После двукратной промывки планшетов в лунки вносили серии двух-или четырехкратных падающих разведений сывороток крови в ФБ-Т-буфере, содержащем 1% эмбриональную бычью сыворотку, в объеме 100 мкл(начальное разведение тестируемых сывороток 1:10). Инкубация происходит при температуре 37єС в течение 1,5 часов. По окончании процедуры трехкратной промывки в каждую лунку добавляли по 100 мкл конъюгата - меченных пероксидазой хрена антител к IgA человека, разведенных с помощью ФБ-Т буфера с 1% содержанием эмбриональной бычьей сыворотки, и оставляют для контакта при комнатной температуре на 1 час. Затем планшеты 4 раза отмывали ФБ-Т буфером и вносят по 100 мкл ТМВ-субстрата для пероксидазы. Спустя 5 минут ферментативную реакцию останавливали 100 мкл 1Н серной кислоты, результаты считывали на спектрофотометре «Мультискан» при длине волны 450 нм.

Для определения вирус-специфических IgA 96-луночные панели сенсибилизировали 100 мкл раствора очищенного ультрацентрифугированием вируса А/Нью Йорк/61/15(H1N1)pdm в фосфатно-солевом буфере в концентрации 20 агглютинирующих единиц (АЕ).



3.3 ПЦР (полимеразная цепная реакция, PCR)

Выделение вирусной ДНК из клинических проб пациентов.

Выделение ДНК проводили с использованием набора реагентов «РИБО-сорб» (компания АмплиПрайм).

1. В каждую из используемых микропробирок «Эппендорф» вносили по 450 мкл лизирующего раствора. После внесения лизиса перемешивали на вортексе и инкубировали при комнатной температуре в течении 5 минут.

2. Плотно закрытые пробы тщательно перемешивали на вортексе и затем процентрифугировали в течение 5 секунд при 5 тыс об/мин на микроцентрифуге для удаления капель со внутренней поверхности крышки пробирки.

3. Тщательно ресуспендировали сорбент на вортексе. В каждую пробирку отдельным наконечником добавили по 25 мкл ресуспендированного сорбента. Перемешивали на вортексе, оставляли на 1 мин, еще раз перемешали и оставляли на 5 мин при комнатной температуре.

4. Центрифугировали микропробирки для осаждения сорбента при 10 тыс об/мин в течение 30 с на микроцентрифуге. Удаляли надосадочную жидкость вручную используя микродозатор и одноразовые наконечники объемом 1000 мл.

5. Добавляли в пробирки по 400 мкл раствора для отмывки 1. Перемешивали на вортексе до полного ресуспендирования сорбента, центрифугировали 30 с при 10 тыс об/мин на микроцентрифуге. Удаляли надосадочную жидкость вручную используя отдельный наконечник для каждой пробы.

6. Добавляли в пробирки по 500 мкл буфера для отмывки 2. Тщательно ресуспендировали сорбент на вортексе. Центрифугировали 30 с при 10 тыс об/мин на микроцентрифуге. Удаляли надосадочную жидкость вручную с отдельным наконечником для каждой пробы.

7. Повторяли отмывку раствором для отмывки 2, следуя п.6.

8. Добавляли в пробирки по 400 мкл раствора для отмывки 4. Тщательно ресуспендировали сорбент на вортексецентрифугировали 30 с при 10 тыс об/мин на микроцентрифуге. Полностью удаляли надосадочную жидкость из каждой пробирки отдельным наконечником вручную.

9. Помещали пробирки в термостат при температуре 60є С на 12-15 мин для подсушивания сорбента. При этом крышки пробирок должны быть открыты.

10. В пробирки добавляли по 50 мкл РНК-буфера, используя наконечник с аэрозольным барьером, свободный от РНК-аз. Перемешивали на вортексе и центрифугировали пробирки на максимальных оборотах микроцентрифуги (12-13 тыс об/мин) в течение 1 мин. Надосадочная жидкость содержала очищенные РНК и ДНК. Пробы готовы к постановке реакции обратной транскрипции и ПЦР-амплификации.

Очищенная ДНК хранилась при температуре -20є С.

Последовательность проводимой ПЦР реакции.

