Клинические проявления. Наиболее частая (50%) локализация актиномикоза - лицо и шея. Инфильтраты располагаются в области нижней челюсти и шеи. Заболевание начинается исподволь, постепенно, без острых явлений.

Наиболее ранний симптом - сведение челюстей, затем появляются уплотнение, отёк жевательных мышц, в процесс вовлекаются подкожная клетчатка, кожа, иногда кость. Определяют очень плотный неподвижный инфильтрат. В этот период его следует дифференцировать с туберкулёзным лимфаденитом, опухолью. Постепенно в процесс вовлекается кожа в области угла нижней челюсти, шеи. Она приобретает сине-багровый цвет, в этом месте пальпируется деревянистой плотности инфильтрат, спаянный с кожей и глубжележащими тканями. Впоследствии в области инфильтрата появляются множественные извитые свищи с гнойным отделяемым. Гной жидкий, без запаха, содержит мелкие зёрнышки (друзы гриба). Для уточнения диагноза исследуют гной под микроскопом или берут биоптаты из кожи, инфильтрата, лимфатического узла. Обнаружение друз гриба в гное или тканях уточняет диагноз актиномикоза.

Наиболее частая локализация актиномикоза кишечника - слепая кишка и червеобразный отросток, реже страдают другие отделы толстой и тонкой кишки. Инфильтрат захватывает всю толщу кишки, прорастает брюшину, брюшную стенку. При распаде инфильтрата на слизистой оболочке образуются язвы, распадающийся инфильтрат может вскрываться через брюшную стенку наружу (с образованием множественных гнойных, а иногда и каловых свищей) или в соседние органы: мочевой пузырь, почку, забрюшинное пространство. При пальпации живота инфильтрат определяется в виде очень плотного опухолевидного образования, неподвижного при прорастании в брюшную стенку или соседние органы. Появившуюся опухоль следует отдифференцировать от аппендикулярного инфильтрата: последний развивается сразу же за приступом острого аппендицита и под влиянием противовоспалительного лечения быстро подвергается регрессу. Актиномикоз лёгкого характеризуется образованием специфической гранулёмы в лёгочной ткани. Плотный инфильтрат, разрастаясь, вовлекает в процесс паренхиму, плевру, бронхи, сосуды лёгкого. Он может прорастать плевру, грудную стенку, распространяться на диафрагму, средостение. Распад инфильтрата приводит к образованию абсцессов, каверн, свищей. Гной, содержащий друзы гриба, может отходить с мокротой при вскрытии инфильтрата в бронх или наружу (при прорастании грудной стенки). Процесс длится месяцами и даже годами и приводит к тяжёлому пневмосклерозу. По клиническому течению актиномикоз лёгких в начальном периоде напоминает хроническую бронхопневмонию, не поддающуюся антибактериальной терапии. Дифференциальную диагностику проводят с опухо - лью, туберкулёзом лёгкого. Наличие инфильтрата в лёгком без труда определяют при рентгенологическом исследовании. Использование рентгенологических методов, компьютерной томографии, бронхоскопии, особенности клинического течения (рост инфильтрата, его распад, отсутствие эффекта от антибактериальной терапии) позволяют исключить туберкулёз, рак лёгкого и поставить диагноз актиномикоза. В запущенных случаях, при распространении процесса на грудную стенку с характерной для актиномикоза клинической картиной поражения кожи диагноз не вызывает сомнений. Чрезвычайно большое значение имеет обнаружение друз в мокроте, гное, биоптатах, полученных при бронхо - или торакоскопии в случае вовлечения в процесс бронхов или плевры.

Для лечения актиномикоза применяют препараты йода (йодид калия) в сочетании с рентгенотерапией. Актиномикоз лица и шеи легко поддаётся лечению, прогноз даже при запущенных формах благоприятный. При актиномикозе кишечника, лёгких проводят аналогичную консервативную терапию. В начальных стадиях прогноз благоприятный. При безуспешности консервативной терапии показано хирургическое лечение - резекция части кишки или лёгкого в сочетании с консервативной терапией. В далеко зашедших случаях, при прорастании в другие органы, развитии тяжёлых гнойных осложнений (гнойного плеврита, медиастинита, забрюшинной флегмоны) выполняют экстренные пал - лиативные операции - вскрытие флегмоны, дренирование средостения, плевральной полости. Прогноз при запущенных формах актиномикоза лёгких и кишечника неблагоприятный.

Тема 14. Вопрос № 17

Назовите препараты для специфической профилактики гриппа. Дайте их характеристику.

1. Средства специфической профилактики и терапии

1.1 Специфические вакцины.

