Хромосомные аберрации, микроядра и апоптоз в лимфоцитах при радиационных воздействиях и других патологических состояниях

Таблица 7 - Среднее содержание аберрантных клеток в лимфоцитах периферической крови у больных с хроническим вирусным гепатитом С, %.

Примечание: транслокации и инверсии считались как два нарушения, т.к. для их образования разрывы происходили в двух места.

Для определения частоты поврежденности хромосомы независимо от ее длины был введен критерий W (количество повреждений на единицу длины хромосомы). Из полученных данных следует, что критерий W для 1-ой хромосомы превышал более чем в 8 раз аналогичный показатель для других хромосом. В таблице 8 представлены наиболее часто повреждаемые участки хромосом. По-видимому, дальнейшее исследование лимфоидных клеток и тканей при ХВГ-С и отягощающих его инфекциях и токсических факторов, без которых эта инфекция встречается чрезвычайно редко, будет полезным для исследования механизмов действия всех этих факторов не только на лимфоидные клетки, но и на организм в целом.

Таблица 8 - Частота встречаемости повреждений в группе пациентов с ХВГ-С

Исследование хромосомных изменений у лиц, имевших длительный контакт с отравляющими веществами нервно-паралитического действия.

У лиц, длительно контактировавших с фосфорорганическими отравляющими веществами, также, как и в предыдущей группе, наиболее частыми повреждениями являлись парные фрагменты, при этом суммарный процент повреждений колебался от 6,5 до 24,9. Наиболее частое количество повреждений наблюдалось во 2-й хромосоме, доля их составляла 2,54% от общего числа. Наиболее часто повреждаемые локусы 2q21-24 (6 раз) и 2q31-32(8 раз). В 6-ой хромосоме доля повреждений составляла 2,31%. При этом, наиболее часто повреждался локус 6q16 (11 раз).

Рисунок 9 - Количество клеток с хромосомными нарушениями в лимфоцитах лиц, участвовавших в ликвидации химического оружия, %

По оси абсцисс - обследуемые лица: с 1 по 7 - пациенты, 8 - доноры (средний уровень получен от 19 доноров)

По оси ординат - количество поврежденных клеток, %

Как следует из рис. 9, уровень поврежденных клеток колебался от 6,5 до 24%, при этом не выявлено корреляции между этим показателем и временем контакта с токсическими веществами, что, по-видимому, обусловлено, в основном, генетической предрасположенностью и иммунным статусом. Средний уровень поврежденных клеток у пациентов составил 13,9±4,3%, что в 12 раз превышало средний уровень, наблюдаемый у доноров (2,3±0,4).

На рис. 10 представлена частота поврежденных хромосом, из которой следует, что наиболее часто повреждаются 2 и 6 хромосомы, затем 1, 3, 5, 4, 8, 12, 9. Полученные результаты свидетельствуют о том, что фосфорорганические вещества избирательно воздействуют на хромосомы, а количество повреждений не коррелирует с их длиной. Причина может заключаться в числе активных генов, расположенных в хромосомах, как полагают [Braselman et al., 2004; Pouzoulet E. et al., 2007].

Обращает на себя внимание тот факт, что, несмотря на длительный контакт с химическими веществами (до 21 года), у обследуемого контингента лиц не выявлено стабильных аберраций в виде транслокаций или делеций, которые могли бы образовывать клоны.

Наиболее часто повреждаемая у обследуемых лиц хромосома 6, как известно, содержит в q-плече несколько генов-супрессоров опухоли, и, следовательно, потеря содержащих их участков могла бы привести к инициации процесса канцерогенеза. Каких-либо других, кроме заболеваний головного мозга и сердечно-сосудистой системы, у наблюдаемого контингента лиц не выявлено. Однако на основании полученных данных делать выводы об отсутствии кластогенного эффекта у исследованных токсикантов преждевременно. Вероятно, объяснение кроется в механизме действия фосфорорганических веществ, который носит строго направленный характер. Возможно, что используемый метод дифференциальной окраски хромосом не достаточно чувствителен для этих целей, и микроделеции, микроинверсии или микротранслокации не могут быть выявлены этим методом. Однако выяснение этого вопроса требует специального изучения и сравнения с действием химических препаратов другой природы.

