Оптимизация микробиологической диагностики туберкулеза. Особенности эпидемического процесса туберкулеза в Республике Саха (Якутия)

Таким образом, проведенный анализ показал, что развитие лекарственной резистентности возбудителя находится в причинно-следственной связи с динамикой эпидемического процесса при туберкулезной инфекции. При сформированной тенденции к увеличению лекарственной резистентности М. tuberculosis активность эпидемического процесса будет сохранена, поэтому одним из важнейших задач фтизиатрии являются мероприятия сдерживающие распространение указанных штаммов: раннее выявление бактериовыделителей и эффективное их лечение.

В связи с этим в рамках данной работы проведено исследование массивности бактериовыделения у 218 больных, выделяющих лекарственноустойчивые микобактерии туберкулеза.

Установлено, что 52,3% впервые выявленных больных, выделяющих ЛУ МБТ и еще не получавших противотуберкулезное лечение, являлись умеренными и массивными бактериовыделителями. Т.о. больные, выделяющие устойчивые к ПТП штаммы М. tuberculosis и особенно к двум и более препаратам, представляют более выраженную эпидемическую угрозу для окружающего населения по сравнению с больными, выделяющими чувствительные микобактерии туберкулеза.

Проведено сравнение прекращения бактериовыделения по окончании основного курса противотуберкулезного лечения у больных (130 человек), выделяющих МБТ, устойчивые к одному, двум, трем, четырем и более ПТП, с больными, выделяющими ЛЧ МБТ (55 человек). Прекращение бактериовыделения у больных, выделяющих МБТ устойчивые к одному ПТП - 90,2% (46 из 51) и выделяющих чувствительные штаммы МБТ - 92,7% (51 из 55) случаев - практически одинаково. Больные, выделяющие МБТ, устойчивые к 4-м и более ПТП только в 47,4% (9 из 19) случаев прекратили выделять МБТ. У больных, выделяющих МБТ, резистентные к двум и трем ПТП, прекращение бактериовыделения наступило в 63,9% (23 из 36) и 66,7% (16 из 24) случаев соответственно. Т.е., сохранение бактериовыделения у больных, выделяющих МБТ, резистентные к ПТП, после проведенного основного курса химиотерапии усугубляет степень эпидемической опасности этой категории больных.

В связи с полученными данными возникает закономерный вопрос о том, как меняется степень патогенности выделяемых больными штаммов М. tuberculosis с лекарственной устойчивостью к ПТП. Согласно данным литературы (Хоменко А.Г., 1988), при приобретении микобактериями туберкулеза устойчивости к ПТП происходит некоторое или значительное снижение вирулентности последних по сравнению с лекарственно-чувствительными штаммами МБТ. В связи с этим исследована вирулентность соответствующих культур, выделенных от 69 пациентов. При ранжировании степени вирулентности в зависимости от чувствительности или устойчивости микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам получены следующие данные. У больных, выделяющих чувствительные к ПТП штаммы МБТ, в 70,0% случаев вирулентность микобактерий сохранялась, у 1/3 больных - 30,0%, вирулентность штаммов МБТ снижена (р<0,05). У больных, выделяющих устойчивые МБТ, в 77,6% случаев вирулентность сохранялась и в 22,4% случаев снижена (р<0,05). Однако при проведении статистической обработки данное предположение не подтверждается (хи-квадрат=0,4; р>0,05). Таким образом, полученные данные указывают на то, что микобактерии туберкулеза, устойчивые к ПТП сохраняли свои вирулентные свойства так же, как и чувствительные к ПТП МБТ.

Следующим этапом настоящей работы стало изучение значимости влияния фактора лекарственной устойчивости М. tuberculosis на результаты радикальных (59 человек) и паллиативных (36 человек) хирургических методов лечения у больных туберкулезом легких.

У больных с эффективным исходом торакопластических операций лекарственно-резистентные МБТ, в т.ч. с МЛУ, зафиксированы в 13,3%, тогда как у больных с неэффективным исходом данного вида вмешательства - в 47,6% (p<0,05) случаев. В то же время эффективность радикального хирургического лечения при МЛУ туберкулезе определена в 81,4% (p<0,05) случаев. Исходя из представленных данных, можно заключить, что радикальные хирургические вмешательства по поводу туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью М. tuberculosis могут рассматриваться как основной вид лечения у данной сложной категории больных.

Однако в современной клинике туберкулеза постоянно возникает вопрос, действительно ли состояние абациллирования отражает полное и истинное отсутствие микобактерий? Все ли паразитировавшие в организме больного микобактерии погибли и элиминированы из него после клинического излечения или же некоторые из них сохранились в остаточных туберкулезных очагах? Поставленные вопросы имеют исключительно важное значение для оценки эпидемиологического риска указанных групп больных. Резекционная фтизиохирургия позволяет изучить наличие М. tuberculosis в резецированных очагах легких и составить представление о бактериологии этих очагов.

Проведенное исследование показало, что в 54,9% (147 из 268) случаев у больных, состоящих на диспансерном учете по туберкулезу органов дыхания без бактериовыделения, в резектатах легкого МБТ выявлены методом люминесцентной микроскопии, в том числе в 22,0% случаев в большом количестве. У указанной группы больных в 13,1% случаев микобактерии выявлены методом посева, из них в 5,2% случаев зарегистрирован скудный рост и в 7,8 % - умеренный и обильный рост.

