонічних середовищах можуть розмножуватися і здійснювати множинні метаболічні реакції, характерні для інтактного організму; підтримувати розвиток бактеріофагів.

3. Морфологія бактерій. Роль окремих структур для життєдіяльності бактерій та у патогенезі інфекційних захворювань

Бактерії - це переважно одноклітинні організми, які не мають чітко сформованого ядра та хлорофілу. Вони розмножуються простим поділом.

Форма бактерій та їх розміри мають велике таксономічне значення і є важливими критеріями при їх ідентифікації. Мікроскопія патологічного матеріалу та вивчення морфологічних особливостей мікроорганізмів дозволяють встановити діагноз гонореї, сифілісу, лептоспірозу, поворотного тифу, туберкульозу, а також поставити орієнтовний діагноз правця, газової анаеробної інфекції, дифтерії.

Розміри бактерій коливаються від 0,2 до 10 мкм (більшість із них має розміри 0,5 - 0,8 мкм 2 - 3 мкм).

Бактерії можуть мати різну форму (коки, палички, звивисті, ниткоподібні, трикутні, зіркоподібні, кільцеподібні та ін.).

сарцини (розміщуються тюками - до 8, 16, 32, 64) - непатогенні;

стафілококи (мають форму грона) - спричинюють гнійно-запальні процеси;

стрептококи (розміщуються ланцюжком) - спричинюють гнійно-запальні процеси

Коки кулястої форми, але бувають бобоподібні та ланцетоподібні бактерії.

За характером поділу та розміщення розрізняють такі коки:

мікрококи (розміщуються поодиноко, безладно) - сапрофіти (але є й умовно-патогенні), спричинюють запальні процеси;

диплококи (розміщуються попарно, мають форму бобів) - збудники епідемічного цереброспінального менінгіту, гонореї і бленореї;

тетракоки (розміщуються по чотири) - непатогенні;

Палички, що не утворюють спор (аспорогенні), називають просто бактеріями (збудники дифтерії, чуми, кишкових захворювань). Спорогенні палички, що живуть в аеробних умовах і утворюють спори, діаметр яких менший за поперечник клітини, називають бацилами (збудник сибірки). Спорогенні анаеробні палички, які утворюють спори, діаметр яких більший за поперечник клітини, називають клостридіями (схема 4). За формою вони нагадують барабанну паличку, веретено або тенісну ракетку (збудники правця, ботулізму, газової анаеробної інфекції).

До основних факторів патогенності (вірулентності) відносять здатність мікроорганізмів до колонізації, Їх стійкість до різних мікробіцидних факторів організму, властивості інвазивності і токсигенності, а також здатність до тривалого персистування. Здатність до колонізації. Адгезія. Фактори колонізації. Розмноженню бактерій в первинному вогнищі інфікування передує адгезія, тобто закріплення бактерій на поверхні клітин, що, власне, і служить початком інфекційного процесу. Прикріплення до поверхні клітин (наприклад, до епітелію слизових оболонок) забезпечують адгезини, або фактори колонізації - різні мікробні продукти - молекули адгезії (білки, ЛПС, ліпотейхоєві кислоти). Молекули адгезії можуть розташовуватися безпосередньо на поверхні бактеріальної клітини або входити до складу мікроворсинок або капсул.

Взаємодія інфекційного агента з епітеліальними клітинами відбувається в результаті декількох типів зв'язків, Різних за природою і специфічності. Виділяють зв'язки, засновані на взаємодії електростатичних сил, обумовлені гідрофобними властивостями поверхні, ліганд-рецепторні взаємодії. Заряд. Бактеріальні та еукаріотичні клітини заряджені негативно, але поверхневі мікроворсинки грамнегативних бактерій знижують заряд бактерій і зменшують електростатичні сили відштовхування. Гідрофобність. Безкапсульні бактерії мають високу гідрофобність, що підсилює адгезивність; Гідрофобні ділянки володіють спорідненістю до ліганд на поверхні еукаріотичих клітин, що і призводить до міцності зв'язку. Специфічні взаємодії. На поверхні бактерій є молекули, здатні до стереоспецифічного зв'язування з комплементарними молекулами на мембранах еукаріотичних клітин (наприклад, гемаглютиніни або тейхоєві кислоти). Інші механізми колонізації. Деякі бактерії здатні «заздалегідь готувати» місце для подальшого розмноження; наприклад, нейрамінідаза полегшує проникнення холерного вібріона через шар слизу і контакт з сіалосодержащімі рецепторами епітелію кишечника. Мікроорганізми також здатні сорбувати на бактеріях, вже колонізували поверхню слизових оболонок, або пов'язувати білки (наприклад, фібронектину), рецептори до якого є на багатьох клітинах макроорганізму. У капсульованих бактерій в прикріпленні активно беруть участь полісахариди капсули. Для успішної колонізації вогнища первинного інфікування бактерії повинні витримати дію численних і різноманітних мікробіцидних факторів господаря. Для захисту від них мікроорганізми активно використовують ряд структур (наприклад, капсули) і синтезованих речовин (наприклад, ферменти).

4. Класифікація та морфологія найпростіших

Найпростіші (лат. Protozoa, від гр. рс?фпт «перший» і ж?б, форми мн. від гр. ж?пн «жива істота») - поліфілетична група, царство одноклітинних або колоніальних еукаріотів, які мають гетеротрофний тип живлення..Більшість найпростіших - мікроорганізми, але деякі (наприклад, колоніальні інфузорії зоотамніуми або поодинокі спіростомуми) досягають розмірів в декілька міліметрів і добре видні неозброєним оком. Справжніх багатоклітинних форм серед найпростіших немає (за винятком загадкових Myxozoa, які, ймовірно, є тваринами).