ПЦР с пробами десневой жидкости из пародонтальных карманов пациентов проводили с использованием коммерческого диагностического набора «АмплиПрайм® HSV / CMV» («НекстБио»)

СОСТАВ Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN для амплификации фрагментов ДНК HSV и CMV c гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» позволяет проводить ПЦР-исследование в качественном и количественном формате.

Амплификация с детекцией в режиме «реального времени».

А. Подготовка пробирок для амплификации.

Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы ДНК - 10 мкл.

1. Рассчитывали количество каждого реагента, требующееся для приготовления реакционной смеси. На одну реакцию требовалось 10 мкл ПЦР-смеси HSV / CMV и 5 мкл ПЦР-буфера-H. Смесь готовили на общее число исследуемых и контрольных образцов (см. контрольные реакции в п. 7) плюс запас на несколько реакций.

2. Перемешивали содержимое пробирок с ПЦР-смесью HSV / CMV и ПЦР-буфером-H, осадили капли на вортексе.

3. В отдельной пробирке подготовили реакционную смесь. Смешали необходимое количество ПЦР-смеси HSV / CMV и ПЦР-буфера-H, осадили капли на вортексе.

4. Отобрали необходимое количество пробирок или стрипов для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб.

5. Внесли в каждую пробирку по 15 мкл приготовленной реакционной смеси. Неиспользованные остатки реакционной смеси выбросили.

6. В подготовленные пробирки внесли по 10 мкл проб ДНК, полученных в результате экстракции из исследуемых образцов.

7. Поставили контрольную реакцию для качественного определения ДНК:

а) положительный контроль ПЦР (К+) - в пробирку с реакционной смесью внесли 10 мкл K2 complex.

б) отрицательный контроль экстракции (ОК) - в пробирку с реакционной смесью внесли 10 мкл пробы, экстрагированной из ОКО.

Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени».

Таблица 1. Единая программа амплификации и детекции флуоресцентного сигнала для приборов роторного и планшетного типа.

Цикл	Температура°С	Время	Детекция флуоресцентного сигнала по каналам для флуорофоров	Количество циклов
1	50	15 мин	-	1
2	95	15 мин	-	1
3	95	10 с	-	45
	60	20 с	FAM, JOE, ROX

1. Программировали амплификатор с системой детекции в режиме «реального времени» для выполнения соответствующей программы амплификации и детекции флуоресцентного сигнала.

Детекция флуоресцентного сигнала назначается по каналам для флуорофоров FAM, JOE и ROX.

2. Установили пробирки в ячейки реакционного модуля прибора. Перед постановкой в амплификатор планшетного типа осадили капли со стенок пробирок на вортексе.

3. Запустили выполнение программы амплификации с детекцией флуоресцентного сигнала.

4. По окончании выполнения программы приступили к анализу и интерпретации результатов.

В. Анализ и интерпретация результатов.

Анализ полученных результатов проводили с помощью программного обеспечения прибора, используемого для проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени».

Таблица 2. Анализ кривых накопления флуоресцентного сигнала по 3 каналам.

Канал для флуорофора	FAM	JOE	ROX
Регистрация сигнала, свидетельствующего о накоплении продукта амплификации	ДНК HSV	ДНК CMV	ДНК ВКО-FL

Результаты интерпретировали на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции S-образной (сигмообразной) формы с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, что определяет наличие (или отсутствие) для данной пробы ДНК значения порогового цикла (Сt) в соответствующей графе таблицы результатов.



Таблица 3. Интерпретация результатов при проведении качественного исследования.

Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Сt)	Результат
FAM	JOE	ROX
отсутствует	отсутствует	определено меньше граничного	ДНК HSV и CMV НЕ обнаружены
определено	отсутствует	не учитывается	ДНК HSV обнаружена
отсутствует	определено	не учитывается	ДНК CMV обнаружена
отсутствует	отсутствует	отсутствует или определено больше граничного	Невалидный

Результат качественного ПЦР-исследования считали достоверным, если получены правильные результаты для контролей этапов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с таблицей ниже и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.

Таблица 4. Результаты для контролей этапов экстракции и амплификации ДНК.

