В фармакокинетических исследованиях при оценке степени изменения количества препарата в тканях используется такой параметр как площадь под фармакокинетической кривой (AUC) «концентрация-время» - интегральный параметр пропорциональный общему количеству лекарственного средства в организме. Мы использовали площадь под фармакокинетической кривой в качестве условной количественной характеристики содержания меченого йодида и ЙДУР в зоне опухоли.

Математическая величина площади (S) равна интегралу аппроксимирующей функции или, в нашем случае, сумме двух интегралов экспоненциальных функций в интервале от 0,25 ч до 72 ч. Выбор данного временного интервала обусловлен удержанием в опухоли включенного в ДНК ЙДУР (Гл.3).

_{72 72}

S(?) = ? A*e^-at dt + ? B*e^-bt dt = S (1) + S (2), где

^{0,25 0,25}

S(?) - площадь под суммарной кривой N_t / N_0.25 отражает совокупный процесс выведения РМ; S (1) = A/a * (e ^-a*0,25 - e^{- -a*72}) - площадь под медленной экспонентой; S(2) = B/b * (e ^-b*0,25 - e^{- -b*72}) - площадь под быстрой экспонентой.

Следует отметить, что при радиометрии in vivo практически невозможно регистрировать уровень радиоактивности только опухоли, поскольку на результаты радиометрии влияет также РМ, содержащаяся в органах и тканях, непосредственно находящихся в зоне «видимости» детектора (кожа, бедренная кость), и РМ прилегающей к опухоли ткани. При нормировании значений радиометрических данных к их контрольному значению, влияние этого фактора сказывается в меньшей степени, чем для абсолютных значений. Кроме того, нахождение относительных значений позволяет оценить влияние доз облучения на индивидуальную реакцию опухоли. Поэтому, учитывая вышесказанное, вместо абсолютной величины площади под кривой выхода РМ мы использовали относительное изменение площади, условно обозначив его коэффициентом W. Коэффициент W рассчитывается как:

1. W?(d/0) = S(?)_d / S(?) ₀ - отношение площади под общей кривой выхода РМ при облучении опухоли дозами 2, 10, 20 или 40 Гр [S(?)_d ] к соответствующей площади РМ контроля [S(?) ₀ ].

2. W1(d/0) = S(1)_d / S(1)₀ - отношение площади под первой экспонентой при облучении опухоли дозами 2, 10, 20 или 40 Гр [S(1)_d ] к соответствующей площади контроля [S(1)₀ ].

3. W2(d/0) = S(2)_d / S(2)₀ - отношение площади под второй экспонентой при облучении опухоли дозами 2, 10, 20 или 40 Гр [S(2)_d ] к соответствующей площади контроля [S(2)₀ ].

Согласно описанной в главе 2 технике проведения экспериментов при оценке изменения радиоактивности в зоне опухоли для индивидуальных животных использовали одну группу животных с последовательным введением двух разномеченных ЙДУР: РМ ¹³¹I (контроль до облучения) и РМ ¹²⁵I (параметр после облучения). В ходе исследований было установлено, что параметры быстрых экспонент кривых выведения РМ ЙДУР из меланомыВ-16, саркомы-180 и свободного йодида из меланомы В-16 для одних и тех же доз облучения идентичны.

Это позволяет расценивать процесс, описываемый 2-ой экспонентой, как процесс выведения из зоны опухоли основного продукта, возникающего при метаболизме ЙДУР, - свободного йодида, что согласуется с литературными данными по метаболизму ЙДУР. Ниже (Табл.4) приведены коэффициенты W2(d/0) (средние по 8 экспериментам) полученные в исследованиях с использованием ЙДУР и NaI.

Таблица 4 Относительное изменение площади [W 2(d/0)] под быстрой экспонентой при рентгеновском облучении опухоли

W 2(d/0)%	2 Гр	10 Гр	20 Гр	40 Гр
NaI меланома В-16	98,7 ± 4,3	84,3 ± 3,8	77,9 ± 2,1	75,4 ± 1,5
ЙДУР меланома В-16	97 ± 3,6	83 ± 2,5	78,9 ± 2,0	76 ± 2,8
ЙДУР саркома-180	98,2 ± 3,8	84,9 ± 3,6	76,3 ± 3,7

Участок кривой, описываемый медленной экспонентой, представляет для нас наибольший интерес, поскольку именно он, как мы полагаем, отражает динамику уровня радиоактивности в опухоли, связанную с ДНК, а S^ЙДУР (1) соответственно - количество ЙДУР, включенного в ДНК опухолевых клеток в интервале времени от 15 минут до 72 часов. В это время ЙДУР связан с ДНК опухоли и где он удерживается при медленном клиренсе в течение 1- 4 суток. Для того чтобы оценить вклад РМ, связанной с медленной экспонентой, в измеряемую в зоне опухоли радиоактивность, при воздействии каждой дозы мы использовали отношение площади под первой экспонентой к площади под суммарной кривой выхода РМ. W(1/?) = W1_{[0, 2, 10, 20, 40]} / W?_{[0, 2, 10, 20, 40].} Вычисление коэффициентов W для каждой дозы позволило установить, что при введении в организм NaI процент «условно связанного» йодида W(1/?), находящегося в опухолевой зоне, по отношению к общему количеству йодида в радиометрируемой области является постоянной величиной, не зависящей от дозы рентгеновского облучения и равен 17%. При использовании ЙДУР существует зависимость коэффициента W(1/?)_d ЙДУР от дозы радиационного воздействия, при которой коэффициент уменьшается с 39% в контроле (без облучения) до 33%, 28%, 23%, и 17% при рентгеновском облучении меланомы В-16 в дозах 2, 10, 20, и 40 Гр соответственно. Критерии достоверности различий величин W(1/?)_d между группами, равные 7,35; 8,95; 8,54; 21,64, значительно превосходят свое критическое значение t=2,30, что говорит о статистически значимых отличиях полученных данных. (Число степеней свободы определяли по формуле для малых выборок. Уровень статистической значимости p 0,05). При рентгеновском облучении саркомы-180 дозами 2, 10 и 20 Гр значения коэффициента W(1/?)_d ЙДУР также различаются с высокой степенью достоверности и составили: 29%, 24%, 16%. Следовательно, надо полагать, что W(1/?) равный 17% - это вклад радиоактивности, которая не связана с синтезом ДНК, а является результатом метаболизма йодида, образующегося в процессе распада ЙДУР.

