Системный подход к оценке состояния иммунного гомеостаза при остром инфаркте миокарда

Рис. 7. Математические модели морфофункционального состояния иммунной системы при экспериментальном инфаркте миокарда

Выявленные изменения чувствительности лимфоцитов крови к норадреналину и ацетилхолину сопровождались изменениями морфометрических характеристик клеток, что могло явиться как отражением перераспределения популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов, так и изменением плотности рецепторов к нейромедиаторам в ответ на изменения активности вегетативной нервной системы.

Для определения закономерностей выявленных изменений и сопоставления их с клиническими данными, нами была проведена комплексная, на основе системного многофакторного анализа, оценка морфофункционального состояния системы иммунного гомеостаза человека при остром ИМ с зубцом Q и без формирования зубца Q.

6. Оценка морфофункционального состояния лимфоцитов, нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов крови у больных с острым инфарктом миокарда

При изучении особенностей состояния лимфоцитов крови в динамике острого ИМ с патологическим зубцом Q и без зубца Q нами были проанализированы изменения 38-ми показателей, характеризующих морфологические, морфометрические параметры клеток, их иммунофенотип, выраженность процессов апоптоза и чувствительность к нейромедиаторам симпатического и парасимпатического звеньев вегетативной нервной системы.

Анализ морфологических, морфометрических и морфоструктурных показателей лейкоцитов крови в динамике острого ИМ у человека выявил изменения, во многом сходные с описанными для экспериментального ИМ у собак. Исключение составила динамика изменений ЯЦО лимфоцитов, значения которого не отличались при остром ИМ с зубцом Q и без зубца Q. При возникновении острого ИМ с патологическим зубцом Q изменения показателей морфофункционального состояния лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов также носили более выраженный характер, чем при ИМ без зубца Q, без нормализации на 14-е и 21-е сутки. Как и при экспериментальном ИМ, наблюдались статистически значимые изменения морфометрических характеристик клеток и их чувствительности к норадреналину (нейтрофильные гранулоциты) и ацетилхолину с наибольшей выраженностью на 1-е и 3-и сутки. У пациентов с развившимся после 7-х суток повторным ИМ отмечалось максимальное снижение чувствительности клеток к ацетилхолину.

Общая направленность изменений морфофункционального состояния иммунной системы при остром ИМ в клинике и эксперименте была подтверждена при сравнительном анализе математических моделей (рис.8).

Рис. 8. Математические модели морфофункционального состояния лимфоцитов (А), нейтрофильных гранулоцитов (Б) человека при остром инфаркте миокарда.

Максимальные отклонения интегральных показателей состояния лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов отмечались на 1-е и 3-и сутки, независимо от тяжести поражения сердечной мышцы. На 14-е и 21-е сутки при остром ИМ без зубца Q интегральные показатели систем приближались к норме, в случае острого ИМ с патологическим зубцом Q нормализации интегрального показателя не происходило. При сходной динамике изменений интегральных показателей, их отклонения от нормы при ИМ у человека во все сроки наблюдения были более выраженными, чем при экспериментальном инфаркте миокарда.

Распределение отдельных показателей морфофункционального состояния модельных систем в зависимости от их весовых коэффициентов в целом не отличалось от описанного для экспериментального ИМ, наибольшие значения Pi имели такие показатели, как ЯЦО лимфоцитов, размер клеток, содержание миелопероксидазы в нейтрофильных гранулоцитах, чувствительность клеток к ацетилхолину, лейкоцитарные индексы.

Таким образом, проведённый анализ математических моделей морфофункционального состояния лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов показал, что характер динамических изменений состояния лейкоцитов человека и собак при возникновении инфаркта миокарда совпадает по выраженности и направленности, при этом отмечается более быстрая нормализация состояния модельных систем в случае экспериментального ИМ, связанная с ускоренными сроками заживления у животных.

У человека и экспериментальных животных в динамике ИМ наблюдаются сходные изменения чувствительности лейкоцитов к нейромедиаторам вегетативной нервной системы, прежде всего ацетилхолину, что подтверждает общебиологический характер выявленных изменений и возможность регуляции иммуновоспалительных реакций со стороны вегетативной нервной системы через механизмы апоптотической гибели лимфоцитов. Полученные данные подтверждают возможность использования модели экспериментального инфаркта миокарда у собак для разработки патогенетически обоснованной иммунокоррегирующей терапии при инфаркте миокарда.

