Нормы гематокрита у детей и взрослых

Возраст

Пол

Показатель

в %

Причины повышения

Причины понижения

до 2 недель

41 - 65

· Эритремия

· Сердечная или дыхательная недостаточность

· Обезвоживание в результате обильной рвоты, диареи, обширных ожогов, при диабете

· Анемия

· Почечная недостаточность

· Вторая половина беременности

с 2 до 4,3 недель

33 - 55

4,3 - 8,6 недель

28 - 42

С 8,6 недель до 4 месяцев

32 - 44

С 4 до 6 месяцев

31 - 41

С 6 до 9 месяцев

32 - 40

С 9 до 12 месяцев

33 - 41

с 1 года до 3 лет

32 - 40

С 3 до 6 лет

32 - 42

С 6 до 9 лет

33 - 41

С 9 до 12 лет

34 - 43

С 12 до 15 лет

Женщины

34 - 44

Мужчины

35 - 45

С 15 до 18 лет

Женщины

34 - 44

Мужчины

37 - 48

С 18 до 45 лет

Женщины

38 - 47

Мужчины

42 - 50

С 45 до 65 лет

Женщины

35 - 47

Мужчины

39 - 50

после 65 лет

Женщины

35 - 47

Мужчины

37 - 51

Норма нейтрофилов у детей и взрослых

Возраст

Сегментоядерные нейтрофилы, показатель в %

Палочкоядерные нейтрофилы, показатель в %

Причины повышения

Причины понижения

Новорожденные

47 - 70

3 - 12

· Инфекционные заболевания (ангина, синусит, кишечная инфекция, бронхит, пневмония)

· Инфекционные процессы - абсцесс, флегмона, гангрена, травматические повреждения мягких тканей, остеомиелит

· Воспалительные заболевания внутренних органов: панкреатит, перитонит, тиреоидит, артрит)

· Инфаркт (инфаркт сердца, почки, селезенки)

· Хронические нарушения обмена веществ: сахарный диабет, уремия, эклампсия

· Раковые опухоли

Применение иммуностимулирующих препаратов, прививки

· Инфекционные заболевания: брюшной тиф, бруцеллез, грипп, корь, ветряная оспа (ветрянка), вирусный гепатит, краснуха)

· Заболевания крови (апластическая анемия, острый лейкоз)

· Наследственная нейтропения

· Высокий уровень гормонов щитовидной железы Тиреотоксикоз

· Последствия химиотерапии

· Последствия радиотерапии

Применение антибактериальных, противовоспалительных, противовирусных препаратов

до 2-х недель

30 - 50

1 - 5

С 2 недель до 1 года

16 - 45

1 - 5

С 1 до 2 года

28 - 48

1 - 5

С 2 до 5 лет

32 - 55

1 - 5

С 6 до 7 лет

38 - 58

1 - 5

С 8 до 9 лет

41 - 60

1 - 5

С 9 до11 лет

43 - 60

1 - 5

С 12 до15 лет

45 - 60

1 - 5

С 16 лет и взрослые

50 - 70

1 - 3

Норма эозинофилов крови у детей и взрослых

Возраст

Показатель

в %

Причины повышения

Причины снижения

Новорожденные

1 - 6

· Аллергия (бронхиальная астма, пищевая аллергия, аллергия на пыльцу и прочие воздушные аллергены, атопический дерматит, аллергический ринит, лекарственная аллергия)

· Паразитарные заболевания - кишечные паразиты (лямблиоз, аскаридоз, энтеробиоз, описторхоз, эхинококкоз)

· Инфекционные заболевания (скарлатина, туберкулез, мононуклеоз, венерические заболевания)

· Раковые опухоли

· Заболевания кроветворной системы (лейкозы, лимфома, лимфогранулематоз)

Ревматические заболевания (ревматоидный артрит, узелковый периартериит,склеродермия)

· Интоксикация тяжелыми металлами

· Гнойные процессы, сепсис

Начало воспалительного процесса

до 2-х недель

1 - 6

с 2 недель до 1 года

1 - 5

с 1 до 2 лет

1 - 7

с 2 до 5 лет

1 - 6

с 6 до 7 лет

1 - 5

с 8 до 9 лет

1 - 5

с 9 до 11 лет

1 - 5

с 12 до 15 лет

1 - 5

с 16 лет и взрослые

1 - 5

Нормы моноцитов крови у детей и взрослых

Возраст

Показатель

в %

Причины повышения мотоцитов (моноцитоз)

Причины снижения мотоцитов (моноцитопения)

Новорожденные

3 - 12

· Инфекции вызванные вирусами, грибками (кандидоз), паразитами и простейшими

· Восстановительный период после острого воспалительного процесса.