Будованайпростіших надзвичайно різноманітна, однак усім їм властиві ознаки, характерні для організації та функцій клітини. Як і в інших клітинах, основними компонентами клітини найпростішого є цитоплазма і ядро. Цитоплазма обмежена зовнішньою мембраною, яка регулює надходження речовин у клітину; у багатьох видів вона ускладнюється додатковими структурами, що збільшують товщину й механічну міцність зовнішнього шару. Таким чином виникають утвори типу пелікули і оболонки, які будуть розглянуті далі.

Цитоплазма найпростіших, як правило, складається з двох шарів - зовнішнього, світлішого й щільнішого - ектоплазми - і внутрішнього, в якому розміщені органели і включення клітини, - ендоплазми. Крім загально клітинних органел у цитоплазмі найпростіших можуть бути різноманітні спеціальні органели. Особливо представлені тут різні фібрилярні утвори - опорні й скоротливі волоконця, скоротливі вакуолі, травні вакуолі тощо. У найпростіших є одне або кілька типових клітинних ядер. Ядро найпростіших має типову двошарову ядерну оболонку. В ядрі містяться розсіяний хромати новий матеріал і ядерця. Ядра найпростіших характеризуються винятковою морфологічною різноманітністю за розмірами, числом ядерець, кількістю ядерного соку тощо.

На відміну від соматичних клітин багатоклітинних найпростіші характеризуються наявністю життєвого циклу. Він складається з ряду послідовних стадій, які в існуванні кожного виду повторюються з певною закономірністю. Найчастіше цикл розпочинається стадією зиготи, що відповідає заплідненій яйцеклітині багатоклітинних. За цією стадією іде одноразове чи багаторазово повторюване безстатеве розмноження, яке здійснюється шляхом клітинного поділу. Потім утворюються статеві клітини (гамети), попарне злиття яких знову дає зиготу.

Важливою біологічною особливістю багатьох найпростіших є здатність до інцистування. При цьому тварини заокруглюються, скидають або втягують органели руху, виділяють на свою поверхню щільну оболонку і переходять у стан спокою. В стані цисти найпростіші можуть витримувати різні коливання умов зовнішнього середовища, зберігаючи життєздатність. З настанням сприятливих для життя умов цисти розкриваються і найпростіші виходять з них у вигляді активних, рухливих особин.

Найпростіші досить поширені. Багато з них живе у морі, деякі в прісних водоймах. Існують види, які живуть у вологому ґрунті. Значного поширення набули паразитичні форми найпростіших. Багато з них спричинюють тяжкі хвороби людини, домашніх і промислових тварин, рослин.

За будовою органел руху і особливостями розмноження тип Найпростіші поділяють на 4 класів:

• Ш саркодові;

• Ш джгутикові - рухаються за допомогою одного або декількох джгутиків. Мають хлорофіл, і при масовому розмноженні можуть давати цвітіння води. Представник: євглена зелена.

• Ш споровики - ендопаразит, з рисами спрощеної організації. Форма тіла не рідко амебовидна. Розмноження відбувається статевим і безстатевим шляхом. У споровиків є збірні, об'єднуючі форми, що свідчать про їх спільне походження від різних предків. Представник: коксидії - паразитує у епітеліях кишечниках і протоках печінки в основному у кролів. Малярійний плазмодій - збудник малярії, 4 види якого паразитують у людини і декілька видів у птахів. Частину життя малярійний плазмодій проводить у червоних тільцях людини, а частину у комарах.

• Ш інфузорії - відрізняються від найпростіших більш складною будовою - наявність ядерного комплексу з мікро- і макронуклеуса. Крім цього, у їхній будові тіла є спеціальні «органи травлення» - глотка. Розмножуються поперечним поділом

5. Класифікація та морфологія грибів

Класифікація грибів заснована на способі їх розмноження: - Ascomycetes, - Basidiomycetes, - Zygomycetes - Oomycetes.

Гриби мають ядро з ядерною оболонкою, цитоплазму з органелами, цитоплазматичну мембрану, яка містить фосфоліпіди і стероли і потужну клітинну стінку, що складається з глюкану, целюлози, хітину, білка, ліпідів та ін. Гриби складаються з довгих тонких ниток гіф, сплітаються в грибницю, або міцелій. Гіфи нижчих грибів, фікоміцетів, не мають перегородок. У вищих грибів (еуміцетів) гіфи розділені перегородками; їх міцелій багатоклітинний.

Гриби розмножуються спорами статевим і безстатевим способами, а також вегетативним шляхом брунькування або фрагментація гіф. За будовою гриби можна розділити на дві групи - нитчасті або плісняві, або міцеліальні і дріжджові. Дріжджі - позатаксономічна група одноклітинних грибів, які втратили міцеліальну будову у звязку з переходом до проживання у рідких і напіврідких, багатих органічними речовинами субстратах. Обєднує близько 1500 видів, що відносяться до аскоміцетів та базидіоміцетів.

Гриби роду Candida: вони відносяться до дріжджеподібних грибів і відрізняються від справжніх дріжджів здатністю утворювати міцелій і відсутністю статевого способу відтворення, тобто відносяться до неспороутворюючих дріжджів. Можуть рости на агарових поживних середовищах. Антигени збудників володіють алергізуючими і антигенними властивостями. Гриби роду кандіда нерідко виявляються як сапрофіти в мікрофлорі порожнини рота, кишечника, піхви.

Плісняві гриби - різні гриби в основному, Zygomycetes і Askomycetes утворюють розгалужені міцелії без великих, легко помітних неозброєним оком, плодових тіл. Багато нитчастих грибів виробляють вторинні метаболіти-антибіотики і мікотоксини, що гнітюче або токсично діють на інші живі організми.

6. Методи мікроскопії

1. Світлова мікроскопія:

- світлопільна-різновид оптичної світлової мікроскопії, де візуалізація досліджуваного обєкта ґрунтується на вибірковому поглинанні ним або елементами його структури світла з різною довжиною хвилі.

