Производство биоферментных препаратов

· Рекомбинантные -- в которых используются полученные генно-инженерным способом белки-аналоги определённых белковых антигенов возбудителя;

· Пептидные -- использующие химически синтезированные фрагменты белков.

Иммуноферментные тест-системы выпускаются в виде многокомпонентных наборов, содержащих все реагенты, необходимые для проведения анализа, и инструкцию по их применению. В каждом диагностическом наборе содержатся положительный и отрицательный контрольные образцы, которые позволяют оценить качество набора и правильность проведения анализа. ОП в лунках с контрольными образцами должна соответствовать нормам, предусмотренным нормативно-технической документацией (НТД) на данную тест-систему и указанным в инструкции по применению диагностического набора. Только в этом случае набор считается пригодным к использованию, а полученные результаты состоятельными. К каждой партии наборов производителем должен прилагаться паспорт ОБТК на данную серию наборов, в котором отражается её соответствие требованиям НТД и основные контрольные показатели, полученные при выпуске тест-системы. Значительные отклонения получаемых контрольных значений ОП от паспортных свидетельствует либо об изменении качества наборов, либо о допущенных при постановке анализа ошибках. Хотя все ИФА-тест-системы построены по единой схеме, каждый набор имеет свои особенности. Различия могут заключаться в степени рабочего разведения образца (1:10, 1:100, 1:200), в подходе к определению критической оптической плотности, по отношению к которой оценивается результат реакции. Предоставляемые аналитические возможности отдельных тест-систем также могут быть различны. Кроме того, различаться могут составы и способы приготовления используемых растворов, методические детали проведения анализа (число промывок планшета на каждой стадии, продолжительность инкубаций, условия хранения рабочих растворов и т.д.), поэтому при работе с любой тест-системой необходимо строгое соблюдение требований инструкции по её применению.

9. Создание нового класса бактериальных препаратов - пробиотиков

Развитие идеи И.И. Мечникова по целенаправленному изменению состава микрофлоры желудочно-кишечного тракта путем энтерального введения культур молочно-кислых бактерий в качестве антагонистов гнилостных микробов оформилось в направление и привело к созданию нового класса бактериальных препаратов - пробиотиков.

В работе Б.А. Шендерова с соавторами (1997) прослежена история появления термина пробиотики и толкование этого термина различными исследователями. По их мнению, термин пробиотик ввели D.M. Lilly и R.H. Stillwell в 1965 г. для обозначения микробных метаболитов, обладающих способностью стимулировать рост микроорганизмов. В 1970 г. M. Gros, G. Jhielin назвали пробиотиками биологические препараты, представляющие собой стабилизированные культуры симбионтных микроорганизмов или продукты их ферментации, которые способствуют росту последних.

В 1974 г. R.B. Parker назвал пробиотиками микробные препараты (микроорганизмы или их компоненты), регулирующие микрофлору кишечника.

В Дании Т. Riise (1981) предложил под названием пробиотик понимать «…увеличение количества полезных микроорганизмов в пищеварительном тракте животного-хозяина путем введения больших количеств желательных бактерий для переустановления и поддержания идеальной ситуации в кишечнике».

R. Fuller (1989) считает пробиотиками «живую микробную кормовую добавку, которая оказывает полезное действие на животное- хозяина путем улучшения его кишечного микробного баланса».

M. Vanbelle et al. (1990) определяют понятие пробиотик как антоним антибиотиков, т.е. промотор жизни.

По мнению Г.А. Сафонова с соавт. (1992), термин пробиотики был предложен Паркером для обозначения микроорганизмов и продуктов их ферментации, обладающих антагонистической активностью по отношению к патогенной микрофлоре.

По определению G.R. Gibson, M.B. Robertroid (1995), пробиотики - это микробиологические пищевые добавки, которые благотворно влияют на хозяина путем улучшения микробиологического баланса его кишечника.

Рассматривая проблему дисбактериозов, А.А. Воробьев с соавт. (1997) называют биопрепараты из нормальной микрофлоры, используемые для профилактики и лечения этого заболевания, эубиотиками. К ним авторы относят препараты, содержащие бифидо- и лактобактерии, E.coli, споровые формы бактерий. Однако Б.А. Шендеров с соавт. (1997) считают, что эубиотики - термин, который используется в основном российскими исследователями и по своей сути охватывает лишь часть пробиотиков. По мнению Б.А. Шендерова, пробиотики - это препараты и продукты питания, в состав которых входят вещества микробного и немикробного происхождения, оказывающие при естественном способе введения благоприятные эффекты на физиологические функции и биохимические реакции организма хозяина через оптимизацию его микробиологического статуса. Это определение предполагает, что любые живые или убитые микроорганизмы, их структурные компоненты, метаболиты, а также вещества другого происхождения, оказывающие позитивное влияние на функционирование микрофлоры хозяина, способствующие лучшей адаптации его к окружающей среде в конкретной экологической нише, могут рассматриваться как пробиотики.