При изучении биологических свойств МБТ, выделенных из резектатов легких, установлено, что все выделенные культуры отнесены к М. tuberculosis. В 68,4% случаев рост МБТ регистрировался после 30 суток и отмечен единичный рост; каталазная и пероксидазная активность сохранены у 96,6% выделенных культур. Лекарственно-устойчивые штаммы МБТ выделяли 76,3% больных, в т.ч. 31,6% МБТ с МЛУ. Полученные данные свидетельствовали о том, что в резектатах легких микобактериальная популяция сохраняла высокую метаболическую активность, более того, у персистирующих МТБ определялась лекарственная устойчивость к ПТП, в т.ч. множественная. Выявленный факт имеет первостепенное значение, т.к. при определенных условиях данная микобактериальная популяция может иметь эпидемическое значение в распространении микобактерий туберкулеза вообще и мультирезистентных штаммов в частности.

При проведении бактериоскопических и культуральных методов значение придается качеству доставляемого в микробиологическую лабораторию материала для индикации кислотоустойчивых микобактерий, а также методы предпосевной обработки материала, качество и состав используемых питательных сред.

Поступающий в микробиологическую лабораторию диагностический материал: мокрота, промывные воды бронхов, смывы с бронхов, для исследования в подавляющем большинстве (95,4%) имел слизистый характер. В том числе жидкий слизистый характер мокроты в 34,8%. Выявлено, что в мокроте густой слизистой консистенции КУМ обнаруживались в 2,8 раза (p<0,05), МБТ в - 2,9 раза (p<0,05) чаще, чем в жидкой.

С целью повышения информативности бактериологических методов исследования мокроты, особенно жидкой консистенции, нами использован энтеросгель. Энтеросгель - энтеросорбирующее средство, в составе препарата содержится метилкремниевой кислоты гидрогель, обладающий высокой сорбционной активностью.

В опытных мазках, приготовленных из 5-го стандарта бактериальной мутности, МБТ обнаружены в значительном количестве (>100 в поле зрения), в разведениях 10-1 и 10-2 - единичные в полях зрения, в разведениях 10-3, 10-4 и 10-5 - единичные в препарате. В контрольных мазках МБТ обнаружены в умеренном количестве, в разведениях 10-1, 10-2 - единичные в полях зрения, в 10-3 - единичные в препарате, в 10-4 и 10-5 микобактерии туберкулеза не обнаружены. Кроме того, отмечено, что сорбент способствовал более равномерному окрашиванию правильно приготовленного мазка. При проведении анализа результатов посевов по критерию появления начального роста, а также по выходу биомассы МБТ показано, что появление начального роста МБТ, особенно при малой концентрации возбудителя в опытных посевах, отмечено на 3-4 дня раньше, также зарегистрировано увеличение выхода биомассы М. tuberculosis по сравнению с контрольными посевами.

Предложенный способ апробирован на диагностическом материале 297 больных туберкулезом органов дыхания. Были получены интересные данные при регистрации сроков начального и интенсивного роста микобактерий туберкулеза. В контрольных посевах начальный рост регистрировался на 23,3, в опытных - на 20,6 день; интенсивный - на 30,0 и 23,3 дни наблюдения (р<0,01) соответственно. Кроме того, зарегистрированы единичные случаи опережения роста культур МБТ в опытных посевах на 12, 14, 16, 18 и 26 дней по сравнению с контролем. Предложенный способ позволил в 72,4% по сравнению с традиционными методами (56,6%) получить более интенсивный рост МБТ (р<0,05). Кроме того, на 3,9 суток сокращаются сроки выхода культур МБТ.

Полученные результаты свидетельствовали о том, что применение сорбента - энтеросгеля являлось эффективным способом выращивания М. tuberculosis на плотных питательных средах, т.к. способствовало оптимальному накоплению бактериальной массы, что имеет принципиальное значение для дифференциальной диагностики колоний МБТ и дальнейшей работы с выросшими культурами. Это происходит за счет физико-химических свойств энтеросгеля, который имеет пористую структуру кремнийорганической матрицы гидрофобной природы, которая характеризуется высоким сорбционным действием, что способствует концентрации микобактерий туберкулеза.

При первичном выделении и культивировании М. tuberculosis из диагностического материала существуют определенные трудности, связанные с их медленным размножением и избирательностью к составу питательных сред. Нами разработан оригинальный вариант приготовления последних с использованием гуминовых веществ. В результате проведенных опытов выбраны наиболее эффективные композиции испытуемых сред. Опыты проводились с использованием 0,1% раствора гумата натрия с добавлением глицерина и яиц. Испытывались 3 опытных варианта (ОВ) яичных питательных сред.

Эффективность опытных вариантов сред определялась скоростью появления первичного и интенсивного роста культур микобактерий туберкулеза: М. bovis (шт. BCG), М. tuberculosis (Аcademia), клинических штаммов М. tuberculosis.

В 1-м варианте опытной среды (ОВ-1) первичный рост М. bovis (BCG) зарегистрирован на 18 день, во 2-м варианте (ОВ-2) - на 7,1 день и в 3-м варианте (ОВ-3) - на 6,9 день наблюдения. Интенсивный рост в 1-м варианте зафиксирован на 22 день, во 2-м варианте - на 10,7 день и в 3-м варианте - на 10,9 день наблюдения (рис. 2).

В контрольных средах первичный рост М. bovis (BCG) на Левенштейна-Йенсена (Л-Й) - на 9,9 день, на среде Финн-2 (Ф-2) появился на 12,6 день, интенсивный рост на среде Л-Й - на 13,2 день, на среде Ф-2 - на 16,1 день, наблюдения.

Рисунок 2. Скорость появления (дни) первичного и интенсивного роста культур М.bovis (BCG) на различных питательных средах

Статистическая обработка результатов опыта показала, что 1-ый вариант опытной среды уступал по информативности контрольным средам Ф-2 и Л-Й. Из результатов опытов следовало, что добавление вытяжки сапропеля в состав питательных сред позволило ускорить получение первой генерации культур М. bovis (BCG), в сравнении с контрольными средами Ф-2 и Л-Й, что является важным фактором в постановке диагноза на туберкулез.