- темнопільна - заснована на розсіюванні світла мікроскопічними обєктами. При темнопольній мікроскопії в обєктив попадають тільки промені світла, розсіяного обєктами при бічному висвітленні. Прямі промені від освітлювача в обєктив не попадають. Застосовується темнопольная мікроскопія переважно для вивчення спірохеті виявлення але не вивчення морфології великих вірусів.

- фазово-контрастна - заснована на інтерференції світла: прозорі обєкти, що відрізняються по показнику переломлення від навколишнього середовища, виглядають або як темні на світлому тлі позитивний контраст, або як світлі на темному тлі негативний контраст. Фазово-контрастна мікроскопія застосовується для вивчення живих мікроорганізмів і кліток у культурі тканини.

- люмінісцентна-в основі лежить явище люмінесценції, тобто здатності деяких речовин світитися при опроміненні їх короткохвильової синьо-фіолетової частиною видимого світла або ультрафіолетових променів з довжиною хвилі, близької до видимого світла. Люмінесцентна мікроскопія використовується в діагностичних цілях для спостереження живих чи фіксованих мікроорганізмів, пофарбованих люмінесцентними барвниками флюорохромами у дуже великих розведеннях, а також при виявленні різних антигенів і антитіл за допомогою іммунофлюоресцентного методу.

- поляризаційна - заснована на явищі поляризації світла і призначена для виявлення обєктів, що обертають площину поляризації. Застосовується в основному для вивчення мітозу.

- ультрафіолетова-в основі лежить здатність деяких речовин ДНК, РНК поглинати ультрафіолетові промені. Вона дає можливість спостерігати і кількісно встановлювати розподіл цих речовин у клітці без спеціальних методів фарбування.

2. Електронна-принципово відрізняється від світлової. В електронному мікроскопі замість світлових променів для побудови зображення використовується потік електронів у глибокому вакуумі. Зображення в електронному мікроскопі спостерігають на флюоресцуючому екрані і фотографують. Як обєкти використовують ультратонкі зрізи чи мікроорганізмів тканин товщиною 20-50 нм, що значно менше товщини вірусних часток. За допомогою електронного мікроскопа вивчають ультратонку будову мікроорганізмів і тканин, а також проводять імунну електронну мікроскопію.

7. Виготовлення бактеріологічних препаратів. Барвники та допоміжні реактиви. Прості та складні методи фарбування

1. Знежирене предметне скельце проводять через полумя газового паяльника, охолоджують і кладуть на робоче місце.

2. Бактеріологічну петлю прожарюють у полумї, тримаючи її як олівець у правій руці.

3. Не випускаючи петлі, лівою рукою беруть прбірку з 0,9% розчином натрію хлориду, а 4 і 5 пальцями правої руки виймають ватно-марлеву пробку.

4.Вінце пробірки пропускають через полумя паяльника.

5. Петлю вводять у пробірку і охолоджують її торкаючись стінки.

6. Занурюють петлю у пробірку і набирають краплю фіз. розчину.

7. Виймають петлю, проводять пробку і відкритий край пробірки через полумя. ставлять пробірку у штатив.

8. На центр скельця наносять взятий ізотонічний розчин.

9. Петлю стерелізують. Уліву руку беруть пробірку з досліджуваним матеріалом, відкривають пробку з дотриманням усіх правил.

10. Петлю охолоджують і набирають невелику к-кість матеріалу.

11. Взятий матеріал наносять на скло біля краплі фіз. розчину, розтираючи та емульгуючи його в краплі, готують мазок, діаметром 1-1,5 см.

12. Петлю прожарюють

Барвники та фарбуючі розчини:

1. Феноловий фуксин Циля

2. Фуксин Пфейфера

3. Насичений спиртовий розчин метиленової синьки

4. Метиленова синька за Леффлером

5. Водно-спиртовий розчин метиленової синьки

Складні методи фарбування:

1. За Грамом

2. За Ромамовським-Гімзою

3. Фуксин Пфейфера

4. Метод Циля-Нільсена

5. Метод Нейссера

Анілінові барвники, використання у мікробіології. Принципи готування фарбуючих розчинів. Прості та складні методи фарбування. Фарбування за Грамом, фактори, які впливають на фарбування бактерії за Грамом. Властивості, що спільні для грам позитивних або для грам негативних бактерій.

Анілінові барвники - органічні сполуки, що утворюються при окисленні аніліну або його солей; широко використовуються в гістологічної техніки, мають бактерицидну, а деякі - канцерогенну дію.

Цей препарат має бактерицидну і бактеріостатичну активність щодо грампозитивних бактерій, особливо стрепто-і стафілококів, а також протипаразитарні і фотосенсібілізуючі властивості.

У медицині використовуються деякі анілінові барвники фуксин, діамантовий зелений, метиленовий синій, метиловий фіолетовий.

Розрізняють прості і складні диференціальні способи фарбування мікроорганізмів. просте фарбування дозволяє швидко вивчити морфологічні особливості мікроорганізмів. Найбільш придатними є основні і нейтральні анілінові барвники. Для простого забарвлення використовують тільки один барвник, найчастіше червоного кольору - фуксин, фіолетового - генціанвіолет.

Складні методи фарбування:

Метод Ціля-Нільсена призначений для диференціації кислотостійких бактерій збудників туберкульозу та лепри від не кислотостійких.

Метод Нейссера використовується для виявлення зерен волютину.

Метод Буррі є негативним методом забарвлення: забарвлюється фон, і не фарбуються самі мікроорганізми. Для цього використовують барвники, не фарбують бактерії, наприклад туш.

Метод Буррі-Гінса використовується для фарбування капсульних бактерій і заснований на тому, що капсула не сприймає барвники.

