Вплив надшвидкого заморожування ооцитів корів на їх подальший розвиток in vitro

14. Свидерская Э. А. Влияние времени совместного инкубирования сперматозоидов и яйцеклеток на получение эмбрионов крупного рогатого скота вне организма / Э. А. Свидерская, П. А. Троцкий, O. E. Гузеватый // Тезисы докладов региональной конференции молодых ученых и специалистов. Оренбург, 1997. Ч. 2. С. 107--108. (Дисертантом проведено експериментальні дослідження, аналіз отриманих даних, підготовлено матеріали до друку).

15. Троцкий П. А. Влияние различных концентраций криопротекторов в витрифицирующем растворе при замораживании ооцитов коров / П. А. Троцкий, O. E. Гузеватый // Интенсификация производства продукции животноводства в Республике Беларусь. Жодино, 1998. С. 114. (Дисертантом розроблено схему експериментальних досліджень, проведено експериментальні дослідження узагальнено результати, підготовлено матеріали до друку).

16. Гузеватый O. E. Некоторые особенности криоконсервирования ооцит-кумулюсных комплексов коров / O. E. Гузеватый, П. А. Троцкий // Актуальные проблемы биологии в животноводстве: Третья междунар. конф. Боровск, 2000. С. 394--396. (Дисертант брав участь у підготовці і проведенні експериментів, оформленні матеріалів до друку).

17. Троцький П. А. Вплив різних способів виведення кріопротекторів на життєздатність і дозрівання ооцит-кумулюсних комплексів корів / П. А. Троцький // Молоді вчені - тваринництву: матер. міжнар. конф. мол. вчених - вихованців шкіл видатних академіків М. Ф. Іванова і Л. К. Гребеня. К., 2000. С. 92--93.

18. Троцький П. А. Застосування різних концентрацій етиленгліколю і гліцерину в еквілібраційному та вітрифікаційному розчинах при кріоконсервуванні ооцит-кумулюсних комплексів корів / П. А. Троцький // Конф. молодих вчених та аспірантів. Чубинське, 2003. С. 58--59.

19. Троцький П. А. Використання ендо- і екзоцелюлярних кріопротекторів для кріоконсервування ооцит-кумулюсних комплексів корів / П. А. Троцький // Матеріали конф. мол. вчених та аспірантів. Чубинське, 2004. С. 48--49.

20. Троцький П. А. Використання пайєт з різним діаметром для кріоконсервування ооцит-кумулюсних комплексів корів / П. А. Троцький // Конф. мол. вчених та аспірантів. Чубинське, 2005. С. 63--64.

21. Троцкий П. А. Использование сахарозы для выведения криопротекторов из деконсервированых ооцит-кумулюсных комплексов коров / П. А. Троцкий // Актуальные проблемы интенсификации производства продукции животноводства: тезисы докладов междунар. науч.-производственной конф. Жодино 13-14 октября 2005. Жодино, 2005. С. 75.

22. Гузеватий О. Є. Методики оцінки якості ооцит-кумулюсних комплексів корів для кріоконсервування / О. Є. Гузеватий, П. А. Троцький, Ю. М. Собко // Методики наукових досліджень із селекції, генетики та біотехнології у тваринництві. К., 2005. С 180--187. (Дисертант брав участь в аналізі і узагальненні методів оцінки якості гамет корів та підготовці матеріалів до друку).

23. Троцкий П. А. Замораживание ооцит-кумулюсных комплексов коров в витрификационном растворе с различной концентрацией криопротекторов / П. А. Троцкий // Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных: зб. науч. трудов. Дубровицы - Быково, 2007. С. 122--124.

АНОТАЦІЯ

Троцький П. А. Вплив надшвидкого заморожування ооцитів корів на їх подальший розвиток in vitro. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата сільськогосподарських наук за спеціальністю 03.00.20 - біотехнологія. - Інститут біології тварин УААН, Львів, 2008.

Дисертаційна робота присвячена вивченню комплексного застосування методів отримання, цитоморфологічної оцінки, кріоконсервування, культивування і запліднення in vitro для отримання зародків великої рогатої худоби з деконсервованих ооцитів корів. Вивчено вплив різних концентрацій гліцерину і пропандіолу у вітрифікаційному розчині на життєздатність гамет при заморожуванні ооцит-кумулюсних комплексів корів. Встановлено, що залежно від стадії мейотичного дозрівання ооцитів, характеру оточуючих їх клітин кумулюса вони мають різну чутливість до низьких температур. Визначено ефективність різних способів виведення кріопротекторів за допомогою сахарози після розморожування гамет корів. Досліджено застосування різних культуральних систем для подальшого розвитку в умовах in vitro ембріонів великої рогатої худоби, отриманих з деконсервованих ооцитів. Проведено морфологічний і цитогенетичний аналіз незрілих і зрілих гамет корів, ранніх зародків великої рогатої худоби, отриманих з деконсервованих, дозрілих і запліднених in vitro яйцеклітин корів.

Ключові слова: біотехнологія, корова, яєчники, ооцит-кумулюсні комплекси, кріоконсервування, гліцерин, пропандіол, сахароза, дозрівання і запліднення in vitro, ембріони.

АННОТАЦИЯ

Троцкий П. А. Влияние сверхбыстрого замораживания ооцитов коров на их дальнейшее развитие in vitro. - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук по специальности 03.00.20 - биотехнология. - Институт биологии животных УААН, Львов, 2008.