Для более полной оценки характера изменений в иммунной системе при ИМ и изучения механизмов действия нейромедиаторов вегетативной нервной системы на лимфоциты нами было проведено иммунофенотипирование лейкоцитов крови больных острым ИМ методами ЛПЦМ, изучены корреляционные взаимосвязи изменений морфо-структурных и иммунофенотипических характеристик клеток в зависимости от их чувствительности к норадреналину и ацетилхолину.

Анализ результатов иммунофенотипирования лимфоцитов крови (рис. 9) показал, что независимо от наличия или отсутствия зубца Q на ЭКГ, при остром ИМ через сутки после возникновения очагов некроза в сердечной мышце отмечалось увеличение относительного содержания CD3⁺8⁺ лимфоцитов по сравнению с контролем (р<0,01), причём у больных с острым ИМ с зубцом Q содержание CD3⁺8⁺-клеток достигало максимальных значений, составляя в среднем 37,4 ±3,9% (в контроле и группе больных с острым ИМ без зубца Q - 26,1±1,9% и 31,4±2,1%, соответственно).

Рис. 9. Изменение иммунофенотипических параметров лимфоцитов крови человека при остром инфаркте миокарда.

1 - CD3+лимфоциты, %

2 - CD3+лимфоциты, клеток х 109/л

3 - CD3+4+лимфоциты, %

4 - CD3+4+лимфоциты, клеток х 109/л

5 - CD3+8+лимфоциты, %

6 - CD3+8+лимфоциты, клеток х 109/л

7 - CD3-8+лимфоциты, %

8 - CD3-8+лимфоциты, клеток х 109/л

9 - CD3-19+лимфоциты,%

10 - CD3-19+лимфоциты, клеток х 109/л

11- CD3-16+56+лимфоциты, %

12 - CD3-16+56+лимфоциты, клеток х 109/л

13- CD3+16+56+лимфоциты, %

14 - CD3+16+56+лимфоциты, клеток х 109/л

15- CD3+25+лимфоциты, %

16 - CD3+25+лимфоциты, клеток х 109/л

17- CD3+HLA-DR+ лимфоциты,%

18 - CD3+HLA-DR+ лимфоциты, клеток х 109/л

19- CD3+95+лимфоциты, %

20 - CD3+95+лимфоциты, клеток х 109/л

21 - Индекс сдвига ацетилхолина (по CD95+), усл.ед.

Одновременно увеличивалось (р<0,01) относительное содержание других эффекторных клеток - CD3^-8⁺- и CD3^-16⁺56⁺-лимфоцитов. Относительное содержание CD3⁺- , CD3⁺4⁺- , CD3^-19⁺- клеток не изменялось, уменьшалось (р<0,05) только их абсолютное количество вследствие значительного снижения (р<0,01) общего числа лимфоцитов в крови. При остром ИМ с зубцом Q отмечалось значительное снижение процентного содержания CD3⁺25⁺- лимфоцитов (до 3,7±0,3%; в контроле - 5,8±0,6%), CD3⁺HLA-DR⁺- лимфоцитов (до 6,8±0,4% против 11,1±1,9% в контроле) и CD3⁺95⁺клеток (до 6,3±0,04 % против 12,4±2,0% в контроле). Одновременно отмечалось снижение экспрессии CD3-антигена на активированных лимфоцитах. В случаях острого ИМ без зубца Q изменений относительного содержания данных клеток по сравнению с контрольными значениями не происходило, имело место только снижение интенсивности флюоресценции связанных с CD3-антигеном антител. Перераспределение субпопуляционного состава лимфоцитов крови сопровождалось увеличением чувствительности лимфоцитов к проапоптотическому действию ацетилхолина, при этом была выявлена сильная положительная корреляция между изменениями значений площади клеток, параметров FSC и содержанием CD3⁺8⁺- (r=0,81 и 0,89, соответственно), CD3^-8⁺- (r=0,79 и 0,85, соответственно) и CD3^-16⁺56⁺-лимфоцитов (r=0,84 и 0,91, соответственно). Чувствительность к норадреналину не изменялась.

