Определение острой токсичности препарата "Эмикон" на карпах

Исследования проводились в условиях аквариального помещения Дмитровского рыбохозяйственного технологического института (филиал) федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования "Астраханский государственный технический университет" (ДРТИ ФГБОУ ВО "АГТУ"). Схему опыта разрабатывали на основании имеющегося исходного показателя ЛД 50 действующего вещества для карпов [5].

При проведении опытов применялись биологические, клинические и патоморфологические методы исследований.

В эксперименте были использованы чешуйчатые карпы массой 140-150 г, в возрасте 18 месяцев в количестве 42 экз. Предварительно рыбы содержались в пластиковом бассейне объемом 300 л. Затем было сформировано 6 опытных и 1 контрольная группы рыб по 6 экз. в каждой, которые пересадили в проточные аквариумы объемом 70 л. Рыбам первой опытной группы препарат задавали в дозе 2,5 г/кг, второй - 5,0 г/кг, третьей -

7,5 г/кг, четвертой - 10 г/кг, пятой - 12,5 г/кг, шестой - 15 г/кг, а контрольной группе рыб вводили суспензию из вспомогательных веществ в дозе 15 г/кг. Температура на протяжении всего эксперимента составляла +15 ...+17°С, рН - 8,1, содержание кислорода в воде - 8,3-8,7 мг/л. Рыб в контрольной и опытных группах кормили экструдированным кормом для молоди карпа в количестве 1 % от ихтиомассы.

Препарат рекомендован для карповых рыб в дозе 0,15 г на 1 кг массы рыб. Непосредственно перед введением "Эмикон" смешивали с водой до получения густой суспензии. Для подготовки исследуемого образца к введению в передний отдел кишечника было экспериментально выбрано соотношение максимально возможного количества препарата к воде 1 : 5, при котором образуется суспензия, способная проходить сквозь просвет катетера. Аналогичным образом готовили контрольный образец из вспомогательных веществ.

На основании предварительных опытов установлена невозможность однократного введения доз, вызывающих гибель рыб, поэтому суспензии препарата с помощью катетера вводили рыбам в передний отдел кишечника от 2 до 4 раз в течение суток порционно с интервалом 2 часа. Для каждой рыбы производился перерасчет в соответствии с живой массой. Карпам контрольной группы вводили суспензию из вспомогательных веществ.

Расчет ЛД 50 произведен по методу Кёрбера с использованием формулы:

где ЛД 100 - доза изучаемого вещества, которая вызвала смертельный исход у всей группы рыб;

Е - интервал между каждыми двумя смежными дозами;

Д - среднее арифметическое из числа рыб, у которых наблюдался летальный исход под влиянием каждых двух смежных доз;

N - число рыб в каждой группе;

Е - сумма.

Результаты исследований. Схема и результаты опыта по оценке острой токсичности препарата "Эмикон" на годовиках карпа в лабораторных условиях описаны в таблице № 1. Дозы "Эмикона" 2,5 г/кг и 5,0 г/кг ихтиомассы, введенные за 2 приема, не вызывали гибели и выраженных клинико-патологических признаков токсикоза у подопытных рыб. После каждого введения суспензии препарата у рыб в течение первых 2-3-х часов наблюдали незначительное угнетение, вялость, малоподвижность. В дальнейшем общее состояние у большинства рыб восстановилось, только у отдельных рыб координация движений была немного нарушена.

При введении дозы препарата 7,5 г/кг их- тиомассы (1,125 г / экз.) за 3 приема каждые 2 часа, к концу опыта (14 день) погибла 1 из 6 рыб. У всех карпов первые 3-6 дней наблюдали клинические признаки токсического воздействия - замедленное поведение, вздутие брюшка. В конце опыта выжившие рыбы начинали брать корм. Кишечник немного гиперемированный, внутренние органы близки к норме, сдавленные.

При введении дозы препарата 10 г/кг ихтиомассы за 3 приема к концу опыта погибло 3 рыбы с проявлением у погибших и выживших особей таких же клинических признаков токсического воздействия, как и в группе № 2.

При введении дозы препарата 12,5 г/кг их- тиомассы за 4 приема гибель к концу опыта составила 4 экз. из 6 рыб с проявлением у погибших рыб признаков токсикоза - угнетенное и замедленное поведение, сильно вздутое брюшко, которое сохранялось до гибели, внутренние органы и кишечник гиперемиро- ванные, сдавленные.

При введении дозы препарата 15 г/кг ихтиомассы погибли все 6 опытных рыб, при этом 4 из них погибли в первые 5 дней с проявлением клинических признаков острого токсического воздействия.

Результаты опытов по оценке острой токсичности препарата "Эмикон"

Таблица 1

Обработка материала по изучению острой токсичности препарата "Эмикон" на карпах по методу Кёрбера

Таблица 2

ЛД 50 = 15000 - (0,5x2500 + 2x2500 + 3,5x2500 + 5x2500) : 6 = 15000 - 27500 : 6 = 10416,7 мг/кг

У контрольной группы рыб, которой по схеме была введена суспензия из вспомогательных веществ в дозе 15 г/кг ихтиомассы, также произошла гибель всех 6 рыб с проявлением у них выраженных клинических признаков отравления в виде сильного вздутия брюшка, гиперемии внешних покровов, кишечника, ануса, кровоизлияний в почках и печени (очевидно в результате их сдавливания).

На основании того, что при введении одинаковых доз препарата и суспензии из вспомогательных веществ (15 г/кг ихтиомассы) наблюдалась сходная динамика гибели рыб, можно заключить, что наличие действующего вещества в испытанной дозе не влияет на увеличение токсичности препарата, а гибель рыб обусловлена не токсическими свойствами активной фармацевтической субстанции, а введением большого объема суспензии препарата.

Исходные показатели для расчета ЛД 50 на основании результатов проведенных опытов приведены в таблице 2.

При обработке данных эксперимента при помощи прикладной программы для ПК LD16, LD50, LD84, LD100 evasion V0.2 Copyright© 2002 НПП "Наука Плюс" получены следующие значения:

LD16 = 6987,35 мг/кг;

LD50 = 10610,08 мг/кг;

LD84 = 14232,8 мг/кг;

LD100 = 16044,16 мг/кг.

Таким образом, LD50 = 10610,08 ± 922,68 мг/кг. Оба метода дали близкий результат, что говорит о достоверности полученных данных.

Заключение