Диссертационная работа посвящена изучению комплексного применения методов получения, цитоморфологической оценки, криоконсервирования, культивирования и оплодотворения in vitro для получения эмбрионов крупного рогатого скота из деконсервированных ооцитов коров. В основу работы положен тот факт, что современная биотехнология воспроизведения сельскохозяйственных животных, в том числе и крупного рогатого скота, предполагает интенсивное использование гамет самок на различных стадиях их мейотического созревания, а также зигот и эмбрионов различных стадий их развития, полученных как in vivo, так и при помощи технологии оплодотворения in vitro. Кроме того, создание криобанков репродуктивных клеток и эмбрионов - это перспективный путь сохранения генетических резервов пород. В значительной мере успех замораживания гамет самок сельскохозяйственных животных, в том числе и коров, зависит от правильности выбора защитных веществ - криопротекторов. Изучено применение различных концентраций глицерина и пропандиола в витрифицирующем растворе при замораживании ооцит-кумулюсных комплексов коров и определено, что увеличение концентрации данных криопротекторов с 50 до 70 % от общего объема витрифицирующего раствора не приводит к увеличению количества жизнеспособных и созревших вне организма до метафазы-2 мейоза деконсервированых гамет, в то время как уменьшение их концентрации с 50 до 30 % оказывает негативное влияние на жизнеспособность и дальнейшее развитие гамет коров вне организма. Наиболее перспективными для криоконсервирования оказались ооциты коров с плотным многослойным кумулюсом. Из общей популяции гамет, пригодных для культивирования, 19,5 % (5,8±2,2 ОКК на яичник) ооцит-кумулюсных комплексов соответствует данному морфологическому типу, 55,3 % из них после деконсервирования и созревания вне организма достигают метафазы-2 мейоза, а количество полученных эмбрионов после оплодотворения in vitro cоставляет 15,4 %. Изучено влияние пайет разного диаметра (0,5; 1,0; 2,0 мм) при замораживании ооцит-кумулюсных комплексов коров и показано, что наиболее эффективным в этом отношении являются пайеты диаметром 0,5 мм, что отображается в увеличении показателей созревания вне организма деконсервированых гамет (на 15,7 %) и оплодотворения in vitro (на 10,9 %). Сравнительный анализ использования различных способов выведения криопротекторов из гамет коров после их размораживания показал, что использования многоступенчатого способа выведения криопротекторов при помощи раствора сахарозы имеет преимущество по сравнению с одноступенчатым способом (с использованием 1,0 М; 0,75 M; 0,5 M сахарозы). Выявлено, что чувствительность ооцитов коров к низким температурам зависит от стадии их мейотического созревания. Криоконсервирование ооцитов коров на метафазе-2 мейоза повышает как выход жизнеспособных и созревших вне организма гамет после их размораживания и краткосрочного культивирования (на 3,3-8,0 %), так и количество эмбрионов крупного рогатого скота после оплодотворения in vitro деконсервированных яйцеклеток (на 6,2 - 11,7 %) по сравнению с использованием ооцитов на стадиях диплотены и метафазы-1. Сравнительный анализ различных культуральных систем (с использованием клеток гранулезы или кумулюса для приготовления кондициированных сред или монослоя) показал, что они по-разному влияют на дальнейшее развитие in vitro зигот и ранних эмбрионов, полученных из деконсервированных гамет коров. Более эффективным для получения эмбрионов крупного рогатого скота как ранних (2-16 клеточных) так и предимплантационных стадий (морула и бластоциста) их развития оказалось применение монослоя клеток гранулезы (22,8 и 2,5 % соответственно) и кумулюса (21,6 и 3,3 % соответственно). Проведен морфологический и цитогенетический анализ незрелых и зрелых гамет коров, эмбрионов крупного рогатого скота, полученных из деконсервированных, созревших и оплодотворенных in vitro яйцеклеток коров.

Ключевые слова: биотехнология, корова, яичники, ооцит-кумулюсные комплексы, криоконсервирование, глицерин, пропандиол, сахароза, созревание и оплодотворение in vitro, эмбрионы.

SUMMARY

Trotskiy P. A. Influence of deep freezing bovine oocytes on their subsequent development in vitro. - Manuscript.

Dissertation on completion of the scientific degree of the candidate of agricultural science іn speciality 03.00.20 - biotechnology. - Institute of animal biology UAAS, Lviv, 2008.

Dissertational work is devoted to studying of complex application of methods of reception, cytomorfological to an evaluation, cryopreservation, maturation and fertilizations in vitro for reception of bovine embryos from frozen-thawed oocytes. The influence of different glycerol and propandiol concentrations in vitrification solution at bovine oocyte-cumulus complexes freezing is investigated. Various sensitivity bovine oocytes to action of low temperatures depending on their meiotic stage, features of cells surrounding them cumulus and diameter straw is revealed. The effective of various methods for cryoprotectors dilution after thawing with the assist of sucrose is reveal. Application various cultural systems for the subsequent development in vitro the bovine embryos received from frozen-thawed oocytes is researched. Morphological and cytogenetic analysis of unmatured and matured bovine gametes, early embryos of cattle produced from frozen/thawed, matured and fertilized in vitro bovine oocytes.

Key words: biotechnology, cow, ovaries, oocyte-cumulus complexes, cryopreservation, glycerol, propandiol, sucrose, maturation and fertilization in vitro, embryos.

Размещено на Allbest.ru