Таким образом, участок кривой выведения РМ ЙДУР из зоны опухоли характеризующийся медленной экспонентой отражает совокупную РМ как ЙДУР включенного в ДНК опухоли, так и количество РМ «условно связанного» йодида (или продуктов его трансформации), который задерживается в области радиометрического измерения.

4.2. Количественная in vivo оценка включения 5-йод-2'-ЙДУР в ДНК опухолевых клеток. Если наша гипотеза верна, и уровень изменения количества ЙДУР в ДНК опухолевых клеток модельно можно представить через изменение площади под первой экспонентой кривой N_t/N _0,25 во времени, то необходимо выполнение двух основных условий: первое - значение подинтегральной функции не должно существенно меняться в интервале от 0,25 до 72 часов, поскольку не должно существенно меняться количество ЙДУР, включенного в ДНК, на протяжении первых 70 - 80 часов после введения ЙДУР (в дальнейшем возможно увеличение скорости выведения РМ за счет дейодирования ДНК при гибели клеток вследствие облучения); второе - должна существовать зависимость величины коэффициента W1(d/0) ЙДУР от дозы облучения опухоли аналогичная зависимости уровня синтеза ДНК от дозы облучения.

Рассчитанное значение скорости убывания функции медленной экспоненты для временного участка от 0,25 до 72 часов, равное приращению этой функции (dy/dt=0,2) указывает на то, что в заданном временном интервале скорость убывания является несущественной и будет приближаться к постоянной величине, оставаясь меньше ее. Что касается выполнения второго условия, то здесь прослеживается четкая закономерность снижения коэффициента W1(d/0) ЙДУР при увеличении подводимой к опухоли дозы. Ниже (Табл. 5) приведены значения доз и соответствующие им значения коэффициентов W1(d/0), усредненных по 5 экспериментам для рентгеновского облучения, облучения тепловыми нейтронами и комбинации облучения тепловыми нейтронами с введением бор-содержащего соединения ¹⁰BSH.

Таким образом, предложенный нами коэффициент W1(d/0) отвечает двум основным требованиям, предъявляемым к модельным параметрам, характеризующим уровень изменения синтеза ДНК в опухоли. Данные, полученные в результате in vivo измерений, практически идентичны результатам, полученным из выделенной ДНК опухолевых клеток, т.е. значения коэффициентов W1(d/0) для рентгеновского излучения соответствуют содержанию ¹²⁵I-ЙДУР в выделенной опухолевой ДНК (Рис.5). Разница же между параметрами W1(d/0) и количеством ЙДУР в выделенной ДНК для каждой дозы воздействия представляет собой величину, определяемую нами как количество «связанного» йодида.

Таблица 5 Влияние дозы облучения на коэффициент относительного изменения площади под медленной экспонентой (W1(d/0)

Меланома В - 16	Саркома - 180
Рентгеновское облучение	Облучение тепловыми нейтронами	10BSH + Нейтронное облучение	Рентгеновское облучение
Доза (Гр)	W1(d/0) ( %)	Доза (Гр)	W1(d/0) ( %)	Доза (Гр)	W1(d/0) ( %)	Доза (Гр)	W1(d/0) ( %)
2 10 20 40	78,4 ±4,1 53,9±3,4 39,6±3,1 19,9±1,04	0,51 1,19 2,04 2,93 5,44 8,94	84,66 ± 4,9 68,20 ± 3,0 49,25 ± 3,2 41,28 ± 3,8 31,47 ± 1,7 27,79 ± 2,0	0,21 0,79 1,09 1,55 2,76 5,39 6,07 9,62	62,41 ± 3,1 51,32 ± 3,2 49,78 ± 1,3 44,60 ± 1,4 32,23 ± 2,1 12,38 ± 1,2 12,15 ± 1,3 11,80 ± 0,9	2 10 20	75,54 ±3,4 51,0±2,3 28,6 ±2,1

Основываясь на проведенном анализе полученных экспериментальных данных, можно сказать, что предложенный нами параметр W 1(d/0) связан с количеством ЙДУР, включенного в ДНК опухолевых клеток, отражает степень изменения пролиферативной активности злокачественного новообразования и может рассматриваться как условная характеристика подавления синтеза ДНК индивидуальной опухоли, а зависимость W1(d/0) от дозы - как зависимость ДОЗА -- ЭФФЕКТ.

Рисунок 5. Зависимость уровня включения ¹²⁵I-ЙДУР в ДНК меланомы В-16 от дозы рентгеновского облучения - значение параметра W1(d/0) - 1, - выделенная ДНК опухолевых клеток - 2 (48 ч после введения ¹²⁵I-ЙДУР)

Поскольку вычисление коэффициента W1 для экспресс-ответа индивидуальной опухоли на противоопухолевое воздействие достаточно громоздко, целесообразно найти связь между этим коэффициентом и параметрами, характеризующими суммарный процесс, регистрируемый нами с помощью внешнего детектора.

4.3. Параметры включения ЙДУР для in vivo оценки уровня синтеза ДНК опухолевых клеток. В заданном временном интервале количество РМ, измеряемой в зоне опухоли, может быть выражено как площадь под кривой N_t/N₀, то есть

t₂

S=?N(t)dt ,

t₁

Зависимость N от t (N= N_t/N₀) в интервале времени 0,25 ч - 48 ч носит экспоненциальный характер, который сохраняется при всех изученных видах облучения опухоли: рентгеновском, облучении тепловыми нейтронами и при сочетанном действии тепловых нейтронов с бор-содержащим препаратом. В таком случае N(t) можно выразить через ее производную по времени [N'] и угловой коэффициент кривой [tg(б)], поскольку в полулогарифмическом масштабе экспонента представляет собой прямую линию с углом наклона к оси абсцисс, равным б. tg(б) = dY/dt = d lnN(t)/dt = 1/N*dN(t)/dt = 1/N*N'(t)

Полученный параметр функционально связан с количеством РМ в зоне опухоли и, кроме того, просто и легко вычисляется в процессе радиометрии по формуле:

tg(б) = [ln N(t₁)-ln N(t₂)] / (t₁-t₂),

где N(t₁) и N(t₂) - величина измеряемой радиоактивности для времени 0,25 и соответственно 24 или 48 часов (рис.3). Далее, взяв отношения угловых коэффициентов кривых выведения РМ у животных с облученной опухолью к их контрольным значениям до облучения [tg(б) выведения РМ ¹²⁵I-ЙДУР / tg(б) выведения РМ ¹³¹I-ЙДУР] и обозначив его К, мы получаем параметр, который отражает уровень изменения включения ЙДУР в опухоль при воздействии на нее.