· Специфические заболевания: туберкулез, сифилис, бруцеллез, саркоидоз, неспецифический язвенный колит

· Ревматические заболевания - системная красная волчанка, ревматоидный артрит, узелковый периартериит, болезни кроветворной системы острый лейкоз, миеломнаяболезнь, лимфогранулематоз

отравление фосфором, тетрахлорэтаном.

· апластическая анемия

· волосатоклеточный лейкоз

· гнойные поражения (абсцессы, флегмоны, остеомиелит)

· роды

· после хирургической операции

прием стероидных препаратов (дексаметазон, преднизолон)

до 2 недель

5 - 15

С 2 недель до 1 года

4 - 10

С 1 год до 2 лет

3 - 10

С 2 до 5 лет

3 - 9

С 6 до 7 лет

3 - 9

С 8 до 9 лет

3 - 9

С 9 до 11 лет

3 - 9

С 12 до 15 лет

3 - 9

С 16 лет и взрослые

3 - 9

Нормы лимфоцитов у детей и взрослых

Возраст

Показатель

в %

Причины повышения лимфоцитов (лимфоцитоз)

Причины понижения лимфоцитов (лимфопения)

Новорожденные

15 - 35

· Вирусные инфекции: инфекционный мононуклеоз, вирусный гепатит, цитомегаловирусная инфекция, герпетическая инфекция, краснуха

· Токсоплазмоз

· ОРВИ

· Заболевания системы крови: острыйлимфолейкоз, хронический лимфолейкоз, лимфосаркома, болезнь тяжелых цепей - болезнь Франклина;

· Отравление тетрахлорэтаном, свинцом, мышьяком, дисульфидом углерода

· Применение препаратов: леводопа, фенитоин, вальпроевая кислота, наркотические обезболивающие

· Лейкоз

· Туберкулез

· Лимфогранулематоз

· Системная красная волчанка

· Апластическая анемия

· Почечная недостаточность

· Терминальная стадия онкологических заболеваний;

· СПИД

· Радиотерапия;

· Химиотерапия

· Применение глюкокортикоидов

до 2 недель

22 - 55

С 2 недель до 1 года

45 - 70

С 1 год до 2 лет

37 - 60

С 2 до 5 лет

33 - 55

С 6 до 7 лет

30 - 50

С 8 до 9 лет

30 - 50

С 9 до 11 лет

30 - 46

С 12 до 15 лет

30 - 45

С 16 лет и взрослые

20 - 40

Норма тромбоцитов крови

180 - 320x109 клеток/л

Причины повышения тромбоцитов

(тромбоцитоз, количество тромбоцитов более 320x109клеток/л)

Понижение уровня тромбоцитов

(тромбоцитопения - менее 180x109 клеток/л)

· удаление селезенки

· воспалительные процессы (обострение ревматизма, остеомиелит, туберкулез, абсцесс)

· разные виды анемий (после кровопотери, железодефицитная, гемолитическая)

· после хирургической операции

· рак различной локализации

· физическое переутомление

эритремия

· врожденные заболевания крови (гемофилии)

· идиопатическая аутоиммунная тромбоцитопеническая пурпура

· лекарственная тромбоцитопения

· системная красная волчанка

· инфекции (вирусные и бактериальные инфекции, риккетсиоз, малярия, токсоплазмоз)

· апластическая анемия

· пароксизмальная ночная гемоглобинурия

· синдром Evans (аутоиммунная гемолитическая анемия и тромбоцитопения)

· ДВС-синдром (диссеминированного внутрисосудистого свертывания)

· Переливание крови

· У детей, рожденных недоношенными

· при гемолитической болезни новорожденных

· сердечная недостаточность

тромбоз почечных вен

Норма базофилов крови

0-0,5%

Причины повышения базофилов крови

· хронический миелолейкоз

· снижение уровня гормонов щитовидной железы гипотиреоз

· ветряная оспа

· аллергия пищевая и лекарственная

· нефроз

· гемолитическая анемия

· состояние после удаления селезенки

· болезнь Ходжкина

· лечение гормональными язвенный колит

MCH, MCHC, MCV, цветовой показатель (ЦП)

Показатель

Расчетная формула

Норма

MCH-meancorpuscular hemoglobin. Данный индекс отражает абсолютное содержание гемоглобина в одном эритроците в пикограммах (пг).

МСН = гемоглобин (г/л)/количество эритроцитов = пг

24 - 33 пг.

