Иммунологические показатели при прогрессировании опухолевой патологии шейки матки, ассоциированной с вирусом папилломы человека

При оценке взаимосвязей между иммунологическими показателями периферической крови и цервикальной слизи, установлено, что наибольшее количество корреляционных взаимосвязей между показателями периферической крови и цервикальной слизи наблюдается в группе больных РШМ I, при этом 5 прямых взаимосвязей существуют между уровнем SCCA и показателями функциональной активности нейтрофилов цервикальной слизи. Выявленные особенности корреляционных взаимосвязей могут быть связаны с нарушением целостности базальной мембраны и увеличением продукции онкомаркера, ведущим к изменению функциональной активности нейтрофилов, поступающих в очаг опухолевой деструкции.

В результате проведенных исследований были зарегистрированы достоверные отличия многих иммунологических показателей у больных предраком и РШМ в зависимости от стадии заболевания. Это дает возможность разработки иммунологических критериев для дифференциальной диагностики между ЦИН III и Cr. in situ, между Cr. in situ и РШМ I стадии, то есть ранними стадиями неопластического процесса.

Известно, что гистологическое исследование является основным, наиболее достоверным и обязательным методом диагностики РШМ. Показаниями к прицельной биопсии являются наличие видимых изменений эпителия шейки матки или патологических результатов цитологического исследования. Биопсия берется с участков поражения, где изменения имеют наихудшие проявления, и в области стыка цилиндрического и многослойного плоского эпителия. При несоответствии результатов кольпоскопии, цитологии и биопсии проводится повторное гистологическое исследование с других участков эпителия, а в сложных случаях с применением выскабливания цервикального канала или конизации шейки матки (Косенко И.А., 2003; Шахова Н.М., 2006).

Для сокращения частоты повторных диагностических биопсий, учитывая мультицентричный характер поражения эпителия и одновременное присутствие различных степеней поражения, мы предлагаем использовать иммунологические критерии как метод дополнительной диагностики ранних стадий РШМ. Важность предлагаемого подхода к диагностике заключается в подтверждении или исключении наличия участков поражения эпителия, соответствующих более выраженной стадии заболевания, чем установленной при гистологическом исследовании. Это послужит основой для изменения тактических подходов к лечению женщин молодого и среднего возраста с целью сохранения репродуктивной функции.

С помощью пошагового дискриминантного анализа были выделены наиболее информативные параметры для построения математической модели. В результате в линейную дискриминантную функцию в качестве наиболее информативных были включены следующие показатели:

1. Для дифференциальной диагностики ЦИН III и Cr. in situ: содержание СD10, (Ч10⁹ / л), СD 20, (Ч10⁹ / л), СD25, (Ч10⁹ / л). лимфоцитов периферической крови, функциональный резерв нейтрофилов цервикальной слизи, у. е. (ФРНС), уровни ИЛ-10, пг/мл крови (ИЛ-10К) и уровни ИНФ-г, пг/мл (ИНФ-гС) и ФНО-б, пг/мл (ФНО-бС) слизи.

2. Для дифференциальной диагностики Cr. in situ и РШМ I: уровень SCCA, мг/л, уровни IgG, г/л (IgGК), ИНФ-б, пг/мл (ИНФ-бК) и ФНО-б, пг/мл (ФНО-бК) периферической крови.