Контроль	Контролируемый этап ПЦР исследования	Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Сt)
		FAM	JOE	ROX
ОК	Экстракция ДНК	отсутствует	отсутствует	определено меньше граничного K
K-	ПЦР	отсутствует	отсутствует	отсутствует
K+	ПЦР	определено меньше граничного K	определено меньше граничного K	определено меньше граничного K



3.4 Статистическая обработка результатов

Обработка результатов исследования проводилась с помощью статистического пакета «Statistica» (версия 6.0). Для представления полученных данных использовали показатели описательноий статистики: среднее арифметическое, среднегеометрические титры (СГТ), среднеквадратичное отклонение. Сравнение двух независимых групп проводили с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия считались статистически значимыми при р <0.05.



Глава 4. Собственные результаты

4.1 Характеристики групп пациентов и динамика воспалительного процесса

Всего было отобрано 4 группы пациентов, из которых 57 %женщин и 43 % мужчин, средний возраст участников составил 39,5 лет.

Были обследованы пациенты 4 различных групп: со здоровыми тканями пародонта, с легкой степенью ХГП, со средней степенью ХГП, с тяжелой степенью ХГП.

Характеристики каждой из данных групп представлены в таблицах 5-9.

Таблица 5. Количественная и качественная характеристика исследуемой группы пациентов со здоровым пародонтом (1 группа)*

№	Пол	Возраст	ХРГС, частота	Сопутствующие заболевания	Вид прикуса
1	М	27	Да, 2-3 р.в.г	Нет	Глубокий травмирующий
2	Ж	20	Да, 1 р.в.г	Нет	Скученный
3	М	28	Да, 1-2 р.в.г	Нет	Ортогнатический
4	М	28	Да, 2-3 р.в.г	Нет, но отмечает наличие ХГП у родителей в течении 5 лет	Ортогнатический
5	Ж	18	Да, 2-3 р.в.г	Нет	Скученность

У данной группы пациентов были проведены следующие мероприятия:

1) Обследование (клиническое, рентгенологическое- Конусно-лучевой компьютерный томограф GALILEOS (Sirona, Германия), микробиологическое, иммунологическое).

2) Лечение

-Обучение и коррекция ИГПР с последующим неоднократным контролем, ПГПР.

-Консервативное лечение :использование антисептиков и т.д.

-Устранение местных факторов, способствующих накоплению микробной бляшки, в том числе устранение дефектов пломб, восстановление контактных пунктов, избирательное пришлифовывание.

-Лечение кариеса и осложненного кариеса.

3) В дальнейшем планируется ортодонтическое и/или ортопедическое лечение по показаниям.

Клинические материалы, полученные от пациентов.

- пробы слюны: здоровый пародонт.

- десневая жидкость из десневой борозды

Таблица 6. Количественная и качественная характеристика исследуемой группы пациентов с легкой степенью тяжести ХГП (2 группа)*

№	Пол	Возраст	ХРГС, частота	Жалобы	Сопутствующие заболевания	Прикус
6	Ж	35	Да, 2-3 р.в.г.	Кровоточивость при чистке, отек, воспаление десен	Аллергия	Открытый перекрестный
7	М	52	Да, 1 р.в.г	Кровоточивость при чистке, неприятный запах из п/рта, отек, воспаление десен	ГБ, ИБС	Скученность зубов
8	Ж	53	Да, 3-4 р.в.г.	Кровоточивость при чистке, во время приема пищи, зуд и жжение в деснах, смещение зубов, отек, воспаление десны	Отсутствуют	Аномалии положения зубов
Итого: 2Ж/1М, средний возраст 46,6 лет, наличие ХРГС 100%, сопутствующие заболевания присутствуют у 2/3 исследуемой группы, патологии прикуса 100%

У данной группы пациентов были проведены следующие мероприятия:

1)Обследование (клиническое, рентгенологическое- Конусно-лучевой компьютерный томограф GALILEOS (Sirona, Германия), микробиологическое, иммунологическое и т.д.).

2)Лечение

-Обучение и коррекция ИГПР с последующим неоднократным контролем, ПГПР.

-Консервативное лечение: использование антисептиков.; антибактериальная терапия - местная и/или общая и т.д.

-Устранение местных факторов, способствующих накоплению микробной бляшки, в том числе устранение дефектов пломб, восстановление контактных пунктов, шинирование подвижных зубов, избирательное пришлифовывание.

-Лечение кариеса и осложненного кариеса.