Показано, что ОВ-2 и ОВ-3 являлись оптимальными экспериментальными средами для культивирования M. bovis (BCG) по скорости появления первичного и интенсивного роста данной культуры, указанные опытные среды превосходили контрольные, разница статистически достоверна (р < 0,001; p < 0,005 соответственно).

Массивность роста или накопление биомассы М. bovis (BCG) учитывали по количеству выросших колоний: на среде Л-Й максимальная массивность в 71,4% случаев регистрировалась от 20 до 50 колоний. На среде Ф-2 в 28,6% массивность роста составляла более 100 колоний. В опытном варианте ОВ-1 в 100% массивность составила до 20 колоний (р<0,01); ОВ-2 - в 14,3% рост от 20 до 50 колоний, в 28,6% регистрировался рост от 50 до 100 колоний и более чем в половине случаев (57,1%) более 100 колоний (p<0,01; p<0,05); соответственно ОВ-3 в 35,7% рост от 20 до 50 колоний, в 14,3% от 50 до 100 колоний и 50% более 100 колоний (p<0,05, p>0,1) (рис. 3).

Таким образом, накопление биомассы культур М.bovis (BCG) наиболее интенсивно наблюдалось в опытных вариантах ОВ-2 и ОВ-3.

Рисунок 3. Массивность роста M. bovis (BCG) на различных питательных средах (%)

В 1-м варианте опытной среды первичный рост М. tuberculosis (шт. Академия) появился на 8,6, во 2-м - на 7,9 день и в 3-м варианте - на 8,1 день наблюдения. Интенсивный рост в 1-м варианте зафиксирован на 11,8 день, во 2-м варианте - на 10,9 день и в 3-м - на 10,9 день наблюдения. На контрольных питательных средах первичный рост М. tuberculosis появился на 11,5 и 10,5 дни соответственно, а высокая интенсивность роста отмечена на 16,2 и 16,2 дни наблюдения на обеих средах соответственно (рис. 4).

Рисунок 4. Скорость появления (дни) первичного и интенсивного роста культур M.tuberculosis (шт. Академия) на различных питательных средах

На среде Л-Й в 35,7% случаев регистрировался рост от 20 до 50 колоний и в 64,3% максимальный рост более 100 колоний. На среде Ф - 2 в 28,6% массивность роста составляла от 50 до 100 колоний и в 71,4% случаев более 100 колоний. В опытном варианте ОВ-1 в 28,6% - массивность от 50 до 100 колоний, в 71,4% - регистрировался рост более 100 колоний (p>0,05), ОВ-2 - в 100% более 100 колоний (p<0,01), ОВ-3 - в 100% более 100 колоний (p<0,01) (рис. 5).

Рисунок 5. Массивность роста культур M. tuberculosis (Аcademia) на различных питательных средах (%)

Таким образом, накопление биомассы культур М. tuberculosis (Аcademia) наиболее интенсивно наблюдалось в опытных вариантах ОВ-2 и ОВ-3.

Полученные данные скорости появления первичного роста и накопления бактериальной массы М. tuberculosis (Аcademia) на всех вариантах опытных сред показали, что среды с использованием вытяжки из сапропеля по своим ростовым свойствам статистически достоверно (р < 0,001; p < 0,005) превосходят контрольные питательные среды Л-Й и Ф-2.

Для изучения скорости и интенсивности роста клинических штаммов М. tuberculosis на опытных питательных средах использованы культуры, выделенные из диагностического материала от 70 больных туберкулезом органов дыхания.

Первичный рост штаммов М. tuberculosis, выделенных от больных различными формами туберкулеза, зарегистрирован на контрольных средах Л-Й на 10,2 и Ф-2 на 8,7 день, а интенсивный - на 15,2 и 13,0 дни наблюдения соответственно. В опытных средах ОВ-1 начальный рост зарегистрирован на 14,2 день, ОВ-2 - на 8,3 день, ОВ-3 - на 7,6 день наблюдения, а интенсивный рост наблюдался на 19,0, 12,3 и 11,6 дни инкубации соответственно (рис. 6).

Рисунок 6. Скорость (дни) появления первичного и интенсивного роста клинических штаммов M. tuberculosis на различных питательных средах

Массивность роста М. tuberculosis на среде Л-Й зарегистрирована: до 20 колоний - в 10,6%; от 20 до 50 колоний - 56,1%; от 50 до 100 колоний - 24,2% и в 9,1% - более 100 колоний. На среде Ф-2: до 20 колоний - 9,1%; от 20 до 50 колоний - 17,4%; от 50 до 100 колоний - 50,7%; более 100 колоний - 21,7%. В опытных средах массивность роста на ОВ-1: до 20 колоний - 44,8%; от 20 до 50 колоний - 55,2% (p<0,01, p>0,1). На ОВ-2: до 20 колоний - 7,1%; от 20 до 50 колоний - 5,7%; от 50 до 100 колоний - 27,1% и более 100 колоний - 58,6% (p<0,01). На ОВ-3: до 20 колоний - 4,3%; от 20 до 50 колоний - 8,6%; от 50 до 100 колоний - 22,8% и более 100 колоний - 64,3% (p<0,01) (рис. 7).

Рисунок 7. Массивность роста клинических штаммов культур M. tuberculosis на различных питательных средах (%)

Таким образом, скорость роста и накопление биомассы штаммов МБТ, выделенных от больных различными формами туберкулеза органов дыхания, статистически достоверна (р<0,001; р<0,005) выше в опытных вариантах сред 2 и 3.