Цветовой показатель (ЦП) - это классический метод для определения концентрации гемоглобина в эритроцитах. В настоящее время постепенно в анализах крови его заменять МСН индекс . Данные индексы отражают одно и то же, только выражены в разных единицах.

0,9-1,1

MCHC- meancorpuscular hemoglobin concentration.Этот индекс отражает степень насыщенности эритроцита гемоглобином и выражается в %. То есть по данному индексу можно сказать, сколько процентов составляет содержание гемоглобина в одном эритроците.

МСНС = (гемоглобин (г/л)/гематокрит(%))*10 = %

30 - 38%

MCV - meancorpuscular volume.Этот показатель отражает средний объём эритроцита, выраженный в микронах кубических (мкм3) или фемтолитрах (фл).

MCV = гематокрит (%)*10/количество эритроцитов(Т/л) = мкм3 (фл)

80-95 мкм3 (фл)

№

п/п

Формируемая компетенция

Содержание задания

Форма контроля

Результат оценивания

1.

ПК-5

Инструктаж по технике безопасности при работе в гистологической лаборатории. Организация лабораторного места лаборанта-гистолога. Работа с документацией гистологической лаборатории.

Тестирование (ФОС), заполнение таблиц (ИЗ)

2.

ОК-7

ОПК-5

ОПК-6

ПК-1

ПК-2

ПК-3

ПК-4

Методы и техника микроскопии. Световая микроскопия. Принцип работы и использование светового микроскопа. Методы световой микроскопии. Витальное (прижизненное) изучение клеток. Изучение фиксированных клеток. Электронная микроскопия. Принципы работы электронного микроскопа. Подготовка материала для электронно-микроскопического исследования. Методика обработки материала для электронно-микроскопического исследования.

Заполнение таблиц (ИЗ), решение ситуационных задач (ФОС)

3.

ОК-7

ОПК-3

ОПК-5

ОПК-6

ПК-4

ПК-6

Правила и этапы приготовления препаратов для гистологического исследования. Взятие материала. Особенности технических приемов. Фиксация материала. Способы фиксации, общие правила фиксации, сущность процесса и важность этапа для дальнейшего исследования. Понятие об артефактах, возможные причины их возникновения и возможные действия по их устранению. Промывка и обезвоживание материала.

Заливка материала в застывающие среды. Микротом, его виды и устройство. Приготовление целлоидиновых и парафиновых срезов. Приготовление тотальных (пленчатых) препаратов.Красители, применяемые в гистологической практике. Классификация красителей. Группа основных или ядерных красителей, понятие «базофилии». Кислые красители - цитоплазматические, понятие «оксифилии». Нейтральные красители. Тинкториальные свойства гистологических структур. Прогрессивные и регрессивные способы окрашивания. Техника окрашивания и заключения срезов. Общие методы окрашивания (окрашивание гематоксилином и эозином, окрашивание железным гематоксилином по Гейденгайну).

Тестирование (ФОС), ответы на контрольные вопросы (ФОС), заполнение таблиц (ИЗ)

4.

ОК-7

ОПК-3

ОПК-5

ОПК-6

ПК-4

ПК-6

Некоторые специальные методы приготовления и окрашивания препаратов. Окрашивание соединительных тканей. Приготовление и окрашивание мазков крови. Выявление элементов нервной системы. Обработка и окрашивание костной ткани. Гистохимические методы. Прижизненное (витальное) окрашивание тканей. Обработка биопсийного материала.

Практические задания (ИЗ)

5.

ПК-7

Педагогическая деятельность. Подготовка и проведение занятия, внеклассного мероприятия.

Развернутый план-конспект и презентация практического занятия, сценарий внеклассного мероприятия и его презентация.

6.

ОПК-13

ПК-4

ПК-8

Подготовка отчетной документации по производственной практике.

Отчет о прохождении производственной практики

№ п/п

Помещение

Функции помещения

1.

Комната для подготовки материала

Прием и вырезка биопсийного материала осуществляются в комнате, расположенной рядом со служебным входом. В комнате устанавливаются вытяжной шкаф, письменный стол (с бланками) для регистрации материала, в вытяжном шкафу -- доски (размером 40 х 20 см), на которых проводится вырезка, небольшой шкаф для посуды и инструмента, раковина-мойка. При возможности диктофонной записи у шкафа на уровне лица прозектора подвешивается микрофон. Если нет вытяжного шкафа, вырезка производится на столе. На столе устанавливают тиски, с помощью которых выпиливают кусочки кости.

2.