-Хирургическое лечение заболеваний пародонта (лоскутная операция, коррекция уздечек, тяжей СОР). Изготовление иммедиат протезов.

3)В дальнейшем планируется ортопедическое лечение по показаниям.

Таблица 7. Количественная и качественная характеристика исследуемой группы пациентов со средней степенью тяжести ХГП (3 группа)*

№	Пол	Возраст	ХРГС, частота	Жалобы	Сопутствующие заболевания	Прикус
9	М	42	Да, 1 р.в.г	Кровоточивость, подвижность, отек, воспаление десен	Аллергия на ЛС	Ортогнатический
10	М	49	Да, 2-3 р.в.г	Кровоточивость во время пищи, отек, воспаление десен	Отсутствуют	Ортогнатический, с аномалиями зубов
11	Ж	45	Да, 1-2 р.в.г	Кровоточивость, подвижность, отек, воспаление десен	Отсутствуют	Ортогнатический
Итого: 2М/1Ж, средний возраст 45,3 года, наличие ХРГС 100%, сопутствующие заболевания отсутствуют, прикус ортогнатический у 100%.

У данной группы пациентов были проведены следующие мероприятия:

1)Обследование (клиническое, рентгенологическое- Конусно-лучевой компьютерный томограф GALILEOS (Sirona, Германия), микробиологическое, иммунологическое и т.д.).

2)Лечение

-Обучение и коррекция ИГПР с последующим неоднократным контролем, ПГПР.

-Консервативное лечение: использование антисептиков.; антибактериальная

терапия - местная и/или общая и т.д.

-Устранение местных факторов, способствующих накоплению микробной бляшки, в том числе устранение дефектов пломб, восстановление контактных пунктов, шинирование подвижных зубов, избирательное пришлифовывание.

-Лечение кариеса и осложненного кариеса.

-Хирургическое лечение заболеваний пародонта (лоскутная операция, коррекция уздечек, тяжей СОР). Изготовление иммедиат протезов.

3)В дальнейшем планируется ортопедическое лечение по показаниям.

Таблица 8. Количественная и качественная характеристика исследуемой группы пациентов с тяжелой степенью ХГП (4 группа)*

№	Пол	Возраст	ХРГС, частота	Жалобы	Сопутствующие заболевания	Прикус
12	Ж	52	Да, 1-2 р.в.г.	Кровоточивость при чистке, во время приема пищи, смещение зубов, попадание пищи м/у зубами, отек, воспаление десен	Хронический гастрит	Скученность зубов
13	Ж	49	Да, 2-3 р.в.г.	Смещение зубов	Аллергия	Дистальный прикус
14	Ж	55	Да, 1-2 р.в.г.	Кровоточивость при чистке, во время приема пищи, подвижность зубов, смещение зубов, отек, воспаление десен	Аллергия на АБ пенициллинового ряда	Аномалии положения зубов
Итого: 3Ж, средний возраст 52 года, наличие ХРГС 100%, сопутствующие заболевания 100, патологии прикуса у 100%.



У данной группы пациентов были проведены следующие мероприятия:

1)Обследование (клиническое, рентгенологическое- Конусно-лучевой компьютерный томограф GALILEOS (Sirona, Германия), микробиологическое, иммунологическое и т.д.).

2)Лечение

-Обучение и коррекция ИГПР с последующим неоднократным контролем, ПГПР.

-Консервативное лечение: использование антисептиков.; антибактериальная

терапия - местная и/или общая и т.д.

-Устранение местных факторов, способствующих накоплению микробной бляшки, в том числе устранение дефектов пломб, восстановление контактных пунктов, шинирование подвижных зубов, избирательное пришлифовывание.

-Лечение кариеса и осложненного кариеса.

-Хирургическое лечение заболеваний пародонта (лоскутная операция, коррекция уздечек, тяжей СОР). Изготовление иммедиат протезов.

3)В дальнейшем планируется ортопедическое лечение по показаниям.

Таким образом, можно отметить следующее: в исследовании принимали участие 14 человек, у каждого из которых, вне зависимости от выраженности патологии, имеется ХРГС, выраженный с различной частотой. У 71 % пациентов имелись разного рода патологии прикуса, что является одним из факторов развития пародонтита. У остальных 28 % прикус без патологий.