Метод фарбування за Романовським-Гімзою універсальний метод фарбування. При фарбуванні найпростіших їх цитоплазма набуває блакитний колір, а ядра - червоно-фіолетовий.

Основні відмінності складних методів фарбування від простих: Використання декількох барвників.; Використовування додаткових інгридієнтів, що не мають забарвлюючих властивостей.

Метод Грама є універсальним методом забарвлення і рекомендується для фарбування прокаріотичних клітин. Фарбування за Грамом є важливим методом для диференціації різних видів мікроорганізмів за тинкторальними властивостями

Фактори, які впливають на фарбування бактерій за Грамом:

Точне виконання правил приготування мазка, тривалості фарбування та знебарвлюваності спиртом. Крім того, має значення вік культури та мінливість мікроорганізмів.

Для грам позитивних бактерій є спільне: чутливість до лізоциму, пеніциліну, йоду; нечутливість до дії пепсину панкреатину; слабо виражені імуногенні властивості; можуть бути ксимлостійкими; можуть утворювати ендоспори, екзотоксин; війки не виявлені

Для грам негативних бактерій є спільним: перетравлюються ферментами ШКТ; мало чутливі до дії лізоциму, пеніциліну, йоду; імуногенні властивості добре виражені; чутливі до дії кислот; ендоспор не утворюють; рідко утворюють екзотоксин; можуть утворювати війки.

8. Бактеріоскопічний метод дослідження. Етапи

У лабораторній практиці використовують такі типи мікроскопічних препаратів: 1) висячу краплю 2) придавлену краплю 3) тонкий мазок крові, гною, мокротиння та ін; 4) товсту краплю 5) агар-мікроскопію 6) препарат-відбиток 7) фіксований мазок. У Бактеріологічній практиці частіше застосовують останній тип препарату. Приготування його складається з декількох етапів: 1) забору і доставки матеріалу для дослідження 2) приготування препарату. Для цього досл. матеріал наносять на чисте, знежирене предметне скло з допомогою бактерій. петлі і розподіляють по площі в 1 см². Щільний (густий) матеріал або к-ру з щільного середовища вносять бактерій. петлею в краплину фізрозчину, ретельно розмішують і розподіляють по склу на такому ж просторі, як і в попередньому випадку. Величина внесеного матеріалу залежить від передбачуваної кількості бактерій в ньому. 3) приготовлений мазок висушують на відкритому повітрі або в теплому струмені повітря (від газового пальника), 4) препарат фіксується на склі для забезпечення безпеки подальшої роботи, прикріплення бактерій до скла, кращого сприйняття ними фарби, оскільки структури вбитих бактерій легше і міцніше сприймають барвники; 5) фіксовані мазки забарвлюють одним з простих або спеціальних методів фарбування, занурюючи мазок в барвник або наливаючи його на препарат так, щоб вся поверхня препарату була вкрита суцільним шаром барвника, і добре просушують на повітрі. Погано висушений препарат дає каламутне зображення при імерсійної мікроскопії через утворення емульсії; 7) мікроскопії мазка. Цінність Б.м. полягає в простоті, доступності методик і швидкості отримання результатів (30 - 60 хв і менше).

Метод фарбування за Грамом

1. Фіксований мазок забарвлюють карболовим розчином генціановий фіолетового протягом 1-2 хвилин.

2. Протягом 1 хвилини обробляють мазок розчином Люголя.

3. Знебарвлюють спиртом 10-20 сек.

4. Промивають водою.

5. Дофарбовують мазок водним розчином фуксину 1-2 хвилини

9. Типи і механізми живлення мікроорганізмів. Механізми проникнення поживних речовин в бактеріальну клітину. Хімічний склад мікроорганізмів, значення складових компонентів

За характером використання джерела енергії розрізняють три групи бактерій. Фототрофи як джерело енергії використовують сонячне світло. Автотрофи (аутотрофи) - неорганічний вуглець, органотрофи (гетеротрофи) - органічний вуглець (вуглеводи, жирні кислоти). Літотрофи (грец. Htos - камінь, trophe - живлення) дістають енергію від окислення неорганічних речовин (водень, окис вуглецю, метан, аміак, сполуки заліза, марганцю, сірки). Вони відіграють вакливу роль у кругообігу речовин у природі. Разом з тим літотрофи справляють і шкідливий вплив: руйнують будівельні матеріали (бетон, скло, гуму, емаль та ін.), спричинюють корозію металів, піддають руйнуванню, близько 10% усіх запасів нафти і значною мірою знижують її якість. До хемолітотрофів належать бактерії, що населяють гарячі джерела, їх виявляють на дні океанів, у надсолоних озерах, на скелях гірських вершин, у пісках пустель. Найважливіші об'єкти для медичної мікробіології - органотрофи, їх поділяють на сапрофітів і паразитів. Сапрофіти в процесі своєї життєдіяльності використовують органічні речовини, які є в навколишньому середовищі. До них відносять більшість видів бактерій, що населяють нашу планету. Паразити - це порівняно невелика група мікроорганізмів (0,1%), які пристосувалися в ході еволюції до паразитичного способу життя; вони живляться за рахунок органічних сполук тварин і людини. Поділ органотрофних мікроорганізмів на сапрофітів й паразитів не абсолютний, бо не завжди можна чітко розмежувати ці підгрупи. Окремі види патогенних для людини бактерій можуть існувати в навколишньому середовищі як сапрофіти, і, навпаки, деякі сапрофіти за несприятливих умов можуть спричиняти у людей і тварин різні захворювання. Більшість бактерій розвивається тільки в складних середовищах, що містять пептон (продукт ферментативного розщеплення м'яса та інших білкових субстратів), м'ясний екстракт і подібні до них продукти біологічного походження.