Рабочая комната лаборантов

В рабочей комнате лаборанта должны быть вытяжной шкаф, химический и физический столы, шкаф и сейф для хранения химических реактивов. Перечень необходимого оборудования лаборатории включает технические и аналитические весы, рН-метр, микротомы (санные, ротационные, замораживающие), криостат или криокит, водяную баню, столик для расплавления парафиновых срезов, комплекты автоматических пипеток, термостаты, холодильники, микроскопы, автоматы для проводки материала и др. В данном помещении производятся необходимые анализы.

3.

Моечная

Моечная - это комната предназначена для мытья посуды. Она оборудована раковинами, ванной. В местах установки раковин и других сантехнических приборов, следует предусматривать отделку стен глазурированной плиткой или другими влагостойкими материалами на высоту 1,6 м от пола и на ширину более 20 см оборудования и приборов с каждой стороны.

4.

Помещение дляразмещения оборудования и хранения экспериментальных образцов

Архивная комната оборудуется стеллажами с полками, имеющими обозначения по годам, номерам и характеру материала («биопсийный», «аутопсийный», «музейный» и др.). В шкафах хранят парафиновые блоки, гистологические препараты, всю документацию патологоанатомического отделения. Сырой материал и формалин хранят в подвале. Гистологические препараты, подлежащие временному хранению, после истечения положенного срока, смываются, предметные стекла используются вторично. В архивной комнате могут быть установлены с компьютерами. Работа с архивным материалом разрешается только в помещении архива, без выноса материалов за его пределы.

5.

Санитарные помещения

Необходимы для персонала и его комфортной работы. Сюда входят: душевые, гардеробные, умывальные, помещение для отдыха персонала и т.д.

№ п/п

Название

Описание, применение, использование

1.

Широкогорлые банки с притертыми пробками

Вместимость от 50 до 200 мл. Используют для составления гистологических батарей, предназначенных для подготовки кусочков тканей к заливке различными средами. Крупные банки применяют для фиксации и хранения кусочков тканей в фиксирующих жидкостях, обработки предметных стекол, приготовления нейтрального формалина и пр.

2.

Бюксы различных размеров

Небольшие круглые стеклянные стаканчики различного диаметра и высоты с шлифованными крышками -- наиболее распространенная посуда для обработки гистологических срезов и маленьких кусочков тканей.

3.

Биологические стаканчики с крышечками

Биологические стаканчики -- круглые, овальные или четырехугольные (как и высокие бюксы) -- применяют для проводки гистологических срезов, монтированных на предметных стеклах. Для придания стаканчикам большей устойчивости и обеспечения определенного порядка в расстановке их помещают в специальные стойки, изготовленные из дерева или пластмассы, по нескольку штук в ряд в зависимости от методики обработки.

4.

Колбы (плоскодонные)

Вместимостью от 50 мл до 2 л. Малые колбы применяют для приготовления и хранения растворов различных красителей, большие -- под дистиллированную воду и прочие жидкости, расходуемые в больших количествах.

5.

Чашки Петри

Чашки Петри -- плоские, широкие стеклянные чашки с крышками -- используют для вырезки биопсийного материала, в них можно окрашивать «свободно плавающие» срезы, ставить гистоэнзиматические реакции в термостате и т.д.

6.

Кюветы

Четырехугольные стеклянные чашки с крышками, имеющие на двух противоположных сторонах прорези, в которые вставляют предметные стекла. Применяют для одновременной окраски нескольких срезов, наклеенных на предметные стекла.

7.

Кристаллизаторы

Круглые глубокие чашки из толстого стекла (различной вместимости) -- применяют для массовой промывки наклеенных на стекла срезов, сливания отработанных жидкостей и других надобностей.

8.

Часовые стекла

(различного диаметра) применяют для обработки свободно плавающих срезов, нуждающихся в контроле под микроскопом (серебрение нервной ткани и др.).

9.

Мерные цилиндры

Используются для мерки, как правило, больших объемов жидкости. Представляют собой длинный сосуд с градуировкой.

10.

Пипетки

Используют для накалывания на срезы красителей и различных жидкостей, градуированные (вместимостью 0,1--100 мл) применяют для отмеривания малых количеств различных жидкостей при составлении растворов (особенно в гистохимической практике).

11.

Пинцеты

Используется вместе с иглой гистологической для правильного размещения тканевого объекта после проводки в парафине в процессе изготовления парафинового блока.

Так же для удерживания обезжиренных предметных стекол.

12.

Препаровальные иглы

Используется вместе с пинцетом для правильного размещения тканевого объекта после проводки в парафине в процессе изготовления парафинового блока.