Лимфомы являются одним из наиболее часто встречающихся заболеваний крови у лиц, пострадавших от ядерной бомбардировки в Хиросиме и Нагасаки. Однако их этиологию в большинстве случаев определить трудно.

По оси абсцисс - номера хромосом и половые хромосомы Х и Y.

По оси ординат - хромосомные аберрации, %

Рисунок 10 - Частота поврежденных хромосом в лимфоцитах лиц, контактировавших с фосфорорганическими отравляющими веществами, %.

Диагностическая значимость цитогенетических показателей в лимфоцитах периферической крови и костном мозге больных с различными формами неходжкинских лимфом.

Как правило, для цитогенетического анализа лимфом используются клетки лимфатических узлов. Однако этот материал мало доступен, а в случае удачного получения материала клетки должны быть помещены в культуру в течение 1 ч после экстирпации лимфоузла, что также не всегда может быть исполнено. Учитывая способность опухолевых лимфомных клеток к диссеминации в периферическую кровь уже на первых стадиях заболевания [Sotomayor et al., 2007], а также результаты наших предыдущих исследований канцерогенного риска у детей, в настоящем фрагменте работы проводилось изучение диагностической значимости цитогенетических показателей при культивировании ЛПК больных с неходжкинскими лимфомами. Для этого было проведено параллельное исследование клеток костного мозга и периферической крови с использованием митогенов для лимфоцитов T- и B-клеточного происхождения у 16 больных с различными формами лимфом.

Как следует из анализа наших данных, только в одном случае материал костного мозга оказался информативным (6,25%), во всех остальных случаях изменений в кариотипе выявлено не было. Наиболее часто встречались повреждения в хромосоме 3, при этом частота клеток с этими нарушениями колебалась от 1 до 10%. Более частым структурным повреждением являлись делеции части или целого p-плеча. Это нарушение отмечается в литературе как специфичное для лимфом [Jaffe et al., 2001]. Более того, выявлена клональная транслокация между хромосомами 2 и 3 у больного с экзонодальной лимфомой головного мозга (рис. 11 и 12).

Рисунок 11 - Метафазная пластинка из культуры ФГА-стимулированных лимфоцитов периферической крови больного с лимфомой центральной нервной системы. Стрелками указаны места перестроек хромосом.

В литературе имеются единичные случаи генетического исследования лимфом центральной нервной системы, в том числе с использованием проточного флуориметра при анализе большого количества клеток [Miozzo et al., 2005]. Следует отметить высокий уровень диссеминации опухолевых клеток - 4%. При этом исследование костного мозга не было информативно.

Рисунок 12 - Кариотип той же пластинки: 46, ХХ, t(2;3)(q24;q25)

Рисунок 13 - Изменение структуры хромосом (суммарное значение по периферической крови и костному мозгу), выявленное при цитогенетическом исследовании неходжкинских лимфом.

По оси ординат - номер хромосомы, по оси абсцисс - число повреждений, %

На рис. 13 представлены данные структурных нарушений в хромосомах лимфоцитов периферической крови и костного мозга (101 больной). Наиболее часто клональные повреждения наблюдаются в хромосомах 1, 3, 6 (более 10%). Число неклональных нарушений практически на порядок превышает клональ-ные. При этом наиболее существенное количество наблюдается в хромосомах 1, 3, 6 и 7, число этих нарушений велико и в хромосомах 2, 4, 5, 9, 12, 17, X. Более высокий уровень неклональных нарушений по сравнению с клональными, возможно, обусловлен низкой способностью опухоли к диссеминации, и требует большего числа анализируемых клеток.

На рис. 14 представлена диаграмма распределения ХА при неходжинских лимфомах. Для построения диаграммы использованы результаты цитогенети-ческого анализа лимфоцитов периферической крови 75 больных с различными формами лимфом.

Из диаграммы видно, что большая часть повреждений при этом заболевании наблюдается при различных нарушениях в хромосоме 3, составляющих 51% от общего количества выявленных повреждений. В два раза реже встречаются нарушения в хромосоме 1. Остальные нарушения составляют не более 5-10% случаев.

Рисунок 14 - Основные цитогенетические повреждения, встречающиеся при неходжкинских лимфомах.