На 3-и сутки острого ИМ изменения субпопуляционного состава лимфоцитов и их чувствительности к ацетилхолину сохранялись и были более выражены при остром ИМ с зубцом Q. Возрастала чувствительность клеток к норадреналину, что проявлялось снижением экспрессии CD3- и CD95- антигенов на лимфоцитах после инкубации крови с норадреналином in vitro (р<0,05 и р<0,01 при ИМ без зубца и с зубцом Q, соответственно).

На 7-е сутки у пациентов с острым ИМ без зубца Q содержание основных популяций и субпопуляций лимфоцитов статистически не отличалось от значений контрольной группы, но было повышено относительное и абсолютное содержание CD3⁺95⁺-клеток, чувствительность к нейромедиаторам нормализовалась. У больных ИМ с патологическим зубцом Q содержание эффекторных лимфоцитов оставалось повышенным, также повышалось количество CD3⁺95⁺-клеток, чувствительность клеток к ацетилхолину была высокой. Максимальные значения содержания CD3⁺8⁺- CD3^-8⁺ - и CD3^-16⁺56⁺ - лимфоцитов, экспрессии CD3^-антигена и индексов сдвига ацетилхолина наблюдались у двух пациентов с развившимся на 9-е - 12-е сутки повторным инфарктом на фоне острого ИМ с зубцом Q. На 14-е - 21-е сутки наблюдения в группе больных ИМ без зубца Q продолжалась нормализация популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов, их чувствительности к нейромедиаторам вегетативной нервной системы. При ИМ с зубцом Q значения большинства показателей приближались к контрольным только на 21-е сутки, однако количество CD3⁺95⁺-клеток и чувствительность лимфоцитов к ацетилхолину оставались достоверно повышенными (р<0,05).

Таким образом, иммунофенотипирование лимфоцитов показало, что при развитии острого ИМ уже в первые сутки отмечалось перераспределение субпопуляционного состава клеток за счёт значительного увеличения содержания лимфоцитов, выполняющих эффекторные функции (Т-цитотоксические клетки, естественные киллеры), наиболее выраженные при остром ИМ с зубцом Q.

В дальнейшем при развитии резорбционно-некротических процессов в миокарде происходит дополнительная активация эффекторных лимфоцитов, повышение количества клеток, экспрессирующих поздний активационный антиген CD95 и готовых воспринимать сигналы к индукции апоптоза. При этом наиболее неблагоприятными для течения острого ИМ являются значительное (более чем в 1,5-2 раза) увеличение в крови относительного содержания CD3⁺8⁺-, CD3^-8⁺ -, CD3^-16⁺56 и CD95⁺- лимфоцитов при повышенной чувствительности клеток к проапоптотическому действию ацетилхолина.

Выявленные изменения подтверждают и дополняют данные литературы об активации иммунной системы у больных ишемической болезнью сердца, связанной с хроническим воспалительным процессом, развивающимся вследствие атеросклеротических поражений сосудов. Выявленная тесная положительная корреляционная связь между количеством CD3⁺8⁺-, CD3^-8⁺-, CD3^-16⁺56- и CD95⁺- лимфоцитов в крови и чувствительностью лимфоцитов к проапоптотическому действию ацетилхолина in vitro, по нашему мнению, убедительно свидетельствует о том, что именно через апоптоз эффекторных клеток вегетативная нервная система, и прежде всего её парасимпатическое звено, может регулировать интенсивность иммуно-воспалительных реакций в организме.

Известно, что система моноцитов/макрофагов играет важную роль в реализации иммуно-воспалительных реакций. Одной из ключевых функций данной системы является продукция провоспалительных цитокинов. В связи с этим в рамках комплексной оценки системы иммунного гомеостаза при остром ИМ нами была проведена оценка содержания ИЛ-1в, ИЛ-6 и ФНОб в плазме крови при остром ИМ, а также способность лейкоцитов (моноцитов) крови больных ИМ вырабатывать провоспалительные цитокины при стимуляции бактериальным липополисахаридом in vitro.