Основні механізми живлення бактерій: 1. Пасивна дифузія 2. Полегшена дифузія 3. Активний транспорт 4. Транслокація хімічних груп 5. Іонний транспорт

Механізми проникнення поживн р-н: Живильні речовини, попередньо розщеплюючи їх зовнішнім перетравлюванням задопомогою екзоферментів. При дифузії розчинена речовина переміщується із зони високої концентрації за межами тіла бактеріальної клітини в організм бактерій доти, доки концентрація не стане однаковою. Проходження розчинника через цитоплазматичну мембрану бактерій із зони нижчої концентрації розчиненої речовини в зону вищої концентрації відбувається в результаті осмосу. Градієнт концентрації й осмотичні сили, що діють з обох боків цитоплазматичної мембрани, дуже різноманітні і залежать від різниці концентрації багатьох речовин, які є в клітині і поживному середовищі. Перенесення розчинених речовин із живильного середовища в клітину може здійснюватися втягненням їх разом з розчинником при умові достатньої пористості цитоплазматичної мембрани. Цитоплазматична мембрана складається з ліпідних і білкових молекул, розташованих у певній послідовності. Заряджені групи молекул своїми кінцями спрямовані до поверхні мембрани. На заряджених кінцях адсорбовані шари білка, що складаються з білкових ланцюгів і утворюють сплетення на зовнішній і внутрішній поверхнях цитоплазматичної мембрани. Висока вибірнавластивість, що дає змогу клітинам бактерій відрізняти одні речовини від інших, пов'язана з наявністю ферментних систем, локалізованих на поверхні клітин. Завдяки дії цих ферментів нерозчинні в цитоплазматичній мембрані речовини стають розчинними. Цитоплазматична мембрана відіграє важливу роль у метаболізмі бактерій. Вона має властивість швидко змінювати свою проникність для різних речовин і тим самим регулювати надходження їх у клітину і розподіл у ній, а також впливати на хід реакцій, у яких ці речовини беруть участь. У процесі живлення бактерій розрізняють пасивне й активне перенесення різних речовин та іонів. При пасивному перенесенні потік речовин рухається відповідно до різниці концентрацій або електрохімічних потенціалів. Активне перенесення речовин відбувається внаслідок генерованої в клітині енергії за типом «біологічних насосів». У регулюванні найважливіших біологічних процесів першорядну роль відіграють універсальні циклічні нуклеотиди, а також іони калію, натрію, кальцію, магнію, перенесення яких відбувається внаслідок різниш в зарядах поверхні цитоплазматичної мембрани й оточуючого мікроорганізми середовища, причому роль переносників, як вважають, виконують жиророзчинні речовини X і Y; при цьому утворюються сполуки з іонами калію і натрію (КХ і NaY), які можуть дифундувати через оболонки клітин. Із цитоплазматичної мембрани деяких мікроорганізмів виділено білки, які беруть участь у транспортуванні амінокислот, а також білкові системи, відповідальні за перенесення деяких цукрів взагалі і глюкози зокрема

10. Поживні середовища, вимоги до них. Класифікація поживних середовищ, які використовують у мікробіології

Вимоги до живильних середовищ. Для вирощування бактерій у лабораторних умовах, дослідження їх різноманітних властивостей, тривалого зберігання використовують живильні середовища. Вони повинні відповідати певним стандартам, створюючи оптимальні умови для росту, розмноження й життєдіяльності мікроорганізмів. У першу чергу, бактерії потребують азоту, вуглецю та водню для побудови власних білків. Водень і кисень для клітин постачає вода. Джерелом азоту виступають численні речовини, в основному, тваринного походження (м'ясо яловиче, риба, м'ясо-кісткова мука, казеїн), а також білкові гідролізати, пептиди, пептони. Можна використовувати й замінники м'яса - плаценту, кров'яні згустки, дріжджі. Отже, до складу середовищ повинні бути введені джерела живильних речовин і вода, а також ростові фактори (вітаміни групи В, ферменти). Універсальним джерелом їх служать екстракти з білків тваринного й рослинного походження, білкові гідролізати. Для мікробів з більш складними харчовими потребами до складу середовищ включають нативні субстрати - кров, сироватку, асцитичну рідину, яєчний жовток, шматочки печінки, нирок, мозкової тканини та ін. Середовища повинні бути збалансованими за мікроелементним складом і містити іони заліза, міді, марганцю, цинку, кальцію, натрію, калію, мати у своєму складі неорганічні фосфати. Допускається застосування речовин, які усувають дію інгібіторів росту і токсиноутворення мікробів (окремі амінокислоти, твіни, активоване вугілля тощо). Важливим є стабілізація оптимуму рН середовища, його високої буферності та рівень окисно-відновного потенціалу (Еh), який для аеробних мікроорганізмів досягає понад 0,08 В, а для анеробних бактерій коливається в межах 0,12-0,60 В. Середовища повинні мати певну в'язкість, густину, мати певну вологість (до 20% води), бути ізотонічними, прозорими й обов'язково стерильними.

Залежно від потреб бактеріологів живильні середовища поділяються на п'ять основних груп. Перша група - універсальні (прості) середовища. До них належать м'ясо-пептонний бульйон (МПБ) та м'ясо-пептонний агар (МПА). За своїм складом, наявністю живильних речовин вони придатні для культивування багатьох видів бактерій. Друга група - спеціальні середовища. Вони використовуються в тих випадках, коли мікроорганізми не ростуть на простих. До них належить кров'яний, сироватковий агари, сироватковий бульйон, асцитичний бульйон, асцит-агар та інші. Третя група - елективні середовища, на яких мікроорганізми певного виду ростуть швидше, більш інтенсивно, опереджають у своєму розвитку інші види бактерій. Наприклад, 1% лужна пептонна вода є елективним середовищем для холерних вібріонів, середовища Ру та Леффлера - для збудників дифтерії. Четверта група селективні середовища, які завдяки додаванню певних компонентів (жовч, фарби, антибіотики та ін.) здатні пригнічувати розвиток одних видів мікроорганізмів, але не впливають на інші види. Так, середовище Мюллера є селективним для тифо-паратифозних бактерій, фуразолідоно-твіновий агар - для коринебактерій і мікрококів. Додавання антибіотиків до складу середовищ робить їх селективними для грибів (напр. середовище Сабуро та ін.). П'ята група - диференціально-діагностичні середовища. Це велика група середовищ, які дозволяють визначити певні біохімічні властивості мікроорганізмів і проводити їх диференціацію. Вони поділяються на середовища для визначення протеолітичних, пептолітичних, цукролітичних, гемолітичних, ліполітичних, редукуючих властивостей (середовища Ендо, Левіна, Плоскірєва, Гісса).