На рис. 15 представлена диаграмма частоты встречаемости вторичных (или дополнительных) аберраций, выявленных при злокачественных лимфомах. Из диаграммы следует, что наиболее частыми вторичными аберрациями в нашем материале являются трисомии по различным хромосомам, а также делеции хромосомы 6q. Выявленные изменения соответствуют описанным в литературе [Jaffe et al., 2001], за исключением характерной для фолликулярных лимфом t(14;18). Возможно, это связано с эндемическими особенностями нашей страны, так как в единственной работе, в которой исследовали цитогенетические показатели при лимфомах в России [Fleischman et al.,1989], эта аномалия также не выявлена.

Рисунок 15 - Частота встречаемости вторичных хромосомных аберраций при злокачественных лимфомах, %.

аким образом, можно заключить, что анализ клеток костного мозга не информативен на ранних стадиях заболевания при использовании метода G-banding. При этом анализ ЛПК является информативным при лимфомах на всех стадиях, особенно в случаях с экзонодальными заболеваниям. Распределение повреждений соответствует описанным в литературе при анализе материала, полученного из лимфатических узлов.

ВЫВОДЫ

1. Воздействие радиации in vitro приводит к увеличению суммарного числа микроядер и хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови, динамика образования которых имеет сходную зависимость от дозы облучения. Отсутствие клеток, содержащих более 3-х микроядер в контроле, и формирование их при облучении, уже начиная с дозы 0,5 Гр, позволяет использовать этот показатель для определения радиационных повреждений.

2. Анализ клеток с аномальными (апоптотическими) ядрами дает возможность выявлять повреждения при больших дозах радиационного воздействия через 6-8 ч после облучения организма, т.е. времени, соответствующему пику интерфазной гибели клеток.

3. Микроядра имеют различные механизмы происхождения, однако наибольшая часть их формируется во время митоза и апоптоза. Соотношение вклада этих двух механизмов в формирование микроядер зависит от величины повреждающего воздействия на клетки.

4. Число повреждений на хромосому не зависит от ее длины, поэтому метод флуоресцентной in situ гибридизации (FISH) должен применяться для биодозиметрии с использованием ДНК-зондов не менее чем для трех хромосом.

5. Выявлена прямая зависимость между радиационно-специфичными повреждениями, обнаруженными в лимфоцитах родителей - участников ликвидации последствий аварии на ЧАЭС, и маркерными хромосомами у детей, специфичными для гемобластозов.

6. Облучение в дозе 1 Гр при условии нарушения тиреоидного гомеостаза в 1,5 раза увеличивает число микроядер по сравнению с контролем, при этом суммарное число хромосомных аберраций не изменяется.

7. При оценке степени облучения необходимо учитывать мутагенные свойства вируса гепатита С, которые проявляются в формировании парных разрывов в сайтах 1q31-32, 9q21-22, 2q32-34, 7q22, и появлении маркерных хромосом.

8. Особенностью формирования хромосомных повреждений в лимфоцитах периферической крови у лиц, длительно контактировавших с фосфорорганическими отравляющими веществами, является образование ломких сайтов и парных фрагментов, при этом изученные вещества не обладают канцерогенным эффектом.

9. Спектр распределения хромосомных аберраций в периферической крови при лимфомах соответствует таковому в клетках лимфатических узлов. Особенностью фолликулярных лимфом у больных в Северо-Западном регионе России является отсутствие транслокации (14;18), наиболее специфичной для этой группы заболеваний в США и странах западной Европы.

Практические рекомендации

1. Для корректной оценки радиационных поражений лаборатории, занимающиеся биологической дозиметрией, должны иметь собственную калибровочную кривую для всех методов, используемых в этой лаборатории.

2. В случае потенциальной опасности сверхнормативного облучения людей необходимо использовать микроядерный тест для всех лиц, которые находились в зоне аварии. Оценка дозы по этому критерию должна определяться только с учетом данных тщательно собранного анамнеза, так как различные предшествующие воздействия - вирусы, химические вещества, а также радиация, могут изменять истинную дозу облучения.

3. Лица, у которых выявлен уровень МЯ, соответствующий дозе более 1 Гр по калибровочной кривой, должны быть обследованы вторично для определения числа дицентриков, желательно с использованием метода дифференциальной окраски хромосом во избежание артефактов. При радиационном воздействии в высоких дозах и необходимости немедленного обследования людей для оценки поглощенной дозы можно использовать показатель аномальных клеток в лимфоцитах периферической крови.