В настоящее время имеются только вакцины против гриппа типов А и В, вакцин против других возбудителей ОРВИ не разработано. Успех вакцинопрофилактики в решающей степени зависит от того, насколько серотип вакцинного штамма соответствует серотипу циркулирующего вируса. Именно поэтому ежегодно ВОЗ пересматривает формулу вакцины, т.е. количество и штаммовый состав подтипов вирусов гриппа, из которых будет изготавливаться вакцина для применения ее в текущем эпидемическом периоде. Так, например, на эпидсезон 2007 - 2008 гг. противогриппозная вакцина будет иметь следующий состав: (H1N1) - A/Solomon Islands/3/2006, (H3N2) - A/Wisconsin/67/2005, B/Malaysia/2506/2004. Это значит, что по данным оперативных наблюдений в мире циркулируют вирулентные штаммы, имеющие родственный антигенный состав с теми штаммами, которые избраны в качестве вакцинных. Перспективным направлением в разработке средств специфической профилактики является вакцина ACAM-FLU-A, о создании которой сообщила англо-американская фирма Acambis. В отличие от классических вакцин, ACAN-FLU-A вызывает ответ на поверхностный белок M2e, который в антигеном отношении значительно более консервативен, чем гемагглютинин или нейраминидаза. Это обстоятельство позволяет надеяться, что новая вакцина будет более универсальной и защищать от заражения любым штаммом вируса типа А. Вместе с тем, только широкие клинические испытания могут показать насколько оправданы эти надежды. Вакцины применяют интраназально или парентерально. Как правило, вакцинацию проводят в осенний период. Обязательной вакцинации подлежат дети, старики и лица, отнесенные к группе риска: врачи, учителя и др. лица, имеющие профессиональный кон - такт с большими массами населения. Вместе с тем следует иметь в виду, что вакцинация не всегда является надежной защитой от гриппа. Исследования поствакцинальной восприимчивости к вирусу гриппа показали, что из общего числа первично прививаемых лиц высокий титр антител накапливается у 70,7 % привитых, но только 51,4% из них действи - тельно невосприимчивы к живому вирусу. У 5,5% вакцинированных при инфицировании появляются клинические признаки и дополнительно к этому нарастание титров антител, 6,2 % дают только специфическую гуморальную реакцию без клинических проявлений, а 7,6% демонстрируют клиническую реакцию без изменения уровня специфических антител. У остальных 29,3% первично прививаемых лиц не выявлено достоверно регистрируемого специфического иммунного ответа на вакцинацию. Таким образом, до 30% лиц, получивших прививку против гриппа, может заболеть при встрече с вирулентным штаммом. Не случайно, в последние годы некоторые ученые скептически относятся к возможности эффективной защиты от эпидемий гриппа с помощью специфических вакцин. Следует к тому же подчеркнуть, что вакцина против гриппа не защищает и не может защитить от заболевания парагриппом, риновирусной или аденовирусной инфекцией. Изменившаяся этиологическая структура гриппа и ОРВИ, появление большого числа смешанных инфекций не всегда позволяют получить приемлемый для практического здравоохранения уровень специфической защиты. В этой связи на первый план выходят методы фармакопрофилактики и фармакотерапии данных заболеваний.

1.2 Специфические и нормальные иммуноглобулины. Иммуноглобулины, представляющие собой готовые антитела, предназначены для экстренной профилактики и лечения инфекционного заболевания. Из специфических средств настоящее время разрешен к применению только противогриппозный иммуноглобулин. Иммуноглобулиновые препараты, содержащие антитела к другим возбудителям ОРВИ не разработаны. Вместе с тем, в разные периоды времени были предложены препараты неспецифических иммуноглобулинов: чигаин, сывороточный иммуноглобулины (пентаглобин, эндобулин). Однако широкого распространения в практической медицине эти препараты не получили. Выпуск чигаина вскоре после его регистрации был прекращен. Два других препарата, хотя и разрешены для применения на территории России, применяются редко, прежде всего вследствие их высокой стоимости (около 3 000 руб за ампулу, 10 мл 5% раствора). В этой связи препараты нормальных иммуноглобулинов применяют, как правило, по абсолютным показаниям, к числу которых относятся гипогаммаглобулинемии, в том числе первичные, септические состояния, тяжелые интоксикации и пр. Таким образом, средства специфической профилактики и терапии актуальны только в отношении вирусов гриппа А и В. Актуальность этих средств, особенно вакцин, не подлежит сомнению, однако даже самая эффективная противогриппозная вакцина не защитит от других ОРВИ, которые также могут вызвать тяжелое заболевание вплоть до летального исхода, как это известно в отношении коронавирусов - возбудителей атипичной пневмонии. Кроме того, существует достаточно распространенное предубеждение в отношении процедуры вакцинации. Периодически противники вакцинации получают дополнительные аргументы в свою пользу, когда в продажу поступают недостаточно качественные вакцины. Так, некоторое время назад население России было серьезно напугано случаями аллергических осложнений после введения вакцины гриппол. Проведенные расследования показали, что виновата была не вакцина как таковая, а определенные ее серии, тем не менее полностью рассеять существующие сомнения, по видимому, не удалось.

Иммунобиологический препарат

№ 23. Туберкулин

Группа:

Аллерген туберкулезный очищенный в стандартном разведении (Туберкулин)

Положение внутри группы:

МИБП-аллерген

Что и в каком виде содержит:

Очищенный туберкулин в стандартном разведении представляет собой смесь фильтратов убитых нагреванием культур микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов, осажденных трихлоруксусной кислотой, обработанных этиловым спиртом и эфиром для наркоза, растворенных в фосфатно-буферном растворе с твином-80 в качестве стабилизатора и фенолом в качестве консерванта.

Принцип получения:

Препарат получают из фильтрата культуры туберкулезных микобактерий путем добавления кнему химических веществ, осаждающих белок, споследующей очисткой препарата физическими методами.

Единицы измерения активности:

Единица активности туберкулина, соответствующая активности 0,028 мкг стандартного препарата сухого очищенного туберкулина.

Назначение препарата:

Препарат предназначен для массовой туберкулинодиагностики, с целью:

а) вакцинацией детей в возрасте 2 месяца и более.

б) для диагностики туберкулеза, в том числе для раннего выявления начальных и локальных форм туберкулеза у детей и подростков.

в) для определения инфицирования микобактериями туберкулеза.

Как используется:

Применяют для постановки внутрикожной пробы Манту. Препарат вводят строго внутрикожно. Пробу Манту ставят пациентам обязательно в положении сидя, т.к. у эмоционально лабильных лиц инъекция может стать причиной обморока. Для проведения внутрикожной пробы применяют однограммовые туберкулиновые шприцы разового использования с короткими тонкими иглами.

Запрещается применять для пробы Манту инсулиновые шприцы и шприцы и иглы с истекшим сроком годности.

Ампулу с препаратом тщательно обтирают марлей, смоченной 70° этиловым спиртом, затем шейку ампулы подпиливают ножом для вскрытия ампул и отламывают. Извлечение туберкулина из ампулы проводят шприцем, которым осуществляют пробу Манту, с иглой № 0845. Набирают 0,2 мл, т.е.2 дозы туберкулина, насаживают тонкую иглу, выпускают раствор до метки 0,1 мл в стерильный ватный тампон. Ампулу после вскрытия допускается хранить в асептических условиях не более 2 часов.