При анализе спонтанных уровней провоспалительных цитокинов в плазме крови у всех больных ИМ (табл. 1) было выявлено статистически значимое (по сравнению с группой практически здоровых доноров) повышение ИЛ-1в, ИЛ-6 и ФНОб через сутки после возникновения очага некроза в миокарде (64,7± 9,9; 40,1± 6,9 и 42,9± 8,7 пг/мл, соответственно против 5,38±1,8, 11,2±2,5 и 9,5±2,2 пг/мл).

Таблица 1. Изменение уровней провоспалительных цитокинов в плазме крови больных острым инфарктом миокарда (M±у)

Примечание: _* - статистически значимые отличия (р<0,001) от соответствующих значений в группе практически здоровых доноров (контроль)

Статистически значимых отличий между группами больных ИМ с зубцом Q и ИМ без зубца Q не было выявлено в силу достаточно большого индивидуального разброса показателей. Через 3-е суток после возникновения ИМ показатели претерпевали незначительные изменения. Отмечено значительное повышение уровня ФНОб в плазме крови больных с Q-образующим ИМ (до 185,6±10,4 пг/мл) на 7-е сутки заболевания, максимальные значения наблюдались у пациентов с осложнениями ИМ.

Наибольшие отличия в динамике показателей у больных ИМ с зубцом Q и ИМ без зубца Q во все сроки наблюдения проявили индуцированные липополисахаридом уровни внеклеточных и внутриклеточных провоспалительных цитокинов. Индексы стимуляции продукции цитокинов были статистически значимо выше при ОИМ с зубцом Q. Возрастание значений индексов стимуляции коррелировали с неблагоприятным прогнозом дальнейшего течения заболевания.

Таким образом, динамика изменений спонтанных и индуцированных уровней провоспалительных цитокинов в плазме крови больных с острым ИМ отражает динамику развития системной воспалительной реакции, важную роль иммуно-воспалительных процессов при развитии ИМ и свидетельствует о перспективности применения иммунокоррегирующей, в том числе и цитокиновой, терапии при данном заболевании. Длительная гиперпродукция ФНОб, являющегося индуктором апоптоза как для лейкоцитов крови, так и кардиомиоцитов, максимально выражена при более тяжёлом течении ИМ, развивается на фоне повышенной чувствительности лимфоцитов крови к проапоптотическому действию ацетилхолина, что подтверждает важность процессов регуляции апоптотической гибели клеток в патогенезе инфаркта миокарда.

Для интегральной, комплексной оценки состояния системы иммунного гомеостаза человека при остром ИМ, выявления общей направленности изменений и определения наиболее важных прогностических параметров все полученные количественные данные были обработаны с помощь системного многофакторного анализа, с расчётом коэффициентов влияния отдельных показателей и рассчитаны обобщающие интегральные показатели для каждого срока наблюдения; построены математические модели состояния системы иммунного гомеостаза (рис. 10).

Рис. 10. Математические модели состояния системы иммунного гомеостаза человека при остром инфаркте миокарда.

Анализ математических моделей подтвердил наличие изменений со стороны иммунной системы в динамике острого инфаркта миокарда с наибольшим отклонением интегральных показателей системы на 3-и сутки после возникновения острого ИМ. Максимальная активация во все сроки наблюдения и отсутствие нормализации общего состояния иммунной системы отмечались в случаях ИМ с зубцом Q. Общий характер и направленность изменений активности модельной системы иммунного гомеостаза определялись в первые 3-е суток после возникновения ИМ морфофункциональным состоянием лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов, что подтверждается сравнительным анализом значений соответствующих интегральных показателей и ранжированной оценкой коэффициентов влияния отдельных параметров. Начиная с 7-х суток основной вклад в общее состояние иммунной системы вносили параметры морфофункционального состояния лимфоцитов и их чувствительность к ацетилхолину. Более выраженное отклонение интегрального показателя морфофункционального состояния иммунной системы при остром ИМ с зубцом Q на 21-е сутки после возникновения ИМ свидетельствовало об относительной стабилизации и патогенетической незавершённости изучаемых процессов при более тяжёлом поражении сердечной мышцы.

