Изучение токсикологического и раздражающего действия пробиотической кормовой добавки Трилактосорб для использования в перепеловодстве

Размещено на http://www.allbest.ru/

Изучение токсикологического и раздражающего действия пробиотической кормовой добавки Трилактосорб для использования в перепеловодстве

Кощаев А. Г., Мигина Е. И.,

Лысенко Ю. А. ФГБОУ ВПО

"Кубанский государственный аграрный

университет", г. Краснодар

Введение

Выращивание здоровой и высокопродуктивной птицы является одной из главных задач для достижения продовольственной биобезопасности РФ [1, 2, 3, 4, 11, 12. 13, 14, 19, 22, 23, 24]. Одним из факторов, сдерживающих развитие отрасли птицеводства, в частности, перепеловодства являются желудочно-кишечные заболевания, которые, в первую очередь, вызваны дисбактериозами [7, 10]. Основной путь в профилактике данных болезней - использование естественных и биобезопасных препаратов и добавок на основе живой микрофлоры [2, 6, 8, 26, 28, 30].

Мировой опыт свидетельствует, что в решении этих проблем все большее значение приобретает использование пробиотиков [1, 2, 3, 4, 8, 15, 27, 29]. Вытесняя из кишечного тракта патогенную микрофлору, они не влияют на представителей естественного биоценоза, способствуют нормализации процессов пищеварения и перевариванию комбикормов [2, 5, 8, 20, 27, 28, 30].

Используемые на ранних стадиях развития пробиотические добавки способствуют заселению желудочно-кишечного тракта полезной симбионтной микрофлорой. Поэтому, возможность создания благоприятного микробного фона в пищеварительном тракте с помощью пробиотиков и рационального кормления представляется важным моментом для повышения здоровья птицы [1, 3, 5, 16, 18, 19, 22, 26].

В последнее время появляются новые отечественные пробиотические добавки и препараты, которые требуют детального изучения и внедрения в производство [11, 12, 16, 21, 22, 29]. В связи с этим, целью наших исследований явилось изучение в лабораторных условиях токсикологического и раздражающего действия новой пробиотической кормовой добавки Трилактосорб.

Материал и методика. Опыты проводили в виварии факультета ветеринарной медицины, на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики Кубанского государственного аграрного университета и лаборатории Краснодарского НИВИ.

В экспериментах использовали новую пробиотическую кормовую добавку Трилактосорб, обладающая антитоксическими свойствами и представляющая собой смесь термофильных молочнокислых культур (Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbru0ckii subsp. Bulgaricus, Lactobacillus acidophilus), выращенных на соевом растительном сырье с использованием сорбирующего горно-минерального компонента. Культуры микроорганизмов получены в ГНУ ВНИИМИ (г. Москва).

Токсикологическая оценка пробиотической кормовой добавки Трилакто-сорб изучалась экспресс-методом на стилонихиях (ГОСТ Р 52337-2005), а также путем определения параметров острой токсичности на мышах и крысах (ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009). Кож-но-резорбтивное действие и раздражающее свойство на слизистые оболочки глаз изучали на кроликах - альбиносах согласно ГОСТ Р ИСО 10993.10-99. В качестве дополнительного исследования раздражающего действия изучали влияние пробиотической добавки Трилакто-сорб на слизистую ротовой полости хомячков (ГОСТ Р ИСО 10993.1099).

В эксперименте было использовано 82 лабораторных животных (30 мышей, 30 крыс, 4 кролика-альбиноса и 18 хомячков), которых перед началом исследований выдерживали в течение 5 дней для акклиматизации.

Лабораторные животные находились в стандартных условиях вивария, имели свободный доступ к воде, нормальный температурный и световой режимы, содержались клетках с древесной стружкой в качестве подстилки и получали лабораторный гранулированный корм ПК 120-3.

Результаты исследований. Токсикологическую оценку пробиотической кормовой добавки Трилактосорб экспресс-методом осуществляли на суточной культуре стилонихий (Stylonychia mytilus) за 1,5-3 ч, находящейся в стадии экспоненциального роста, путем воздействия на них различных фракций токсических веществ, извлеченных из исследуемой добавки водным и ацетоновым экстрактами. Результат биотестирования оценивали по количеству погибших простейших. Безопасным следует считать добавку, в которой 70-100% особи сохранили жизнеспособность при одновременном параллельном исследовании как ацетонового, так и водного экстракта. На начало опыта в каждой лунке было от 15 до 20 шт. инфузорий. В качестве контроля использовали 1%-й раствор ацетона (1%-й РА) и минеральный раствор Лозина-Лозинского (МР ЛЛ).