В результате вычисления диагностических коэффициентов для определения были предложены следующие формулы:

1. F(x1) = - 15,671 Ч СD10 + 13,993 Ч СD20 - 15,035 Ч СD25 + 0,488 Ч ФРНС + 0, 633 Ч ИЛ-10К + 0,1 Ч ИНФ-г C - 0,081Ч ФНО-бС - 4,786

2. F(x2) = 0,620 Ч SCCA - 0,285 Ч IgGК - 0,372 Ч ИНФ-бК + 1,854 Ч ФНО-бК + 5,653

Применение данных формул подразумевает формальную подстановку значений иммунологических показателей, полученных при обследовании пациентки, и вычисление значений дискриминатнтных функций. В качестве точек разделения используются значения середины расстояний между координатами центров распределений. Если значение дискриминатнтных функции больше значения середины расстояния, то больную необходимо отнести к последующей группе, если меньше, то к предыдущей. В нашем случае координаты точки разделения для обеих формул равны 0. Таким образом, формально, если значение дискриминатнтной функции F(x1) больше 0, то больную необходимо отнести к группе с Cr. in situ, если меньше, то к группе с ЦИН III. Если значение дискриминатнтной функции F(x2) больше 0, то больную необходимо отнести к группе с РШМ I, если меньше, то к группе c Cr. in situ.

Результаты валидизации полученных линейных дискриминантных функций показали, что точность диагностики при помощи данной модели составляет 87,5% между ЦИН III и Cr. in situ, между Cr. in situ и РШМ I стадии - 90 %.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о перспективности проведения дальнейших исследований в этом направлении, а расширение спектра иммунологических исследований предоставит возможность для построения более точной математической модели.

ВЫВОДЫ

1. У больных цервикальной интраэпителиальной неоплазией III и раком шейки матки преобладает 16 генотип вируса папилломы человека в составе моно- и микстинфекции. На всех стадиях прогрессии опухолевой патологии шейки преобладает моноинфекция вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска.

2. Независимо от стадии неопластического процесса шейки матки, ассоциированного с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска, наблюдаются однонаправленные изменения факторов системного иммунитета: рост числа CD10+клеток, снижение общего числа Т-лимфоцитов, CD4+ и NK-клеток крови, повышение уровней ИНФ-б, ИНФ-г, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10 и снижение уровня ФНО-б в сыворотке крови.

3. При всех стадиях прогрессии опухолевой патологии шейки матки наблюдаются однонаправленные изменения в системе локальной иммунной защиты: повышение общего количества лейкоцитов, угнетение внутриклеточного кислородозависимого метаболизма и резерва бактерицидной функции нейтрофилов, усиление лизосомальной активности, снижение активности и интенсивности фагоцитоза нейтрофилов, повышение уровня sIg A и выраженное снижение уровней ИНФ-б и ФНО-б при росте концентраций ИНФ-г, ИЛ-2, ИЛ-10 цервикальной слизи.

4. У больных цервикальной интраэпителиальной неоплазией III по сравнению с группой с латентной папилломавирусной инфекцией отмечается увеличение относительного количества лимфоцитов при снижении процентного содержания нейтрофилов периферической крови, наблюдается увеличение числа CD56+ и CD25+ клеток. Изменения цитокинового профиля сыворотки крови характеризуются повышением содержания ИНФ-б, ИЛ-10 и снижением ФНО-б. Показатели местного иммунитета отличает повышение общего количества лейкоцитов и лизосомальной активности нейтрофилов, снижение показателей НСТ-теста, активности и интенсивности фагоцитоза; повышение уровня sIgA и снижение уровней ИНФ-б и ФНО-б при росте концентраций ИНФ-г, ИЛ-2, ИЛ-10 в цервикальной слизи.

5. При Cancer in situ относительно больных с цервикальной интраэпителиальной неоплазией III наблюдается сокращение субпопуляций CD3+, CD4+, CD25+ лимфоцитов, снижение CD95+, CD16+, CD56+ клеток и соотношения CD4+/ CD8+, и повышается уровень ИЛ-10 в сыворотке крови. В системе локальной защиты происходит снижение количества жизнеспособных нейтрофилов и повышение уровней ИНФ-б и ИЛ-4 цервикальной слизи.

6. У больных раком шейки матки I стадии по сравнению с пациентками с Cancer. in situ выявлено увеличение относительного числа HLA-DR+ лимфоцитов и снижение концентраций ИНФ-б и IgM крови. Показатели местного иммунитета отличает снижение уровня IgM, повышение уровня IgG и рост концентрации ИЛ-2 цервикальной слизи.