13.

Стеклянные иглы

Стеклянные иглы необходимы при импрегнации серебром, когда металлические иглами пользоваться нельзя,

14.

Зажимы

Используют для извлечения предметных стекол из банок со спирт-эфиром, а также для захвата мелких лабораторных животных

15.

Ножницы

Острые, бывают остроконечные, с закругленными краями. Универсальный в использовании: отбор материала, отделение мелких кусков от более крупных и т.д.

16.

Скальпели

Необходимы для формирования тонких срезов. Используются для приготовления препаратов. Крайне острые, металлические, имеют рукоятку для удобной фиксации в руке.

17.

Шпатели (лопаточки)

Металлические или пластмассовые прямые и изогнутые лопаточки для переноса срезов и кусочков тканей, взятия различных сыпучих веществ

18.

Предметные стекла

Прямоугольные пластины размером 76 х 26 мм и толщиной 1--2 мм, предназначенные для размещения гистологических срезов в процессе приготовления постоянных препаратов.

19.

Покровные стекла

Представляют собой тонкие (0,15--0,2 мм толщины) пластинки различных размеров. Служат для покрытия обработанных срезов, расположенных на предметном стекле.

20.

Металлические ванночки, дно которых залито воском

21.

Микротом

Специальное механическое устройство, предназначенное для приготовления гистологических срезов определенной толщины.

22.

Световой микроскоп

Оптический прибор для получения увеличенных изображений объектов (или деталей их структуры). Применяется для более детального рассмотрения препаратов, тканей и их срезов.

23.

Термостат

Как правило применяется для культивирования, сохранения тех или иных материалов, нуждающихся в условиях постоянной температуры.

24.

Вытяжной шкаф

Необходим для приготовления реактивов, включающих в себя летучие соединеня.

№ п/п

Части микроскопа

Описание, основная функция

Оптическая часть

1.

Объектив

Представляет собой сложную оптическую систему, образующую увеличенное изображение объекта. Объектив состоит из металлического цилиндра с вмонтированными в него линзами, число которых может быть различным. Увеличение объектива обозначено на нем цифрами.

2.

Окуляр

Состоит из 2-3 линз, вмонтированных в металлический цилиндр. Между линзами расположена постоянная диафрагма, определяющая границы поля зрения. Нижняя линза фокусирует изображение объекта, построенное объективом в плоскости диафрагмы, а верхняя служит непосредственно для наблюдения. Увеличение окуляров обозначено на них цифрами: х7, х10, х15.

3.

Осветительная часть

Состоит из зеркала или электроосветителя, конденсора с ирисовой диафрагмой и светофильтром, расположенных под предметным столиком. Они предназначены для освещения объекта пучком света. Электроосветитель устанавливается под конденсором в гнездо подставки.

4.

Конденсор

Состоит из 2-3 линз, вставленных в металлический цилиндр. При подъеме или опускании его с помощью специального винта соответственно конденсируется или рассеивается свет, падающий от зеркала на объект.

5.

Ирисовая диафрагма

Расположена между зеркалом и конденсором. Она служит для изменения диаметра светового потока, направляемого зеркалом через конденсор на объект, в соответствии с диаметром фронтальной линзы объектива и состоит из тонких металлических пластинок. С помощью рычажка их можно то соединить, полностью закрывая нижнюю линзу конденсора, то развести, увеличивая поток света.

Механическая часть

6.

Штатив

Конструктивный несущий узел светового микроскопа, служащий для установки тубуса, предметного столика, осветительной системы.

7.

Колонка с микро- и макровинтами

Колонка имеет форму дуги. К штативу примыкает коробка механизмов, система зубчатых колес для регуляции движения тубуса. Система приводится в действие вращением макрометрического и микрометрического винтов.

Макрометрический винт (кремальера, зубчатка, макровинт) служит для предварительной ориентировочной установки изображения рассматриваемого объекта на фокус.

Микрометрический винт (микровинт) используется для последующей, более четкой установки на фокус.

8.

Тубус

Это цилиндр, в который сверху вставляют окуляры. Тубус подвижно соединен с головкой тубусодержателя, фиксируется стопорным винтом в определенном положении. Ослабив стопорный винт, тубус можно снять.

№ п/п

Части микротома

Описание, основная функция

1.

Станина

Представляет собой массивную устойчивую основу аппарата. В верхней части имеется паз для перемещения ножевых салазок, несущих ножедержатель. На боковой поверхности расположены наклонные направляющие для перемещения салазок с механизмом подъема.