Выживаемость стилонихий N (%) вычисляли по формуле:

N = N2 : Ni * 100, где N2 - среднеарифметическое (из пяти испытаний) значение количества сти-лонихий в конце опыта, шт.; N1 - среднеарифметическое (из пяти испытаний) значение количества стилонихий в начале опыта, шт.; 100 - перевод результата в проценты.

Результаты экспресс-метода на инфузориях представлены в таблице 1.

Таблица 1. Токсикологическая оценка пробиотической кормовой добавки Трилактосорб экспресс-методом на инфузориях

Результаты эксресс-оценки показали, что выживаемость стилонихий при действии на них водного и ацетонового экстрактов пробиотической кормовой добавки Трилактосорб, соответственно, составила 97,8 и 94,7 %, что, согласно ГОСТ Р 52337-2005, находится в пределах, характеризующих её как малотоксичную добавку растительного происхождения.

Оценку острой токсичности осуществляли на клинически здоровых беспородных белых мышах с начальной массой тела 20-25 г (возраст 2.5-3.0 мес.) и половозрелых беспородных белых крысах с массой тела 220-250 г (возраст 2.5-3.0 мес.) путем однократного применения пробиотической кормовой добавки Трилактосорб в смеси с кормов лабораторным животным натощак. В эксперименте методом групп-аналогов было сформировано по пять групп животных обоего пола 6 особей в каждой. Согласно научной литературы эффективная доза, характерная для данной группы фармакологических добавок составляет 0,2 % от массы корма [5, 6, 8, 9, 16, 17, 18, 20. 21, 25]. В связи с чем, нами было испытано 3 дозы пробиотической кормовой добавки Трилактосорб от научно-предполагаемой: 3- (0,6%),

(1,0%) и 10-кратные (2,0%). В качестве группконтроля использовались: отрицательный контроль (ОК) - мыши и крысы получали только стандартный лабораторный гранулированный корм ПК 120-3 и контроль модельной среды (КМС), в которой лабораторные животные

употребляли стандартный комбикорм и субстрат, входящий в состав пробиотической кормовой добавки Трилактосорб, в 10-кратной дозе (2,0 %). Наблюдение проводили в течение 14 дней с учетом изменения общего состояния, а также поведения подопытных лабораторных мышей и крыс.

Результаты острой токсичности пробиотической кормовой добавки Трилактосорб на подопытных животных представлены в таблице 2.

Таблица 2. Острая токсичность пробиотической кормовой добавки Трилактосорб на лабораторных животных, (n=6)

Из таблицы 2 видно, что однократное пероральное использование исследуемых доз пробиотической кормовой добавки Трилактосорб не вызывает гибели лабораторных животных за весь период наблюдения. Состояние подопытных мышей и крыс оставалось удовлетворительным, с хорошо выраженным аппетитом, животные были подвижны, реакция на внешние раздражители оставалась такой же как и до употребления добавки. Нарушения в функциональной активности органов пищеварительной и мочевыделительной систем, а также проявление других токсических явлений - отсутствовали.

По результатам изучения острой токсичности пробиотической кормовой добавки Трилактосорб можно сделать заключение о том, что определить полулетальную дозу (ЛД50) не удалось. Таким образом, учитывая то, что использование пробиотической кормовой добавки Трилактосорб переносится подопытными животными без каких-либо видимых последствий в максимально используемой дозе, её можно отнести как малотоксичным препаратам данной фармакологической группы.

Свободное пероральное использование пробиотических добавок с кормом сельскохозяйственной птицей, в том числе перепелами в производстве, предполагает возможное их попадание на кожу а также слизистые оболочки глаз, что может вызывать негативное воздействие на организм. В результате чего, нами изучалось раздражающее свойство пробиотической кормовой добавки Трилактосорб на кожу и конъюнктиву глаз.

Изучение кожно-резорбтивного действия испытуемой добавки проводили на 2-х половозрелых кроликах-альбиносах обоего пола массой 2,2-2,5 кг, которым за сутки до проведения опыта выстригали шерсть на симметричных участках обоих боков для аппликации, одна из которых служила контролем. Размер обрабатываемой поверхности кожи составлял от 5 до 8% поверхности тела подопытного животного. 1,0 г пробиотическую кормовую добавку Трилактосорб разводили небольшим объемом воды, затем смачивали ватным тампоном и наносили на участок кожи, а сверху фиксировали повязкой. Местно-раздражающее действие Трилактосорба на кожу оценивалась после 4-х часовой экспозицией, а также через 24, 48 и 72 часов. Обращали внимание на степень кожного проявления (покраснение, повышение чувствительности, припухлость, воспаление), включая эритему и отек. а также возможность появления общей реакции организма кроликов-альбиносов.