На внутренней поверхности средней трети предплечья участок кожи обрабатывают 70° этиловым спиртом и просушивают стерильной ватой. Тонкую иглу срезом вверх вводят в верхние слои кожи параллельно ее поверхности - внутрикожно. После введения иглы в кожу из шприца вводят строго по делению шкалы 0,1 мл (2 ТЕ) препарата, т.е.1 дозу. При правильной технике введения в коже образуется папула беловатого цвета в виде "лимонной корочки", размером 7 - 10 мм в диаметре. Пробу Манту ставит по назначению врача специально обученная медсестра, имеющая документ - допуск к проведению туберкулинодиагностики.

Результаты туберкулиновой пробы оценивает врач или специально обученная медсестра. Результат пробы Манту оценивают через 72 ч путем измерения размера инфильтрата (папулы) в мм. Прозрачной линейкой с миллиметровыми делениями измеряют и регистрируют поперечный (по отношению к оси предплечья) размер инфильтрата. Гиперемию учитывают только в случае отсутствия инфильтрата. При постановке проб Манту, реакция считается:

отрицательной - при полном отсутствии инфильтрата (папулы) и гиперемии или при наличии уколочной реакции (0 - 1 мм);

сомнительной - при инфильтрате размером (2-4 мм) или тольсо гиперемии любого размера без инфильтрата;

положительной - при наличии инфильтрата диаметром 6 мм и более;

гиперергической - у детей и подростков считается реакция с диаметром инфильтрата 17мм и более, у взрослых - 21мм и более, а также визикулонекротические реакции независимо от размера инфильтрата с лимфангоитом или без него

На чем основано использование:

Действующее начало препарата аллерген - туберкулопротеин, вызывает при постановке внутрикожной туберкулиновой пробы у инфицированных или вакцинированных лиц специфическую реакцию гиперчувствительности замедленного типа в виде местной реакции - гиперемии и инфильтрата (папулы).

Признаки непригодности к употреблению

Начатый флакон может быть употреблен в течение дня, вскрытая ампула используется одномоментно. Не использованный в указанных условиях препарат непригоден к дальнейшему употреблению.

2. Санитарная и фармацевтическая микробиология

Тема 1. Вопрос № 15

Болезни корней и корневищ.

Возбудители - бактерии Pseudornonas, Erwinia. Бактерии, вызывающие болезни у растений, имеют термин "фитопатогенные". Заражение растений бактериальными болезнями идет различными путями, к примеру, клубнями, через семена, черенками, частями зараженных растений. Переносчиков бактериозов много, собственно, любые активно перемещающиеся животные переносят на себе бактерии.

Большое количество патогенных бактерий содержит почва. Особенности выживания бактерий в почве зависят от ее состава и внешних условий, к примеру, температуры, наличия в ней простейших организмов, уничтожающих бактерии, специфики растительности.

Чаще всего фитопатогенные бактерии погибают сравнительно быстро, но наличие в почве загнивающих остатков растений обеспечивает им более длительное сохранение.

Бактериальные инфекции причиняют большой вред многим видам растений. Поражения могут быть общими, вызывающими гибель всего растения или отдельных его частей, проявляться на корнях (корневые гнили), в сосудистой системе (сосудистые болезни); местными, ограничивающимися заболеванием отдельных частей или органов растения, а также проявляться на паренхимных тканях (паренхиматозные болезни - гнили, пятнистости, ожоги); могут носить смешанный характер. Особое место занимают бактериозы, связанные с появлением новообразований (опухолей).

При общей инфекции идет увядание растения, которое может быть вызвано двумя причинами: закупоркой сосудов (сосудистое увядание) либо токсическим действием бактерий на ткани растения.

При местных паренхиматозных поражениях наблюдаются локальное либо общее (при сильном поражении) загнивание тканей, различные некрозы в виде пятнистостей либо ожогов. При пятнистостях идет изменение окраски пораженных тканей, чаще всего в бурый либо черный цвет с последующим частичным либо полным их отмиранием. Для ожогов характерно быстрое почернение и отмирание отдельных органов или частей растения.

При смешанном поражении помимо закупорки сосудистой системы идет быстрое разрушение прилегающих к ней тканей.

Опухоли возникают как на надземных, так и на подземных органах растений. Обычно различают раковые и туберкулезные опухоли. В первом случае идет усиленное деление клеток (так называемая гиперплазия), в результате ткань разрастается, при этом внутри ткани нет полостей. Распространен корневой рак, вызываемый бактерией Psetidomonas tumefaciens. Туберкулезные опухоли имеют каверны, пустоты внутри разросшихся тканей. Каверны образуются в результате гниения отдельных участков опухоли.

В ряде случаев патогены при поражении одного и того же вида растения вызывают сразу несколько типов поражения. Иногда у различных растений один и тот же вид бактерий вызывает различные симптомы заболеваний, что усложняет правильную диагностику бактериозов.

Поражение патогенными микроорганизмами происходит двумя основными путями: через естественные отверстия, имеющиеся у растительных тканей, например через устьица, водяные поры, а также через механические повреждения.

Фитопатогенные бактерии бывают как специализированными, так и неспецифическими, повреждающими большую группу растений.

Возбудители бактериозов - главным образом неспороносные бактерии из семейства Mycobacteriaceae, Pseudomonadaceae, Bacteriaceae. Среди них существуют многоядные бактерии, поражающие многие виды растений, и специализированные, поражающие близкородственные растения одного вида или рода.

Многоядные бактерии вызывают следующие наиболее распространённые бактериозы: мокрые гнили и корневой рак различных плодовых деревьев, винограда.

Специализированные бактерии вызывают бактериальную пятнистость фасоли, бактериоз огурцов, чёрную бактериальную пятнистость и бактериальный рак томатов, сосудистый бактериоз капусты, рябуху табака, чёрный и базальный бактериоз пшеницы, бактериальный ожог косточковых, груш, шелковицы, цитрусовых, кольцевую гниль и чёрную ножку картофеля, гоммоз хлопчатника, полосатый бактериоз проса и ячменя и другие болезни.