4. В тех случаях, когда необходимо подтвердить или выявить факт облученности организма в отдаленные сроки после воздействия, необходимо использовать метод FISH, при использовании не менее трех ДНК-зондов.

5. Лица с выявленными в результате радиационного воздействия стабильными рекуррентными хромосомными повреждениями в лимфоцитах, которые можно рассматривать как онкомаркерные, должны быть отнесены к группе канцерогенного риска и регулярно проходить диспансерное обследование.

6. При обследовании пациентов с эндо- и экстранодальными лимфомами для цитогенетических исследований следует использовать лимфоциты периферической крови, стимулированные Т- и B-клеточными митогенами.

7. Цитогенетический метод исследования лимфоцитов периферической крови может быть использован для многократных исследований пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями с целью дифференциального диагноза, прогноза лечения и определения минимальной остаточной болезни.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации в изданиях, рекомендованных ВАК МОиН РФ.

1. Колюбаева С.Н. К механизму образования микроядер в ФГА-стимулированных лимфоцитах периферической крови человека / С.Н. Колюбаева, Л.В. Щедрина, Р.П. Степанов [и др.] // Цитология. - 1986. - Т. 28, № 26. - С. 227-231.

2. Колюбаева С.Н. Исследование механизма гибели тимоцитов при воздействии сверхвысоких доз гамма-облучения / С.Н. Колюбаева, Н.Б. Звонароева, А.С. Сейлиев [и др.] // Радиобиология. - 1987. - Т. 27, вып. 3. - С. 319-324.

3. Колюбаева С.Н. Электронно-микроскопический анализ пострадиационной гибели тимоцитов и лимфоцитов периферической крови / С.Н. Колюбаева, В.Е. Комар, Р.П. Степанов [и др.] // Радиобиология. - 1988.- Т. 28, вып. 2.- С. 189-194.

4. Колюбаева С.Н. Сравнительное исследование микроядерного теста и хромосомных аберраций в лимфоцитах человека / С.Н. Колюбаева, Б.И. Прокопчук, В.В. Ракецкая [и др.] // Радиобиология. - 1989. - Т. 29, вып. 5. - С. 611-614.

5. Колюбаева С.Н. Анализ лимфоцитов с аномальными ядрами в периферической крови крыс, подвегнутых г-облучению / С.Н. Колюбаева, Л.В. Мясникова, В.Е. Комар // Радиобиология.- 1990. - Т. 30, вып. 1. - С. 124-127.

6. Воробцова И.Е. Цитогенетическая характеристика детей, пострадавших в результате аварии на Чернобыльской АЭС / И.Е. Воробцова, С.Н. Колюбаева, М.В. Воробьева [и др.] // Медицинская радиология.- 1993. - Т. 38, № 10. - С. 25-28.

7. Соболь К.В. Снижение повреждающего действия г-облучения на лимфоциты человека при постлучевой обработке препаратом MD1 / К.В Соболь, С.Н. Колюбаева, В.Е. Комар // Радиац. биология. Радиоэкология. - 1994. - Т. 34, вып. 2. - С. 143-147.

8. Колюбаева С.Н. Исследование радиационных повреждений в лимфоцитах человека методом микроядерного и хромосомного анализа / С.Н. Колюбаева, В.В. Ракецкая, Е.А. Борисова [и др.] // Радиац. биология. Радиоэкология. - 1995. - Т. 35, вып. 2. - С. 150-156.

9. Ракецкая В.В. Цитогенетическое исследование больных с нарушением тиреоидного гомеостата / Ракецкая В.В., Т.П. Евтушенко, О.В. Дубко, С.Н. Колюбаева [и др.] // Радиац. биология. Радиоэкология. -1995. -Т.35, вып.2.-С.157-161

10. Новик А.А. Характеристика некоторых цитогенетических показателей при неходжкинских лимфомах / А.А. Новик, В.Я. Мельниченко, С.Н. Колюбаева [и др.] // Гематология и трансфузиология. - 2000. - Т. 45, № 3. - С. 49-52.