Резюмируя полученные данные следует, что опытные варианты питательных сред имели более выраженные питательно-ростовые свойства, что позволило ускорить на 2-3 дня выход первичной генерации культур микобактерий туберкулеза и в 2,6 раза чаще получать массивный рост МБТ. Кроме того, отмечено длительное сохранение в пробирке конденсационной жидкости, что предохраняет среду от преждевременного засыхания.

В результате использования предлагаемых питательных сред при посеве микобактерий как референтных штаммов, так и патогенных культур возбудителя туберкулеза достигалось увеличение биомассы и ускорение получения первой генерации культур МБТ. Стимулирование роста и размножения микобактерий связано с тем, что гуматы в своей структуре содержат активные функциональные группы, обладающие способностью стимулировать биологические процессы, и относятся к группе биогенных стимуляторов (Егорова М.С. и др., 1997).

Предложены следующие показания к применению разработанных вариантов питательных сред:

1. Для бактериологической диагностики туберкулеза в практических лабораториях и научно-исследовательских учреждениях ветеринарного и медицинского профиля.

2. Для сохранения и выращивания лабораторных штаммов и выделенных культур микобактерий туберкулеза.

Таким образом, полученные результаты свидетельствовали о безусловной перспективности использования сапропелей для повышения эффективности выращивания микобактерий туберкулеза и замены ими дорогостоящих минеральных основ питательных сред.

Исследования последних лет показывают, что туберкулез, вызванный лекарственно-резистентными М. tuberculosis, трудно поддается лечению, возникает необходимость ранней, своевременной коррекции схем химиотерапии. Для этого врачу необходима более ранняя информация о чувствительности возбудителя данного больного к ПТП.

Известные в практических лабораториях методы определения чувствительности микобактерий туберкулеза к ПТП длительны и предполагают (с учетом выхода культур) получение результатов в срок от 7 до 15 недель. Применение для этой цели современных технологий в работе практических лабораторий ограничено высокой стоимостью и сложностью проведения анализов.

Нами модифицирован прямой способ определения ЛЧ М. tuberculosis к ПТП бактериоскопически положительного материала - мокроты. Сущность способа заключалась в том, что использовался комплекс питательных сред - жидкой среды и плотной яичной среды. На первом этапе использовалась жидкая среда Школьниковой для подращивания микобактерий в течение 3 суток. На втором этапе надосадочная часть жидкой среды Школьниковой удалялась. В осадок добавлялась свежая среда Школьниковой, перемешивалась и засевалась по обычной методике на плотные яичные среды с разведениями противотуберкулезных препаратов.

При использовании известного прямого метода у 24 больных в 75% получен рост микобактерий туберкулеза в контроле и на среде с противотуберкулезными препаратами, в 25% рост МБТ не зарегистрирован. При использовании предложенного способа рост МБТ получен у всех 24 больных, т.е. в 100% случаев.

Кроме того, из 70 больных у 33 при тестировании предложенным прямым способом выделены чувствительные к противотуберкулезным препаратам микобактерии туберкулеза, что подтверждено определением ЛЧ у выделенных штаммов МБТ всех 33 больных непрямым методом абсолютных концентраций.

У 37 больных зарегистрирована лекарственная устойчивость МБТ к ПТП. Совпадение результатов устойчивости МБТ сравниваемыми методами определено к стрептомицину в 89,3% (из 28 у 25); изониазиду в 89,5% (из 27 у 24); рифампицину в 89,5% (из 21 у 19); канамицину в 81,2% (из 11 у 9) случаев. При использовании предложенного способа регистрировалась высокая частота совпадений результатов выявления штаммов с множественной лекарственной устойчивостью в 94,1% (из 18 у 17) случаев, что является наиболее важным показателем для клиники.

Разработанный способ определения чувствительности микобактерий позволяет клиницистам получить результаты исследований в срок через 22-24 дня, тогда как при применении непрямого метода - через 49-60 дней. При этом происходило существенное, достоверное укорочение сроков определения лекарственной чувствительности МБТ в 2,2-2,5 раза, что важно для более ранней коррекции химиотерапии у данной категории больных и проведения адекватного лечения с учетом выявленной лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза.

Показанием к применению предложенного способа является обильное или умеренное впервые диагностированное бактериовыделение в мокроте больных туберкулезом органов дыхания, установленное методом люминесцентной или световой микроскопии. Противопоказаний к применению нет.

Таким образом, двухэтапное использование комплекса питательных сред способствовало:

1. Подращиванию имеющихся микобактерий в жидкой питательной среде.

2. Удалению токсических продуктов метаболизма микобактерий, образовавшихся во время лаг-фазы размножения микроба.

3. Непосредственному определению лекарственной чувствительности микобактерий к противотуберкулезным препаратам и получению результата ЛЧ МБТ в 100% случаев.

Заключение

Выводы.

1. Установлено, что на территории Республики Саха (Якутия) в период 1990-2007 гг. по сравнению с 1970-1990 гг. сохранялась неблагоприятная эпидемическая ситуация по всем основным эпидемиологическим показателям. Определен рост заболеваемости в 1,4 раза, бациллярности в 1,1 раза и смертности в 1,3 раза; интенсивность снижения показателя болезненности значительно менее выражена.