Возникновение и развитие бактериоза. зависит от наличия инфекционного начала и восприимчивого растения, а также от факторов внешней среды, изменяя которые можно управлять течением инфекционного процесса. Например, бактериоз огурцов в теплицах развивается только при наличии капельножидкой влаги и температуры воздуха 19-24°C. Проветривая теплицы и повышая в них температуру, удаётся приостановить развитие болезни. Бактерии проникают в растения через различные повреждения и естественные ходы; например, возбудители различных пятнистостей - через устьица листьев, ожога плодовых деревьев - через нектарники цветков, сосудистых бактериозов крестоцветных - через водяные поры в листьях. Развитию бактериоза способствуют кроме повышенной влажности и температуры воздуха наличие на растениях капелек воды, а также недостаток фосфора и калия, высокий рН почвы.

Основные виды бактериозов комнатных растений:

Мокрая гниль

Довольно распространенное заболевание комнатных растений - мокрая гниль. Болезнь проявляется в размягчении и распаде отдельных участков на листьях, черешках, корнях и плодах растения. Бактерии выделяют в ткани листа фермент пектиназу, который вызывает распад тканей. Чаще всего поражению подвержены сочные и мясистые части растений. На листьях сначала появляются небольшое бесформенное пятно, серого, бурого или черного цвета, которое разрастается в размерах. На луковицах и клубнях попросту говоря начинается гниение, часто сопровождающееся неприятным запахом. При благоприятных условиях - в теплом и влажном климате болезнь распространяется очень быстро. И пораженная часть или все растение превращается в раскисшую массу.

Возбудитель проникает через механические поражения на растении - даже микроскопические трещинки и ранки. Сохраняется в почве с растительными остатками. Поэтому требуется дезинфекция почвы перед посадкой, а при обрезке корней, клубней и луковиц срезы необходимо присыпать толченым древесным углем. А инструмент дезинфицировать спиртом после каждого обрезания.

Провоцирует развитие болезни внесение избыточных доз удобрений, застаивание воды в почвы, плотная, слежавшаяся почва, охлаждение влажной земли в горшках, например, зимой в прохладном помещении.

Меры борьбы:

Растение можно спасти, если бактериоз еще не поразил всю сосудистую систему или носит местный характер (например, гниль началась с кончика листа). Если сгнили корни, то еще можно попробовать укоренить верхушку (если данное растение укореняется черенками). Если гниение поразило только часть корней, а надземная часть выглядит живой, можно попытаться спасти растение, - для этого нужно освободить корни от земли, срезать все гнилые, пересадить в сухую подготовленную почву, полить и опрыскать бордоской жидкостью (или медьсодержащими препаратами). Зараза не перекинется на другое растение стоящее рядом, но весь рабочий инструмент и горшки необходимо тщательно дезинфицировать (http://hob. h1.ru/arhiv/r73/textH. htm).

Гнили (примеры)

Дельфиниум.

Возбудитель заболевания - бактерия Pectobacterium phytophthorum. В случае поражения этим патогеном чернеет и загнивает основание побега. Растение начинает отставать в росте, листья желтеют, начиная с нижних. Сосудистые пучки темнеют и заполняются бактериальной слизью, вызывая увядание растения.

Шалфей.

Возбудитель болезни - бактерия Pseudomonas tumefaciens. В области корневой шейки, на корневой образуются наросты различной величины, имеющие бугорчатую поверхность. В осенний период они загнивают и разрушаются. Больные растения отстают в росте, имеют угнетенный вид, листья скручиваются и засыхают.

Пеларгония, герань.

Возбудитель болезни - бактерия Bacterium sp. Листья по краю коричневеют, по мере развития забоелвания свертываются и засыхают. Стебель со временем отмирает. Корневая чернеет и разрушается.

Гладиолус.

Возбудитель заболевания бактерия - Pseudomonas marginata. На нижней части листьев образуются красновато-коричневые мелкие пятна, разрастающиеся по мере развития заболевания, образующие вдавленные полосы бурого цвета, загнивающие в сырую погоду. Листья желтеют и усыхают. На чешуе луковиц появляются коричневые пятна небольшого размера, имеющие черные края. Пятна в дальнейшем имеют приподнятый край, часто растрескивающиеся в центре, с прозрачным или желтовато-коричневыми выделениями бактерий, идет загнивание.

Ирис Возбудители заболевания - бактерии Bacterium carotovorum, и некоторые другие, вызывающие мокрую гниль побегов и корневищ. В весенний период основания побегов темнеют, буреют и засыхают. Поражаются также корневища. В этом случае молодые побеги, их основания и прилегающая часть корневищ загнивают по типу мокрой гнили. В течение лета при развитии инфекции поврежденные ткани загнивают. К концу лета корневища разрушаются, превращаясь в беловатый порошок, сохраняются лишь оболочки корневищ. Заболевание активно развивается в сырые сезоны, кроме этого провоцирующим фактором является избыток азота.

Бактериальная пятнистость, бактериальный ожог, сосудистый бактериоз.

Болезнь чаще поражает молодые листья и побеги. Бактериальные пятнистости в зависимости от вида патогена имеют различные симптомы. Наиболее характерная картина, когда на поверхности листа или стебля сначала образуются мелкие водянистые пятна, которые постепенно приобретают чёрный цвет. Чаще всего пятна имеют неправильно-угловатую форму, и ограничены желтой или светло-зеленой каймой. Бактерия распространяется чаще всего вдоль жилок. Пятна растут, сливаются, чернеет весь лист. В конечном итоге растение погибает.

Оптимальные условия для развития бактерий - это температура 25-30°C и высокая влажность воздуха. Гибель бактерий наступает только при температуре выше 56°C. Бактерии рода Xanthomonas устойчивы к высушиванию и долгое время может переносить пониженную температуру.

Вариантом бактериальной пятнистости является так называемые бактериальный ожог, который вызывают бактерии рода Pseudomonas. В этом случае на растения появляются не пятна, а довольно большие бесформенные области почернения, которые затем усыхают. Выглядит так, как будто этот участок листа подгорел. Если болезни сопутствуют благоприятные условия, то развивается она, очень быстро вызывая отмирание отдельных частей и гибель всего растения. Начинается бактериальный ожог чаще с молодых листьев, побегов и цветков. Бактерии проникают в растения через устьица или ранки, начинают размножаются в межклетниках паренхимы листьев. Инкубационный период развития заболевания 3-6 дней в зависимости от температуры. Бактерии сохраняются в почве и на семенах.

