Тип кормления коров в хозяйстве №1 концентратный (концентрированные корма составляли 45,4% от питательности рациона кормления), в двух остальных полуконцентратный (25,3 28,10%). Во всех хозяйствах анализ питательности рационов кормления по отношению к норме выявил дефицит витамина Д, сахара, фосфора, кальция, серы, йода, кобальта, цинка, в хозяйстве №1 каротина, в хозяйстве №2 сырой клетчатки, в хозяйстве №3 меди. Ниже нормы было сахаропротеиновое отношение, от 0,28 до 0,31.

В хозяйстве №1 среди крупного рогатого скота, поставляемого на убой на ОАО “Новосибирский мясоконсервный комбинат”, при послеубойной экспертизе внутренних органов выявлены поражения печени в виде абсцессов (6,52%), вызванные Fusobacterium necrophorum. Некробактериозом болели преимущественно коровы и нетели после отела.

По результатам биохимического исследования сыворотки крови коров во всех хозяйствах установлены ниже нормы показатели щелочного резерва, каротина, кальция общего, в хозяйстве №3 фосфора неорганического, а в хозяйстве №1 было выше нормы содержание общего белка.

Заболеваемость коров кожной формой некробактериоз колебалась от 8 до 17%.

В хозяйствах №2 и №3 при клиническом исследовании животных обнаружено провисание путового и венечного суставов, рассасывание хвостовых позвонков. В помещениях для животных высокая влажность.

В данных хозяйствах иммунизировали коров вакциной ГОА ИЭВСиДВ в период стойлового содержания. В течение опыта среднемесячная заболеваемость коров в вакцинированных группах животных была достоверно ниже (Р<0,01) по сравнению с контрольными. Коэффициент снижения интенсивности проявления эпизоотического процесса (КСИ) составил: в хозяйстве №1 - 59,78%, в хозяйстве №2 - 41,1%, в хозяйстве №3 - 48,49%.

2.2.3.3 Сочетанное применение вакцинации и неспецифических
мероприятий при оздоровлении от некробактериоза

Опыты по сочетанному применению неспецифических мероприятий и вакцинации при оздоровлении от некробактериоза крупного рогатого скота провели в хозяйстве №4 Тюменской, хозяйстве №5 Новосибирской, в хозяйстве №6 Томской области и хозяйстве №7 Алтайского края (табл. 5).

По данным таблицы 5, в исследуемых хозяйствах среднегодовой удой на 1 фуражную корову колебался от 3600 кг до 4700 кг. В структуре рациона удельный вес сена составлял от 0 до 11,45%, сочных кормов (силос +сенаж) от 68,73 до 83,3%, концентратов от 8,2 до 19,82%.

Тип кормления коров в хозяйствах №4, №6, концентратный (концентрированные корма составляли 42,7046,72% от питательности рациона кормления), а в хозяйствах №5, №7 полуконцентратный (26,8037,91%). Во всех хозяйствах анализ питательности рационов кормления по отношению к норме выявил дефицит витамина Д, сахара, фосфора, йода, а также в хозяйствах №46 серы, №57 кобальта и цинка, №6 сырой клетчатки, кальция, марганца и меди. Ниже нормы было сахаропротеиновое отношение, от 0,34 до 0,50.

В хозяйстве №4 среди крупного рогатого скота, при послеубойной экспертизе выявлены поражения мышечной ткани тазовых конечностей, вызванные Fusobacterium necrophorum. По результатам биохимического исследования сыворотки крови коров в хозяйствах № 4, №5, №6, №7 установлены ниже нормы показатели кальция общего, фосфора неорганического в хозяйствах №5, №6, №7 щелочного резерва, каротина, в хозяйстве №4 общего белка.

Таблица 5 - Зоотехнические и эпизоотические показатели в хозяйствах и результаты оздоровления от некробактериоза при сочетании вакцинации с неспецифическими методами

Примечание: К* концентратный, П** полуконцентратный, КСИ*** коэффициент снижения интенсивности проявления эпизоотического процесса

В хозяйстве №4 при клиническом исследовании животных отмечали признаки остеодистрофии: расслабление связочного аппарата суставов пальца, рассасывание хвостовых позвонков как результат нарушения обменных процессов на почве несбалансированного кормления. В помещениях для животных высокая влажность.

Заболеваемость коров кожной формой некробактериоз колебалась от 14 до 50%. В хозяйствах №4 и №6 также кожной формой некробактериоза болел и молодняк, заболеваемость составляла от 10 до 15% .