У 57 % исследуемых отсутствовали сопутствующие заболевания, что свидетельствует о том, что данный критерий не является значимым при развитии заболеваний пародонта, однако при тяжелом течении ХГП сопутствующие заболевания встречались в 100%.

64 % исследуемых предъявляют жалобы на «Кровоточивость при чистке, во время приема пищи, смещение зубов, попадание пищи между зубами, подвижность, отек, воспаление десен», остальные 46% относятся к группе пациентов со здоровыми тканями пародонта и жалоб не предъявляют.

Исходя из данных показателей, можно сделать вывод о том, что для исследования влияния воспалительных вирусных заболеваний на местный противовирусный иммунитет данная группа пациентов подходит, так как в анамнезе у всех имеется герпетическая вирусная инфекция, которая проявляется с различной частотой в виде ХРГС.

4.2 Изучение этиологической значимости вирусов герпеса в течении пародонтита

Пробы содержимого десневой борозды были изучены методом ПЦР в реальном времени с помощью гидролизируемых молекулярных зондов. Измерение выделенной ДНК из проб на спектрофотометре (NanoView) показало, что в среднем выход ДНК составил 350 нГ. Для ОК амплификация отсутствует. Для положительных контролей по каналам FAM, JOE, ROX зарегистрировано значение порогового цикла меньше граничного. Это свидетельствует о получении правильных результатов для контролей этапов экстракции и амплификации ДНК (Рис. 4).

В лунках с исследуемыми пробами амплификация не зарегистрирована, что свидетельствует об отсутствии в исследованных пробах генетического материала ВПГ-1, ВПГ-2 и ЦМВ в необходимой концентрации. В связи с этим было высказано предположение, что сайт забора материала для этого вида анализа не является оптимальным. Однако аналогичные результаты были получены после анализа этим же методом проб слюны. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об отсутствии активной герпетической инфекции полости рта ВПГ-1, ВПГ-2 и ЦМВ на момент обследования. В связи с этим планируется изучить пробы на другие разновидности вирусов герпеса. В дальнейшем рекомендовано расширить группы обследованных, уделив внимание пациентам с рецидивирующей герпетической инфекции.

Рисунок 4. Кривые амплификации .

4.3 Изучение местного иммунитета слизистой полости рта

Содержание IgA определяли в пробах слюны, полученных от пациентов на различных стадиях лечения . Пробы хранили при - 20° С

На рисунке 5 представлены кривые, представляющие зависимость усредненных значений оптической плотности лунок с анализируемыми пробами, обработанными или не обработанными ингибитором пептидазы PMSF, от разведения проб.

Показано, что обработка ингибитором пептидазы PMSF приводила к увеличению значений OD450, которое было выражено при наименьших разведениях, однако эти различия не были статистически значимыми.



Рисунок 5. Зависимость усредненных значений оптической плотности лунок с анализируемыми пробами, обработанными или не обработанными ингибитором пептидазы PMSF, от разведения проб. По оси абсцисс представлена кратность разведений, по оси ординат - оптическая плотность при длине волны 450 нм (OD450).

На Рис. 6 представлены результаты изучения общих и противовирусных IgA в слюне у всех групп пациентов до, в процессе и после лечения. В контрольную группу входили пациенты без воспалительных заболеваний пародонта. В качестве антигена для изучения противовирусного иммунитета использовали эпидемически актуальный вирус гриппа пандемического подтипа A(H1N1)pdm. Показано, что уровень общих IgA был в среднем в 4 раза выше по сравнению с противовирусными антителами (Рис. 5). В норме титры общих IgA были постоянными и составили 1:512. У нескольких пациентов в процессе лечения наблюдалось повышение общих IgA, которое впоследствии возвращалось к первоначальным значениям. В отношении противовирусных антител к вирусу пандемического гриппа А/Нью Йорк/61/15(H1N1)pdm показано, что и в норме, и при патологии их количество существенно варьировало от пороговых значений (1:16) до 1:1024, так как уровень противовирусного иммунитета зависит от предыдущих контактов с вирусами. После лечения количество противовирусных антител возрастало статистически значимо (Р=0,02), что может свидетельствовать о положительном влиянии проведенного курса лечения на местный противовирусный иммунитет вследствие активации антитело-продуцирующих клеток памяти.

Рисунок 6. Результаты иммуноферментного анализа с образцами слюны пациентов.