Меры борьбы:

На садовых культурах применяют обработку растений и протравливание семян антибиотиком фитолавин-300. В домашних условиях на комнатных растениях с успехом применяют опрыскивание и полив почвы раствором трихопола - 1 таблетка трихопола на 2л воды. Эффективны так же медьсодержащие препараты, как бордоская смесь, медный купорос.

Источники заражения:

Одним из важнейших источников заражения являются семена. При прорастании семян они могут заражать всходы, а затем по проводящим сосудам передвигаться в растения и заражать взрослые растения в период вегетации. Кроме того, больные семена могут служить источником распространения инфекции, причиной появления бактериозов в таких районах, где раньше их не было. Инфекцию могут распространять также и зеленые растения, в которых бактерии хорошо сохраняются и переносятся в новые районы страны вместе с зараженными растениями (черенки, окулировочные материалы - глазки). Одним из основных источников заражения бактериозами являются остатки больных растений. Особенно долго и хорошо фитопатогенные бактерии сохраняются в деревянистых частях растений.

Почва как источник инфекции не представляет большой опасности. Многочисленные исследования показали, что фитопатогенные бактерии, попадая в почву, быстро погибают под воздействием микробов-антагонистов (происходит как бы самоочищение почвы).

Некоторые виды насекомых также могут являться источником первичной инфекции. Большую опасность в распространении бактериозов представляют капельки дождя с мелкими частицами остатков больных растений, которые ветром и воздушными течениями разносятся на далекие расстояния (воздух сам по себе не играет роли в непосредственной передаче заболеваний). Переносить фитопатогенные бактерии может также и вода - поливная, вода рек и других источников. И наконец, в природе в распространении бактериозов немаловажную роль играют нематоды.

Увядание (примеры)

При увядании идет активное поражение надземных частей растений.

Астра многолетняя.

Возбудитель заболевания по типу сосудистого увядания - бактерия Pseudomonas solanocearum. Листья скручиваются, засыхают, не теряя зеленой окраски, побеги усыхают. На поперечном срезе стебля имеется характерное потемнение сосудов, при надавливании из них выделяется слизистая масса.

Крестоцветные.

Возбудитель заболевания - бактерия Bacterium tumefaciens. Идет поражение сосудистой системы растений. Листья желтеют, побеги увядают. На поперечных срезах стеблей и черешков проявляются побуревшие сосуды. Заболевание передается как семенами, так и частями заболевших растений, в которых зимует возбудитель.

Хризантема.

Возбудитель заболевания - бактерия Pseudomonas solanocearum. Листья скручиваются и засыхают, при этом не изменяя окраски. На поперечном срезе стебля наблюдается потемнение сосудов. При нажимании из них выделяется слизь.

Различные опухоли (примеры)

Хризантема.

Возбудитель заболевания - Bacterium tumefaciens. Вызывает бактериальный рак, в результате него на корневой шейке и стебле образуются опухоли с бугорчатой поверхностью, первоначально белые, по мере развития заболевания темнеющие, загнивающие.

Георгин.

Возбудитель болезни - бактерия Pseudomonas tumefaciens. На корневой системе образуются опухоли, достигающие размеров клубня картофеля средней величины. По мере увеличения размеров опухоли коричневеют, к осени загнивают и разрушаются. Бактерия попадает в почву вместе с растительными остатками пораженных растений и сохраняется в ней в течение 3-4 лет. Бактерия вызывает гибель клубней георгин при хранении.

Гвоздика. Возбудитель заболевания - бактерия Pseudomonas tumefaciens. На корневой системе и корневой шейке образуются наросты различной величины, сначала белые, затем темнеющие, иногда загнивающие, с неровной бугорчатой поверхностью.

Гладиолус. Возбудитель болезни - бактерия Corynebacterium fascians. На клубнелуковицах образуются разной величины наросты с неровной бугристой поверхностью. Часто заболевание сопровождается израстанием деток.

Тема 2. Вопрос № 14

В каких помещениях проводится контроль воздуха?

Микробиологический контроль воздуха проводится с помощью методов естественной или принудительной седиментации микробов. Естественная седиментация (по методу Коха) проводится в течение 10 мин путем осаждения микробов на поверхность твердой питательной среды в чашке Петри. Принудительная седиментация микробов осуществляется путем "посева" проб воздуха на питательные среды с помощью специальных приборов (импакторов, импинджеров. фильтров).

Контроль воздуха проводится в "чистых" помещениях.

Чистое помещение - помещение, в котором контролируется счетная концентрация аэрозольных частиц, и которое построено и используется так, чтобы свести к минимуму поступление, генерацию и накопление частиц внутри помещения, и в котором, при необходимости, контролируются другие параметры, например, температура, влажность и давление (ISO 14644-1).

Основным принципом обеспечения чистоты является создание в "чистом" помещении избыточного давления по отношению к смежным с ним помещениям. Это обеспечивается созданием в нем дисбаланса воздуха, то есть разности между количеством приточного и вытяжного воздуха. Количество приточного воздуха должно превышать вытяжку минимум на 20 % при условии, что рассматриваемое помещение находится в центре здания, и не менее 30 % при наличии в помещении остекления, допускающего инфильтрацию. Это обеспечивает движение воздуха из помещений с высокими требованиями по чистоте в смежные помещения с более низкой степенью чистоты по мере убывания технологических требований.

ИНСТРУКЦИЯ "ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ КОНТРОЛЯ ПАРАМЕТРОВ ВОЗДУШНОЙ СРЕДЫ В "ЧИСТЫХ" ПОМЕЩЕНИЯХ И МЕТОДЫ ИХ ИЗМЕРЕНИЙ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ РДИ 42-505-00"

Тема 3. Вопрос № 13

Какие питательные среды используют для посева смывов, как проводится инкубация посевов, на какой день исследования могут быть выданы результаты?