В хозяйстве №4 все поголовье животных (600 коров) в октябре было привито противонекробактериозной ГОА ИЭВСиДВ вакциной. В октябре (перед вакцинацией), ноябре, декабре 1994 г. и в апреле 1995 г проведено определение титра антител, который составил соответственно lg 2,40,07; lg 4,00,08, (Р<0,01), lg 3,20,05, (Р<0,01), и lg 2,50,09.

Проведенный биохимический анализ сыворотки крови в октябре, декабре и апреле показал улучшение их показателей. Если в октябре такие показатели обмена веществ как содержание кальция, фосфора и белка были ниже нормативных показателей, то к декабрю произошло их достоверное повышение (Р <0,050,01).

В результате проведенных ветеринарно-санитарных и специфических мероприятий в хозяйстве заболеваемость коров снизилась с 50 до 8%, молодняка с 10 до 4%, КСИ составил соответственно 84 и 60 %.

В хозяйстве №5 в начале стойлового содержания и в конце февраля (ревакцинация) ежегодно (20002005 гг.) всех коров и нетелей двукратно прививали опытной гидроокисьалюминиевой вакциной.

Лабораторные исследования сыворотки крови животных показали, что содержание в ней каротина, кальция, фосфора, белка, щелочного резерва находится в пределах физиологической нормы: каротина 0,5±0,0262 мг%, кальция общего 2,5±0,0162 ммоль/л, фосфора неорганического 1,574±0,036 ммоль/л, общего белка 86,5±0,93 г/л, щелочной резерв 53,76±0,00 об%/СО₂.

Внедрение комплексной системы мероприятий способствовало оздоровлению хозяйства №5 от некробактериоза крупного рогатого скота, КСИ составил 100%, а экономическая эффективность из расчета на 1 рубль затрат составила 4,63 руб.

В хозяйстве № 6 все поголовье животных, начиная с 4-х месячного возраста, иммунизировали инактивированной гидроокисьалюминиевой (ГОА) формолвакциной против некробактериоза животных согласно наставлению по ее применению.

В результате проведенных ветеринарно-санитарных и специфических мероприятий удалось снизить заболеваемость коров с 30 до 9,0%, молодняка с 15 до 3%, КСИ составил соответственно 70 и 80 %. Поражения мышечной ткани тазовых конечностей больше не зафиксировано.

В хозяйстве № 7 все поголовье коров ежегодно, начиная с 2002 года, иммунизировали инактивированной эмульгированной вакциной против некробактериоза животных (ВИЭВ) согласно наставлению по применению.

В результате проведения системы мероприятий по оздоровлению и профилактике некробактериоза с марта 2002 по май 2006 гг. заболеваемость коров некробактериозом уменьшилась с 21,4 до 3,5%, КСИ составил 83,65 %.

2.2.3.4 Одномоментное испытание разных разрабатываемых
противонекробактериозных вакцин в однотипных условиях

В 90-е годы в России разработкой вакцин против некробактериоза занимались несколько научных коллективов: ГНУ ИЭВСиДВ гидроокисьалюминиевая вакцина; МВА и ВГНКИ нековак и нековак-ститул вакцины; ВИЭВ эмульгированная инактивированная вакцина. Нами проведено одновременное испытание этих вакцин в неблагополучном хозяйстве №8 Новосибирской области на одной и той же ферме, при одинаковых условиях кормления, ухода и содержания животных (табл. 6).

По данным таблицы 6, в хозяйстве содержали 1109 коров. Среднегодовой удой на 1 фуражную корову составлял 3500 л. Некробактериозом в основном болели животные после отела, с ярко выраженными клиническими признаками. Заболеваемость животных некробактериозом на протяжении предыдущих 5 лет ежегодно составляла 1124%. Кроме гнойно-некротического поражения дистального отдела конечностей у животных отмечали признаки остеодистрофии: расслабление связочного аппарата суставов пальца, рассасывание хвостовых позвонков. У 1,81% животных при убое на мясокомбинате обнаружены абсцессы печени, вызванные Fusobacterium necrophorum. Животных содержат в типовых коровниках, в стойловый период на привязи, моциона в зимний период практически нет, весной и осенью на необорудованных выгульных дворах в течение двух часов (с 16 до 18 час). В помещениях высокая влажность. Подстилка из соломы, навозоудаление скребковыми транспортерами. В структуре рациона удельный вес сена составлял 11,9 %, силоса 59,5 %, концентратов 11,9%, соломы - 16,7%. Тип кормления коров - полуконцентратный (концентрированные корма составляли 29,7% от питательности рациона кормления). На 1 кормовую единицу приходилось 85,1 г переваримого протеина, сахара - 23,91 г, жира -36,49 г, кальция - 5,87 г, фосфора - 2,76 г, магния - 2,36 г, серы - 1,80 г.