11. Акимов В.Н. Особенности изменений кариотипа лимфоцитов периферической крови больных хроническим вирусным гепатитом С / В.Н. Акимов, С.С. Бацков, С.Н. Колюбаева [и др.] // Мед. академический журнал. - 2004. - Т. 5, № 1. - С. 64-69

12. Михайловская О.В. Изучение взаимосвязи между ломкостью хромосом и лимфопролиферативными заболеваниями / О.В. Михайловская. С.Н. Колюбаева, Н.А. Викторова [и др.] // Цитология. - 2005. - Т. 47, № 1. - С. 83-88.

13. Бацков С.С. К вопросу об особенностях и взаимосвязи изменений кариотипа лимфоцитов периферической крови и иммунного статуса у больных хроническим вирусным гепатитом С / С.С. Бацков, С.Н. Колюбаева, В.Н. Акимов [и др.] // Рос. журн. гастроэнторологии, гепатологии и колопроктологии. - 2005. - № 2. - С. 51-56.

14. Колюбаева С.Н. Цитогенетическая характеристика больных с хроническим лимфоцитарным лейкозом / С.Н. Колюбаева, В.О. Саржевский, А.А. Титова, О.Р. Краснова [и др.] // Медицинский академический журнал. - 2006. - Т. 6, № 3. - С.109-114.

15. Богданов А.Н. Цитогенетическое исследование злокачественных лимфом / А.Н. Богданов, В.О. Саржевский, С.Н. Колюбаева [и др.] // Вестник СПб. Университета. - 2008. - Серия 11. - Вып. 3. - С. 126-131.

16. Богданов А.Н. Случай острого лимфобластного лейкоза с t(9;22) и несколькими дополнительными перестройками / А.Н. Богданов, В.О. Саржевский., С.Н. Колюбаева [и др.] // Гематология и трансфузиология. - 2008. - Т. 53, № 3. - С. 35-38.

17. Богданов А.Н. Значение цитогенетических исследований в диагностике злокачественных лимфом / А.Н. Богданов, В.О. Саржевский, С.Н. Колюбаева [и др.] // Вопросы онкологии. - 2008. - Т. 54, № 2. - С. 6-8.

18. Колюбаева С.Н. Новые подходы к оценке риска гемобластозов у лиц, подвергшихся действию радиации // Вестник Рос. Воен.-мед. акад. - 2008. - Т. 23, № 3. - С. 36-38.

19. Колюбаева С.Н. Использование цитогенетических методов в радиационной медицине // Вестник Рос. Воен.-мед. акад. - 2008. - Т. 23, № 3. - С. 179-180.

20. Сосюкин А.Е. Анализ повреждений хромосом в лимфоцитах периферической крови у лиц, занятых на работах с токсическими веществами, относящимися к химическому оружию / А.Е. Сосюкин, С.Н. Колюбаева, А.В. Язенок [и др.] // Вестник Рос. Воен.-мед. акад. - 2008. - Т. 23, № 3. - С. 169-170.

21. Колюбаева С.Н. Сравнительный анализ стабильных хромосомных аберраций, выявленных методом флуоресцентной in situ гибридизацией у человека и обезьян при облучении in vitro лимфоцитов крови / С.Н. Колюбаева, А.В. Киссель, А.Н. Гребенюк // Вестник Рос. Воен.-мед. акад. - 2008. - Т. 21, № 1. - С. 138-141.

Методические рекомендации, авторское свидетельство

22. Колюбаева С.Н. Использование микроядерного теста для индикации пострадиационныъх эффектов у человека: Методические рекомендации / С.Н. Колюбаева, В.В. Ракецкая, Л.В. Мясникова [и др.]. - М: Минздрав РФ, 1991. - 12 с.

23. Колюбаева С.Н. Использование микроядерного теста при малых дозах / С.Н. Колюбаева, В.В. Гущ, Б.И. Макеев // Авторское свидетельство № 310946. - 1990 г.

24. Новик А.А. Значимость цитогенетических исследований при диагностике неходжкинских лимфом: Методические рекомендации / А.А. Новик, В.Я. Мельниченко, С.Н. Колюбаева [и др.]. - СПб.: ВМедА, 2000. - 16 с.

25. Новик А.А. Значимость цитогенетичяеских показателей при миелопластическом синдроме: Методические рекомендации / А.А. Новик, В.Я. Мельниченко, С.Н. Колюбаева [и др.]. - СПб.: ВМедА, 2000. - 14 с.