К= [ln N(t₁)-ln N(t₂)] (¹²⁵I-ЙДУР)/ [ln N(t₁)-ln N(t₂)] (¹³¹I-ЙДУР ) (1)

Графическое исследование корреляционных полей значений параметров W1(d/0), отражающих степень изменения пролиферативной активности злокачественного новообразования и коэффициента К, который рассчитывается непосредственно по результатам радиометрии in vivo в первые двое суток после введения ЙДУР, выявило, что эти поля концентрируются вокруг линии связи, которая на графике в логарифмическом масштабе - прямая линия и наиболее точно регрессионное уравнение описывается степенной функцией: W1(d/0) = А* К^{(- b)}, где А и b - регрессионные коэффициенты. Степень соответствия индивидуальных значений W1(d/0) и К линии регрессии, определяющаяся коэффициентом корреляции Пирсона (r_xy), стандартная ошибка оценки (s_r), а также расчетные значения коэффициентов регрессии для каждой из указанных доз радиационного воздействия приведены в следующей таблице:

Таблица 6 Коэффициенты уравнений регрессии между коррелирующими признаками W1(d/0) и К для рентгеновского облучения меланомы В-16

Доза (Гр)	А	b	коэффициент корреляции rxy	стандартная ошибка оценки sr
2	98,9	- 1,96	0,89	0,03
10	102,8	- 2,16	0,94	0,05
20	111,9	- 2,32	0,98	0,056
40	100,1	- 2,26	0,96	0,06
p 0,05 n= 15ч18 на точку W1(d/0) = А* К(- b)

Монотонность зависимости факторов, показанных для отдельных животных, как для крайних точек, так и для точек внутри дозового диапазона, позволяет интерполировать данную зависимость на весь изучаемый диапазон. На рисунке 6 представлено корреляционное поле индивидуальных значений W1(d/0) и К для 64 животных при облучении меланомы В-16 рентгеновским излучением в диапазоне доз от 2 до 40 Гр. Уравнение линии регрессии определяется следующей формулой:

W1(d/0) = 109,9*К ^{(- 2,37)} или ln W1(d/0) = ln 109,9 - 2.37 * ln K.

Рисунок 6. Корреляционное поле индивидуальных значений W1(d/0) и К = tg(D)/tg(0) при локальном облучении меланомы В-16 привитой мышам С57Вl/6, различными дозами рентгеновского излучения;

^____________ линия регрессии

- - - - - - - доверительные границы линии регрессии

?, ^ ,? , ¦ облучение опухоли в дозах 2, 10, 20, 40 Гр.

Вычисленные коэффициенты уравнений регрессии между коррелированными признаками для рентгеновского, нейтронного и сочетанного бор-нейтронного облучения меланомы В-16, а также для рентгеновского облучения саркомы-180 (Табл. 7) указывают на сильную, близкую к функциональной, связь этих признаков, причем, независимую как от типа радиационного воздействия, так и от штамма опухоли. Уравнение линии регрессии определяется следующей формулой:

W1(d/0) = 113,6*К^(-2,48). Данное выражение получено при анализе 96 пар коррелирующих признаков, коэффициент корреляции r_xy=0,98 при уровне статистической значимости p 0,05.

Таблица 7 Коэффициенты уравнений регрессии между коррелирующими признаками W1(d/0) и К

Вид излучения	Диапазон доз (Гр)	А	b	коэффициент корреляции rxy	стандартная ошибка оценки sr
Рентгеновское (меланома В-16)	2 40	109,9	-2,4	0,98	0,054
Нейтронное (меланома В-16)	0,51 8,9	112,3	-2,1	0,99	0,059
10BSH + нейтронное (меланома В-16)	0,21 9,5	120,9	-2,6	0,98	0,085
Рентгеновское (саркома - 180)	2 20	103,6	-2,1	0,96	0,08
p 0,05 W1(d/0) = А* К(- b)

Использование аппроксимации и уменьшение числа экспериментальных точек, безусловно, несколько снижает точность конечных результатов по сравнению с результатами, получаемыми при использовании предложенного нами ранее модельного параметра W1(d/0), но такое упрощение позволяет довольно быстро и просто получить необходимые сведения для расчетов количественной оценки реакции опухоли на облучение.

Взаимосвязь параметров W1(d/0) и К при некоторых допущениях может быть представлена функциональной зависимостью. Поскольку изменение уровня радиоактивности N(t) в интервале времени 0,25 ч - 72 ч носит экспоненциальный характер, то: N(t)_d =A*e^-at (¹²⁵I-ЙДУР), N(t)₀ =A*e^-at (¹³¹I-ЙДУР), а отношение угловых коэффициентов К = a_d/a₀. Тогда, исходя из того, что площадь под медленной экспонентой S^ЙДУР(1) = A/a *(e ^-a*0,25 - e^{- -a*72}), параметр W1(d/0) = S(1)_d / S(1)₀ и обозначив t = 0,25 ч - через 0, а t = 72 ч - через T , мы получаем следующее уравнение:

W1(d/0) = [A_d*a₀ / A₀*a_d] * [(1 - e^-ad*T) / (1 - e^-a0*T)] (2)

Поскольку значение Т велико, то различие между значениями e^-ad*T и e^-ao*T будет мало, вследствие чего второй член уравнения (2) примерно равен 1, т.е.

[(1 - e^-ad*T) / (1 - e^-a0*T)] ? 1. Приняв эти условия, уравнение (2) будет выглядеть так:

W1(d/0)=[A_d*a₀ / A₀*a_d]= (A_d / A₀) * (1/К) (3)

Или: ln W1(d/0) = ln (A_d / A₀) - ln K, что согласуется с уравнением линии регрессии, полученной при исследовании корреляционных полей.

Таким образом, нами определена количественная взаимосвязь параметра W1(d/0), отражающего степень изменения пролиферативной активности злокачественной опухоли с коэффициентом К, который рассчитывается непосредственно по результатам радиометрии с помощью внешних детекторов в первые двое суток после введения ЙДУР. Кроме того, независимость параметров корреляционного уравнения между W1(d/0) и К от типа облучения позволяет сделать вывод, о возможности применения коэффициента К при любом противоопухолевом воздействии, поскольку фактически отражает сохранившийся уровень синтеза ДНК опухолевых клеток.

