Індукція каталітичної активності плазміногену моноклональним антитілом IV-1c

На підставі проведених експериментів було сформульовано схему індукції каталітичної активності плазміногену антиплазміногеновим моноклональним антитілом IV-1c. Початковою фазою реакції є взаємодія антитіла з плазміногеном за звичайним механізмом антигенного розпізнавання. Зв'язування антитіла з антигенною детермінантою спричиняє механічне напруження молекули Глу-плазміногену, що зрештою призводить до його конформаційних перебудов і переходу у відкриту, Ліз-подібну конформацію. Цей перехід полегшує доступність кринглових структур Глу-плазміногену та створює передумови зв'язування з однією з них С-кінцевого залишку лізину гамма-ланцюга імуноглобуліну. Остання взаємодія є ключовою у переході від лаг-періоду, коли молекула плазміногену амідолітичної активності не виявляє, до другої фази реакції. Швидкість конформаційної перебудови молекули плазміногену, яка призводить до експозиції активного центру свідчить, що для неї достатньо самого по собі факту одночасної взаємодії молекули антитіла з плазміногеном з протеїназним доменом і кринглами. Експонований активний центр плазміногену виявляє активаторну активність стосовно плазміногенів інших комплексів, що зрештою призводить до накопичення в інкубаційному середовищі плазміну та формування позитивного зворотнього зв'язку. Подібна вибірковість, коли активується лише плазміноген комплексу, вказує на неповну доступність активного центру та можливу участь антитіл комплексів в орієнтації молекул плазміногену одна відносно одної для активації.

Висновки

Дослідження некаталітичних активаторів плазміногену та механізмів індукції каталітичної активності серинових протеїназ є значною мірою ускладненими через високу швидкість цього процесу. Індукція каталітичної активності плазміногену моноклональним антитілом IV-1c, завдяки подібності механізмів некаталітичної активації та відносно невеликій швидкості цього процесу, перетворює комплекс Глу-плазміноген-моноклональне антитіло IV-1c на зручну модель вивчення "непрямої" активації проферментів серинових протеїназ.

Доведено, що початковою фазою індукції некаталітичним антиплазміногеновим моноклональним антитілом IV-1c каталітичної активності Глу-плазміногену є його перехід до відкритої Ліз-подібної конформації, який значною мірою залежить від фізико-хімічних умов середовища.

Встановлено, що енергія активації процесу для лаг-фази та другої фази реакції становить 19 і 40 ккал/моль відповідно. Надзвичайно висока енергія активації другої фази реакції свідчить за одночасний перебіг декількох процесів.

Показано, що друга фаза реакції індукції каталітичної активності ефективно інгібується ^?2-антиплазміном з І50% рівною 0,86 пмоль, що є свідченням на користь повної експонованості на цей час активного центру плазміногену комплексу.

Доведено, що індукція каталітичної активності не є реакцією зі стовідсотковим результатом. Імовірність експозиції активного центру серинової протеїнази комплексу є статистичною. В разі моноклонального антитіла IV-1c вона становить 20 відсотків.

Запропоновано схему реакції, яка має таку послідовність: утворення комплексу Глу-плазміноген-моноклональне антитіло IV-1c за механізмом антиген-антитіло; перехід Глу-плазміногену до відкритої Ліз-подібної конформації; взаємодія лізин-зв'язуючих ділянок плазміногену з С-кінцевим лізином гамма-ланцюга антитіла IV-1c; конформаційна перебудова молекули плазміногену з повною експозицією активного центру.

Список опублікованих праць за темою дисертації

Сломинский А.Ю. Каталитические свойства Glu-плазминогена в комплексе с моноклональным антителом IV-1c // Укр. біохім. журнал. - 1999. - Т. 71 № 4. - С. 113-115.

Сломінський О. Ю., Макогоненко Є. М., Колеснікова І. М., Седерхольм-Вільямс С.А. Особливості активації плазміногена в комплексі з антиплазміногеновим моноклональним антитілом IV-1c. // Укр. біохім. журнал. - 1999. - Т. 71, № 5. - С. 44-50.

Особистий внесок здобувача - одержання чистих антитіл, характеристика препарату антитіл, визначення впливу на процес індукції конформації проферменту та визначення швидкості некаталітичної активації, взято безпосередню участь в обговоренні, підготовано публікацію.

Макогоненко Є. М., Яковлев С.О., Сломінський О. Ю., Корольчук В. І., Гриненко Т.В., Соколовська Л. І., Дружина Н.М., Колесникова І. М., Чернишов В. І., Седерхольм-Вільямс С.А. Активація плазміногену антиплазміногеновим моноклональним антитілом IV-1c. Властивості та механізм реакції // Укр. біохім. журнал. - 2000. - Т. 72, № 4-5. - С. 99-108.

Особистий внесок здобувача - одержання чистих антитіл, характеристика препарату антитіл, дослідження впливу фізико-хімічних умов середовища на індукцію каталітичної активності плазміногену моноклонального антитіла IV-1c, здатності ?2-антиплазміну інгібувати плазміноген в комплексі з моноклональним антитілом, залежності швидкості реакцій від концентрацій компонентів або комплексу, індукція каталітичної активності антитілом різних форм плазміногену, участь у визначенні енергії активації процесу індукції каталітичної активності плазміногену та впливу температури на процес індукції, формулювання схеми реакції, взято безпосередню участь у обговоренні та підготовці публікації;

Яковлев С.О., Макогоненко Є. М., Корольчук В. І., Сломінський О. Ю., Колесникова І. М., Седерхольм - Вільямс С.А. Механізм утворення комплексу між плазміногеном і антиплазміногеновим моноклональним антитілом IV-1c // VII Український біохімічний з'ізд, Київ - 1997. - Ч. 1. - С. 31.

T. N. Platonova, E. M. Makogonenko, T. M. Chernishenko, A. Yu. Slominsky, S. A. Cederholm-Williams. Fragment E1 of fibrin induces catalytic activity in prothrombin and factor X // XVIII International Symposium Thrombosis and Haemostasis, Paris, France - 2001. - Suppl. CD3478.

Makogonenko E., Slominsky A., Sokolovskaja L and Cederholm-Williams S-A. Properties of reaction of Glu-Pg activation by antiplasminogen monoclonal antibody IV-1c // XVth International Congress on Fibrinolysis & Proteolysis, Hamamatsu, Japan - 2000. - Vol. 4, Suppl. 1. - P-94. - P 71.

Размещено на Allbest.ru