Імуногістохімічна діагностика та оцінка клітинного імунітету при сальмонельозі курей

9. У курчат, орально інфікованих збудником сальмонельозу, антиген інтенсивніше накопичувався в печінці (14,80±0,028 % на 15-у добу) та селезінці (34,75±0,038 % на 15-у добу). За внутрішньом'язового інфікування курчат спостерігалося накопичення антигена, особливо в бурсі Фабриціуса (6,20±0,014 % на 15-у добу), селезінці (44,10±0,042 % на 30-у добу) та м'язовій тканині (11,00±0,039 % на 15-у добу).

Практичні пропозиції

1. Методичні рекомендації з імуногістохімічної діагностики та оцінки імунітету при сальмонельозі птиці затверджені науково-методичною радою Держдепартаменту ветеринарної медицини України, протокол № 3 від 20. 12. 2006 року.

Список праць, опублікованих за темою дисертації

1. Красников Г.А., Шутченко П.А. Применение иммуноферментного и иммуногистохимического методов анализа для диагностики сальмонеллеза и изучения его иммуногенеза // Ветеринарна медицина: Міжвід.темат.наук.зб. Х., 2004. Вип.83. С. 125-129. (Дисертант здійснив аналіз літературних даних щодо питань застосування імуноферментних та імуногістохімічних методів досліджень при хворобах сільськогосподарських тварин).

2. Изучение субпопуляций лимфоцитов и макрофагов селезенки у цыплят после заражения S. enteritidis и прививки аттенуированной вакциной / А. Берндт, У. Метнер, Г.А. Красников, П.А. Шутченко // Ветеринарна медицина: Міжвід.темат.наук.зб. Х., 2004. Вип.84. С. 94-99. (Дисертант провів дослідження з вивчення динаміки змін субпопуляцій лімфоцитів та макрофагів селезінки курчат після вакцинації проти сальмонельозу, а також після їхнього зараження збудником сальмонельозу. Крім цього, дисертант описав стадійність розвитку імунної реакції).

3. Красников Г.А., Шутченко П.А., Берндт А. Применение иммуногистохимических методов исследования при изучении иммунитета животных // ІІІ конференція Всеукраїнського товариства ветеринарних патологів, 21-23 квітня 2004 р., м. Харків. Х., 2004. Ч.1. С. 35-38. (Дисертант проаналізував стан розвитку досліджень у галузі імуногістохімії з використанням методів визначення поверхневих маркерів клітин імунітету та перспектив їхнього застосування в науковій і практичній ветеринарній медицині).

4. Studying of chicken immune cell subpopulations after infection with salmonella enteritidis and inoculation with attenuated vaccine / A. Berndt, U. Methner, G.A. Krasnikov, P.A. Shutchenko // Animals. Health. Food Quality: International scientific conference proceedings, 15 october 2004, Jelgava, Latvia. Jelgava, 2004. P.36-39. (Дисертант дослідив динаміку формування субпопуляцій імунокомпетентних клітин у селезінці та бурсі Фабриціуса в нормі та після зараження Salmonella enteritidis).

5. Визначення поверхневих маркерів імунокомпетентних клітин у курчат у ранній період імуногенезу при сальмонельозі / А. Берндт, У. Метнер, Г.А. Красніков, П.О. Шутченко //Вісник аграрної науки. 2004. №9. С. 30-33. (Дисертант дослідив динаміку складу відповідальних субпопуляцій Т- і В-лімфоцитів та макрофагів при формуванні імунної відповіді на введення протисальмонельозної вакцини та після зараження курчат Salmonella enteritidis).

6. Застосування методів імуногістохімії при вивченні сальмонельозу птиці / Г. Красніков, П. Шутченко, А. Берндт, У. Метнер // Ветеринарна медицина України. 2004. №12. С. 8-9. (Дисертант провів дослідження з вивчення сальмонельозу птиці із застосуванням імуногістохімічного методу міченого стрептавідин-біотину).