Глава 5 посвящена практическому использованию разработанных параметров для прогнозирования динамики роста опухоли после терапевтического воздействия.

Для оценки реакции опухоли на лучевое воздействие были изучены закономерности роста опухоли в зависимости от дозы рентгеновского, нейтронного и комбинации нейтронного облучения с ¹⁰BSH для меланомы В-16 и для различных доз рентгеновского облучения саркомы-180. Усредненные данные некоторых экспериментов по динамике роста опухоли (V_t/V₀) во времени для различных доз исследуемых излучений представлены на рисунке 7.

5.1. Влияние облучения на параметры роста опухолей. Кинетика роста опухоли является важным показателем как для диагностики, так и для процесса лечения в ходе терапии опухолевых новообразований. От нее в значительной степени зависит эффективность терапевтических методов лечения и, в том числе, эффективность лучевой терапии. Для оценки реакции опухоли на лучевое воздействие достаточно часто используются такие параметры как продолжительность задержки роста опухоли Т_(з) и время дорастания опухоли до двойного объема Т_(дор).

Риcунок 7. Динамика роста опухоли от момента ее облучения: облучение меланомы В-16 тепловыми нейтронами - (А); облучение меланомы В-16 тепловыми нейтронами в сочетании с ¹⁰ВSH (Б); рентгеновское облучение саркомы - 180 - (В). V_t/V₀ (%) - отношение объемов опухоли в момент времени t к ее объему на момент облучения; время (сутки) рассчитано от начала облучения.

При использовании этих критериев строятся кривые в координатах доза - время дорастания до определенного объема или время задержки роста опухоли. Форма полученных кривых дает возможность судить об относительной радиочувствительности субпопуляций клеток в опухоли и, вместе с тем, служит для оценки данных биологической эффективности излучений. Кроме того, для характеристики доли объема опухоли, клетки которой сохранили способность к пролиферации после лучевого воздействия, нами был разработан параметр М=[V_t/V₀ (D)] / [V_t/V₀ (0)].

Параметр М и его оценка.

Параметр М представляет собой отношение нормированных к начальным величинам объемов (облученных [V_t/V₀ (D)] и необлученных [V_t/V₀(0)]) опухолей на экспоненциальных участках кривых возобновленного после облучения роста опухолей. Он характеризует долю объема опухоли, клетки которого сохранили способность к пролиферации после облучения (условно говоря, доля «выжившего» после облучения объема опухоли). К этому утверждению приводят следующие рассуждения:

Полный объем экспоненциально растущей опухоли после однократного облучения можно описать уравнением:

V = V₀ (1- e ^-aD). e^-еt + V₀ e ^-aD . e ^цt , где (4)

V₀ - объем опухоли на момент облучения;

D - поглощенная доза;

t - время от начала облучения;

а - коэффициент, характеризующий зависимость между дозой и объемом опухоли, клетки которого сохранили способность к пролиферации после облучения;

V₀ (1- e ^-aD) - объем опухоли, клетки которого получили нерепарируемые повреждения, будут гибнуть и выбывать из опухоли;

е - коэффициент, характеризующий cкорость уменьшения объема опухоли за счет клеток, потерявших способность к пролиферации после облучения;

ц - коэффициент, характеризующий cкорость увеличения объема опухоли за счет прироста количества клеток, сохранивших способность к пролиферации после облучения;

V₀e^-aD - объем опухоли, клетки которого сохранили способность к пролиферации и с которого возобновляется рост опухоли после облучения («выживший» объем).

Первый член уравнения (4) характеризует объем опухоли, связанный с убыванием клеток, потерявших способность к пролиферации в результате облучения. Второй член уравнения (4) характеризует объем опухоли, связанный с приростом клеток, сохранивших способность к пролиферации после облучения. Через некоторое, зависящее от дозы время, когда процесс роста опухоли значительно превалирует над процессом выведения погибших клеток влияние процесса убыли клеток на общий объем опухоли, т.е. первый член уравнения (4), снижается до величин, которыми можно пренебречь. С этого момента кривая роста опухоли будет характеризоваться вторым членом уравнения (4). Для определения объема опухоли клетки которого после облучения сохранили способность к пролиферации, или объема опухоли с которого возобновляется ее рост после облучения, достаточно определить показатель ц. Поскольку показатель ц - угловой коэффициент экспоненциальной кривой возобновленного после облучения роста опухоли - является угловым коэффициентом кривой роста, построенной в полулогарифмических координатах (по оси ординат - объем опухоли), то на практике определить этот объем можно путем экстраполяции экспоненциального участка кривой до пересечения с полулогарифмической осью ординаты. Отрезок, отсекаемый на оси ординат, и будет характеризовать объем опухоли, клетки которого остались жизнеспособными после облучения. Наиболее удобно такие расчеты проводить по кривым, построенным для нормированных к начальным величинам объемов. Тогда отсекаемая на ординате величина указывает долю объема, клетки которого сохранили способность к пролиферации после облучения. Эта доля «выжившего» объема опухоли фактически соответствует доле выживших после облучения клеток (Рис.8).

Риcунок 8. Динамика роста меланомы В-16 после ее рентгеновского облучения. V_t/V₀ (%) - отношение объемов опухоли в момент времени t к ее объему на момент облучения; время (сутки) рассчитано от начала облучения.

Для определения предложенным способом доли «выжившего» объема опухоли не требуется построение кривой роста контрольных (необлученных) опухолей. Достаточно знать объем опухоли на момент облучения данной дозой. Однако в этом случае не будут учтены возможные влияния различных факторов, связанных с проведением экспериментов в разное время, на разных группах животных, с использованием опухоли от разных пассажей и т.п.

Для того чтобы нивелировать ошибки, обусловленные вышеперечисленными факторами, при определении доли «выжившего» объема опухоли мы использовали отношения объемов облученных опухолей, нормированных к начальным величинам объемов в контроле: [V_t/V₀(D)]/[V_t/V₀(0)] (5),

и назвали это отношение параметром «М». В случае равенства скоростей роста опухолей в контроле и возобновленного роста опухолей после облучения, эти отношения на экспоненциальном участке кривых роста постоянны для данной дозы и не зависят от времени. Величину М для каждой дозы вычисляли из экспериментально найденных отношений [V_t/V₀ (D)]/[V_t/V₀ (0)] как среднее значение для нескольких временных точек на участках экспоненциального роста опухолей. Эту величину в дальнейшем использовали для построения кривой ДОЗА--ЭФФЕКТ.