7. У больных раком шейки матки II-III стадий относительно больных раком шейки матки I стадии наблюдается снижение количества HLA-DR+ и CD11b+ лимфоцитов, рост уровней ИНФ-г, ИЛ-2 и ИЛ-10 крови. Показатели цервикальной слизи характеризуются повышением общего количества лейкоцитов, уровней IgM, IgG и ростом концентраций ИЛ-4 и ИЛ-10.

8. Концентрация SCCA до начала лечения зависит от стадии заболевания. Наблюдается выраженное повышение уровней онкомаркера при раке шейки матки I-III стадий. Выявлены взаимосвязи между уровнями SCCA и иммунологическими показателями: при цервикальной интраэпителиальной неоплазии III - прямая связь между уровнем онкомаркера и относительным числом CD11+ лимфоцитов крови, при Cancer in situ - обратная связь с уровнем ИЛ-2 крови, при раке шейки матки I стадии - прямая связь с процентным содержанием HLA-DR+ лимфоцитов.

9. Математическая модель, разработанная на основании дискриминантного анализа иммунологических показателей периферической крови и цервикальной слизи, позволяет проводить дифференциальную диагностику между цервикальной интраэпителиальной неоплазией III и Cancer in situ с точностью 87,5%, между Cancer in situ и раком шейки матки I стадии c точностью до 90 %.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При комплексном обследовании женщин с ЦИН и РШМ рекомендуется определять наличие ДНК вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска в соскобах из цервикального канала с помощью метода ПЦР.

2. При обследовании женщин с установленным диагнозом ЦИН III и Cr. in situ, ассоциированных с ВПЧ ВКР, целесообразно применять иммунологическое исследование цервикальной слизи и периферической крови с использованием показателей, входящих в математическую модель, для дополнительной дифференциальной диагностики ЦИН III, Cr. in situ и РШМ I стадии.

Для дифференциального диагноза между ЦИН III и Cr. in situ: содержание СD10, СD 20, СD25, лимфоцитов и уровень ИЛ-10 периферической крови; функциональный резерв нейтрофилов, уровни ИНФ-г, и ФНО-б, цервикальной слизи:

F(x1) = - 15,671 Ч СD10 + 13,993 Ч СD20 - 15,035 Ч СD25 + 0,488 Ч ФРНС + 0, 633 Ч ИЛ-10К + 0,1 Ч ИНФ-г C - 0,081Ч ФНО-бС - 4,786

Если значение дискриминатнтной функции F(x1) больше 0, то больную необходимо отнести к группе с Cr. in situ, если меньше, то к группе с ЦИН III.

Для дифференциального диагноза между Cr. in situ и РШМ I стадии: уровни SCCA, IgG, ИНФ-б, и ФНО-б, периферической крови.

F(x2) = 0,620 Ч SCCA - 0,285 Ч IgGК - 0,372 Ч ИНФ-бК + 1,854 Ч ФНО-бК + 5,653

Если значение дискриминатнтной функции F(x2) больше 0, то больную необходимо отнести к группе с РШМ I, если меньше, то к группе c Cr. in situ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Абрамовских, О.С. Частота выявления ВПЧ 16/18 типов у женщин с патологическими процессами шейки матки методом ПЦР / О.С. Абрамовских, В.Ф. Долгушина, Л.Ф. Телешева, И.Ю. Орнер И.Ю. // Современные проблемы диагностики и лечения дисбактериозов: материалы конф. Посвящ. 10-летию НПЦ диагностики, лечения и профилактики дисбактериозов НИИ иммунологии ЧелГМА и 60-летию ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия МЗ РФ». Челябинск, 2004. С. 3-4.