Отбор проб и доставка в лабораторию

В практике текущего санитарного надзора за объектами общественного питания, торговой сети, пищеблоками детских дошкольных и подростковых учреждений, а также буфетами - раздаточными лечебно-профилактических учреждений широко используется метод смывов с целью контроля эффективности санитарной обработки инвентаря, оборудования, посуды, санитарной одежды и рук персонала. Метод смывов дает возможность объективно оценить санитарное содержание обследуемых учреждений.

При проведении санитарно-бактериологических исследований смывов в основном ограничиваются выявлением бактерий группы кишечной палочки, обнаружение их расценивается как одно из подтверждений нарушения санитарного режима.

При выявлении вторичного массивного обсеменения готового продукта со значительным превышением в нем общего количества микробов, в смывах также необходимо определять общую бактериальную обсемененность и наличие бактерий рода Proteus и St. aureus.

При взятии смывов с оборудования, инвентаря, посуды, столовых приборов записывается: номер образца по порядку, место взятия смыва, в каком техническом и санитарном состоянии находилось оборудование (инвентарь, посуда и т.д.), с которого взят смыв, время забора.

При взятии смывов с рук записывается: номер по порядку, фамилия, имя и отчество сотрудника, выполняемая работа, время забора.

Доставка проб должна производиться в термоконтейнерах.

Время доставки проб продуктов и смывов в лаборатории для осуществления исследования не должно превышать двух часов, так как затягивание этого срока отражается на достоверности результатов анализа.

Техника взятия смывов

Взятие смывов производится с помощью стерильных увлажненных ватных тампонов. Стерильные ватные тампоны на стеклянных, металлических или деревянных палочках, вмонтированных в пробирки с ватными пробками, заготавливают заранее в лаборатории. В день взятия смывов в каждую пробирку с тампоном наливают (в условиях бокса над горелкой) по 5 мл стерильного 0,1% водного раствора пептона таким образом, чтобы ватный тампон не касался жидкости.

Непосредственно перед взятием смыва тампон увлажняют средой.

Смывы с крупного оборудования и инвентаря берут с поверхности 100 см2, для ограничения поверхностей используют шаблон (трафарет), сделанный из проволоки. Трафарет имеет площадь 25 см2, чтобы взять смывы с площади в 100 см2 его накладывают 4 раза в разных местах поверхности контролируемого объекта.

При взятии смывов с мелких инструментов обтирается вся поверхность предмета, при заборе смывов с тарелок протирают всю внутреннюю поверхность. При взятии смывов с мелких предметов одним тампоном протирают три одноименных объекта - три тарелки, три ложки и т.п. У столовых приборов протирают их рабочую часть.

При исследовании стаканов протирают внутреннюю поверхность и верхний наружный край стакана на 2 см вниз.

При взятии смывов с рук протирают тампоном ладонные поверхности обеих рук, проводя не менее 5 раз по каждой ладони и пальцам, затем протирают межпальцевые пространства.

При взятии смывов с санитарной одежды протирают 4 площадки по 25 см2 - нижнюю часть каждого рукава и 2 площадки с верхней и средней частей передних пол спецовки. С различных мест полотенца берут 4 площадки по 25 см2.

Методика исследования смывов. Объем исследования

На предприятиях общественного питания исследование смывов проводят на присутствие бактерий группы кишечных палочек.

Исследование на наличие золотистого стафилококка и протея, определение общей бактериальной обсемененности производится по показаниям.

Например:

а) исследование смывов на стафилококки проводят при обследовании кремово-кондитерских цехов, столовых и ресторанов, молочных кухонь и других пищеблоков, обращая особое внимание на контроль рук персонала; б) общую микробную обсемененность можно определить для установления эффективной обработки посуды, а также при оценке моющих и дезинфицирующих средств.

Методика посева смывов на бактерии группы кишечных палочек

При плановых санитарно-гигиенических обследованиях для выявления БГКП производят посевы смывов на среды Кесслера с лактозой или Кода, при этом в пробирку со средой опускают тампон и переносят оставшуюся смывную жидкость.

Посевы на средах Кесслера или Кода инкубируют при 37°С, через 18-24 часа со среды Кесслера производят высев на плотную дифференциальную среду Эндо, со среды Кода высев производят в случае изменения окраски среды или ее помутнения.

Посевы помещают в термостат при температуре 37°С на 24 часа, после чего просматривают. Из колоний, подозрительных или типичных для БГКП, готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Обнаружение грамотри-цательных палочек указывает на наличие БГКП.

Методика посева на общую бактериальную обсемененность

Перед посевом смывов в пробирку с тампоном добавляют 5 мл 0,1% пептонной воды или изотонического раствора хлорида натрия. Тампон тщательно отмывают, после чего 1,0 мл смывной жидкости помещают в чашку Петри и заливают расплавленным МПА. Чашки помещают в термостат при 30°С. Предварительный подсчет выросших колоний производят через 48 часов, окончательный - через 72 часа. Количество колоний, выросших на чашке, умножают на 10 для определения общего количества бактерий, содержащихся на поверхности исследуемого предмета.

Методика посева на золотистый стафилококк

Для выявления золотистого стафилококка посев смывов производят на чашки с желточно-солевым агаром, непосредственно втирая посевной материал тампоном, затем последний погружают в пробирку с 6,5% солевым бульоном.

Оценка результатов

Обнаружение санитарно-показательных и условно-патогенных бактерий в смывах с поверхностей чистых, подготовленных к работе предметов, инвентаря и оборудования, а также рук персонала свидетельствует о нарушении санитарного режима и дает основание для проведения административных мер.

Тема 4. Вопрос № 12

Почему определяют БГКП, а не возбудителей кишечных инфекций?

Наличие бактерий группы кишечной палочки (БГКП) определяется во всех жидких продуктах, во всех продуктах животного происхождения (за исключением стерилизованных), во многих продуктах растительного происхождения. БГКП объединяют представителей нормальной микрофлоры кишечника человека и относятся к семейству Enterobacteriaceae родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia. БГКП выполняют функцию индикатора фекального загрязнения и относятся к санитарно-показательным микроорганизмам.