Отсутствие четкого определения препаратов этой группы, по-видимому, можно объяснить недостаточной изученностью их фармакодинамики. Это стало возможным в связи с тем, что большинство авторов относили пробиотики к кормовым добавкам. На основании результатов наших многолетних исследований мы считаем, что пробиотики следует отнести к лекарственным средствам, которые предпочтительнее использовать для превентивной терапии и в качестве эрготропиков.

По нашему мнению, пробиотики - это стабилизированные культуры микроорганизмов и продукты их ферментации, обладающие свойством оптимизировать кишечные микробиоценозы, подавлять рост и развитие патогенной и условно-патогенной микрофлоры, повышать обменные процессы и защитные реакции организма, активизировать клеточный и гуморальный иммунитет.

P. Lyons и R.J. Fallоn (1992) назвали наше время «наступающей эпохой пробиотиков». И действительно, многочисленные исследования по разработке новых биопрепаратов и дальнейшее изучение механизма их лечебно-профилактического действия дают основание утверждать, что в XXI в. пробиотики в значительной степени потеснят на рынке традиционные и небезопасные для организма препараты, особенно те, которые применяются с профилактической целью. В последний период наряду с пробиотиками в ветеринарной медицине применяют пребиотики и синбиотики. По данным А.И. Калмыковой (2001), к пребиотикам относятся препараты немикробного происхождения, способные оказывать позитивный эффект на организм хозяина через селективную стимуляцию роста или активности нормальной микрофлоры кишечника. Пребиотиками, в частности, являются олигосахариды, например фруктоологосахариды, активно стимулирующие рост бифидобактерий. Полагают, что при рациональной комбинации пробиотиков и пребиотиков возможен максимальный позитивный эффект. Получаемые в результате рациональной комбинации пробиотиков и пребиотиков препараты называют симбиотиками (Шендеров, 1997).

Для производства пробиотиков вначале использовали неспорообразующие бактерии, обладающие свойствами выделять при сбраживании углеводов молочную, уксусную, пропионовую и другие кислоты. Поскольку в нормальной микрофлоре теплокровных преобладает ацидофильная палочка, то в качестве пробиотика стали использовать ацидофильную бульонную культуру (АБК) (Мозгов, 1964).

В дальнейшем для обогащения препарата витаминами группы В к АБК стали добавлять пропионово-кислые бактерии, что, несомненно, улучшило качество препарата и расширило сферу его применения. Этот препарат стали выпускать под названием ПАБК. Применение АБК и ПАБК повышало общую устойчивость животных и улучшало пищеварение, профилактировало развитие инфекционных заболеваний, излечивало желудочно-кишечные заболевания, стимулировало рост молодняка, а также улучшало течение беременности (Мозгов, 1964). В нашей стране в начале 60-х годов XX в животноводстве широко применяли жидкие формы симбионтных микроорганизмов (АБК и ПАБК), которые изготовляли непосредственно во многих хозяйствах и ветеринарных лабораториях. Однако такие недостатки, как нестандартность продукции, неудобства хранения и транспортировки, быстрая потеря активности, способствовали сокращению их выпуска и применения. В настоящее время эти препараты выпускают лишь на отдельных предприятиях и в лабораториях, но эти количества не удовлетворяют спрос, и поэтому некоторые хозяйства, особенно птицефабрики, вновь наладили их производство.

В дальнейшем на основе живых бифидо- и лактобактерий были созданы различные препаративные формы (лактобактерин, бифидумбактерин, ацидофилин, колибактерин и др.), которые до настоящего времени широко используются для восстановления нормальной микрофлоры и лечения желудочно-кишечных заболеваний (Сафонов, Калинина, Романов, 1992; Шубин и соавт., 1994). Бифидо- и лактобактерии, преобладающие в нормальной микрофлоре животных, подавляют размножение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов путем закисления среды обитания и наработки антибиотических веществ. Попадая в желудочно-кишечный тракт, присутствующие в этих препаратах микроорганизмы размножаются, синтезируют многие биологически активные вещества (органические кислоты, липиды, витамины, антибиотики, иммуномодуляторы и т.п.) и повышают неспецифическую резистентность организма-хозяина.

Бифидобактерии предупреждают развитие дисбактериоза. В процессе их жизнедеятельности образуются витамины В1, В2 и К, а также молочная и уксусная кислоты. Кислая среда способствует лучшему всасыванию жиров, витаминов, железа и кальция, задерживает размножение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Со временем расширялся спектр используемых для получения пробиотиков микроорганизмов. Развитие лиофилизационной техники позволило разрешить эти проблемы, теперь пробиотики выпускают в виде сухих препаратов лиофильно высушенных микроорганизмов в чистом виде или в технической форме с питательной средой. В качестве наполнителей для сухих препаратов используют сухое молоко, сахарозу, а для технической формы - кукурузную, рыбную или другую муку. Такие формы наиболее удобны (в отличие от жидких) при групповом назначении животным с кормом.