7. Динамика маркированных иммунокомпетентных клеток селезенки и фабрициевой бурсы после введения штаммов S. enteritidis с различной патогенностью / А. Берндт, У. Метнер, Г.А. Красников, П.А. Шутченко // Ветеринарна медицина: Міжвід.темат.наук.зб. Х., 2005. Т.1., Вип.85. С. 112-121. (Дисертант провів дослідження з вивчення динаміки змін субпопуляцій Т-і В-лімфоцитів та макрофагів в селезінці та бурсі Фабриціуса із застосуванням фмуногістохімічної детекції стрептавідин-біотиновим методом.

8. Красников Г.А., Шутченко П.А. Субпопуляции иммунокомпетентных клеток в селезенке и фабрициевой бурсе SPF-цыплят // Ветеринарна медицина: Міжвід.темат.наук.зб. Х.,2005. Т.1., Вип. 85. С. 608-611. (Дисертант дослідив відсотковий вміст показових маркерів імунокомпетентних клітин у SPF курчат у період з 1-ї по 13-у доби після виведення).

9. Фабрициева бурса как индикаторный орган при гистологическом изучении состояния иммунитета у кур / Г.А. Красников, Е.А. Медведь, П.А. Шутченко и др. // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных. Воронеж, 2006. С. 141-147. (Дисертант дослідив імунну активність фабрицієвої бурси за допомогою імуногістохімічного методу).

10. Шутченко П., Красніков Г. Імуногістохімічне вивчення клітинного імунітету при сальмонельозі курчат // Ветеринарна медицина України. 2006. №7. С. 26-27. (Дисертант вивчив зміни субпопуляцій клітин імунітету курей до 51-денного віку).

11. Гистологическое, иммуногистохимическое и морфометрическое изучение фабрициевой бурсы у кур / Г.А. Красников, Е.А. Медведь, П.А. Шутченко, В.Б. Гурьева // Ветеринарна медицина: Міжвід.темат.наук.зб. Х., 2006. Вип.86. С.206-210. (Дисертант визначив вміст дев'яти основних субпопуляцій Т- і В-лімфоцитів та макрофагів у бурсі Фабриціуса).

12. Шутченко П.О., Красніков Г.А. Динаміка кластерів імунітету при сальмонельозі курчат //Проблеми зооінженерії та ветеринарної медицини: Зб. наук. праць. Х.,2006. Вип. 13. Ч.2. С. 253-256. (Дисертант вивчив особливості формування імунітету при зараженні курчат сальмонельозом та після щеплення атенуйованою вакциною).

13. Шутченко П.О. Імуногістохімічний метод діагностики сальмонельозу курей // Ветеринарна медицина: Міжвід.темат.наук.зб. Х.,2007. Вип. 88. С. 268-272.

14. Патент 25815 Україна МПК G01N33/00 Спосіб імуногістохімічної діагностики сальмонельозу курей / Г. А. Красніков, Б. Т. Стегній, П. О. Шутченко; ННЦ “ІЕКВМ”; Заявлено 30.03.2007; Опубл. 27.08.2007, Бюл. № 13.

15. Патент 26855 Україна. Імуногістохімічний спосіб експертизи м'яса і продуктів забою птиці на контамінованість сальмонелами.

Анотація

Шутченко П. О. Імуногістохімічна діагностика та оцінка клітинного імунітету при сальмонельозі курей. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03 - ветеринарна мікробіологія та вірусологія. ННЦ “Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини”, Харків, 2007.

Дисертація присвячена сучасним методам імуногістохімії, які застосовуються при вивченні імунного стану курей після інфікування та щеплення атенуйованою вакциною проти сальмонельозу, а також діагностиці сальмонельозу. Імуногістохімічним вивченням субпопуляцій (кластерів) Т- і В-лімфоцитів і макрофагів: CD3, CD4, CD8, TcR1, TcR2, CVI, IgM, IgG та IgA показана участь цих клітин у формуванні імунної відповіді. Визначені певні особливості формування імунітету при зараженні курчат Salmonella enteritidis та щепленні протисальмонельозною вакциною.

Розроблено новий імуногістохімічний метод діагностики сальмонельозу курей, який дозволяє виявляти специфічний сальмонельозний антиген у тканинах і органах хворої на сальмонельоз птиці та сальмонелоносіїв.

Ключові слова: сальмонельоз, Salmonella enteritidis, імунна відповідь, імунокомпетентні клітини, імуногістохімічні методи, діагностика.