Тема 5. Вопрос № 11

Что такое пирогенность, свойствами каких микроорганизмов она обусловлена?

Пирогенные вещества (греч. pyr - огонь +gennao - создавать, производить) - биологически активные вещества экзогенного (бактериального и вирусного) и эндогенного (клеточно-тканевого) происхождения, обладающие свойством вызывать перестройку уровня регуляции температурного гомеостаза, приводящую к повышению температуры тела и развитию лихорадки. Пирогенные вещества относятся к соединениям типа липополисахаридов - веществ с большой молекулярной массой, достигающей 8 000 000 и размером частиц 0,05 - 1 мкм. Активным пирогеном в липополисахаридах является липидная часть, которая действует на терморегуляторные центры гипоталамуса и вызывает функциональные нарушения в органах и системах организма. Присутствие этих веществ в инъекционных растворах может вызвать у больного при введении в сосуды, спинномозговой канал пирогенную реакцию - повышение температуры тела, озноб и другие болезненные реакции, а высокое содержание их может привести к летальному исходу. Наиболее резкие пирогенные реакции наблюдаются при внутрисосудистых, спинномозговых и внутричерепных инъекциях. Первоначально это явление было описано в 1865 г. при парентеральном введении дистиллированной воды. В 1876 г. впервые появился термин "пироген" применительно к веществам, выделенным из гниющего мяса. В 1891 г. С.П. Боткин установил, что одной из причин лихорадочной реакции при брюшном тифе является образование тканевых пирогенов. В период 1892 - 1912 г. г. было установлено, что пирогенная реакция вызывается как живыми, так и погибшими микроорганизмами. В 1923 г. F. B. Seibert выделил пирогенные вещества из растворов, установил их термостабильность и первым обосновал использование кроликов для изучения пирогенной реакции.

Источники и природа пирогенных веществ

Различают эндогенные и экзогенные пирогены. Первые являются клеточно-тканевыми продуктами, образующимися в определенных условиях. Вторые - это вещества, содержащиеся в микробах и выделяющиеся в процессе их жизнедеятельности.

1. Эндогенные пирогенные вещества

Эндогенные пирогенные вещества образуются в организме при действии бактериальных пирогенных веществ и экзогенных факторов, вызывающих воспаление, а также при иммунопатологических процессах с участием лимфокинов. Основным источником эндогенных пирогенных веществ являются моноциты крови, альвеолярные и перитонеальные макрофаги, фиксированные макрофаги селезенки и печени, а также нейтрофильные гранулоциты и эозинофилы; они спонтанно синтезируются клетками некоторых опухолей. Образование эндогенных пирогенных веществ лейкоцитами осуществляется только в условиях патологии при взаимодействии с различными раздражителями и протекает в две фазы: фаза активизации и фаза освобождения пирогенна. Вырабатываемый лейкоцитами пирогенного вещества (лейкоцитарный пироген) термолабильный белок с молекулярной массой 10 000 - 45 000 обладает в очищенном виде высокой пирогенной активностью; стимулирует лейкоцитопоэз, синтез иммуноглобулинов и белков (фибриногена, гаптоглобулина, церулоплазмина, C-реактивного белка). В острой фазе воспаления лейкоцитарный пироген не имеет видовой пирогенной специфичности. Открытие эндогенных пирогенных веществ позволило обосновать современную унитарную теорию лихорадки. Они играют роль белковых медиаторов; их действие на гипоталамические центры терморегуляции через простагландины и циклические нуклеотиды приводит к смещению уровня регуляции температуры, включению аппарата физической и химической терморегуляции, к развитию лихорадки.

2. Экзогенные пирогенные вещества

Экзогенные пирогенные вещества не действуют непосредственно на центры терморегуляции; их пирогенная активность опосредуется через образование вторичных, эндогенных, пирогенных веществ в организме. Такой способностью обладают также метаболиты стероидных гормонов, синтетические хемотоксические пептиды и интерфероногенная двуспиральная РНК. Наиболее высокой биологической активностью обладают липополисахариды грамотрицательных бактерий, способные повышать температуру тела, стимулировать гипофиз-адреналовую систему, лейкоцитопоэз, синтез иммуноглобулинов, образование и выделение лейкоцитами вторичных пирогенных веществ, интерферона, простагландинов, тормозить рубцово-спаечные процессы и др.

Источниками пирогенных веществ в лекарственных средствах в большинстве случаев являются микроорганизмы: главным образов грамотрицательные бактерии, а также грибы и даже вирусы. Кроме того, пирогенную реакцию могут вызывать некоторые химические вещества: продукты термоокислительной деструкции пластмасс (например, фторопластов), суспензия фосфата кальция, нуклеинат натрия и другие химические вещества.

Носителем пирогенности является эндотоксин (0-антиген), присутствующий в клеточной оболочке микроорганизмов и составляющий от 1 до 5 % сухой массы бактериальных клеток. Эндотоксин представляет собой липополисахаридо-протеино-липоидный комплекс.

При его гидролизе образуются не обладающие пирогенностью сложный протеин и липид В, а также относительно устойчивый липополисахарид, ответственные за пирогенную реакцию.

Липополисахаридный комплекс является компонентом самой внешней зоны клеточной стенки грамотрицательных бактерий. При кислотном гидролизе липополисахарид расщепляется на свободный липид А и "деградированный" нетоксичный фосфорилированный полисахарид. Липид А липополисахаридов различных микроорганизмов имеет очень близкое строение, в то время как полисахаридная часть весьма отличается как своей молекулярной массой, так и природой моносахаридов. Считают, что пирогенность и токсичность пирогенов определяется именно липидом А, полисахарид же биологически неактивен и обеспечивает растворимость липополисахаридного комплекса.

Широким варьированием свойств полисахаридов объясняют значительные колебания у пирогенов, образуемых различными микроорганизмами, молекулярной массы (от 10 000 до 8 000 000), размеров частиц (от 50 мкм до 1 мкм) и минимальной дозы, вызывающей пирогенную реакцию (от 0,001 до 7 мкг/мл).