2.

Микрометрический винт

Микрометрическая установка служит для автоматической подачи объекта к ножу с целью получения срезов необходимой толщины. Главной составной частью ее является микрометрический винт, т.е. винт с очень тонкой нарезкой.

3.

Объектные салазки с объектодержателем

Винтовой зажим, вмонтированный в шаровую оправу каретки подачи объектодержателя. Шарнирный механизм позволяет придавать блоку любое нужное положение. Фиксацию объектодержателя производят специальной рукояткой.

4.

Ножевые салазки с зажимом для ножа

Массивные устойчивые салазки, снабженные ручкой для передвижения и несущие на себе ножедержатель, который укрепляют на салазках специальной рукояткой, позволяющей менять горизонтальный угол расположения ножа. Сам же зажим снабжен подвижной цилиндрической втулкой, перемещение которой с помощью рычажка меняет угол наклона ножа.

5.

Микротомные ножи

Резку исследуемого объекта на микротоме производят с помощью специальных микротомных ножей.
Существует несколько разновидностей микротомных ножей. В основу их классификации положена форма лезвия. Режущий край микротомного ножа в отличие от обычной бритвы имеет так называемый фасеточный шлиф, т. е. угол сечения лезвия, образующийся в результате заточки лезвия под некоторым углом относительно его поверхности.

№

п/п

Виды микроскопии

Разновидности

Цели использования

1.

Световая микроскопия

Витальная (прижизненная) микроскопия

Показывает, что многие структуры живой клетки сравнительно мало изменяются при умелой фиксации и последующем окрашивании. Витальная микроскопия возможна и без окрашивания, если в обычный микроскоп ввести так называемый темнопольный конденсор. Он освещает объект так, что в глаз наблюдателя попадают только те лучи, которые рассеялись на частицах объекта и тем самым изменили направление своего распространения. Лучи, прошедшие через фон без рассеяния, в глаз не попадают. Поэтому частицы объекта светятся и ярко выделяются на темном фоне (темном поле). Частицы объекта хорошо видны, даже если их размеры меньше разрешаемого расстояния.

Темнопольная микроскопия

Обеспечивает наибольший возможный контраст изображения. успешно применялась для изучения спирохет, лептоспир и других слабо окрашиваемых микроорганизмов. При работе с гистологическими препаратами она неприменима.

Ультрамикроскопия

Мельчайшие изучаемые частицы освещаются мощным боковым пучком света и видны точками на черном фоне. Ультрамикроскопия позволяет подсчитывать частицы, оценивать их размеры и другие свойства. Применяется для изучения коллоидных растворов, аэрозолей, суспензий.

Ультрафиолетовая микроскопия

Основана на способности некоторых веществ избирательно поглощать ультрафиолетовые лучи с определенной длиной волны. Это позволяет наглядно демонстрировать и изучать, в том числе количественно, распределение веществ в живых клетках или фиксированных препаратах. В ультрафиолетовом микроскопе участок, содержащий нуклеиновую кислоту, выглядит значительно темнее.

Люминесцентная микроскопия

живой объект обрабатывают специальными красителями, которые, будучи освещены синим, фиолетовым или ультрафиолетовым светом, начинают светиться, излучая более длинные волны (зеленые, желтые). Цвет возбужденного вторичного свечения зависит от химических свойств объекта и введенного в него красителя.

Поляризационная микроскопия

Основана на изменении плоскости колебаний световой волны после прохождения через кристаллы. В практической медицине не применяется.

2.

Электронная микроскопия

Трансмиссионная и сканирующая электронная микроскопия

Это система визуализации изображения, которая теоретически обеспечивает очень высокое разрешение (0,1 нм). Основана на взаимодействии между электронами и компонентами тканей.

Тонкопленочный объект просвечивается пучком ускоренных электронов

Растровая (сканирующая) микроскопия.

Предназначен для получения изображения поверхности объекта с высоким (до 0,4 нанометра) пространственным разрешением, также информации о составе, строении и некоторых других свойствах приповерхностных слоёв. Основан на принципе взаимодействия электронного пучка с исследуемым объектом.Их главная функция -- получение увеличенного изображения исследуемого образца и/или изображений образца в различных регистрируемых сигналах. Сопоставление изображений, полученных в разных сигналах, позволяют делать вывод о морфологии и составе поверхности.

Биопсия

Метод исследования, при котором проводится прижизненный забор клеток или тканей (биоптата) из организма с диагностической или исследовательской целью. Биопсия является обязательным методом подтверждения диагноза при подозрении на наличие онкологических заболеваний.