2. Выявлены закономерности динамики лекарственной резистентности М. tuberculosis на территории Республики Саха (Якутия):

· рост удельного веса лекарственно-устойчивых штаммов МБТ с 51,1% в 1970 г. до 71,1% в 2007 г. (р<0,01);

· снижение резистентности штаммов МБТ к одному и двум ПТП до 4,6% и 11,2% (р<0,01) соответственно, повышение к трем и четырем ПТП до 29,0% и 54,7% соответственно (р<0,01);

· в структуре лекарственной резистентности к отдельным противотуберкулезным препаратам установлено преобладание штаммов МБТ, устойчивых к стрептомицину (61,4%), к изониазиду (68,5%) и рифампицину (43,8%);

· уровень первичной лекарственной устойчивости МБТ среди больных туберкулезом органов дыхания в 2004 - 2007 гг. превысил в 2,9 раза (р<0,01) аналогичные показатели по сравнению с 1996 - 2000 гг.;

· за указанный период уровень множественной лекарственной устойчивости МБТ среди больных увеличился с 27,5% до 65,7% (р<0,01), в т.ч. среди впервые выявленных больных с 21,6% до 33,3% (р<0,05);

3. Предложено для комплексной оценки состояния здоровья населения в отношении туберкулезной инфекции использование индекса интенсивности (ИИ) фактора, который позволяет учитывать основные эпидемиологические показатели (заболеваемость, болезненность, бациллярность, смертность и др.) в том числе и лекарственную устойчивость штаммов микобактерий туберкулеза.

4. Выявлена во втором периоде наблюдения (1990-2007 гг.) средняя (умеренная) достоверная причинно-следственная положительная связь (r = 0,45) между индексом интенсивности эпидемической ситуации туберкулезной инфекции и лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза.

5. Доказано, что лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза является сдерживающим фактором для достижения стабилизации и дальнейшего снижения распространенности туберкулезной инфекции на территории Республики.

6. Удельный вес впервые выявленных больных среди всего контингента бактериовыделителей в Республике Саха (Якутия) сохранялся на стабильном уровне, который в последние годы колебался от 38,1 до 48,8%.

7. При исследовании резекционного материала от больных туберкулезом легких, не выделяющих на момент операции из мокроты микобактерии туберкулеза, выделены М. tuberculosis. Особенностью этой микробной популяции является высокая метаболическая активность, с наличием лекарственной устойчивости к ПТП (76,3%), в т.ч. множественной (32,6%).

8. Разработаны и рекомендованы питательные среды с использованием 0,1% раствора гумата натрия на основе сапропеля местного природного происхождения для выделения М. tuberculosis из диагностического материала.

9. Предложена обработка диагностического материала для выращивания М. tuberculosis на предпосевном этапе энтеросгелем, которая на 3,7% повысила информативность культурального метода исследования. При этом в 72,4% случаев наблюдался массивный рост колоний МБТ (р<0,01).

10. Разработан прямой способ определения чувствительности микобактерий у больных с бактериоскопически положительной мокротой позволяющий существенно укоротить сроки определения лекарственной чувствительности М. tuberculosis, по сравнению с непрямым методом (в 2,2-2,5 раза), что важно при наличии лекарственной устойчивости, для ранней коррекции химиотерапии у данной категории больных и проведения адекватного лечения.

Практические рекомендации.

1. Плотные питательные среды с использованием 0,1% раствора гумата натрия на основе сапропеля для выращивания М. tuberculosis предлагаются в целях диагностики туберкулеза в практических лабораториях и научно-исследовательских учреждениях ветеринарного и медицинского профиля.

2. Для повышения чувствительности бактериологической диагностики туберкулеза методом посева целесообразно использовать сорбент - энтеросгель при предпосевной обработке диагностического материала.

3. Использование прямого способа определения чувствительности микобактерий позволяет клиницистам получить результаты исследований - через 22-24 дня, тогда как при применении непрямого метода через 49-60 дней. Таким образом, происходит существенное, достоверное укорочение сроков определения лекарственной чувствительности МБ в 2,2-2,5 раза, что крайне важно для более ранней коррекции химиотерапии у данной категории больных и проведения адекватного лечения с учетом выявленной лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза.

4. Для комплексной оценки состояния здоровья населения республики в отношении туберкулеза целесообразно использовать индекс интенсивности, который учитывает основные эпидемиологические показатели туберкулезной инфекции (заболеваемость, болезненность, бациллярность, смертность и др.) и особенности возбудителя. Использование указанного индекса предоставляет возможность дать обобщенную оценку динамики распространения рассматриваемого инфекционного заболевания на различных территориях за любой анализируемый отрезок времени.

Литература

1. Черноградский И.П. Вопросы централизованного управления бактериологической службы противотуберкулезных учреждений Якутской ЯАССР / Черноградский И.П., Алексеева Г.И., Горохова Т.В., Тяптиргянова Н.Г.// Тезизы докладов У Всероссийского съезда фтизиатров в г. Челябинске. - М., 1980. - С. 26-29.

2. Черноградский И.П. Характеристика бактериовыделения при туберкулезе в условиях Якутской АССР / Черноградский И.П., Алексеева Г.И., Захаров В.Т., Горохова Т.В. // Сборник научных статей Якутского научно-исследовательского института туберкулеза. Депонировано 29.05.89.№ 17.817. // МРЖ. - Р.2. - 1989. - № 11. - 41 с.

3. Андросова М.В. Иммунологический метод идентификации M.tuberculosis и M. Bovis (BCG) на основе применения моноклональных антител / Андросова М.В., Владимирский М.А., Алексеева Г.И. // Проблемы туберкулеза. - 1989. - № 5. - С. 43-46.

4. Андросова М.В. Применение иммуноферментного анализа для видовой идентификации M.tuberculosis и M. Bovis (BCG) с использованием моноклональных антител / Андросова М.В., Владимирский М. А., Алексеева Г.И. // Применение иммуноферментного анализа в медицине: тезисы докладов республиканской научной конференции. - Харьков, 1989. - С. 80-82.

5. Бактериологическое обследование на туберкулез лиц из групп риска / И.П. Черноградский, Ч.Д. Шаноев, В.Т. Захаров, Г.И. Алексеева: метод. рекомендации / ЯФ НПО «Фтизиопульмонология». - Якутск, 1989. - 8с.