Кривые ДОЗА ЭФФЕКТ по параметру Т(з) для трех вышеуказанных типов излучения представлены на рисунке 9. Кривые достаточно хорошо описываются линейной зависимостью (r=0,92-0,96). Из сравнения этих зависимостей в рабочем диапазоне доз 2 ч 9,5 Гр находим, что биологический эффект воздействия тепловых нейтронов в сравнении с рентгеновским излучением составляет 3,7 ч 3,8, тогда как тепловых нейтронов в сочетании с ¹⁰ВSH - 4,5 ч 4,7.

Различия в 1,5 - 2 раза в степени воздействия рентгеновского излучения на саркому-180 по сравнению с меланомой В-16 отражает представленная на том же рисунке зависимость Т_(з) от дозы облучения, такое различие вполне характерно для саркомы, как более резистентной опухоли.

Риcунок 9. Зависимость Т_(зад) от дозы локального облучения меланомы В-16 (1,2,3) и саркомы-180 (4) 1. Тепловые нейтроны в сочетании с ¹⁰ВSH (3-5 мкг В/г опухоли) 2. Тепловые нейтроны (1,2·10⁸ н/см² сек) 3. Рентгеновское излучение (200 кВ) 4. Рентгеновское излучение (200 кВ)

Риcунок 10. Зависимость Т_(дор) от дозы локального облучения меланомы В-16 (1,2,3) и саркомы-180 (4) 1. Тепловые нейтроны в сочетании с ¹⁰ВSH (3-5 мкг В/г опухоли) 2. Тепловые нейтроны (1,2·10⁸ н/см² сек) 3. Рентгеновское излучение (200 кВ) 4. Рентгеновское излучение (200 кВ)

Кривые ДОЗА -- Т_(дор) (рис. 10) тех же животных также имеют вид линейных зависимостей (r = 0,85-0,90). Биологический эффект действия облучения на опухоль в том же диапазоне доз 2 ч 9,5 Гр по отношению к рентгеновскому излучению для тепловых нейтронов составляет 3,03 ч 3,3, и действия тепловых нейтронов в сочетании с ¹⁰BSH - 4,2 ч 4,0.

Предложенный ранее параметр М может быть показателем жизнеспособности опухоли, поскольку, как уже отмечалось, на участке экспоненциального роста опухоли после ее облучения этот параметр характеризует долю объема опухоли, клетки которого сохранили cпособность к пролиферации. В таком случае кривая ДОЗА -- ln M в сущности соответствует кривой ДОЗА доля выживших клеток.

Как видно из представленных на рисунке 11 графиков, параметр М для каждого типа излучения зависит от дозы. При облучении тепловыми нейтронами (2) и в сочетании тепловых нейтронов с ¹⁰ВSH (1) эта зависимость носит практически линейный характер, а кривая выживаемости не имеет плеча. Это отражает влияние излучения с высокой линейной потерей энергии и указывает на то, что клетки меланомы В-16 не восстанавливаются от сублетальных повреждений при этих видах облучения. Кривая выживаемости в этом случае представляется простым экспоненциальным уравнением М(D) = е ^-k*D. При рентгеновском облучении кривая выживаемости имеет плечо и представляет зависимость вида: М(D) = 1 - (1- е ^-kn*D)ⁿ , где k_n - постоянная инактивации каждой из n мишеней, которые все должны быть поражены, чтобы убить клетку.

Риcунок 11. Зависимость М от дозы локального облучения меланомы В-16, привитой мышам С57Bl/6, рентгеновским излучением, тепловыми нейтронами и тепловыми нейтронами в сочетании с ¹⁰ВSH 1. Тепловые нейтроны в сочетании с ¹⁰ВSH (3-5 мкг В/г опухоли) 2. Тепловые нейтроны (1,2·10⁸ н/см² сек) 3. Рентгеновское излучение (200 кВ)

Параметр М = [Vt/V0(D)]/[Vt/V0(0)] - отношение нормированных на начальные величины объемов облученных опухолей к таковым без облучения на экспоненциальном участке роста опухоли после воздействия.

Среднюю инактивирующую дозу D₀ (величина обратная k) для каждого типа излучения находили из соответствующих дозовых кривых M поглощенная доза. При рентгеновском облучении М(D) = 1 - (1- е ^{-0,06* D})^1,1; при облучении тепловыми нейтронами М(D) = е -^0,25*D; при облучении тепловыми нейтронами в сочетании с ¹⁰ВSH М(D) = е -^0,36*D.

Значения D₀, найденные из решения уравнений кривых ДОЗА lnM для каждого вида излучения, составили:

рентгеновское излучение 16,6 Гр

тепловые нейтроны 4,0 Гр

тепловые нейтроны + ¹⁰ВSH 2,8 Гр

Путем сравнения величин D₀ определили биологический эффект действия облучения на опухоль. Так, для тепловых нейтронов и тепловых нейтронов с ¹⁰ВSH по отношению к рентгеновскому излучению значения биологического эффекта составили 4,2 и 6, соответственно.

Влияние различных доз облучения опухоли на изменение предложенного в главе 4 параметра К проиллюстрировано на рисунке 12, где представлены усредненные кривые изменения значения К при действии на опухоль трех видов излучения.

Рисунок 12. Зависимость К = tg(D)/tg(0) от дозы локального облучения меланомы В-16 (1,2,3) и саркомы-180 (4) 1. Тепловые нейтроны в сочетании с ¹⁰ВSH (3-5 мкг В/г опухоли) 2. Тепловые нейтроны (1,2·10⁸ н/см² сек) 3. Рентгеновское излучение (200 кВ) 4. Рентгеновское излучение (200 кВ)

Анализ полученных данных показал, что: 1. в исследуемых нами диапазонах доз отношение угловых коэффициентов К от дозы наиболее точно описывается степенной зависимостью К = С*D^f; 2. значения коэффициента f идентичны таковым для рентгеновского облучения меланомы В-16, облучения тепловыми нейтронами и тепловыми нейтроны в сочетании с ¹⁰ВSH. Определенный по этому параметру биологический эффект действия на опухоль облучения тепловыми нейтронами составил по отношению к рентгеновскому излучению 3,15ч3,5 и действия тепловых нейтронов в сочетании с ¹⁰BSH - 5,5 ч 6,0.