11. Дихання мікроорганізмів. Аеробний та анаеробний типи дихання. Ферменти, що беруть участь в процесі дихання; структури клітини, де локалізуються дихальні ферменти. Методи культивування анаеробних бактерій

До анаеробних процесів відносяться спиртне, молочнокисле, маслянокисле і інші види бродіння, в результаті яких утворюються специфічні кінцеві продукти (етиловий спирт, молочна, масляна кислоти і ін.). Бродіння - це енергетичні процеси, при яких органічні сполуки є одночасно як донаторами, так і акцепторами електронів.

Аеробне дихання мікроорганізмів - це процес, при якому останнім акцептором водню (протонів та електронів) є молекулярний кисень. В результаті окислення головним чином складних органічних сполук з'являється енергія, яка виділяється в навколишнє середовище або накопичується в макроенергетичних фосфатних зв'язках АТФ. Розподіляють повне та неповне окислення.

Ферменти, що беруть участь в процесі дихання: протеїнази, амілази. Локалізація: мітохондрії.

Універсальним середовищем для культивування анаеробів є с-ще Кіта-Тароцці, яке складається з глюкозного бульйону, шматочків печінки або фаршу (ля зв» язування кисню повітря). Перед посівом це с-ще нагрівають 10-30 хв при 100 *С у водяному нагрівачі для видалення повітря, швидко охолоджують, а після посіву матеріалу заливають стерильним вазеліном. Для культивування анаеробів використовують також с-ще Вільсона-Блера на основі вісмут-сульфітагару, в якому анаероби утв чорні колонії; цукровий агар, кров» яний агар, молоко.

12. Ферменти мікроорганізмів, їх роль в обміні речовин. Використання для ідентифікації та диференціації бактерій. Ферменти патогенності

Ферменти: ендо- і екзоферменти; адаптивні і конститутивні; гідролази, оксиредуктази, ізомерази, трансферази, ліази, лігази.

Ендоферменти функціонують тільки усередині клітки. Вони каналізують тільки усередині клітки. Вони каналізують реакції біосинтезу й енергетичного обміну. Екзоферменти виділяються кліткою в середовищі та каталізують реакції гідролізу складних органічних сполук на більш прості, доступні для асиміляції мікробною кліткою.

До них відносяться гідролітичні ферменти, що грають винятково важливу

роль у харчуванні мікроорганізмів.

У залежності від субстрату гідролітичні ферменти прийнято поділяти на дві великі групи:

- гідролітичні або цукролітичні ферменти, субстратом для який є різні

цукри, а продуктами їх розщеплення - кислоти, спирти, альдегіди, Н2О;

- протеолітичні ферменти, що розщеплюють білки з утворенням поліпептидів, амінокислот, аміаку, індолу, сірководню.

Для вивчення активності ферментів при ідентифікації мікроорганізмів широко використовують диференційно-діагностичні середовища, до складу яких входять визначені субстрати - цукри чи білки. При дослідженні гідролітичної активності бактерій поширені моносубстратні диференційно-діагностичні середовища Гісса (строкатий ряд Гісса), лактозовмісні середовища Ендо, Левіна, Плоскірєва, дисубстратні середовища Ресселя, полісубстратні середовища Кліглера й Олькеницького. Останні можуть служити і для вивчення протеолітичних властивостей бактерій, тому що ріст мікроорганізмів супроводжується вивільненням аміаку. Протеолітичні ферменти бактерій визначаються також по виділенню індолу, сірководню, розщепленню деяких амінокислот, наприклад, фенілаланіна, лізина, цистина. Протеолітичні ферменти здатні змінювати (розріджувати) желатин, причому, різні види бактерій по різному змінюють «стовпчик» желатину в пробірці з посівом мікроорганізму. Так, при рості холерного вібріона «стовпчик» желатину приймає форму цвяха, при рості стафілокока - панчохи, при росту синьогнійної палички спостерігається пошарове розрідження середовища.

Окислювально-відновні ферменти, дегідрогенази, каталазу визначають по зміні органічного барвника - акцептора водню. Здатність мікроорганізмів використовувати як джерело вуглецю цитрат оцінюють у спеціальних тестах заснованих на роботі ферментів.

У практичних бактеріологічних лабораторіях широко застосовують мікро- і експрес-методи для орієнтованого вивчення біохімічних властивостей мікроорганізмів. Для цієї мети існує безліч тест-систем. Найбільше часто використовують систему індикаторних паперів (СІБ). СІби представляють із себе диски фільтрувального папера, просочені розчинами чи цукрів інших субстратів у сполученні з індикаторами. Такі диски опускають у пробірку з вирослої в рідкому живильному культур середовищі. По зміні кольору диска із субстратом судять про роботу ферменту. Мікро-тест системи для вивчення ідентифікації ентеробактерій представлені одноразовими пластиковими контейнерами із середовищами, що містять різні субстрати, з додаванням індикаторів. Посів чистої культури мікроорганізмів у такі тест-системи дозволяє швидко виявити здатність бактерій утилізувати цитрати, глюкозу, сахарозу, виділяти аміак, індол, розкладати сечовин, сахарозу, виділяти аміак, індол, розкладати сечовину, лізин, фенілаланін і т.д.