Создание сухих форм пробиотических препаратов позволило расширить сферу их применения и выпускать более стандартизованные препараты, длительное время сохраняющие свои свойства. Твердые формы бифидобактерина (лиофилизированная биомасса активных бифидобактерий) и лактобактерина (смесь двух штаммов лактобактерий), применяемые для профилактики и лечения у телят желудочно-кишечных заболеваний, показали высокую эффективность (Воронин и соавт., 1990; Зитаре, 1983; Ивановский, 1996; Ихтизаров, 1979).

Следующим этапом в создании препаратов пробиотиков следует считать разработку комбинированных препаратов.

По данным В.В. Поспеловой (1994), совместное культивирование ацидофильной палочки с бифидобактериями совместимо и обеспечивает их сохранение, свойственное для каждого из этих штаммов бактерий. При сочетании бифидобактерий и ацидофильной палочки антагонистический эффект в отношении кишечной палочки значительно выше, чем при использовании каждой культуры в отдельности. Показано также, что ацидофильная палочка стимулирует накопление бифидобактериями специфических антибиотических веществ. Комплексными бактериальными препаратами являются бифилак и бифимол. Эти препараты следует растворять непосредственно перед выпаиванием теплой (37ОС) водой и применять за 30-60 минут до кормления молозивом в течение 5 суток. Препараты, обладая высокой эффективностью в профилактике желудочно-кишечных болезней телят, оказывают стимулирующее действие на их рост и развитие в раннем возрасте.

Продолжается работа по созданию новых, более активных пробиотиков. Большой интерес в качестве основы для пробиотиков представляют бактерии рода Bacillus. Свойства некоторых штаммов этой группы бактерий настолько разнообразны и привлекательны, что только за последние годы на их основе разработано более десятка эффективных препаратов:

- медицинские: биоспорин (B. subtilis + B. licheniformis), гинеспорин (B. subtilis), споробактерин (B. subtilis), бактиспорин (B. subtilis), энтерогермин (B. subtilis), флонивин (B. subtilis), бактисубтил (B. sereus), цереобиоген (B. sereus);

- ветеринарные: бактерин-СЛ (B. subtilis, B. licheniformis), эндоспорин (B. subtilis), БПС-44 (B. subtilis), энтеробактерин (B. subtilis), глоген-8 (B. natto), прималас (B. subtilis), протектин (B. subtilis).

По мнению В.В. Смирнова с соавт. (1995), «наиболее перспективными для создания пробиотиков оказались бациллы, относящиеся к виду Bacillus subtilis, B. pumilus, B. polymyxa. Эти виды стабильно выделяются из разнообразных биотопов, в том числе из организма и тканей теплокровных, насекомых и растений. Для штаммов этих видов характерны высокая устойчивость к неблагоприятным условиям внешней среды, ферментативная и антагонистическая активность. Живые культуры спорообразующих аэробных бактерий из рода Bacillus следует считать экологически чистыми и перспективными для использования в животноводстве.

10. Инсулин человеческий генноинженерный

Инсулин человеческий генноинженерный является распространенным заменителем гормонального инсулина, который производит поджелудочная железа. Используют для синтеза не только генно измененный гормон человека, но и синтетически созданное вещество. Еще одним известным вариантом создания препарата является использование измененного инсулина свиньи, т.к. он по своему составу и функциям наиболее близок к человеческому.

Человеческий генно инженерный инсулин содержится в таких известных препаратах, как Инсуран, Инсуман, Возулим, Пенфилл, Биосулин, Генсулин, Актрапид, Ринсулин, Хумулин, Хумудар, Росинсулин и некоторых других.

Существуют различные виды инсулинов. Одна из классификаций касается срока действия препарата. Согласно ей, инсулин растворимый может иметь короткое и длительное действие. Существуют и комбинированные препараты (инсулин двухфазный), которые содержат вещество и быстрого, и продолжительного действия. Такой тип медпрепаратов называют смесями. Среди них есть те, которые созданы с изменением человеческого гормона. Инсулин двухфазный - это Микстард, Гансулин, Инсуман, Хумулин и Генсулин. Их использовать нужно дважды в день, за полчаса до еды. Это связано с тем, что инсулин двухфазный имеет вещество короткого действия, прием которого зависит от режима питания.

Инженерный аналог человеческого гормона есть среди препаратов со средней степенью продолжительности. Данный инсулин растворимый начинает действовать через час, а пик его активности наступает через 7 часов. Спустя 12 часов он выводится. Человеческий генно инженерный препарат данной группы - это Инсуман, Протафан, Хумулин, Ринсулин, Биосулин, Генсулин, Гансулин, Инсуран.