Анализ питательности рациона кормления животных по отношению к норме выявил дефицит витамина Д, сахара, фосфора, йода, кобальта и цинка. Сахаропротеиновое отношение ниже нормы (0,28).

Лабораторные исследования сыворотки крови показали содержание ниже нормы кальция 2,3±0,051 ммоль/л, фосфора неорганического 1,32± 0,09 ммоль/л и щелочного резерва 36,2±0,62 Об% СО₂,. В данном хозяйстве, неспецифические меры профилактики, намеченные нами, руководством хозяйства не были проведены.

Все вакцины применяли согласно наставлениям по их применению. Среднемесячная заболеваемость животных в опытных группах была достоверно ниже по сравнению с контрольными (Р<0,01).

Коэффициент снижения интенсивности проявления эпизоотического процесса при применении вакцин соответственно составил: ГОА ИЭВСиДВ - 50,71 %, нековак - 46,1%, инактивированной эмульгированной (ВИЭВ) - 41,2%.

Таким образом, вакцинация против некробактериоза животных несколько снижает заболеваемость, поэтому для полной ликвидации инфекции в неблагополучных хозяйствах иммунизацию необходимо сочетать с ветеринарно-санитарными мерами.

Таблица 6 - Зоотехнические и эпизоотические показатели в хозяйстве и результаты одномоментного испытания разных разрабатываемых противонекробактериозных вакцин

Примечание: * - достоверный уровень значимости по отношению к контролю, Р<0,01, П** полуконцентратный, КСИ*** коэффициент снижения интенсивности проявления эпизоотического процесса

2.2.4 Оздоровление неблагополучных по некробактериозу хозяйств с разной эпизоотической ситуацией неспецифическими методами

2.2.4.1 Естественная резистентность организма крупного рогатого скота - как условие эффективности неспецифических методов оздоровления

Исходя из имеющихся теоретических предпосылок о зависимости заболеваемости животных от состояния резистентности их организма, провели исследования в неблагополучных по некробактериозу хозяйствах в этом направлении. Установлено, что у больных животных естественная резистентность организма была ниже по сравнению со здоровыми, как при стойловом, так и пастбищном содержании. Эта разница особенно заметна и имела достоверное значение (P<0,05) по лизоцимной и бактерицидной активностям. Если лизоцимная активность у больных животных в стойловый период была 8,61±1,19%, то во время летнего пастбищного содержания она равнялась 16,93±1,56%. Увеличение ее на 8,32% при оценке методами математической статистики оказалось достоверным (Р<0,05). Более высокие значения лизоцимной активности установлено у здоровых животных в стойловый и пастбищный периоды. Так, в летнее время у больных животных лизоцимная активность была 16,93±1,56%, тогда как у здоровых коров в это же время она составляла 22,681,65%. Разность между этими показателями статистически достоверна (Р<0,05).

Фагоцитарная активность больных и здоровых животных изменялась незначительно, как в стойловый, так и пастбищный периоды. Среднее ее значение колебалось от 68,111,24% до 70,911,19%.

Сравнительное изучение естественной резистентности организма крупного рогатого скота в хозяйствах в зависимости от их благополучия по некробактериозу также показало, что она была выше в пастбищный период, как в благополучном, так и неблагополучном хозяйствах. Увеличение зарегистрировано по состоянию бактерицидной и лизоцимной активностям, тогда как показатель фагоцитарной активности изменился незначительно.

Так, в пастбищный период БА у животных в неблагополучном хозяйстве составила 56,711,54%, а в благополучном - 66,241,47% (P<0,05). Лизоцимная активность в сыворотке крови коров резко увеличилась в пастбищный период в неблагополучном хозяйстве по отношению к животным, находившимся на стойловом содержании: показатели ее 20,341,19% и 10,681,39% соответственно.

В одном из неблагополучных по некробактериозу хозяйств Новосибирской области на модельной группе коров изучали динамику показателей естественной резистентности организма с учетом ежемесячной заболеваемости животных в стаде (рис.).

Анализ результатов исследований показал, что уже с ноября началось снижение бактерицидной активности сыворотки крови. Такое явление продолжалось до апреля, после 2-месячного стабильного состояния, в мае она несколько повысилась, в июне, июле и августе отмечено относительно стабильное состояние, а в сентябре началось вновь ее понижение. Разность в показателях по снижению бактерицидной активности с ноября (62,6±0,98%) к апрелю (51,7±1,7%) оказалась статистически достоверной (Р<0,05). Показатели лизоцимной активности сыворотки крови в течение осенне-зимних месяцев, с ноября по февраль снижались медленно, а с марта по апрель кривая ее пошла резко вниз и составила 8,27±0,72%, Р<0,05, тогда как с мая началось ее стабильное увеличение, которое продолжалось до августа 15,9±0,84%. Разность между показателями ЛА в летние и зимние месяцы достоверна (Р<0,050,01).