Сопоставление средних значений и весовых коэффициентов отдельных иммунологических показателей выявило, что в первые 3-е суток развития острого ИМ отмечалась тесная корреляция в изменении ряда иммунологических и клинико-лабораторных показателей. Так, коэффициенты влияния уровней в крови ИЛ-1в, ИЛ-6, ФНОб были сопоставимы с весовыми коэффициентами таких параметров, как ИСЛК и ЛИИ. Максимальную прогностическую значимость проявляли показатели чувствительности лейкоцитов к нейромедиаторам вегетативной нервной системы.

На 7-е и 14-е сутки возрастала прогностическая значимость уровня ФНОб, ЯЦО лимфоцитов, относительного содержания CD3⁺CD8⁺- и CD3^-CD16⁺56⁺- лимфоцитов. Наибольшую прогностическую значимость на 21-е сутки течения острого ИМ приобретали такие показатели, как ЛИИ, содержание CD3⁺CD95⁺ лимфоцитов, чувствительность лимфоцитов к ацетилхолину.

С целью получения рабочей математической модели для использования в клинической практике нами был проведён расчёт интегральных показателей системы иммунного гомеостаза с учётом иммунологических параметров, имеющих наибольшие значения весовых коэффициентов в конкретные сроки наблюдения (табл.2). При совпадении значений весовых коэффициентов отдельных параметров в рабочую модель включали наиболее простые и воспроизводимые показатели. Учитывая, что отдельные результаты наблюдений каждого показателя при оценке средних арифметических значений принадлежат одному распределению с наиболее вероятным отклонением в пределах доверительного интервала, для определения группы риска в рабочую модель подставляются значения единичного показателя обследуемого пациента, не зависимо от наличия или отсутствия патологического зубца Q на ЭКГ, рассчитывается интегральный показатель и определяется группа риска по максимальному приближению к диагностическим значениям интегральных показателей системы.

Таблица 2. Изменения интегральных показателей морфофункционального состояния иммунной системы при остром инфаркте миокарда (рабочая модель для оценки группы риска)

В целом, комплексная, на основе системного многофакторного анализа, сравнительная оценка состояния иммунной системы человека при остром ИМ и собак при экспериментальном ИМ выявила общие закономерности изменений иммунологических показателей в динамике ИМ, зависящие от тяжести поражения сердечной мышцы и являющиеся отражением участия иммунологических механизмов в патогенезе инфаркта миокарда. Показана ведущая роль лимфоцитов на всех этапах реализации иммуно-воспалительных процессов при ИМ, раннее увеличение содержания эффекторных лимфоцитов при ИМ, что свидетельствует о предсуществующей активации иммунной системы у больных инфарктом миокарда.

Использованный комплекс методов позволил доказать важную роль вегетативной нервной системы, особенно её парасимпатического звена, в регуляции иммунных реакций посредством влияния на апоптоз лимфоцитов. Полученные математические модели состояния иммунной системы человека и экспериментальных животных подтвердили общебиологический характер выявленных изменений со стороны иммунной системы и позволили определить наиболее значимые для диагностики и прогноза иммунологические показатели, позволяющие выделять среди больных с острым ИМ пациентов с высоким риском развития осложнений.

ВЫВОДЫ

1. Анализ изменений средних размеров лимфоцитов, параметров светорассеяния FSC после 2-х часов инкубации цельной крови при 37⁰С в присутствии ацетилхолина хлорида (10^-5 моль/л и 10^-6 моль/л для крови человека и собак, соответственно) и экспрессии CD95-антигена на клетках через 24 часа инкубации позволяет выявлять и оценивать проапоптотическое действие нейромедиатора на лимфоциты крови.

2. Развитие экспериментального инфаркта миокарда у собак сопровождается динамическими изменениями показателей морфофункционального состояния иммунной системы, зависящими от стадии патологического процесса и тяжести поражения сердечной мышцы и отражающими выраженность иммуновоспалительной реакции.

3. При возникновении нетрансмурального инфаркта миокарда у собак максимальные изменения иммунологических показателей наблюдаются в первые трое суток и проявляются в увеличении площади лимфоцитов крови, их ядер, ядерно-цитоплазменного отношения, чувствительности к проапоптотическому действию ацетилхолина, активации нейтрофильных гранулоцитов при сниженной реакции на ацетилхолин и норадреналин, увеличении содержания С-реактивного белка, возрастании индекса сдвига лейкоцитов крови и лейкоцитарного индекса интоксикации. Нормализация показателей отмечается на 14-е сутки после возникновения очага некроза в сердечной мышце.