Фиксация

Метод обработки ткани с целью закрепления ее прижизненной структуры.

Обезвоживание

Способ удаления воды из различных материалов с целью получения обезвоженного продукта.

Уплотнение или заливка

Процесс создания блока, достаточно твердого, чтобы быть пригодным для резки (микротомирования).

Микротомия

Подготовка гистологических срезов при помощи микротома для последующего микроскопического исследования.

Базофилия

Химическое сродство к основаниям, в том числе, к осномвным красителям. Базофилией в гистологии называют способность клеточных структур окрашиваться основными (щелочными) красителями (азуром, пиронином, гематоксилином и др.), обусловленная кислотными свойствами окрашивающихся компонентов клетки, главным образом нуклеиновых кислот (ДНК и РНК).

Оксифилия

Свойство цитоплазмы и других элементов клетки или волокнистых структур окрашиваться кислыми красителями (эозином, кислым фуксином и др.)

Гистохимия

Раздел гистологии, изучающий локализацию различных химических веществ и продуктов их метаболизма в тканях.

Авторадиография

Метод изучения распределения радиоактивных веществ в исследуемом объекте наложением на объект чувствительной к радиоактивным излучениям фотоэмульсии.

Иммуноцитохимия

Метод морфологической диагностики, в основе которого лежит визуализация и оценка с помощью микроскопа результатов реакции антиген-антитело непосредственно в гистологических срезах.

Световая микроскопия

Микроскопия, при которой увеличенное изображение получают с помощью оптического прибора (микроскопа), в структуру которого входят компоненты, использующие пучок света для создания видимого поля.

Электронная микроскопия

Совокупность методов исследования с помощью электронных микроскопов микроструктур тел, их локального состава и локализованных на поверхностях или в микрообъемах тел электрических и магнитных полей.

Сканирующая микроскопия

Метод анализа поверхностной структуры микрообъекта путем анализа отраженного «электронного изображения» (как правило, при специальном напылении и с применением метода замораживания-высушивания, что позволяет повышать электронную плотность объекта и предотвращать деформации клеточных и др. структур).

Морфометрия

Включает совокупность приемов и методов определения геометрических характеристик исследовательских объектов-гистологических препаратов (срезов, мазков, отпечатков и т.п.) и микрофотографий.

Этапы изготовления гистологического препарата

Сущность этапа

Взятие материала

Берут кусочки органов и тканей величиной не более 1 смі. Материал желательно получать как можно раньше после смерти людей (метод исследования материала трупа человека -- аутопсия).

С диагностической целью материал для гистологического исследования может забираться у людей прижизненно с помощью специальных инструментов или во время операций. Этот способ получения материала носит название биопсии.

Фиксация

Фиксация - метод обработки ткани с целью закрепления ее прижизненной структуры. Это достигается путем воздействия на ткань специальных растворов (фиксаторов). Наиболее существенным изменением, происходящим в тканях под воздействием фиксатора является процесс свертывания (коагуляции) белков. Количество фиксатора следует брать в 20-100 раз больше объема кусочка фиксируемого материала.

Помывка в воде

После фиксации материал промывают (чаще всего в течение нескольких часов в проточной воде) с тем, чтобы избавить его от избытка фиксатора и различных осадков фиксирующих жидкостей.

Изучить с помощью микроскопа такие фиксированные кусочки органов невозможно, т.к. они не прозрачны. Чтобы кусочек органа можно было микроскопировать, его надо разрезать на очень тонкие пластинки - срезы. Такие срезы получают с помощью микротомов. для того, чтобы резать на микротоме кусочек ткани, ее надо предварительно уплотнить. Это достигается путем пропитывания застывающими жидкостями - расплавленным парафином. Парафин в воде не растворяется, и поэтому промытый после фиксации кусочек ткани необходимо предварительно обезводить, и только затем пропитывать.

Обезвоживание

Обезвоживание ткани производятся постепенно (чтобы не произошло сморщивания) путем проведения ее через спирты возрастающей крепости: 50є, 60є, 70є, 80є, 90є, 96є, 100є. В каждом спирте кусочки находятся от нескольких часов до 1 суток в зависимости от величины кусочка.

Уплотнение (заливка)

При заливке кусочки предварительно пропитываются теми жидкостями, которые служат растворителями для парафина (ксилол или толуол). При заливке в парафин кусочки из абсолютного спирта переносятся в смесь абсолютного спирта с хлороформом или ксилолом, взятых поровну, затем чистый ксилол и, наконец, в расплавленный насыщенный раствор парафина в хлороформе, где они находятся в термостате при температуре 37є до 1 суток и более. Дальнейшая заливка проводится в термостате при температуре 54є -56є в трех порциях парафина.