Результаты накожных аппликаций показали, что в ходе эксперимента у лабораторных животных местного покраснения не отмечалось, отсутствовали повышение чувствительности, припухлость, воспаление, образование эритемы и отек кожи. Таким образом, индекс первичного раздражения пробиотической кормовой добавки Трилактосорб равнялся нулю.

Оценка раздражающего действия Трилактосорба на конъюнктиву глаз проводилась на 2-х половозрелых кроликах-альбиносах обоего пола массой 2.8-3.0 кг. Перед началом опыта, для выявления выраженных повреждений, обращали внимание на состояние глаз каждого подопытного животного. Эксперимент начинали с того, что кроликам-альбиносам аккуратно в нижний отдел конъюнктивального мешка левого глаза вводили такое количество добавки, которое занимает объем 0,1 мл. После инсоляции нижнее и верхнее веки соединяли и в таком положении выдерживали в течение 2-3 сек. Правый глаз служил контролем. Обследование глаза лабораторных животных после введения пробиотической кормовой добавки Трилактосорб проводили через 1, 24, 48 и 72 часа. Обращали внимание на состояние конъюнктивы, роговицы, радужной оболочки, проявление хематоза (отек конъюнктивы), а также наличие выделений из глаза.

Результаты исследований показали, что введение пробиотической кормовой добавки Трилактосорб в нижний отдел конъюнктивального мешка левого глаза вызывает незначительное покраснение слизистой оболочки и выделение слезных желез сразу после инсоляции, которые исчезали через несколько минут. Дальнейшие наблюдения за кроликами не выявили иной патологии: не отмечалось помутнения роговицы глаза, радужная оболочка была без видимых изменений, хематоз и выделения из глаз отсутствовали. Общее состояние кроликов-альбиносов на всех этапах исследований оставалось удовлетворительным, без изменений.

Изучение дополнительного раздражающего действия пробиотической кормовой добавки Трилактосорб на слизистую ротовой полости проводили на здоровых половозрелых хомячках обоего пола массой 230-250 г. из которых формировали три группы подопытных животных по 6 голов в каждой, получавших разные дозы добавки. Пробиотическую кормовую добавку Трилактосорб в дозе 0,6; 1,0 и 2,0 г разводили в 10,0 мл 0,9%-го раствора хлорида натрия, затем ими пропитывали ватно-марлевые тампоны. Далее помещали их в один защечный мешок каждого лабораторного животного, а другой мешок служил контролем. Продолжительность контакта слизистой рта с материалов составила десять минут. Для предотвращения выталкивания тампона изо рта на каждого хомячка надевали бумажный воротник, располагающийся вокруг шеи так, чтобы не мешать нормальному питанию и дыханию. В конце эксперимента отчет включал в себя макроскопическое исследование защечных мешков сразу после извлечения тампонов, а также оценку состояния слизистой и степень раздражающей реакции.

Проведенный анализ исследований выявил следующую клиническую картину лабораторных животных: слизистая защечного мешка с обеих сторон во всех опытных группах хомячков была чистой, без покраснений, припухлостей, образование отеков и эритем зарегистрировано не было, состояние животных до и после эксперимента не изменилось. Таким образом, индекс раздражающего действия Трилактосорба можно оценить как нулевой, что свидетельствует об отсутствии данного явления на слизистую ротовой полости исследуемой пробиотической кормовой добавки.

Выводы

Комплекс проведенный исследований по изучению токсикологического и раздражающего действия новой пробиотической кормовой добавки Трилактосорб свидетельствует о том, что разработанная добавка не вызывает гибели простейших организмов и лабораторных животных, не проявляет раздражающего действия на кожу, слизистую глаз и ротовой полости, что, в целом, её характеризует как безопасную кормовую смесь для дальнейшего использования в птицеводстве, в том числе перепеловодстве.

добавка кормовой токсичность животное

Список литературы

1. Биотехнология кормов и кормовых добавок / А. И. Петенко, А. Г.Кощаев, И. С. Жолобова, Н. В. Сазонова // Изд-во Кубанский ГАУ. - Краснодар, 2012. - 454 с.

2. Биотехнология получения хлореллы и ее применение в птицеводстве как функциональной кормовой добавки / Г. А. Плутахин, Н. Л. Мачнева, А. Г. Кощаев, И. В. Пятиконов // Труды Кубанского государственного аграрного университета. - 2011. - Т. 1. - N° 31. - С. 101-104.