4. В динамике трансмурального инфаркта миокарда изменения морфофункционального состояния лимфоцитов крови собак носят сходный характер, но выражены в большей степени, с отсутствием нормализации чувствительности к ацетилхолину на 14-е сутки. Для нейтрофильных гранулоцитов характерны: снижение фагоцитарной активности и активности внутриклеточной миелопероксидазы при максимальной чувствительности клеток к норадреналину в 1-е и 3-и сутки; увеличение ядерно-цитоплазменного отношения и снижение чувствительности к норадреналину и ацетилхолину на 7- е и 14-е сутки; содержание С-реактивного белка и значения лейкоцитарных индексов повышены во все сроки наблюдения.

5. Использование системного многофакторного анализа с построением математических моделей позволило выявить максимальную активацию иммунной системы экспериментальных животных на 3-и сутки после воспроизведения инфаркта миокарда. При этом трансмуральный инфаркт миокарда сопровождается более выраженными и длительными изменениями морфофункционального состояния иммунной системы, с развитием дисбаланса чувствительности лейкоцитов к нейромедиаторам вегетативной нервной системы.

6. У пациентов с острым инфарктом миокарда выявляются динамические изменения показателей морфофункционального состояния лейкоцитов, уровней иммуноглобулинов классов A, M, G; С-реактивного белка и активности системы комплемента, сходные с таковыми у экспериментальных животных и отражающие участие иммунной системы в патогенезе инфаркта миокарда и влияние на неё со стороны вегетативной нервной системы.

7. Иммунофенотипирование лимфоцитов крови человека выявило, что при инфаркте миокарда без зубца Q в первые трое суток заболевания происходит увеличение относительного содержания эффекторных лимфоцитов (CD3⁺8⁺-,CD3^-8⁺-,CD3^-16⁺56⁺-клетки), коррелирующее с повышенной чувствительностью клеток к ацетилхолину и норадреналину, на 7-е сутки увеличивается содержание CD3⁺95⁺лимфоцитов, начиная с 14-х суток происходит постепенная нормализация показателей; при инфаркте миокарда с зубцом Q данные изменения выражены в большей степени, сопровождаются в первые трое суток снижением количества активированных клеток (CD3⁺25⁺, CD3⁺HLA-DR⁺ и CD3⁺95⁺ лимфоциты) и экспрессии CD3-антигена на них; высокий уровень CD3⁺95⁺лимфоцитов наблюдается с 14-х по 21-е сутки, повышенная чувствительность клеток к проапоптотическому действию ацетилхолина сохраняется на протяжении 21-х суток после возникновения инфаркта миокарда.

8. Перераспределение субпопуляций лимфоцитов и изменение их чувствительности к проапоптотическому действию ацетилхолина сопровождается динамическими изменениями спонтанных и индуцированных уровней провоспалительных цитокинов (интерлейкин-1в, интерлейкин-6 и фактор некроза опухоли б) в крови, что свидетельствует о целесообразности разработки иммунокоррегирующей терапии при остром инфаркте миокарда.

9. Комплексная сравнительная оценка состояния иммунной системы при остром инфаркте миокарда в клинике и эксперименте выявила общие закономерности изменений иммунологических показателей, зависящие от тяжести поражения сердечной мышцы и являющиеся отражением участия иммунологических механизмов в патогенезе инфаркта миокарда, с позиций доказательной медицины подтвердила целесообразность использования модели экспериментального инфаркта миокарда у собак для возможной разработки иммуннокоррегирующей терапии.

10. Системный многофакторный анализ позволил обосновать спектр наиболее значимых иммунологических показателей для повышения эффективности диагностики и прогнозирования течения инфаркта миокарда.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанный комплекс методов оценки морфофункционального состояния иммунной системы на основе системного многофакторного анализа целесообразно использовать наряду со стандартными клинико-лабораторными показателями для повышения эффективности диагностики и прогнозирования течения острого инфаркта миокарда и разработки подходов к иммунокоррегирующей терапии при данном заболевании.