6. Алексеева Г.И. Биологические особенности резервуара туберкулезной инфекции в некоторых административных территориях Якутии по данным централизованной картотеки / Алексеева Г.И., Захаров В.Т., Горохова Т.В., Черноградский И.П. // Сборник научных статей Якутского научно-исследовательского института туберкулеза. - 1989. - С. 131-138. - Депонировано 29.05.89. № 17817 // МРЖ. - Р.2. - 1989. - № 11. - С.41.

7. Черноградский И.П. Бактериологическое обследование на туберкулез лиц из групп риска / Черноградский И.П., Захаров В.Т. Шаноев Ч.Д., Алексеева Г.И., Тяптиргянова Н. Г.// Проблемы туберкулеза. - 1990. - № 8. - С. 13-15.

8. Комплексные микробиологические исследования для контроля эпизоотической и эпидемиологической ситуации по туберкулезу в Якутии / В.Т. Захаров, Г.И. Алексеева: методическое пособие. - Якутск, 1990. - 23с

9. Черноградский И.П. Бактериологическое обследование на туберкулез лиц из групп риска / Черноградский И.П., Шаноев Ч.Д., Захаров В.Т., Алексеева Г.И.// Медицинская наука - практике: методические разработки. - Новосибирск, 1991. - С. 140 -142.

10. Черноградский И.П. Характеристика бактериовыделения у больных туберкулезом легких - жителей Якутии / Черноградский И.П., Алексеева Г.И., Горохова Т.В., Захаров В.Т., Тяптиргянова Н.Г., Новоселова Н.В. // Проблемы туберкулеза. - 1992. - № 3-4. - С. 49-51.

11. Черноградский И.П. Актуальные вопросы бактериологической диагностики туберкулеза в регионе Якутии / Черноградский И.П., Алексеева Г.И., Горохова Т.В., Захаров В.Т., Тяптиргянова Н.Г., Новоселова Н.В. // Материалы Х1 съезда фтизиатров. - Санкт-Петербург, 1992. - С. 250-251.

12. Черноградский И.П. Вопросы бактериологической диагностики туберкулеза / Черноградский И.П., Алексеева Г.И., Захаров В.Т. // 70 лет противотуберкулезной службе Новосибирской области, 50 лет Новосибирскому научно-исследовательскому институту туберкулеза: сборник научных трудов юбилейной научно-практической конференции, 27-29 июня 1995 г. - Новосибирск, 1995. - С. 207-210.

13. Заявка 96121836/20 (027908) (Положит. Решение) Черноградский И.П. Способ выращивания микобактерий туберкулеза / Черноградский И.П. Алексеева Г.И., Захаров В.Т. // Научно-практическое объединение

"Фтизиатрия". - Якутск, 1996.

14. Алексеева Г.И. Использование микродоз аутокрови для выращивания микобактерий туберкулеза /Алексеева Г.И., Афанасьева Ю. П., Захаров В.Т., Павлова Н.К.// Проблемы ускоренной бактериологической диагностики туберкулеза: материалы научно - практической конференции, 15-16 окт. 1996 г. - Обнинск, 1996. - С. 18-19.

15. Алексеева Г.И. О влиянии неблагоприятных факторов внешней среды на жизнеспособность микобактерий туберкулеза / Алексеева Г.И., Афанасьева Ю.П., Захаров В.Т., Павлова Н.К. // Проблемы ускоренной бактериологической диагностики туберкулеза: материалы научно-практической конференции, 15-16 окт. 1996 г. - Обнинск, 1996. - С. 27.

16. Алексеева Г.И. Состояние фтизиобактериологической службы в РС (Я) / Алексеева Г.И. // Проблемы туберкулеза. - 1997. - № 2. - С. 11-13.

17. Алексеева Г.И. Использование аутокрови больного для выращивания микобактерий туберкулеза / Алексеева Г.И., Афанасьева Ю.П., Захаров В.Т., Павлова Н.К. // Туберкулез и экология. - 1997. - № 2. - С. 20-22.

18. Захаров В.Т. Эпизоотическая и эпидемическая ситуация по туберкулезу в Якутии/ Захаров В.Т., Алексеева Г.И., Чернявский В.Ф., Васильева А.А. // Материалы IV (XIV) съезда научно-медицинской ассоциации фтизиатров. - Йошкар-Ола, 1999. - С. 19.

19. Алексеева Г.И. Вопросы бактериологического мониторинга в Республике Саха (Якутия) / Алексеева Г.И., Попова Р. В., Афанасьева Ю. П. // Материалы IV (XIV) съезда научно-медицинской ассоциации фтизиатров. - Йошкар-Ола, 1999. - С. 206.

20. Алексеева Г.И. Динамика обнаружения микобактерий туберкулеза у впервые выявленных больных туберкулезом органов дыхания в Якутии /Алексеева Г.И., Черных М.В. // Проблемы туберкулеза в Якутии: эпидемиология, организация и лечение: сборник трудов I (XXIV). - Якутск, 2002. - С. 63-70.

21. Кравченко А.Ф. Значение торакопластики и причины ее неэффективности при деструктивном туберкулезе легких / Кравченко А.Ф., Алексеева Г.И., Шамаев В.Е., Павлов Н.Г. // Проблемы туберкулеза в Якутии: эпидемиология, организация и лечение: сборник трудов I (XXIV). - Якутск, 2002. - С. 172-177.

22. Павлов Н.Г. Современные возможности лабораторной диагностики туберкулеза / Павлов Н.Г., Алексеева Г.И. // Проблемы туберкулеза в Якутии: эпидемиология, организация и лечение: сборник трудов I (XXIV). - Якутск, 2002. - С. 204-214.

