Молекулярно-генетичні зміни при Ph'-позитивних лейкеміях та їх діагностика

Данная работа посвящена изучению молекулярно-генетических изменений при ХМЛ и ОЛЛ и, в часности, dbl-гомологичного (DH) региона bcr/abl кДНК у больных с разным течением Ph' позитивних лейкозов, а также разработке методов молекулярно-генетической диагностики данной группы заболеваний.

Был проведен сравнительный анализ последовностей химерного гена bcr/abl, которые характерны для разных форм Ph'-позитивних лейкозов, на основе которого было разработаны и внедрены в клиническую практику молекулярно-генетические подходы для выявления химерного гена bcr/abl и определения конкретного типа даной перестройки.

С использованием обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) с последующим клонированием и секвенированием полученых фрагментов были проанализированы первичные последовательности DH домена у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом и острым лимфобластным лейкозом на разных стадиях заболевания. Кроме того, были проанализированы эти же участки в составе нормального гомолога гена bcr - как у пациентов с филадельфийской хромосомой, так и у нормальных доноров. В результате такого анализа было впервые показано, что у некоторых пациентов с острым лимфобластным лейкозом и хроническим миелоидным лейкозом на острой стадии заболевания происходит потеря разных участков DH домена. Было описано 7 новых вариантов химерной BCR/ABL мРНК (GenBank AY533677, AY536248, AY536250, AY536247, AY536244, AY536246, AY536245). И хотя у всех пациентов были выявлены разные изменения первичной последовательности мРНК, можно отметить и общие черты этих изменений. Так, во всех случаях делеции в мРНК не приводили к нарушению рамки считывания. Кроме аномальных вариантов функциональных доменов у вышеупомянутых пациентов выявлялись также и полноразмерные DH домены. Подобные изменения были описаны только для пациентов с агрессивным характером протекания заболевания - ГЛЛ, с ХМЛ - на стадии акселерации и миелопролиферативное заболевание с агрессивным протеканием. Проанализированы последствия выявленных изменений на характер функционирования белка.

Еще одной важной проблемой является разработка диагностических систем для данной группы патологий. Своевременная дифференциальная диагностика, особенно диагностика на ранних стадиях, позволяет, благодаря новым схемам лечения, значительно повысить шансы на выздоровление или перевести заболевание на продолжительное время в стадию ремиссии (при ХМЛ). Диагностика имеет также важное значение для контроля остаточных патологических клеток на стадии ремиссии для своевременного реагирования на патологические изменения в процессе протекания заболевания. Поскольку в результате проведенных исследований было показано, что у некоторых больных на острой стадии лейкозов с Ph' хромосомой, происходят изменения в DH участке химерной мРНК, предложен новый подход к выявлению и дифференциальной диагностике даной группы патологий, который позволяет выявлять как классические, так и возможные неканонические типы перестроек в bcr участке гена bcr/abl. Для этого были подобраны праймеры, которые обеспечивают полное перекрытие bcr участка химерного гена при проведении обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции. Это позволяет обнаруживать измения, сопряженные как с “неклассической” точкой транслокации, так и возможные нарушения, приводящие к изменению длины данного участка химерного гена.

Таким образом, в данной работе охарактеризованы изменения в DH домене химерного гена bcr/abl, которые были выявлены у некоторых пациентов с ОЛЛ и ХМЛ на острой стадии заболевания, и разработаны подходы для виявления данных форм лейкозов.

Ключевые слова: хронический миелогенный лейкоз, ХМЛ, острый лимфобластный лейкоз, ОЛЛ, ген bcr/abl, DH домен, диагностика.

SUMMARY

Dybkov M. V. - The molecular-genetics changes during Ph' positive leukemias and their diagnostics. - Manuscript.

Thesis for Philosophy Doctor (PhD) degree in Biology, speciality 03.00.22 -Molecular Genetics. - Institute of Molecular Biology and Genetics National Academy of Sciences of Ukrainе, Kyiv, 2007.

The work is devoted to the study of the dbl-homology (DH) domain of patients with the chronic myelogenous leukemia (CML) and acute lymphoblastic leukemia (ALL). Nucleotide sequences of the DH domain of the hybrid bcr/abl gene of patients with CML and ALL is analysed at the different stage of the illness using the reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). The loss of various parts of different length of the DH domain of the p210 BCR/ABL mRNA was found to occur for some patients suffering from ALL and CML, at the acceleration illness stage. Seven new variants of the himeric mRNA is described. In analysing the potential protein sequence for this variants their possible functional role substantiated.

The new approach to the detection and differential diagnostics of the Ph' positive leukemias is proposed to reveal the classic translocation as well as the uncanonical translocation in the bcr region of the hybrid bcr/abl gene.

Keywords: chronic myelogenous leukemia, CML, acute lymphoblastic leukemia, ALL, bcr/abl gene, DH domain, diagnostics.

Размещено на Allbest.ru