Аннотация

Шутченко П. А. Иммуногистохимическая диагностика и оценка клеточного иммунитета при сальмонеллезе кур. - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук по специальности 16.00.03 - ветеринарная микробиология и вирусология. ННЦ “Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины”, Харьков, 2007.

Диссертация посвящена разработке и применению современных методов иммуногистохимии при изучении иммунного состояния кур после инфицирования и вакцинирования аттенуированной вакциной против сальмонеллеза SPF птицы, а также для обнаружения сальмонеллезного антигена в органах и тканях зараженных птиц. Исследования проведены с использованием чувствительного и высокоспецифичного трехэтапного стрептавидин-биотинового метода индикации поверхностных маркеров. Иммуногистохимическое изучение субпопуляций (кластеров) Т- и В-лимфоцитов и макрофагов: CD3, CD4, CD8, TcR1, TcR2, CVI, IgM, IgG и IgA позволило получить новые и оригинальные результаты. Установлены отличия в характере изменения количества исследуемых кластеров иммунитета в бурсе Фабрициуса и селезенке при заражении. Результаты свидетельствуют о высокой реактогенности исследуемых субпопуляций иммунокомпетентных клеток и демонстративности изменений их количества, в особенности клеток бурсы Фабрициуса как при вакцинации, так и после заражения сальмонеллезом, что дает основания отличать поствакцинальный иммунитет от постинфекционного.

У вакцинированных цыплят, в отличие от инфицированных, наиболее сильно проявлялась активность лимфоцитов с поверхностными маркерами IgG (в бурсе Фабрициуса), а в селезенке - CD3, CD8 и CVI. У зараженных цыплят в бурсе Фабрициуса сильнее проявлялось накопление лимфоцитов с поверхностными маркерами CD3, CD4, CD8, TcR1, TcR, IgA, а в селезенке - клеток с маркером IgМ. Изучено активное участие в формировании иммунитета при сальмонеллезе клеток, которые продуцируют иммуноглобулины. Процент клеток с маркерами IgG и IgA в бурсе Фабрициуса был большим, чем в селезенке, что подчеркивало решающую роль бурсы Фабрициуса в формировании гуморального иммунитета.

Разработаный новый иммуногистохимический метод определения сальмонеллезного антигена позволяет выявлять его в тканях и органах больной сальмонеллезом птицы и сальмонеллоносителей. Метод основан на принципе иммуноферментного выявления специфических антигенов, в частности в нем использована схема двухэтапного непрямого иммуногистохимического анализа. С помощью данного метода в гистосрезах внутренних и иммунокомпетентных органах кур, зараженных сальмонеллезом, был выявлен сальмонеллезный антиген, который имел вид глыбок и располагался в клетках и между ними. Определены динамика и места его накопления в тимусе, печени, селезенке, бурсе Фабрициуса, слепой кишке и мышцах зараженных сальмонеллезом цыплят.

Ключевые слова: сальмонеллез, Salmonella enteritidis, иммунный ответ, иммунокомпетентные клетки, иммуногистохимические методы, диагностика.

Annotation

Shutchenko P. O. Immunohistochemical diagnostics and estimation of cell imunity at salmonellosis of hens. - Manuscript.

Dissertation for Academic degree of Candidate of Veterinary Sciences, speciality - 16.00.03 - Veterinary Microbiology and Virology. NSC “Institute of Experimental and Clinical Veterinary Medicine”, Kharkov, 2007.

The dissertation is devoted to the modern immunohistochemical methods are used for studying immune state of hens after infection and vaccination with attenuated vaccine against salmonellosis, and also for diagnostics of salmonellosis. By immunohistochemical studying T- and B-lymphocyte and macrophage subpopulations (clasters): CD3, CD4, CD8, TcR1, TcR2, CVI, IgM, IgG and IgA it was shown the role of these cells in immune response formation. It was determined the main features of immunity formation chicken infection with Salmonella enteritidis and injection with vaccine against salmonellosis.

The modern immunohistochemical method for diagnostics of salmonellosis of hens was developed. It allows to reveal a specific salmonella antigene in tissues and organs of poultry infected with salmonellosis and when salmonella-carrying also.

Key words: salmonellosis, Salmonella enteritidis, immune response, immunocompetent cells, immunohistochemical methods, diagnostics.

Размещено на Allbest.ru