Человеческий генно инженерный препарат есть и среди группы с коротким действием. Например, к ним относятся Гансулин, Инсуран, Хумулин, Ринсулин, Генсулин, Биоинсулин и Актрапид. Подобный инсулин растворимый начинает действовать через полчаса, а его активность максимального уровня достигает через пару часов. Выводятся такие препараты 6 часов.

Актрапид НМ

Производитель: Novo Nordisk (Дания)

Выпускается в виде раствора для инъекций. Известна также такая форма выпуска, как Актрапид НМ Пенфилл. Он тоже продается в виде раствора для инъекций.

Биоинсулин Р

Производитель: ОАО "Фармстандарт" Россия

Раствор для инъекций 100 МЕ/мл. По 5 мл или 10 мл во флаконы из бесцветного нейтрального стекла, укупоренный колпачком комбинированным.

По 3 мл в картирижд из нейтрального стекла, укупоренный колпачком комбинированным, для использования со шприц ручкой Биоматик ®Пен или Биосулин ®Пен.

По 1 флакону по 5 мл или 10 мл в пачку вместе с инструкцией по применению.

Генсулин Р

Форма выпуска, состав и упаковка

Раствор для инъекций прозрачный, бесцветный.1 мл

инсулин растворимый (человеческий генно-инженерный)100 МЕ

3 мл - картриджи (5) - упаковки ячейковые контурные (1) - пачки картонные.

10 мл - флаконы (1) - пачки картонные.

Производитель

БИОТОН С.А. (BIOTON S.A.)

Адрес: ул. Старостинска 5,02-516 Варшава, Польша

ЗАО «Биотон Восток»

302518, Россия, Орловская область, Орловский район, пос. Куликовский, ул. Ливенская, д.1

Инсуран Р (Инсулин человеческий* (Insulin human*), Insuran R)

Форма выпуска и состав р-р д/ин., 40 МЕ/мл, фл., 10 мл, пач. картон. 1, Институт биоорганической химии РАН(Россия)

Хумулин Регуляр

Производитель: Эли Лилли Восток С.А. (Швейцария)

Форма выпуска

Препарат Хумулин Регуляр выпускается в форме инъекционного раствора во флаконах по 4 мл и 10 мл №1 или картриджах по 3 мл №5, предназначенных для использования в шприц-ручках по типу КвикПен.

Хумулин НПХ

Производитель: Эли Лилли Восток С.А. (Швейцария)

Форма выпуска

Препарат Хумулин НПХ выпускается в форме суспензии, применяемой для п/к введения. Упаковка может содержать: флаконы по 4 или 10 мл; картриджи по 1,5 и 3,0 мл, предназначенных для шприц-ручек типа КвикПен.

Инсуман Базал ГТ 100 МЕ/мл

Производится компанией Авентис Фарма Дойчланд ГмбХ, Германия.

Брюнингштрассе, 50, Д-65926, Франкфурт-на-Майне, Германия.

Форма выпуска

Суспензия для инъекций 100 МЕ/мл во флаконах по 5 мл. В упаковке 5 флаконов вместе с инструкцией по применению.

Ринсулин® НПХ

Форма выпуска Суспензия для подкожного введения 100 МЕ/мл.

По 3 мл препарата в стеклянные картриджи с плунжерами резиновыми из каучука укупоренные комбинированными колпачками из алюминия с диском резиновым. В каждый картридж вложен шарик из стекла с полированной поверхностью.

5 картриджей с инструкцией по применению, укладывают в контурную ячейковую упаковку из поливинилхлоридной пленки и фольги алюминиевой печатной лакированной или материала упаковочного, или без фольги и материала упаковочного помещают в пачку из картона.

Производитель:

ОАО "Национальные биотехнологии, 142279, Россия, Московская область, Серпуховский район, рп. Оболенск, строение 4, корпус 82.

Протафан

Производитель: Novo Nordisk (Дания)

Форма выпуска

Выпускают Протафан в виде суспензии для введения под кожу. Вещество расфасовано в картриджи по 3 мл, по 5 картриджей в упаковке.

Генсулин Н

Форма выпуска, состав и упаковка

Суспензия для п/к введения белого цвета, при стоянии образуется осадок белого цвета и бесцветная или почти бесцветная надосадочная жидкость; осадок легко ресуспендируется при легком встряхивании.1 мл

инсулин-изофан человеческий генно-инженерный100 МЕ

3 мл - картриджи (5) - упаковки ячейковые контурные.

10 мл - флаконы (1) - пачки картонные.

Производитель

"Биотон С.А." (BIOTON S.A.)

Адрес: ул. Старостинска 5, 02-516 Варшава, Польша

Размещено на Allbest.ru