По приведенным в этом разделе данным видно, что биологический эффект облучения опухоли варьирует в достаточно широких пределах в зависимости от способа оценки. Кроме того, при бинарной терапии, например при облучении опухоли тепловыми нейтронами в присутствии бор-содержащего соединения, на биологический эффект будет влиять химическая структура и внутриклеточная локализация применяемого соединения.

5.2. Взаимосвязь роста опухоли и параметров выведения ЙДУР. В данном разделе рассматривается возможность использования параметров, связанных со скоростью выведения радиоактивного ЙДУР из опухоли, в качестве показателей, характеризующих ответ индивидуальной опухоли на облучение.

В качестве показателя изменения уровня радиоактивности ЙДУР во времени ранее нами был принят параметр К= [ln N(t₁)-ln N(t₂)] / (t₁-t₂). С его помощью можно дать количественную оценку эффективности применения лучевой терапии для индивидуальных животных. Для этого с помощью регрессионного анализа определили количественную взаимосвязь между параметрами, характеризующими реакцию опухоли на облучение (Т_(з) или Т_(дор)), с параметром, характеризующим скорость выведения РМ ЙДУР из зоны опухоли (К). Графическое исследование корреляционных полей значений Т_(дор), Т_(з) и К показало, что наиболее точно условия связи параметров отражает уравнение в виде экспоненциальной функции.

Соответствие индивидуальных значений К и Т_(дор) линии регрессии определялась корреляционным коэффициентом Пирсона. При высокой степени соответствия (r = 0,93ч0,95 при 95% достоверности) регрессионные зависимости для рентгеновского и нейтронного облучения практически не различаются, что еще раз указывает на показатель К, как на параметр, связанный с изменением опухолевой реакции при любом типе облучения.

На рисунке 13 приведено корреляционное поле индивидуальных значений Т_(з) и К для 198 животных с опухолью меланома В-16, подвергнутой локальному рентгеновскому облучению, облучению тепловыми нейтронами и тепловыми нейтронами в сочетании с ¹⁰BSH, а также при рентгеновском облучении саркомы-180. Очевидно, что несмотря на вариабельность полученных индивидуальных показателей, для большинства варьирующих признаков (примерно 96% всех точек на графике) существует значительная корреляция (r= 0,92ч0,98).

Риcунок 13. Корреляционное поле индивидуальных параметров задержки роста опухоли Т_(зад) и К = tg(D)/tg(0) при локальном облучении меланомы В-16 привитой мышам С57Вl/6, различными дозами рентгеновского излучения, тепловыми нейтронами и тепловыми нейтронами в сочетании с ¹⁰BSH, а также при рентгеновском облучении саркомы-180

^____________ линия регрессии

- - - - - - - доверительные границы линии регрессии

Используя коэффициент К и его функциональную связь с параметром W1(d/0), можно определить степень подавления синтеза ДНК опухоли (гл.4). Кроме того, коэффициент К связан с параметром М, который, как уже отмечалось, характеризует долю «выжившего» после облучения опухоли объема. Поскольку М(D) = е-^m*D, К(D) = С*D^f при одних дозах облучения, то мы получаем следующее уравнение:

ln М = - m/С_*К ^1/f. Таким образом, параметр К, характеризующий скорость выведения РМ из опухоли в первые двое суток после введения радиоактивного ЙЛУР, может быть использован в качестве показателя индивидуального ответа опухоли на облучение по параметрам Т_(з), Т_(дор), W1(d/0), или М. Для решения этой задачи необходимо осуществить следующий порядок действий: 1. для отдельного животного, исходя из данных радиометрии до и после облучения, определить К по формуле (1); 2. подставить значение К в уравнение регрессии и, с учетом ее доверительной зоны, определить ожидаемую величину Т_(з) или вычислить через W1(d/0) степень изменения пролиферативной активности опухоли, или по параметру М -- долю «выжившего» после облучения опухоли объема. Ниже приведена сводная таблица (Табл.8) определения по коэффициенту К ряда показателей индивидуального ответа опухоли на облучение: процент включения ЙДУР в ДНК опухолевых клеток; степень подавления пролиферативной активности; доля объема опухоли, клетки которого сохранили после облучения способность к пролиферации; ожидаемую задержку роста опухоли. Данные приведены для меланомы В-16 при ее облучении рентгеновским излучением, при облучении тепловыми нейтронами и облучении тепловыми нейтронами в присутствии введенного ¹⁰BSH, а также для рентгеновского облучения саркомы-180. Значения доз в данной таблице приведены для удобства сравнения интересующих параметров, положим, различных типов облучения. Диапазон значений величины параметра К является отражением биологической сущности действия облучения на опухолевые клетки и определяется уровнем подавления синтеза ДНК.

Принципиально важно отметить, что разработанная и предлагаемая методика может быть использована не только при оценке лучевого воздействия, но и при других видах противоопухолевой терапии, поскольку зависимость параметров W1(d/0) и К фактически отражает сохранившийся уровень синтеза ДНК опухолевых клеток.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Таблица 11 Показатели индивидуального ответа опухоли на облучение, определенные по параметру К

К K	W1(d/0) %	Подавление пролиферативной активности (%)	меланома В-16	саркома-180
			рентгеновское облучение	тепловые нейтроны	10BSH + тепловые нейтроны	рентгеновское облучение
			Доза (Гр)	M %	Т(зад.) сут	Доза (Гр)	M %	Т(зад.) сут	Доза (Гр)	M %	Т(зад.) сут	Доза (Гр)	Т(зад.) сут
1	100	0	0	100	0	0	100	0	0	100	0	0	0
1,1	89,2	26,8	2,1	88,3	1,2	0,6	85,6	2,2	0,2	92,0	3,1	2,3	1,8
1,2	71,9	44,1	3,2	82,5	1,6	1,0	78,7	2,7	0,4	87,7	3,5	4,2	2,1
1,3	59,0	55,7	4,8	75,0	2,2	1,4	69,9	3,4	0,6	82,0	3,7	7,5	2,6
1,4	49,1	64,1	7,0	65,9	3,1	2,1	59,5	4.3	0,8	74,8	4,0	12,8	3,5
1,5	41,3	71,3	9,8	55,5	4,2	2,9	48,1	5.6	1,1	66,1	4,5	20,9	4,8
1,6	35,2	77,5	13,6	44,3	5,6	4,0	36,4	7.2	1,6	56,3	5,0	33,2	6,7
1,7	30,3	82,9	18,3	33,3	7,5	5,5	25,4	9.3	2,2	45,8	5,8	51,1	9,6
1,8	26,3	87,5	24,4	23,1	9,8	7,3	16,2	12.0	2,9	35,3	6,2	76,9	13,7
1,9	23,0	91,5	32,0	14,7	12,8	9,5	9,2	15.3	3,8	25,5	7,8	113,2	19,5
2	20,3	94,9	41,4	8,4	16,5	12,3	4,6	19.4	4,9	17,0	9,8	163,3	27,6
2,1	17,9	97,8	52,8	4,2	20,9	15,7	2,0	24.4	6,3	10,4	12,3
2,2	16,0	100,4	66,6	1,8	26,3	19,9	0,7	30.5	7,9	5,8	15,4