13. Ріст і розмноження бактерій. Механізм клітинного поділу, фази розмноження культури бактерій в стаціонарних умовах

Ріст - це збільшення розмірів окремої особи.

Розмноження - здатність організму до відтворення.

Основним способом розмноження в бактерій є поперечний розподіл, що відбувається в різних площинах з формуванням різноманітних сполучень клітин (грона, ланцюжки, тюки і т.д.).

У бактеріальних клітин розподілу передує подвоєння материнської ДНК.

Кожна дочірня клітка одержує копію материнської ДНК. Процес розподілу вважається закінченим, коли цитоплазма дочірніх кліток розділена перегородкою. Клітки з перегородкою розподілу розходяться в результаті дії ферментів, що руйнують серцевину перегородки. Швидкість розмноження бактерій різна і залежить від виду мікробу, віку культури, живильного, середовища температури.

При вирощуванні бактерій у рідкому живильному середовищі спостерігалося кілька фаз росту культур:

1. Фаза вихідна (латентна) - мікроби адаптуються до живильному, середовищу збільшується розмір кліток. До кінця цієї фази починається розмноження бактерій.

2. Фаза логарифмічного інкубаційного росту - йде інтенсивний розподіл кліток. Триває ця фаза близько 5 годин. При оптимальних умовах бактеріальна клітка може поділятися кожні 15-30 хв.

3. Стаціонарна фаза - число знову з'явилися бактерій дорівнює числу відмерлих. Тривалість цієї фази виражається в годинник і коливається в залежності від виду мікроорганізмів.

4. Фаза відмирання - характеризується загибеллю кліток в умовах виснаження живильного і середовища нагромадження в ній продуктів метаболізму мікроорганізмів.

Якщо живильне середовище в якому культивуються мікроорганізми, буде обновлятися, то можна підтримувати фазу логарифмічного росту. При розмноженні на щільних живильних середовищах бактерії утворять на поверхні середовища й усередині її типові для кожного мікробного виду колонії. Колонії можуть бути опуклими чи плоскими, з рівними чи нерівними краями, із шорсткуватою чи гладкою поверхнею і мати різне фарбування: від білого до чорного. Усі ці особливості (культуральні властивості) враховують при ідентифікації бактерій, а також при доборі колоній для одержання чистих культур.

Ріст бактерій залежить насамперед від того, чи є в середовищі вода, поживні речовини, фізіологічне активні речовини тощо. Ріст паличкоподібних прокаріотних клітин відрізняється від кулястих. Перші ростуть переважно в напрямку довгої вісі, а другі - рівномірно в усіх напрямках. У зв'язку з цим співвідношення між поверхнею і об'ємом у паличкоподібних клітин під час їхнього росту істотно не змінюється. У кулястих - відносна величина поверхні клітини зменшується, оскільки їхня поверхня росте пропорційно квадрату радіусу, а об'єм - пропорційно кубу.

Ріст бактерій завершується їхнім розмноженням, яке виявляється у збільшенні кількості особин мікробної популяції на одиницю об'єму.

14. Бактеріологічний метод дослідження. Принципи, методи та етапи виділення чистих культур бактерій та їх ідентифікації

Бактеріологічний метод полягає у виділенні чистої культури збудника (популяції, що містить бактерії одного виду) і ідентифікації цього збудника є основним методом бактеріологічного дослідження

Вивчення властивостей мікроорганізмів у бактеріологічній лабораторії з метою встановлення приналежності до тієї чи іншої систематичної групи (виду, роду) і називається їх ідентифікація.

В цілому бактеріологічний метод дослідження являє собою багатоетапне бактеріологічне дослідження, яке триває 18 - 24 годин.

Основою бактеріологічного методу є виділення чистої культури збудника, яке відбувається на першому етапі дослідження. Для виділення чистої культури збудника роблять посів взятого матеріалу. Посів робиться, як правило, на щільні живильні середовища, які вибирають виходячи з властивостей передбачуваного збудника.

При бактеріологічному методі застосовують по можливості середовища, на яких росте тільки конкретний вид бактерій - елективні середовища, або середовища, що дозволяють відрізнити передбачуваного збудника від інших мікроорганізмів або по-іншому диференційно-діагностичні середовища.

Наприклад, при бактеріологічної діагностики кишкових інфекцій - середовище Ендо, для виділення дифтерійної палички використовують телуритові середовища, і т. Д. При виділенні умовно-патогенних мікроорганізмів при бактеріологічному методі посів взятого матеріалу здійснюють на універсальні поживні середовища. Прикладом такого середовища може служити кров'яний агар.

Всі маніпуляції, які пов'язані з виділенням бактеріальних культур, проводяться над полум'ям пальника.

При бактеріологічному методі посів матеріалу на живильні середовища здійснюють або скляним або металевим шпателем, або бактеріальної петлею таким чином, щоб знаходяться в досліджуваному матеріалі бактерії розсіяти по поверхні живильного середовища. У результаті такого розсіювання кожна бактеріальна клітина потрапляє на свою ділянку середовища.

При виділенні з патологічного матеріалу чистої культури збудника, який суттєво забруднений сторонньою мікрофлорою, часто користуються біологічним методом виділення чистої культури. Роблять це таким чином: заражають досліджуваним матеріалом чутливих до збудника лабораторних тварин. Ще один приклад біологічного методу - при дослідженні хворого на вміст у мокроті пневмококів, матеріал внутрибрюшинно вводять білим мишам. З їх крові через 4-6 годин отримують чисту культуру пневмокока.