3. Жолобова И. С. Мясная продуктивность и качество мяса перепелов после применения натрия гипохлорита / И. С. Жолобова, А. В. Лунева, Ю. А. Лысенко // Труды Кубанского государственного аграрного университета. - 2013. - N° 1 (41). - С. 146-150.

4. Жолобова И. С. Влияние натрия гипохлорита на рост и развитие перепелов / И. С. Жолобова, А. В. Лунева, Ю. А. Лысенко, Е. В. Якубенко // Ветеринария Кубани. - 2013. - N° 2. - С. 5-7.

5. Использование в птицеводстве функциональных кормовых добавок из растительного сырья / А. Г. Кощаев, И. А. Петенко, И. В. Хмара, С. А. Калюжный, Е. В. Якубенко // Ветеринария Кубани. - 2013. - N° 5. - С. 20-23.

6. Кощаев А. Г Пробиотик Трилактобакт в кормлении перепелов / А. Г Кощаев, О. В. Кощаева, С. А. Калюжный // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета [Электронный ресурс]. - Краснодар: КубГАУ, 2014. - N° 01 (095). - С. 58-81.

7. Кощаев А. Г. Экологизация продукции птицеводства путем использования пробиотиков как альтернативы антибиотикам / А. Г. Кощаев // Юг России: экология, развитие. - 2007. - N° 3. - С. 94-98.

8. Лысенко Ю. А. Повышение биологического потенциала перепе-лок-несушек при использовании пробиотических кормовых добавок / Ю. А. Лысенко, А. И. Петенко // Ветеринария Кубани. - 2012. - N° 5. - С. 5-7.

9. Лысенко Ю. А. Изучение влияния пробиотической кормовой добавки "Промомикс С" на продуктивность и биобезопасность продукции птицеводства / Ю. А. Лысенко, А. В. Лунева // материалы Международной научнопрактических конференций Общества Науки и Творчества. - Казань ("Science Time"), 2014. - Вып. 5. - С. 112-122.

10. Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов и его коррекция пробиотиками / А. Г Кощаев, Г В. Кобыляцкая, Е. И. Мигина, О. В. Кощаева // Ветеринария Кубани. - 2013. - N° 3. - С. 6-9.

11. Особенности обмена веществ птицы при использовании в рационе пробиотической кормовой добавки / А. Г. Кощаев, С. А. Калюжный, Е. И. Мигина, Д. В. Гавриленко [и др.] // Ветеринария Кубани. - 2013. - N° 4. - С. 17-20.

12. Пат. 2501303, Российская Федерация, МПК51 А 23 К 1/16, А 23 К 3/00 Способ получения кормовой добавки для сельскохозяйственной птицы / А. И. Петенко [и др.]. Опубл. 20.12.2013.

13. Петенко А. И. Концентрат из сока люцерны / А. И. Петенко, А. Г. Кощаев // Птицеводство. - 2005. - N° 5. - С. 28-29.

14. Петенко А. И. Тыквенная паста - источник каротина / А. И. Петенко, А. Г. Кощаев // Птицеводство. - 2005. - N° 7. - С. 15-17.

15. Петенко А. И. Биотехнология кормов и кормовых добавок / А. И. Петенко, А. Г. Кощаев, И. С. Жолобова // Изд-во Кубанский ГАУ. - Краснодар,2012. - 454 с.

16. Петенко А. И. Особенность формирования микробиоценозов ЖКТ и эффективность обменных процессов у перепелов при использовании пробиотических кормовых добавок / А. И. Петенко, Ю. А. Лысенко // Ветеринария Кубани. - 2012. - N° 4. - С. 24-26.

17. Петенко А. И. Кормовые добавки в рационах перепелов / А. И. Петенко, Ю. А. Лысенко // Птицеводство. - 2012. - N° 9. - С. 36-38.

18. Применение моно- и полиштаммовых пробиотиков в птицеводстве для повышения продуктивности / А. Г Кощаев, Г. В. Кобыляцкая, Е. И. Миги-на, О. В. Кощаева // Труды Кубанского государственного аграрного университета. - 2013. - Т. 3. - N° 42. - С. 105-110.

19. Применение новой ферментной кормовой добавки Микоцел в комбикормах для цыплят-бройлеров / Г. В. Фисенко, А. Г. Кощаев, И. А. Петенко, И. М. Донник [и др.] // Ветеринария Кубани. - 2013. - N° 4. - С. 15-17.

20. Пробиотические добавки в комбикормах цыплят-бройлеров/A. Г. Кощаев Г. П. Гудзь, А. И. Петенко, Е. В. Якубенко // Ветеринария Кубани.- 2006. - N° 5. - С. 12-15.