23. Алексеева Г.И. Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза и массивность бактериовыделения у впервые выявленных больных туберкулезом органов дыхания / Алексеева Г.И. // Вопросы формирования здоровья и патологии человека на Севере: факты, проблемы и перспективы: материалы научно - практической конференции. - Якутск, 2002. - С. 188-189.

24. Алексеева Г.И. Модифицированные питательные среды для выращивания микобактерий туберкулеза / Алексеева Г.И., Павлов Н.Г., Перк А.А., Егорова М.С., Мярикянов М.И. // Вопросы формирования здоровья и патологии человека на Севере: факты, проблемы и перспективы: материалы научно-практической конференции. - Якутск, 2002. - С. 189-191.

25. Алексеева Г.И. Модифицированный метод определения лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам / Алексеева Г.И., Фазульянова И.А., Павлов Н. Г., Черных М.В. // Приоритетные направления развития науки в 1-ой четверти ХХ1 века: опыт, проблемы, перспективы. - Якутск, 2002. - С. 45-48.

26. Алексеева Г.И. Анализ качества диагностического материала по данным микробиологической лаборатории / Алексеева Г.И., Горохова Т.В., Фазульянова И.А., Черных М.В. // Проблемы туберкулеза в Якутии: эпидемиология, организация, лечение: сборник трудов II (XXV). - Якутск, 2003. - С. 89-94.

27. Алексеева Г.И. Способ определения лекарственной чувствиительности микобактерий туберкулеза / Алексеева Г.И., Павлов Н.Г., Черных М.В., Фазульянова И.А. // Проблемы туберкулеза в Якутии: эпидемиология, организация, лечение: сборник трудов II (XXV). - Якутск, 2003. - С. 94-98.

28. Алексеева Г.И. Повышение диагностической эффективности плотных питательных сред для выращивания МБТ / Алексеева Г.И., Павлов Н.Г., Перк А.А., Черных М.В. // Проблемы туберкулеза в Якутии: эпидемиология, организация, лечение: сборник трудов II (XXV). - Якутск, 2003. - С. 79-82.

29. Кравченко А.Ф. Эффективность хирургического лечения больных туберкулезом орагнов дыхания, состоящих в 1 «А» (МБТ-) группе диспансерного учета / Кравченко А.Ф., Алексеева Г.И., Винокурова М.К., Черных М.В., Бурнашова А. У. // Эффективность противотуберкулезных мероприятий и проблемы пульмонологии в современных эпидемиологических условиях. - Иркутск, 2003. - С. 91-92.

30. Алексеева Г.И. Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза и массивность бактериовыделения у впервые выявленных больных в Якутии / Алексеева Г.И., Фазульянова И.А., Черных М.В., Павлов Н.Г. // Материалы Х Российско-Японского международного медицинского симпозиума. «Якутия-2003» - Якутск, 2003. - С. 169-170.

31. Galina I. Alexeeva. The results of microbiological study of lung resection specimens in tuberculosis / Galina I. Alexeeva, Alexander F. Kravchenko //European Respiratory Journal. Abstracts 13th ERS Annual Congress. Vienna, Austria, September 27-October 1, 2003. - P. 339.

32. Алексеева Г.И. Применение сапропелей для выращивания микобактерий туберкулезного комплекса / Алексеева Г.И., Павлов Н.Г. // Избранные вопросы теоретической и практической медицины в условиях Якутии. Хирургия, болезни ЛОР-органов, стоматология, онкология, фтизиатрия, нервные болезни: сборник статей Якутского государственного университета им. М.К. Аммосова медицинского института - Якутск, 2003. - С. 100-101.

33. Алексеева Г.И. Результаты микробиологического исследования резектатов легкого при туберкулезе / Алексеева Г.И., Кравченко А.Ф., Черных М.В. // Избранные вопросы теоретической и практической медицины в условиях Якутии. Хирургия, болезни ЛОР-органов, стоматология, онкология, фтизиатрия, нервные болезни: сборник статей Якутского государственного университета им. М.К. Аммосова медицинского института - Якутск, 2003. - С. 147-150.

34. Алексеева Г.И. Микроскопическое выявление кислотоустой-чивых микобактерий / Алексеева Г.И., Фазульянова И. А., Горохова Т. В // Туберкулез сегодня: материалы VII Российского съезда фтизиатров. - М., 2003. - С. 81.

35. Алексеева Г.И. Лекарственная устойчивость сопутствующей микрофлоры и МБТ у больных туберкулезом органов дыхания / Алексеева Г.И., Фазульянова И.А. // Межд. Симп.Японо-Росс.мед.обмена, Ниигата, Япония 10-11 авг. 2004 г. - Ниигата, 2004. - 475 c. - C. 279.- Drug resisstance of M.tuberculosis and nonspecific bacterial flora isolated from patients with airway tuberculosis.

36. Алексеева Г.И. Способ определения лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза / Алексеева Г.И., Черных М.В., Павлов Н. Г. //3 Конгресс Европейского Региона IUATLO. 14 Национальный Конгресс Российского Респираторного Общества. - Пульмонология. - Прил. - М., 2004. - С. 49.382.

37. Алексеева Г.И. Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза и массивность бактериовыделения у впервые выяленных больных туберкулезом органов дыхания / Алексеева Г.И., Черных М.В. // 3 Конгресс Европейского Региона IUATLO. 14 Национальный Конгресс Российского Респираторного Общества. - Пульмонология. - Прил. - М., 2004. - С. 49.382.

38. Алексеева Г.И. Некоторые общие вопросы фтизиобактериологии / Алексеева Г.И. // Проблемы туберкулеза в Якутии: эпидемиология, организация и лечение: сборник трудов IV (XXVII). - Якутск, 2005. - С. 59-64.