2. Рекомендуется для изучения влияния вегетативной нервной системы на апоптоз лимфоцитов in vitro использовать инкубацию цельной гепаринизированной крови с раствором ацетилхолина хлорида (конечная концентрация 10^-5 моль/л) при 37⁰С в полной питательной среде RPMI в течение 2-х и 24-х часов с дальнейшей оценкой параметров фронтального светорассеяния (FSC) и содержания CD3+95+,CD3^-95+,CD95+лимфоцитов. При проведении исследований на лимфоцитах крови собак концентрация ацетилхолина хлорида при тех же условиях инкубации должна составлять 10^-6 моль/л.

3. Для оптимального анализа данных иммунологических исследований, оценки адекватности возможной иммунокоррегирующей терапии в динамике инфаркта миокарда и других заболеваний целесообразно использовать разработанную компьютерную программу обработки параметров состояния иммунной системы пациента «Иммунолог».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Лимарева Л.В. Изменение адреночувствительности лимфоцитов периферической крови собак в дневное и ночное время суток / Л.В. Лимарева, Т.В. Суздальцева // Сборник научных трудов по материалам итоговой годичной конференции ЦНИЛ под ред. Проф. М.В. Угловой - Куйбышев, 1990 г.- С. 57 - 60.

2. Лимарева Л.В. Морфофункциональное состояние нейтрофильных лейкоцитов крови при экспериментальном инфаркте миокарда / Л.В. Лимарева, В.В.Богуш, Е.А.Захарова // Сборник научных трудов "Математическое моделирование в теоретической и практической медицине"- под ред. Проф. М.В.Угловой и Г.П.Котельникова., посвященный 75-летию Самарского гос.мед.университета. -Самара, 1994.- С. 36 - 38.

3. Лимарева Л.В. Изучение морфофункционального состояния лейкоцитов крови в дневное и ночное время / Л.В. Лимарева // Сборник научных работ "Иммунологические и гуморальные аспекты клинической патологии" под ред. проф. С.М. Бабкина по материалам итоговой годичной конференции НИЦ Самарского мед. института.- Самара, 1996.- С. 43-45.

4. Лимарева Л.В. Использование иммунологических методов в оценке функциональных свойств лейкоцитов и фибробластов in vitro / Л.В. Лимарева, В.В. Богуш, И.Ю. Николаева, Т.В. Яценко // Материалы II Всероссийского симпозиума с международным участием "Клинические и фундаментальные аспекты тканевой терапии. Теория и практика клеточных биотехнологий". Под общей ред. Г.П. Котельникова, С.П. Миронова, В.Д. Фёдорова, Л.Т. Воловой // Самара, Издательство «Офорт», 2004. - С. 139 - 140.

5. Лимарева Л.В. Комплексная оценка чувствительности лимфоцитов крови к нейромедиаторам вегетативной нервной системы при остром инфаркте миокарда в клинике и эксперименте / Л.В. Лимарева // Вестник Самарского государственного университета. Естественнонаучная серия. - 2006. - № 9 (49). - С. 205 - 212.

6. Лимарева Л.В. Оценка диагностической и прогностической значимости параметров иммунофенотипирования лейкоцитов крови при остром инфаркте миокарда / Л.В. Лимарева // Вестник Самарского государственного университета. Естественнонаучная серия. - 2007. - № 9/1(59). - С. 391 - 397 (принята в печать 26.12.2006).

7. Меленберг Т.В. «Иммунолог» - программа для обработки данных о состоянии иммунной системы пациента / Т.В. Меленберг, А.В. Жестков, Л.В. Лимарева, М.Ю. Доладов // Вестник Самарского государственного универ-ситета. Естественнонаучная серия. - 2006. - № 6/2 (46). - С. 165 -169.

8. Лимарева Л.В. Сравнительная оценка влияния преднизолона и нейромедиаторов вегетативной нервной системы на апоптоз лимфоцитов периферической крови / Л.В. Лимарева, О.П. Данильченко // Аллергология. Иммунология. - 2006. - Т.7- № 3. - С. 272.

9. Лимарева Л.В. Методы проточной цитометрии в оценке влияния нейромедиаторов вегетативной нервной системы на морфофункциональное состояние лейкоцитов крови / Л.В. Лимарева // Морфология. Научно-теоретический медицинский журнал. - 2008. -Т. 134. - №5. - С. 79.