21. Сравнительная оценка эффективности применения пробиотика Трилактобакт в перепеловодстве / А. Г. Кощаев, Е. В. Якубенко, О. В. Кощаева, B. В. Шкредов // Ветеринария Кубани. - 2014. - N° 1. - С. 5-9.

22. Фармакологическое обоснование применения кормовой добавки Микоцел на перепелах / Г. В. Фисенко, А. Г. Кощаев, С. С. Хатхакумов, С. А. Калюжный // Труды Кубанского государственного аграрного университета.- 2013. - Т. 4. - N° 43. - С. 76-82.

23. Хлорелла и её применение в птицеводстве / Г А. Плутахин, Н. Л. Мачнева, А. Г. Кощаев [и др.] // Птицеводство. - 2011. - N° 05. - С. 23-25.

24. Хлорелла и триходерма в качестве функциональных кормовых добавок перепелам / А. Г. Кощаев [и др.] // Аграрная наука. - 2012. - N° 7. - С. 28-29.

25. Эффективность использования нового пробиотика в различные возрастные периоды выращивания перепелов мясного направлений продуктивности / А. Г. Кощаев [и др.] // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета [Электронный ресурс]. - Краснодар: КубГАУ, 2013. - N° 06(090). - С. 230-248.

26. Эффективность применения биотехнологических функциональных добавок при выращивании перепелов/ А. Г. Кощаев, Г. А. Плутахин, Н. Л. Мачнева, Г. В. Фисенко // Ветеринария Кубани. - 2011. - N° 4. - С. 23-25.

27. Bengmark S. Colonic food: pre- and probiotics / S. Bengmark //Am J Ga-stroenterol. - 2000. - V. 95. - N° 1. - P. 5-7.

28. Fuller R. Probiotics and prebiotics: microtlora management for improved gut health / R. Fuller, G. Gibson // Clin Microbiol Infect. - 1998. - N° 4.- P. 477-480.

29. Kociova Z. Ucinnost probiotica thepax vo vykrme brojlerovych kurciat / Z. Kociova, S. Horovsky, T. Wertheimer // Hydinarstvo. - 1990. - T 25.- S. 37-46.

30. Ouwehend A. C. Probiotics: an overview of beneficial effects / A. C. Ouwehend, S. Salminen, E. Isolauri // J. Microbiol. - 2003. - Vol. 41. - N° 2. - P. 63-72.

Резюме

В данной работе представлены результаты изучения токсикологического и раздражающего действия на простейших и лабораторных животных новой пробиотической кормовой добавки Трилактосорб, представляющей собой смесь термофильных молочнокислых культур (Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus, Lactobacillus acidophilus), выращенных на соевом растительном сырье с использованием сорбирующего горноминерального компонента. Изучение токсичности добавки на стилонихиях осуществлялось экспресс-методом путем воздействия на них различных фракций токсических веществ, извлеченных из исследуемой добавки водным и ацетоновым экстрактами. Результаты эксресс-оценки показали, что выживаемость сти-лонихий при действии на них экстрактов добавки Трилактосорба находилось в пределах, характеризующих её как малотоксичную добавку растительного происхождения. Осуществлялась изучение острой токсичности исследуемой добавки на мышах и крысах, а также её кожно-резорбтивного и раздражающего действия на слизистые оболочки глаз и ротовой полости. Однократное пероральное использование исследуемых доз пробиотической кормовой добавки Трилактосорб не вызывает гибели лабораторных животных, состояние лабораторных мышей и крыс оставалось удовлетворительным. Результаты накожных аппликаций показали, что в ходе эксперимента у лабораторных животных местного покраснения не отмечалось, отсутствовали повышение чувствительности, припухлость, воспаление, образование эритемы и отек кожи. Введение пробиотической кормовой добавки Трилактосорб в нижний отдел конъюнктивального мешка глаза вызывает незначительное покраснение слизистой оболочки и выделение слезных желез сразу после инсоляции, которые исчезали через несколько минут. Дальнейшие наблюдения за кроликами не выявили иной патологии. Изучение дополнительного раздражающего действия пробиотической кормовой добавки Трилактосорб на слизистую ротовой полости хомячков показало следующую клиническую картину: слизистая защечного мешка с обеих сторон во всех опытных группах хомячков была чистой, без покраснений, припухлостей, образование отеков и эритем зарегистрировано не было. По совокупности проведенных исследований индекс первичного раздражения изучаемой добавки равнялся нулю.

Ключевые слова: пробиотическая добавка, молочнокислые бактерии, сорбент, токсичность, стилонихии, мыши, крысы, кролики-альбиносы, поведение, аппетит, доза.

Размещено на Allbest.ru