39. Алексеева Г.И. Как повысить эффективность выявления микобактерий туберкулеза / Алексеева Г.И., Ермолаева Е. И. // Проблемы туберкулеза в Якутии: эпидемиология, организация и лечение: сборник трудов IV (XXVII). - Якутск, 2005. - С. 64-72.

40. Алексеева Г.И. Бактериологическая характеристика резектатов легких у больных, не выделяющих микобактерий туберкулеза / Алексеева Г.И., Кравченко А.Ф. // Национальный конгресс по болезням органов дыхания (15). Учредительный конгресс евроазиатского респираторного общества (1).[Секция] 33. Туберкулез. - М., 2005. - С. 154.

41. Черных М.В. Сравнительная характеристика возбудителя у больных туберкулезом легких / Черных М.В., Алексеева Г.И., Павлов Н. Г. // Национальный конгресс по болезням органов дыхания (15). Учредительный конгресс евроазиатского респираторного общества (1).[Секция] 33. Туберкулез. - М., 2005. - С. 198.

42. Кравченко А.Ф. Место хирургии в оздоровлении больных с множественно-лекарственным туберкулезом легких / Кравченко А.Ф., Алексеева Г.И., Винокурова М. К., Чуркин А.А. // Якутский медицинский журнал. - 2006. - № 2. - С. 26-29.

43. Алексеева Г.И. Частота выделения лекарственно-устойчивых микобактерий туберкулеза в Якутии / Алексеева Г.И., Кравченко А.Ф., Ахременко Я. А. // Дальневосточный медицинский журнал. - 2006. - № 4. - С. 39-42.

44. Алексеева Г.И. Прошлое и настоящее фтизиобактериологии Якутии / Алексеева Г.И. //Якутский медицинский журнал. - 2006. - № 4. - С. 69-73.

45. Алексеева Г.И. Частота выявления множественной лекарственной устойчивости у возбудителя туберкулеза в РС (Я) / Алексеева Г.И. // Актуальные вопросы охраны здоровья населения: сб. тр. город. науч. - практ. конф. «Реализация национального приоритетного проекта в сфере здравоохранения и медицинского образования в РС (Я). - Якутск, 2006. - С. 24-28.

46. Комплексные противоэпидемические и ветеринарно-санитарные мероприятия в очаге туберкулезной инфекции животноводческих хозяйств / Н.Г. Павлов, Г.П. Протодъяконова, Г.И. Алексеева.: методическое пособие [ под редакцией М.А. Тырылгина ]. - Якутск, 2006. - 24с.

47. Кравченко А.Ф. Влияние хирургического стресса у больных туберкулезом легких с множественной лекарственной устойчивостью / Кравченко А.Ф., Алексеева Г.И., Винокурова М. К. // XVI Национальный конгресс по болезням органов дыхания, II Конгресс Евроазиатского Респираторного общества. - Санкт-Петербург., 2006. - С. 182.

48. Павлов Н.Г. Новые технологии в лабораторной диагностике туберкулеза / Павлов Н.Г., Алексеева Г.И., Черных М.В. // Якутский медицинский журнал. - 2006. - № 4. - С. 62-68.

49. Применение энтеросгеля и гумата натрия в микробиологической диагностике туберкулеза / Г.И. Алексеева, Н. Г. Павлов, М.В. Черных, А.А. Перк, М.С. Егорова: методическое пособие. - Якутск, 2006. - 9с.

50. Черных М.В. Биологические свойства возбудителя у больных туберкулезом / Черных М.В., Алексеева Г.И. // XVI Национальный конгресс по болезням органов дыхания, II Конгресс Евроазиатского Респираторного общества. - Санкт-Петербург, 2006. - С. 200.

51. Алексеева Г.И. Модифицированный способ прямого определения лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза / Алексеева Г.И., Черных М.В. // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. -2006. - № 9. - С. 56-58.

52. Алексеева Г.И. Повышение результативности выявления микобактерий туберкулеза в Республике Саха (Якутия) / Алексеева Г.И. , Ермолаева Е.И. // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. - 2006. - № 9. - С. 59-63.

53. Алексеева Г.И. Повышение чувствительности выявления микобактерий туберкулеза из диагностического материала с применением сорбента - энтеросгеля /Алексеева Г.И., Павлов Н. Г., Черных М.В. // Дальне-восточный журнал инфекционной патологии. - 2006. - № 9. - С. 63-65.

54. Алексеева Г.И. Мониторинг лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза в Республике Саха (Якутия) / Алексеева Г.И., Кравченко А.Ф. // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2007. - № 7. - С. 30-33.

55. Алексеева Г.И. Вариант питательной среды для диагностики микобактерий туберкулеза / Алексеева Г.И., Павлов Н. Г., Перк А.А. // Сборник трудов Четвертой международной научно-практической конференции «Исследование, разработка и применение высоких технологий в промышленности». Под ред. А.П.Кудинова, Г.Г.Матвиенко. - Санкт-Петербург.: Издательство Политехнического университета. -2007. - Т. 10. - С. 169-170.

56. Алексеева Г.И. Способ прямого определения лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам / Алексеева Г.И., Черных М.В., Павлов Н.Г. // Якутский медицинский журнал. - 2008. - № 2. - С.25-27.

57. Алексеева Г.И. Основные тенденции распространения туберкулезной инфекции на территории Республики Саха (Якутия) / Алексеева Г.И., Кравченко А.Ф., Савилов Е.Д. // Якутский медицинский журнал. - 2009. - № 3. - С.104-106.

58. Савилов Е.Д. Оценка эпидемиологической ситуации по туберкулезу в Республике Саха (Якутия) с использованием обобщенного критерия.

Размещено на Allbest.ru