2. Зурочка, А.В. Возможности оценки иммунного статуса путем сравнительного анализа результатов, полученных разными методами фенотипирования / А.В. Зурочка, И.Ю. Орнер, С.В. Квятковская, К.В. Никушкина, О.С. Абрамовских // Материалы IV конференции Иммунологов Урала. 2005.- №1(4). С. 189-190.

3. Телешева, Л.Ф. Выявление высокоонкогенных типов ВПЧ у сотрудников предприятия газовой промышленности Челябинской области / Л.Ф. Телешева, И.Ю. Орнер, О.С. Абрамовских, И.Л. Батурина, К.В. Никушкина, Н.А. Луговская // Новые лабораторные технологии в диагностике и лечении заболеваний человека: материалы конф., посвящ. 25-летию ЦНИЛ ЧелГМА. Челябинск, 2006. С. 169-171.

4. Телешева, Л.Ф. Изменения субпопуляционного состава лимфоцитов у женщин с папилломавирусной инфекцией, работающих на промышленном предприятии Челябинской области / Л.Ф. Телешева, О.С. Абрамовских, И.Ю. Орнер, И.Л. Батурина, К.В. Никушкина // 1-ый Российско-Чешский медицинский форум: сб. материалов. Челябинск, 2006. С. 179-181.

5. Абрамовских, О.С. Анализ частоты выявления ВПЧ у женщин с предраком и раком шейки матки, проживающих в Челябинской области / О.С. Абрамовских, И.Ю. Орнер, Л.Ф. Телешева, К.В. Никушкина, М.А. Беренда // Генодиагностика инфекционных заболеваний: сб. тр. / под ред. В.И. Покровского. М.: Универ. Книга; Паис, 2007. Т.3. С. 75-76.

6. Телешева, Л.Ф. Активность противоопухолевого иммунитета у женщин с предраком и раком шейки матки, ассоциированном с вирусом папилломы человека, в Челябинской области / Л.Ф. Телешева, И.Л. Батурина, И.Ю. Орнер, О.С. Абрамовских, // Мед иммунология. 2009. Т.11, № 4-5. С. 438-439.

7. Батурина, И.Л. Изменение показателей местного иммунитетау женщин с местнораспространенными формами рака шейки матки, ассоциированного с вирусом папилломы человека (ВПЧ), до и после лечения / И.Л. Батурина, О.С. Абрамовских, И.Ю. Орнер, Л.Ф. Телешева, А.В. Жаров // Вест. Уральской мед. Академ. Науки. 2009.- №1-/2. С. 74-76.

8. Летяева, О.И. Иммунологические особенности персистирующей папилломавирусной инфекции шейки матки / О.И. Летяева, О.С. Абрамовских, Л.Ф. Телешева, И.Ю. Орнер, И.Л. Батурина, М.А. Беренда // Вест. Уральской мед. Академ. Науки. 2009.- №1-/2. С. 119-120.

9. Телешева, Л.Ф. Изменение апоптотической активности CD95+ клеток у женщин с заболеваниями шейки матки, ассоциированными с папилломавирусной инфекцией / Л.Ф. Телешева, И.Л. Батурина, И.Ю. Орнер, О.С. Абрамовских // «Х Международный конгресс Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии»: сб. тр. Казань, 2009. с. 210.

10. Батурина, И.Л. Возрастные особенности развития местнораспространенных форм рака шейки матки, ассоциированных с папилломавирусной инфекцией / И.Л. Батурина, И.Ю. Орнер, А.В. Жаров, Л.Ф. Телешева, О.С. Абрамовских, // Научно-практическая конферненция с международным участием «Совершенствование медицинской помощи при онкологических заболеваниях, включая актуальные проблемы детской гематологии и онкологии. Национальная онкологическая программа»: VII съезд онкологов России:сб. материалов. М., 2009. Т.II. С. 43.