Рисунок 7. Содержание общих локальных IgA в слюне пациентов в зависимости от тяжести течения ХГП.

Как видно из Рис. 7, содержание общих локальных IgA, при легкой степени тяжести ХГП приближалось к показателям у пациентов без патологии. Разброс значений наблюдался в случаях среднего и тяжелого течения. Эти данные могут свидетельствовать о влиянии тяжести течения хронического воспалительного процесса пародонта на уровень неспецифического местного иммунитета слизистой оболочки рта, опосредованного секреторными IgA.



Заключение и выводы

Показано, что у 71% пациентов из исследуемых групп хронические заболевания пародонта были связаны с аномалиями прикуса. При тяжелом течении пародонтита в 100% наблюдались сопутствующие заболевания.

При исследовании методом ПЦР биоматериала, полученного из десневых борозд и пародонтальных карманов пациентов с ХГРС, в исследованных пробах было не выявлен генетический материал вирусов герпеса 1 типа, вирусов герпеса 2 типа и цитомегаловируса, способных активно влиять на процессы развития заболеваний пародонта. Из этого следует, что данная выборка пациентов оказалась недостаточной для доказательства влияния вирусной ДНК на возникновение и усиление заболеваний полости рта.

При попытке исследовать методом ПЦР пробы слюны результаты на графиках были схожими, что подтвердило отсутствие вирусной активности герпетической инфекции в полости рта, представленной вирусами герпеса 1 и 2 типа, а также цитомегаловирусом.

Исследование местного иммунитета слизистой оболочки полости рта на наличие и количество локальных IgA, прошло успешно. Было выявлено, что при среднем и тяжелом течении хронического генерализованного пародонтита, содержание локальных антител IgA увеличивается в среднем от значения нормы. Это свидетельствует о том, что воспалительные патологические заболевания полости рта имеют связь с противовирусным иммунитетом слизистой оболочки полости рта, и способны оказывать влияние на тяжесть течения и развития заболеваний тканей пародонта, посредством угнетения его функций.

Более подробное исследование позволит глубже изучить проблемы пародонтологических заболеваний, рассмотрев их с более широкой точки зрения, а именно через зависимость функционирования иммунитета полости рта от присутствия и патогенности вирусного агента в десневой жидкости и слюне.

1. В группе обследованных пациентов у 100% в анамнезе имелась герпетическая инфекция, представленная ХРГС, который проявляется с разной частотой и в разные периоды. При воспалительных заболеваниях пародонта не была выявлена корреляция степени тяжести заболевания с рецидивами герпетической инфекции. В большинстве случаев воспалительные заболевания пародонта были связаны с аномалиями прикуса.

2. Проведенное исследование проб десневой жидкости и слюны методом полимеразной цепной реакции не выявило вирусного генетического материала, что свидетельствует об отсутствии вирусной инфекции в активной фазе у конкретной выборки пациентов. При последующих исследованиях для установления этиологии герпетической инфекции у пациентов с ХГРС следует производить забор проб в фазу активности вирусной инфекции.

3. Разработана методика выявления локальных и вирус-специфческих IgA в слюне с помощью ИФА при использовании рекомбинантного пептида стрептококка, содержащего IgA-связывающий участок.

4. Изучение проб слюны разработанным методом показало, что в норме содержание общих локальных IgA в слюне является постоянным. Курс лечения хронического оказывает положительное влияние на состояние общего и вирус-специфического локального иммунитета, опосредованного IgA.



Список использованной литературы

1. Афанасьев У. В., Соловьева А. М., Афиногенов Г. Е. - Роль микробного фактора в развитии начальных форм воспалительных заболеваний пародонта. 2001 г.

2. Бабичев С.А., Коротяев А.И. - Медицинская микробиология, иммунология, вирусология. 2010 г.

3. Барер Г. М., Немецкая Т. И. - Болезни пародонта. Клиника, диагностика и лечение: Учебное пособие. 1996 г.

4. Боровский Е.В., Иванов В.С., Максимовский Ю. М., Максимовская Л. Н. - Терапевтическая стоматология, Учебник. - М.: Медицина, 2001 г.