У тому випадку, якщо в результаті бактеріологічного методу дослідження передбачається в досліджуваному матеріалі зміст малої кількості збудника, посів роблять на рідку живильне середовище для його нагромадження, так звану середу збагачення, яка оптимальна для даного мікроорганізму. Далі здійснюють пересівши з рідкого ПС на щільні середовища, розлиті в чашках Петрі. Засіяну збудником середу поміщають в термостат зазвичай при певній температурі, що важливо для бактеріологічного методу.

На другому етапі бактеріологічного методу дослідження проводять вивчення колоній бактерій, які виросли на щільному живильному середовищі і походять від однієї бактеріальної клітини. (колонія і є чистою культурою збудника). Проводять мікроскопічне і макроскопічне дослідження колоній у відбитому та прохідному світлі: неозброєним оком, під малим збільшенням мікроскопа, за допомогою лупи.

Відзначають культуральні властивості колоній: їх форму, величину, колір, характер країв і поверхні, структуру, консистенцію. Далі для приготування мазків використовують частину кожної з намічених колоній. Забарвлюють мазки за Грамом, микроскопируют, визначаючи тинкторіальних (відношення до фарбування) і морфологічні властивості виділеної культури і перевіряючи одночасно її чистоту.

Частину колонії пересівають в пробірки з оптимальною для даного виду середовищем, наприклад, скошеним агаром, з метою накопичення чистої культури для більш повного її вивчення. Пробірки переміщають на 18-24 години в термостат. На другому етапі, крім перерахованих досліджень, нерідко підраховують кількість вирослих колоній.

Це має особливе значення при захворюваннях, викликаних умовно-патогенними мікроорганізмами. При таких захворюваннях судити про провідну роль якого-небудь збудника допустимо лише по його змісту в патологічному матеріалі в досить великій кількості і переважанню цього збудника над іншою флорою.

Для того щоб провести таке дослідження готують послідовні розведення взятого досліджуваного матеріалу, з яких на чашки з живильним середовищем проводять висів, підраховують кількість колоній, що виросли, множать на розведення, з чого визначають вміст мікроорганізмів в матеріалі.

Ідентифікація виділеної чистої культури збудника і визначення для цієї культури чутливості до антибіотиків та інших хіміотерапевтичних препаратів - третій етап бактеріологічестого методу. Ідентифікацію виділеної бактеріальної культури виробляють по тинкторіальними, морфологічним, біохімічним, культуральними, токсигениих, антигенними властивостями.

Першим ділом беруть мазок з культури, що виросла на скошеному агарі, досліджують морфологію бактерій і перевіряють чистоту культури вирослих бактерій. Далі здійснюють посів виділеної чистої культури бактерій на середовища Гіссена. Бажано провести посів і на інші середовища для визначення біохімічних властивостей.

Ферментативні, або біохімічні, властивості бактерій обумовлені ферментами, які беруть участь у розщепленні білків, вуглеводів, що викликають відновлення і окислення різних субстратів.

Причому кожен з видів бактерій виробляє постійний для нього набір ферментів. Найчастіше при вивченні антигенних властивостей використовують реакцію аглютинації на склі.

За допомогою реакції нейтралізації токсину антитоксином in vivo або in vitro визначають токсиноутворювання мікробів. У ряді випадків вивчають і інші фактори вірулентності. Вище перелічені дослідження, які проводяться в бактеріологічній лабораторії, дозволяють визначити рід або вид збудника.

У тому числі для виявлення джерела інфекції, з метою виявлення епідемічної ланцюжка захворювання, здійснюють внутрішньовидову ідентифікацію бактерій. Суть внутрішньовидової ідентифікації бактерій полягає у визначенні фаговари або фаготип, вивченні різних властивостей виділених антигенних бактерій. Процес визначення фаготип називають фаготипування. Фаготипування здійснюють при черевному тифі, стафілококової інфекції, паратиф В.

На чашку з живильним середовищем, яка засіяна за допомогою шпателя виділеної чистої культурою, наносять різні діагностичні фаги по краплині. У випадку, якщо культура чутлива до даного фагу, в результаті бактеріологічного дослідження спостерігаються так звані негативні колонії (бляшки), які виглядають як утворення округлої форми ділянок зруйнованих бактерій. Культура збудника може бути чутлива до декільком чи одній фагам.

У зв'язку з широким розповсюдженням лікарсько-стійких форм бактерій, для призначення раціональної хіміотерапії необхідно визначення антибіотикограми - стійкості або чутливості до хіміотерапевтичних препаратів виділеної чистої культури збудника. Для антибіотикограми використовують або метод паперових дисків, або найбільш точний, але громіздкий метод серійних розведень.

Метод паперових дисків базується на виявленні зони пригнічення розмноження бактерій навколо дисків, які просочені антибіотиками. У разі застосування методу серійних розведень хімічний препарат - антибіотик з рідким живильним середовищем розводять в пробірках, після чого засівають в пробірки однакову кількість бактерій. По відсутності або наявності росту бактерій проводять облік результатів. У результаті бактеріологічного методу дослідження для визначення ідентичності штамів, отримана антибіотикограма може служити і епідеміологічним цілям.

Можуть проводитися повторні дослідження при виявленні бактеріоносійства т. К. Можна не виявити збудника в одній порції матеріалу.

В даний час в сучасному світі існують прискорені методи визначення виду і роду бактерій. Застосовують систему індикаторних папірців - СІБ, що дозволяє через 6-12 годин і без використання великого числа поживних середовищ виділити чисту бактеріальну культуру. Також широко використовують імунофлюоресцентний метод для експрес-діагностики інфекційних хвороб (див. Серологічні дослідження).

15. Вплив фізичних, хімічних та біологічних факторів на мікроорганізми. Стерилізація, методи та засоби стерилізації. Контроль ефективності стерилізації. Асептика. Антисептика

Методи мікробної деконтамінації: стерилізація, дезінфекція, антисептика та асептика.