11. Абрамовских, О.С. Инновационный подход к диагностике папилломавирусной инфекции урогенитального тракта женщин Челябинской области / О.С. Абрамовских, М.А. Беренда Л.Ф. Телешева, И.Ю. Орнер, И.Л. Батурина // Оптимизация высшего медицинского и фармакологического образовании: менеджмент качества и инновации: материалы I науч.-практ. конф. Челябинск: Изд-во ЧелГМА, 2010. С. 11-13.

12. Телешева, Л.Ф. Антиген плоскоклеточной карциномы в ранней диагностике рака шейки матки / Л.Ф. Телешева, И.Ю. Орнер, И.Л. Батурина, А.В. Жаров, О.С. Абрамовских, К.В. Никушкина // Уральский мед. журн. 2010. № 03(68). С. 81-83.

13. Абрамовских, О.С. Оптимизация диагностики папилломавирусной инфекции в Челябинской области / О.С. Абрамовских, М.А. Зотова, Л.Ф. Телешева, И.Ю. Орнер, И.Л. Батурина, А.Н. Ахматова, К.В. Никушкина, Л.Г. Хавлюк // Материалы Российской научно-практической конференции «Стратегия развития онкорадиологической службы в регионах РФ». Челябинск, 2010. С. 5-6.

14. Батурина, И.Л. Определение уровня экспрессии антигена плоскоклеточной карциномы в сыворотке крови и его взаимосвязь с показателями Т-клеточного звена иммунитета у пацменток местнораспространенными формами рака шейки матки / И.Л. Батурина, И.Ю. Орнер, О.С. Абрамовских, Л.Ф. Телешева, А.В. Жаров, М.А. Зотова, К.В. Никушкина // Материалы Российской научно-практической конференции «Стратегия развития онкорадиологической службы в регионах РФ». Челябинск, 2010. С. 7-9.

15. Орнер, И.Ю Антиген плоскоклеточной карциномы в диагностике рака шейки матки / И.Ю. Орнер, И.Л. Батурина, О.С. Абрамовских Л.Ф. Телешева, М.А. Зотова // Материалы российской научно-практической конференции «Стратегия развития онкорадиологической службы в регионах РФ» - Челябинск, 2010. С. 91-92.

16. Абрамовских, О.С. Цитокиновый профиль цервикальной слизи у женщин с латентной папилломавирусной инфекцией / О.С. Абрамовских, М.А. Зотова, В.Ф. Долгушина, А.Н. Ахматова, Л.Ф. Телешева, И.Ю. Орнер, Е.А. Мезенцева // Вестн. Уральской мед. Академ. Науки. 2010. № 2/1(29). С. 85.

17. Абрамовских, О.С. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови при неопластической патологии шейки матки, ассоциированной с вирусом папилломы / О.С. Абрамовских, И.Ю. Орнер, М.А. Зотова, И.Л. Батурина, Л.Ф. Телешева, К.В. Никушкина, Л.Ф. Чернова // Вестн. Уральской мед. Академ. Науки. 2010. № 2/1(29). С. 86.

18. Батурина, И.Л. Сопоставление показателей Т-клеточного звена иммунитета и содержание антигена плоскоклеточной карциномы в сыворотке крови у пациенток с местнораспространенными формами рака шейки матки / И.Л. Батурина, И.Ю. Орнер, О.С. Абрамовских, Л.Ф. Телешева, А.В. Жаров, К.В. Никушкина // Мед иммунология. 2010. Т.12, № 4-5. С. 387-392.

19. Орнер, И.Ю. Сравнительный анализ иммунологических показателей периферической крови у пациенток с тяжелой дисплазией и раком шейки матки, ассоциированных с вирусом папилломы человека / И.Ю. Орнер, О.С. Абрамовских, И.Л. Батурина, М.А. Зотова, К.В. Никушкина, Л.Ф. Телешева // Российский аллергологический журнал. 2010. № 5 (1). С. 212-213.

Размещено на Allbest.ru