Тема 6. вопрос № 10

Назовите основные источники и методы получения антибиотиков. Примеры.

Антибиотики - специальные продукты жизнедеятельности микроорганизмов и их модификации, которые обладают высокой физиологической активностью по отношению к определенным группам микроорганизмов (вирусам, бактериям, грибам, водорослям) или к злокачественным опухолям. Традиционные представления об антибиотиках связаны с их широким применением в современной медицине и ветеринарии. Некоторые антибиотические препараты применяют как стимуляторы роста животных, в борьбе с болезнями растений, при консервировании пищевых продуктов и в научных исследованиях (в области биохимии, молекулярной биологии, генетике, онкологии). В соответствии с классификацией, в основе которой лежит химическое строение, антибиотики можно разделить наследующие группы:

. Ациклические соединения (исключая жирные кислоты и терпены)

Алициклические соединения (в том числе тетрациклины)

Ароматические соединения

Хиноны

Кислородсодержащие гетероциклы

Азотсодержащие гетероциклические соединения

Пептиды

В настоящее время различают три способа получения антибиотиков: биологический, метод получения полусиитетических препаратов и синтез химических соединений - аналогов природных антибиотиков

Синтетические антибиотики. Изучение химической структуры антибиотиков дало возможность получать их методом химического синтеза. Одним из первых антибиотиков, полученных таким методом, был левомицетин. Большие успехи в развитии, химии привели к созданию антибиотиков с направленно измененными свойствами, обладающих пролонгированным действием, активных в отношении устойчивых к пенициллину стафилококков. К пролонгированным препаратам относятся экмоновоциллин, бициллин 1,3,5.

Полусинтетические антибиотики. Их готовят комбинированным способом: методом биологического синтеза получают основное ядро молекулы нативного антибиотика, а методом химического синтеза, путем частичного изменения химической структуры - полусинтетические препараты.

Большим достижением является разработка метода получения полусинтетических пенициллинов. Методом биологического синтеза было извлечено ядро молекулы пенициллина - 6-аминопенициллановая кислота (6-АПК), которая обладала слабой антимикробной активностью. Путем присоединения к молекуле 6-АПК бензильной группы создан бензилпенициллин, который теперь получают и методом биологического синтеза. Широко применяемый в медицине под названием пенициллин, бензилпеиициллин обладает сильной химиотерапевтической активностью, но активен лишь в отношении грамположительиых микробов и не действует на устойчивые микроорганизмы, особенно стафилококки, образующие фермент - ? - лактамазу. Бензилпенициллин быстро теряет свою активность в кислой и щелочной средах, поэтому его нельзя применять внутрь, так как он разрушается в желудочно-кишечном тракте.

Полусинтетические препараты получают также на основе 7-аминоцефалоспориновой кислоты (7-АЦК). Производные 7-АЦК: цефалотин, цефалоридин (цепории) не дают аллергических реакций у лиц, чувствительных к пенициллину. Получены и другие полусинтетические антибиотики, например рифампицип - эффективный противотуберкулезный препарат.

Биологический синтез. Полностью химическая структура установлена одной трети известных антибиотиков и только половина из них может быть получена химическим синтезом. Поэтому микробиологический синтез получения антибиотических средств очень актуален.

Синтез микроорганизмами антибиотиков - одна из форм проявления антагонизма; связан с определенным характером обмена веществ, возникшим и закрепленным ходе его эволюции, то есть это наследственная особенность, выражающаяся в образовании одного и более определенных, строго специфичных для каждого вида антибиотических веществ.

Промышленное получение антибиотиков, как правило, осуществляется путем биосинтеза и включает следующие стадии:

выбор высокопроизводительных штаммов продуцента (до 45 тыс. ЕД/мл)

выбор питательной среды;

процесс биосинтеза;

выделение антибиотика из культуральной жидкости;

очистка антибиотика.

Выбор высокопроизводительных штаммов продуцента. Природные штаммы в большинстве своем малоактивны и не могут использоваться для промышленных целей. Поэтому после отбора наиболее активного природного штамма для повышения его продуктивности применяют различные мутагены, вызывающие стойкие наследственные изменения. Эффективными мутагенами являются мутагены физической природы - ультрафиолетовое и рентгеновское излучение, быстрые нейтроны или химические вещества. Использование мутагенов позволяет не только повысить продуктивность природного штамма, но и получать штаммы с новыми неизвестными для природного микроорганизма свойствами.

Большое значение для биосинтеза антибиотика имеет подбор рационального состава питательных сред.

Понятие "среда для культивирования" включает не только определенный качественный и количественный состав компонентов или отдельных элементов, необходимых для конструктивного и энергетического омена организма (источники азота, углерода, фосфора, источники ряда микроэлементов, витамины и ростовые вещества), но также и физико-химические и физические факторы (активная кислотность, окислительно-восстановительный потенциал, температура, аэрация и др.). Все эти факторы взаимосвязаны и играют существенную роль при развитии микроорганизмов.

Подбирая среды нужного состава, следует учитывать специфику культивируемого организма. Это необходимо для создания оптимальных условий, которые бы способствовали наилучшему росту микроба и биосинтезу необходимых продуктов жизнедеятельности. Например, если организм не может синтезировать некоторые существенные для него жизнедеятельности соединения (как например, аминокислоты или витамины) из простых веществ субстрата, то для его развития следует в состав ввести готовые аминокислоты или витамины. К таким "требовательным" организмам относятся некоторые виды бактерий (молочнокислые и др.). Актиномицеты и преимущественно плесневые грибы, как правило, строят вещества своего тела и довольно сложные по составу конечные продукты обмена из соединений, образуемых из простых компонентов субстрата.

Методы культивирования продуцентов антибиотиков

В современных условиях наиболее перспективным методом выращивания микроорганизмов - продуцентов антибиотиков или других биологически активных соединений признан метод глубинного культивирования. Метод состоит в том, что микроорганизм развивается в толще жидкой питательной среды, через которую непрерывно пропускается стерильный воздух, и среда перемешивается.

Можно указать четыре основные модификации глубинного способа выращивания микроорганизмов.