5. Долгих В.В, Кулеш Д.В., Колесникова Л.Р., Мемезова Н.Н. - Выявление пародонтопатогенных микроорганизмов у пациентов с диагнозом эссенциальная артериальная гипертензия методом ПЦР. 2012 г.

6. Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилов Е.М. - Теория и практика ИФА. 1991 г.

7. Исаков.В.А, В.В.Борисова. - Герпес. Патогенез и лабораторная диагностика., 1999 г.

8. Караков К.Г., Эльбекьян К.С., Маркарова Г.В. - Основы биохимии тканей и органов полости рта. 2012 г.

9. Костюк С.А., Кулага О.К., Хворик Д.Ф. - Новые аспекты клинического применения полимеразной цепной реакции. - «Медицинские новости». - №5. - 2006г.

10. Круглов С.В., Малышев И.Ю. - Основы метода иммуноферментного анализа. 2010 г.

11. Луцкая И.К. - Заболевания слизистой оболочки полости рта / - М.: Мед. лит., 2007 г.

12. Павлов И.П., Борисов Л. Б.. - Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. 2005 г.

13. Покровский В.В., Федоров Н.А., Шипулин Г.А., Безруков В.М. - Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции. Основные положения .1995 г.

14. Самойликов П.В. - Принципы иммуноферментного анализа, основные виды ИФА, применение в диагностике, 2009 г.

15. Царев В.Н. - Микробиология, вирусология и иммунология полости рта. 2013 г.

16. Annie Kitty George, Sukumaran Anil. - Acute Herpetic Gingivostomatitis Associated with Herpes Simplex Virus 2: Report of a Case, 2014

17. Contreras A, Slots J. - Herpesviruses in human periodontal disease. J Periodontal Res, 2000

18. Hiroshi Nagura. - Mucosal Defense Mechanism and Secretory IgA System, Department of Pathology, Tohoku University School of Medicine, Sendai, 980, 1989

19. Kamma, J. J., Contreras, A., & Slots, J. - Herpes viruses and periodontopathic bacteria in early?onset periodontitis. Journal of clinical periodontology, 2001

20. Lasky LA, Dowbenko DJ. - DNA sequence analysis of the type-common glycoprotein-D genes of herpes simplex virus types 1 and 2., 1984

21. Mc Crudden, M. T. C., Irwin, C. R., Linden, G. J., & Lundy, F. T. - Matrix metalloproteinase?8 activity in gingival crevicular fluid: development of a novel assay. Journal of periodontal research, 2017

22. Mohammad Mukhit Abdul Gaffar Kazi, Renu Bharadwaj, Kishore Bhat, Daisy Happy, - Association of Herpes Viruses with Mild, Moderate and Severe Chronic Periodontitis, 2015

23. Parra B, and Slots J, - Detection of human viruses in periodontal pockets using polymerase chain reaction, Oral Microbiol Immunol, 5, 1996

24. Saygun I, Sahin S, Ozdemir A, Kurtis B, Yapar M, Kubar A, et al. - Detection of human viruses in patients with chronic periodontitis and the relationship between viruses and clinical parameters. J Periodontol, 2002

25. Slots J. - Herpesviral?bacterial synergy in the pathogenesis of human periodontitis. Curr Opin Infect Dis, 2007

26. Sunde PT, Olsen I, Enersen M, Grinde B.- Patient with severe periodontitis and subgingival Epstein?Barr virus treated with antiviral therapy. J Clin Virol, 2008

27. Roselyn J. Eisenberg, Deborah Long, Ruth Hogue-Angeletti, Gary H. Cohen. - Amino-Terminal Sequence of Glycoprotein D of Herpes Simplex Virus Types 1 and 2, 1984



Благодарности

Выражаю особую благодарность Михайловой Екатерине Станиславовне, к.м.н., доценту кафедры терапевтической стоматологии, врачу-стоматологу терапевту высшей квалификационной категории за помощь в осуществлении проведения клинических этапов исследования.

Выражаю благодарность сотрудникам ФГБНУ «ИЭМ»

1. Аспиранту отдела вирусологии Сычеву И.А., за помощь в постановке практической части исследования.

2. Аспиранту отдела вирусологии Ландграф Г.О., за помощь в разработке методов исследования и проведении исследования.

3. Ведущему научному сотруднику отдела молекулярной микробиологии Гупаловой Т.В.

Размещено на Allbest.ru