10. Фёдорова О.И. Реакции периферической крови у больных пожилого возраста при распространенных заболеваниях / О.И. Фёдорова, В.А. Кондурцев, И.Л. Давыдкин, Л.В. Лимарева // Клиническая медицина: Ежемесячный научно-практический журнал. - 2008. - Т.86. - №2. - С. 48-51.

11. Попова Л.Л. Сравнительная оценка характера изменений основных иммунологических показателей при различных патологических состояниях / Л.Л. Попова, Л.В. Лимарева, М.В. Комарова // Уральский Медицинский Журнал . - 2008. - №14 (54). - С. 89-93.

12. Лимарева Л.В. Оценка диагностической и прогностической значимости показателей иммунного статуса при остром инфаркте миокарда / Л.В. Лимарева // Российский Иммунологический Журнал. - 2008. -Т. 2(11). - № 2-3. - С. 322-323

13. Лимарева Л.В. Оценка диагностической и прогностической значимости показателей иммунного статуса у реципиентов аллотрансплантата почки / Л.В. Лимарева, А.В. Колсанов, С.И. Попова, А.А. Авдеева // Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей и клеток: Материалы всероссийской конференции с международным участием // Самара, Издательство «Офорт», 2008. - С. 276 - 277.

14. Кельцев В.А. Ранние артриты у детей и подростков - иммунный статус больных и перспективы лечения / В.А. Кельцев, Л.И. Гребёнкина, Л.В. Лимарева, М.А. Бочкарёва, Ю.Г. Григорьева, // Научно-практическая ревматология. - 2008. - № 2. - С. 64 - 68.

16. Лимарева Л.В. Математическое моделирование в оценке прогностической значимости иммунологических показателей при остром инфаркте миокарда / Л.В. Лимарева // Сборник трудов Х международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии, посвященном столетию со дня рождения академика АМН А.Д. Адо (Россия, Казань, 20-23 мая 2009). - С. 365.

17. Лимарева Л.В. Определение интенсивности флюоресценции меченных моноклональных антител к CD3 антигену на поверхности Т-лимфоцитов в комплексной оценке иммунного статуса больных ишемической болезнью сердца / Л.В. Лимарева // Вестник Уральской медицинской академической науки. Тематический выпуск по аллергологии и иммунологии - 2009. - № 2/1 (24). - С. - 319 - 320.

18. Лимарева Л.В. Сравнительная оценка иммунного статуса больных ИБС в динамике гипертонического криза, острого инфаркта миокарда и после аортокоронарного шунтирования / Л.В. Лимарева, И.В. Новокшёнова, И.В. Губарева // Медицинская иммунология. - 2009. - Т. 11. - № 4-5. - С. 468.

19. Лимарева Л.В. Особенности морфофункционального состояния лейкоцитов крови при остром инфаркте миокарда / Л.В. Лимарева // Морфологические ведомости. - 2009. - № 3-4. - С. 59 - 61.

20. Лимарева Л.В. Комплексная оценка иммунной системы при остром инфаркте миокарда в клинике и эксперименте // Самара, Издательство Офорт, 2009, 147с.

21. Меленберг Т.В. Программа для обработки данных о состоянии иммунной системы пациента «Иммунолог» / Т.В. Меленберг, А.В. Жестков, Л.В. Лимарева, М.Ю. Доладов // Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ № 2006610352 (Заявка № 2005612520 дата поступления 4 октября 2005 зарегистрирована в реестре программ для ЭВМ 20 января 2006 г.).

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ИМ - инфаркт миокарда

ИСЛК - индекс сдвига лейкоцитов крови

ИСд - индекс сдвига показателя под действием нейромедиатора

Ист - индекс стимуляции

ИЛ-1в - интерлейкин бета

ИЛ- 6 - интерлейкин 6

ИФА - иммуноферментный анализ

ЛГИ - лимфоцитарно-гранулоцитарный индекс

ЛПЦМ - лазерная проточная цитофлюориметрия

ФНОб - фактор некроза опухоли альфа

С-РБ - С - реактивный белок

ЯЦО - ядерно-цитоплазменное отношение

CD - clusters of differentiation

Sк - площадь клетки

Sя - площадь ядра

FSC -forward scattering

SSC - side scattering

Размещено на Allbest.ru