Выводы

Предложены и разработаны параметры количественной неинвазивной оценки реакции индивидуальной опухоли на облучение с использованием меченного различными изотопами йода ЙДУР.

Модельный параметр W1(d/0), связанный с количеством ЙДУР, включенного в ДНК опухолевых клеток, и отражающий степень изменения пролиферативной активности в индивидуальной опухоли.

Коэффициент К (отношения угловых коэффициентов кривых выведения РМ из облученной опухоли к их значениям до облучения), который рассчитывается непосредственно по данным радиометрии с помощью внешних детекторов в первые двое суток после введения ЙДУР.

Определена функциональная (количественная) взаимосвязь параметра W1(d/0) с коэффициентом К и показана независимость параметров корреляционного уравнения между W1(d/0) и К от типа облучения, что позволяет сделать вывод о возможности применения коэффициента К при любом противоопухолевом воздействии, поскольку фактически он отражает сохранившийся уровень синтеза ДНК опухолевых клеток.

Установлены корреляционные зависимости коэффициента К с параметрами роста опухоли меланомы В-16 и саркомы-180, с дозой облучения опухоли для отдельных животных при рентгеновском облучении, облучении тепловыми нейтронами и облучении тепловыми нейтронами в сочетании с ¹⁰ВSH. Эта зависимость может служить количественной мерой индивидуального ответа опухоли на противоопухолевое воздействие.

Для оценки биологической эффективности разработан и применен биологический критерий - параметр М (отношения объемов опухолей на экспоненциальной фазе возобновленного после облучения роста опухолей к их значениям до облучения), характеризующий зависящую от дозы долю объема опухоли, клетки которого сохранили пролиферативную активность после облучения. Он позволяет нетравматично получать оценку реакции опухоли на облучение и заменить во многих случаях сложный метод изучения выжившей после облучения фракции опухоли клеток.

В результате проведенного комплекса исследований научно обоснована, разработана и внедрена в экспериментальную практику система раннего (48ч) индивидуального прогностического количественного мониторинга эффективности лучевого воздействия на опухоль с использованием параметров выведения меченого ЙДУР. Метод прост, относительно быстр и универсален. Он может быть применен для оценки реакции опухоли на любое воздействие, приводящее к изменению уровня синтеза ДНК.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях

статьи

1. Р.А.Спрышкова, А.И.Севастьянов, М.Г.Найденов, Н.Г.Серебряков, Е.Ю.Григорьева. «¹²⁵I-йоддезоксиуридин в реакции экспериментальных опухолей на облучение», Медицинская радиология, 1989, N 9, с.40-45.

2. R.A.Spryshkova, E.Yu.Grigoryeva, M.G.Naidenov, A.S.Yagoubov, «The use of 5-iodo-2-deoxyuridine for evaluation of individual tumour in response to irradiation to biological models», Лабораторные животные, 1991, т.1, N3, с.53-57.

3. Р.А.Спрышкова, Е.Ю.Григорьева, В.А.Братцев, А.И.Севастьянов, М.Г.Найденов, «5-йод-2-дезоксиуридин в оценке индивидуальной реакции экспериментальных опухолей на облучение», Вопросы онкологии, 1992, N 9, c.327-334.

4. А.В. Андреев, А.И.Гусев, Е.Ю.Григорьева, «Аналитические характеристики набора ИРМА АФП для определения альфа-фетопротеина человека», Клиническая лабораторная диагностика, 1993,N3, с.54-58.

5. Р.А.Спрышкова, А.С.Ягубов, Е.Ю.Григорьева, Е.Ю.Колдаева, «Настоящее положение бор-нейтроннозахватной терапии опухолей», Вопросы онкологии, 1995, т.41, N 2, с.106-107.

6. R.A.Spryshkova, E.Yu.Grigorieva, M.G.Naidenov, G.I.Borisov, «Biological efficacy of BSH-thermal neutron irradiation estimated with different methods on the model of B-16 melanoma», Frontiers in Neutron Capture Therapy, Chemistry and Biology, Eds. B.Larsson, J.Crawford, R.Weinreich, 1997, v.2, pp.563-567.

7. E.Yu.Grigorieva, R.A.Spryshkova, «Methodological principles for the use of 5-iodo-2-deoxyuridine labelled with radioactive iodine for in vivo evaluation of individual tumour response to irradiation», Frontiers in Neutron Capture Therapy, Chemistry and Biology, Eds. B.Larsson, J.Crawford, R.Weinreich, 1997, v.2, pp.557-562.

8. А.В. Андреев, Е.Ю.Григорьева, «Вариант моноклонального радиоиммунологического анализа альфа-фетопротеина», Клиническая лабораторная диагностика,1998, N2, с. 43-45.

9. Л.И. Захаркин, В.A. Oльшевская, Р.А. Спрышкова, E.Ю. Григорьевa, В.И. Рябкова, Г.И. Борисов, «Синтез бис (диалкиламинометил) -о - и -m- карборанов и исследование их в качестве возможных препаратов для боронейтронозахватной терапии», Хим.фарм. журнал, 2000, т.34, N6, с. 21-23.

10. A.V.Tultaev, O.A.Yuminov, R.A.Spryshkova, E.Yu.Grigorieva at.all «About radiotherapy of the thyroid gland cancer with use of alpha-emitter radionuclides: prognosis of the 211At radiation dose in the organs and whole patent body calculated on the base the laboratory investigation data on the pharmacokinetic of “Astatine chloride, 211At” with rats». Preprint INP MSU 2000, 31/635 МГУ им. М.В.Ломоносова НИИ Ядерной Физики им. Д.В.Скобельцева.