Прочие публикации

26. Koliubaeva S.N. Cytogenetic studies of Chernobyl victims / I.E. Vorobtsova, S.N. Koliubaeva, V.E. Komar // 25th Annual Meeting EEMS. - Stockholm, 1993. - P. 12-14.

27. Koliubaeva S.N. Micronuclei of apoptotic origin / S.N. Koliubaeva, V.V. Raketskaija, V.E. Komar // Joint Meeting European Society Radiation Biology.-Amsterdam,1994.-P. 41

28. Koliubaeva S.N. Correlation between chromosome aberration and micronuclei / S.N. Koliubaeva, V.V. Raketskaija, V.E. Komar // Joint Meeting European Society Radiation Biology. - Amsterdam, 1994. - P. 40.

29. Ilyinskikh N. Results of interlaboratory research on definition of radiation doses, received by the local population as a result of failure on Siberian chemical plant on April 6,

30. 1993 / N. Ilyinskikh, T.T. Natarajan, I. Suskov, S.N. Kolioubaeva // 25th Annual Meeting of EEMS. - Amsterdam, 1995. - Рoster 9-7. - P. 279

31. Kolioubaeva S.N. New activities of WHO collaborating Centre for Medical Radiation Pathology. Estimation of leukemia risk in children born from Chernobyl accident victims / S.N. Kolioubaeva [et al.] // Montpelie, 1996. - P. 76-77.

32. Kolioubaeva S. Special Features of Radiation Effect Manifestation in Chernobyl victims revealed by cytogenetics methods in different stages of the accident / / S. Kolioubaeva, V. Raketskaya, L. Miasnikova [et al.] // Internat. conf. «One decade after Chernobyl: Summing up the consequences of the accident». - Vienna, 1997. - P. 11-13.

33. Гребенюк А.Н. Показатели цитогенетической нестабильности у женщин участниц ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС и их детей / А.Н Гребенюк., В.Ф Беженарь, С.Н. Колюбаева // Междунар. конгресс “Эколого-социальные вопросы защиты и охраны здоровья молодого поколения на пути в ХХI век”.- СПб., 1998.- С. 148-150

34. Sorokine-Durm I. FISH-painting applied to late overexposure dose reconstruction: interest of non- human primate study / I. Sorokine-Durm, S. Kolioubaeva, V. Durand [et al.] // Intern. conf. “Diagnosis and Treatment of Radiation Injury”. - Rotterdam, 1998. - Р. 63.

35. Sorokine-Durm I. Reconstruction of irradiation dose as measured by chromosomes painting / I. Sorokine-Durm, S. Kolioubaeva, V. Durand [et al.] // Radioprotection. - 1998. - Vol. 43. - P. 193-195.

36. Колюбаева С.Н. Характеристика некоторых цитогенетических показателей в диагностике злокачественных лимфом / С.Н. Колюбаева, Л.В. Мясников, Н.А. Абиссова [и др.] // Рос. симпоз. ”Морфологические, иммунологические и молекулярно-биологические аспекты идентификации гемобластозов и родственных заболеваний”. - Сочи, 1999. - С. 29.

37. Гребенюк А.Н. Цитогенетическая оценка воздействия факторов Чернобыльской аварии на женщин и детей / А.Н. Гребенюк, С.Н. Колюбаева, В.Ф Беженарь. [и др.] // Междунар. конф. “Пробл. радиац. генетики на рубеже веков”.- М., 2000.- С.231-232

38. Novik A.A. The significance of some cytological indexes in diagnostics of malignant lymphomas / A.A. Novik, Y. Melnichenko, S. Kolioubaeva [et al.] // 11th Intern. Congress on Anti-Cancer Treatment. - Paris, 2001. - P. 51.

39. Новик А.А. Анализ цитогенетических изменений в различных прогностических группах больных агрессивными неходжкинскими лимфомами / А.А. Новик, С.Н. Колюбаева, В.О. Саржевский [и др.] // Материалы российско-голландской конференции. - СПб., 2002. - С. 219-220.

40. Колюбаева С.Н. Использование FISH метода для выявления облученности обезьян / С.Н. Колюбаева // Материалы международной научной конф. ”Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии в опытах на обезьянах”. - Сочи-Адлер: Наука Кубани, 2007. - С. 256-261.

Размещено на Allbest.ru