Окончательная заливка проводится в парафин с добавлением воска, который наливают в специальные бумажные коробочки или стеклянные чашки, а затем эти коробочки или чашки после появления на поверхности парафина пленки, погружают в воду.

Происходит полное затвердение парафина. Кусочки с окружающим их парафином извлекают из коробочек и с помощью расплавленного парафина, наклеивают на деревянные кубики, получаются парафиновые блоки.

Уплотнения также можно добиться замораживанием кусочка органа (срочная биопсия).

Приготовление срезов

Срезы с блоков изготовляются на микротоме. Наиболее распространены микротомы санный и замораживающий. В специальных устройствах микротома зажимается парафиновый блок и микротомный нож.

Окрашивание

Перед окраской из парафиновых срезов обязательно удаляют парафин (растворением в ксилоле).

Окрашивание необходимо производить для того, чтобы отчетливо выявить под микроскопом тонкие структуры объекта.

По окрашиванию определенных гистологических структур различают краски ядерные (окрашивание ядра), цитоплазматические (окрашивающие цитоплазму), и специальные, окрашивающие избирательно определенные структуры.

Заключение среза

Окрашенные и промытые в воде срезы во избежание помутнения обезвоживают в спиртах (70є, 96є), просветляют в карбол-ксилоле, ксилоле, а затем на предметное стекло, где находится срез, помещают каплю бальзама и срез накрывают покровным стеклом. Бальзам представляет собой растворенную в ксилоле смолу одного из видов сосны, растущей в Канаде (канадский бальзам), смолу пихты (сибирский бальзам) или специальную синтетическую среду.

При исследовании биопсий с целью уточнения диагноза в гистологических лабораториях прибегают к ускоренной обработке материала. Кусочки тканей и органов при этом проходят те же этапы обработки, но за 5-7 дней. Иногда производится так называемая срочная биопсия, когда в течение 15-80 мин. материал фиксирует, получают срезы, окрашивают их и заключают. Быструю фиксацию производят в 10% формалине, подогреваемом пламенем горелки или с использованием СВЧ-печи. Уплотнения добиваются замораживанием (хлорэтилом, углекислотой или с помощью замораживающего микротома).

Реагент

Результат

Гематоксилин

Окрашивает базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержат нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК): клеточное ядро, рибосомы и РНК-богатые участки цитоплазмы.

Эозин

Окрашивает эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Эозинофильные структуры содержат внутри- и внеклеточные белки, например, тельца Леви. Цитоплазма является эозинофильной средой. Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом.

Орсеин

Используется для выявления эластиновых волокон, особенно это актуально в патологической анатомии кровеносных сосудов. Эластические волокна соединительной ткани окрашиваются в тёмно-красный цвет; остальные структуры - в слабо-розовый цвет.

Серебрение

Солями серебра используют для выявления нервных клеток, нейроглиальных элементов, периферических нервных волокон и их окончаний, ретикулярной стромы органов, межклеточного вещества эпителия и гладкой мускулатуры, бледных трепонем и др. С целью улучшения качества препаратов срезы после серебра нередко тонируют солями золота, окрашивание в фиолетовый цвет.

Железный гематоксилин

Железный гематоксилин Вейгерта должен окрашивать ядра в черный цвет. Если они приобретают коричневый цвет, то это свидетельствует о порче красителя. Железный гематоксилин Гейденгайна

окрашивает в черный цвет не только ядра, но и митохондрии, темные диски скелетной и сердечной мышечной ткани и другие структуры.

Реактив Шиффа

Позволяет выделить гликоген и гликопротеины (лиловый цвет). Соединительная ткань, хрящ, костная ткань, железистые клетки и структуры ткани почек окрашиваются в лиловый цвет.

Ядро окрашивается в синий.

Романовский Гимза

Посредством данного метода окраске подлежат ацидофильные образования в разные оттенки красного цвета. Образования базофильного характера окрашиваются в цвет от пурпурного до синего.

Группы красителей

Название окрашиваемых структур

Пример красителя

Основные, или ядерные, красители

хроматин ядер, ядрышко

гематоксилин, тионин, кармин, метиловый зеленый

Кислотные красители

цитоплазматические структуры клеток, эритроциты

эозин, кислый фуксин, Конго красный (конгорот), эритрозин

Нейтральные красители

жиры и липоиды, ядра

судан III, судан IV, метиленовый синий