11. E. Grigorieva, R. Spryshkova, V. Riabkova, K. Zhizhin, E. Malinina, A. Chernyavsky, E. Luk'yanets, K. Solntsev, N. Kuznetsov, G. Borisov, «Biodistribution study of novel dodecaborate-phtalocyanines in the B-16 mouse melanoma», Frontiers in Neutron Capture Therapy. Ed. M.F. Hawthorhe, K. Shelly, R.J. Wiersema. Kluwer Academic/plenum Publishers, NY.2001, V.2, pp.1027-1032.

12. А.В.Тултаев, О.А.Юминов, Р.А.Спрышкова, Е.Ю.Григорьева «Радионуклидная терапия рака щитовидной железы с использованием альфа-эмиттеров: прогноз значений поглощенной дозы излучения (экспериментальное исследование)», Медицинская радиология и радиационная безопасность, 2001,т.46, с. 11-17.

13. А.В.Андреев, Е.Ю.Григорьева, «Количественноеопределение моноклональных антител с помощью твердофазного конкурентного радиоиммуноанализа с использованием нативного антигена», Иммунология, 2001, № 1 с.60-63.

14. Е.Ю. Григорьева, Т.Г. Николаева, Е.Ю. Колдаева, М.Г. Найденов, Р.А. Спрышкова «Na₂¹⁰B₁₂H₁₁SH (BSH) - препарат для нейтронозахватной терапии: биораспределение и влияние на клеточный цикл меланомы В-16», Российский Биотерапевтический Журнал, 2005, N 3, с.30-33.

15. Е.Ю.Григорьева, Е.Ю Колдаева, М.Г. Найденов «Экспериментальные подходы к количественному мониторингу терапии злокачественных опухолей». Российский Биотерапевтический Журнал, 2007, N 3, с.60-66.

16. Е.Ю.Григорьева, Е.Ю Колдаева, М.Г. Найденов, Г.И.Борисов, К.Ю.Жижин «Нейтронозахватная терапия меланомы мышей при использовании линзы Кумахова», Российский Биотерапевтический Журнал, 2007 N4, с.13-16.

Тезисы докладов

17. R.A.Spryshkova, E.Yu.Grigoryeva, M.G.Naidenov, A.S.Yagoubov, «The use of 5-iodo-2-deoxyuridine for evaluation of individual tumour response to irradiation», Abstracts Х1 International Symposium on Laboratory Animals and Experimental medicine, Riga, 2-4 October, 1990.

18. Р.А. Спрышкова, А.С. Ягубов, Е.Ю. Григорьева, Е.Ю. Колдаева «Современное состояние нейтронозахватной терапии опухолей», Материалы Всероссийского Съезда Онкологов, Ростов - на -Дону, 10-12 октября 1995.

19. Р.А. Спрышкова, Е.Ю. Григорьева, Е.Ю.Колдаева, «Перспективы 10В-нейтронозахватной терапии опухолей», Медицинская физика, техника, биология, клиника. 1995, N 2, с.54.

20. R.A.Spryshkova, E.Yu.Grigorieva and G.I.Borisov, «Biological efficacy of BSH-thermal neutron irradiation estimated with different methods on the model of B-16 melanoma», Seventh International Symposium on Neutron Capture Therapy for Cancer. Programme and Abstracts the International Society for NCT, Zurich, Switzerland, 4-7 September, 1996, B 26, p.43.

21. E.Yu.Grigorieva and R.A.Spryshkova, «Methodological principles for the use of 5-iodo-2-deoxyuridine labelled with radioactive iodine for in vivo evaluation of individual tumour response to irradiation», Seventh International Symposium on Neutron Capture Therapy for Cancer. Programme and Abstracts the International Society for NCT, Zurich, Switzerland, 4-7 September,1996, B 25, p.43.

22. R.Spryshkova, E.Yu.Grigorieva, V.Riabkova, K.Zhizhin, E.Malinina, «Pharmacokinetic study of novel dodecaborate-phthalocyanines in the B-16 mouse melanoma model», Eighth International Symposium on Neutron Capture Therapy for Cancer. 13-18 September 1998, La Jolla, California, U.S.A., Program and Abstracts, E12, E-12, p.43.

23. R.Spryshkova, E.Yu.Grigorieva, V.Riabkova, M.G.Naidenov G.I.Borisov, Е.V.Egorov, «Chemistry,Biological Studies and Medical Application of Boron Compounds», ХY1 Менделеевский съезд по общей и прикладной химии, "Научная сессия по проектам INTAS в области химии" программа, 25-29 мая 1998г., Санкт-Петербург, стр.153, 961-1114.

24. О.V.Fotina, A.V.Tultaev, O.A.Yuminov, R.A.Spryshkova, S.Y.Platonov, E.O.Eremenko, V.A.Drozdov, E.Yu.Grigorieva, V.I.Riabkova, I.P.Petrova «At alpha-emitter in isotonic solution as a valuable tool for cancer therapy», Seventh International Radiopharmaceutical Dosimetry Symposium, October 17-19, 2002, p.55.

25. G.I. Borisov, M.G. Naidenov,E.Yu. Koldaeva, E.Yu. Grigorieva, S.A. Petrov, K.Yu. Zhizhin, V.A. Brattsev «Neutron capture therapy (NCT) of melanoma in mice using new boron carriers and neutron capillary optics», Second Int. Conference on X-Ray and Neutron Capillary Optics, Zvenigorod, Russia, 22-26.09 2004, pp.15-16.

26. Е.Ю. Григорьева, Е.Ю. Колдаева, Е.А. Барышникова, Г.И. Борисов,

М.Г. Найденов, Р.А. Спрышкова «Фармакокинетика натриевой, магниевой и кальциевой солей поликарбораниленпроизводного бета-аланина - носителей бора для нейтронозахватной терапии», Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты», Москва, 17-19.03 2004, Российский Биотерапевтический Журнал, 2004, N 2, с. 21.

27. Е.Ю.Григорьева, Т.Г.Николаева, Е.Ю. Колдаева, В.Н.Братцкв «Кинетика клеточной популяции меланомы В-16 при действии BSH - препарата для нейтронно-захватной терапии», Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты», Москва, 16.03-18.03 2005, Российский Биотерапевтический Журнал, 2005, N 1, с.23.