Рисунок - Показатели естественной резистентности и заболеваемость крупного рогатого скота некробактериозом в неблагополучном хозяйстве

Фагоцитарная активность крови с ноября по май колебалась незначительно (5758%), после чего она стала возрастать до августа (62,0±0,4%), а затем начала снижаться. Увеличение фагоцитарной активности в летние месяцы по сравнению с уровнем зимних достоверно (Р<0,05). При сопоставлении динамик показателей естественной резистентности и заболеваемости, животных некробактериозом можно заметить, что при снижении уровня резистентности происходит увеличение заболеваемости. Особенно это просматривается в отношении бактерицидной и лизоцимной активностей и меньшей степени в сравнении с фагоцитарной активностью. Так, в ноябре, заболеваемость животных была наименьшая (1,5%), а показатели естественной резистентности относительно высокими: БА - 62,6±0,98%, ЛА - 10,1±0,5%, ФА - 59,0±0,7%. В апреле, когда показатели резистентности были низкими (БА 51,7±1,7%, ЛА 8,27±0,7%, ФА 57,0±0,9%) заболеваемость возросла в 3,67 раза и составила 5,5%. С мая по август показатели естественной резистентности начали возрастать, а заболеваемость животных некробактериозом уменьшилась за этот промежуток времени в 2,35 раза и составила 1,7%.

Таким образом, показатели естественной резистентности организма крупного рогатого скота, как бактерицидная, так и лизоцимная активности меняются в течение года. В меньшей степени изменяется фагоцитарная активность крови. Наиболее высокая она в летний период, во время пастбищного содержания, с постановкой на стойловое содержание начинается ее снижение. В хозяйствах, неблагополучных по некробактериозу, показатели резистентности ниже, чем в благополучных хозяйствах, и они ниже у больных животных по сравнению со здоровыми. Динамика показателей естественной резистентности и заболеваемости имеет противоположную направленность, т.е. со снижением показателей естественной резистентности увеличивается заболеваемость и, наоборот, при повышении резистентности снижается заболеваемость, при коэффициенте корреляции: БА- r = 0,924, ЛА- r = 0,600, ФА- r = 0,656.

2.2.4.2 Применение неспецифических мероприятий в неблагополучных хозяйствах

Опыты по применению неспецифических мероприятий при оздоровлении от некробактериоза крупного рогатого скота провели в хозяйстве №9, хозяйстве №10, хозяйстве №11, хозяйстве №12 и хозяйстве №13 Новосибирской области и Алтайского края (табл. 7).

По данным таблицы 7, в исследуемых хозяйствах среднегодовой удой на 1 фуражную корову колебался от 3240 кг до 7700 кг. В структуре рациона удельный вес сена составлял от 6,3 до 14,9%, сочных кормов (силос +сенаж) от 69,3 до 78,1%, концентратов от 10,5 до 24,40%.

Тип кормления коров в хозяйствах №9, №11, №13 полуконцентратный (концентрированные корма составляли 26,3033,75% от питательности рациона кормления), а в хозяйствах №10, №12 концентратный (40,00 52,85 %). Во всех хозяйствах анализ питательности рационов кормления по отношению к норме выявил дефицит витамина Д, сахара, йода, цинка, в хозяйствах №1013 фосфора и кобальта, в хозяйствах №1012 серы, в хозяйстве №10 сырой клетчатки, в хозяйстве №12 каротина, кальция и меди. Ниже нормы было сахаропротеиновое отношение, от 0,34 до 0,48.

В хозяйствах №10, №12, №13 у животных при убое на мясокомбинате обнаружены абсцессы печени от 2,05 до 7,8 %, вызванные Fusobacterium necrophorum. Также в хозяйстве №12 среди первотелок и коров после второго отела были отмечены поражения кожи сосков вымени, обусловленные Fusobacterium necrophorum.

В хозяйстве №11 при клиническом исследовании животных обнаружено провисание путового и венечного суставов, рассасывание хвостовых позвонков. Все эти факторы говорят о том, что у животных нарушен витаминно-минеральный обмен. Это способствует понижению резистентности организма животных.

По результатам биохимического исследования сыворотки крови коров во всех хозяйствах (№ 9№13) установлены ниже нормы показатели щелочного резерва, кальция общего, фосфора неорганического, а в хозяйствах №9, №10, №11, №13 также каротина.

В изучаемых хозяйствах (№9 №13) заболеваемость коров кожной формой некробактериоза колебалась от 8 до 19%. В хозяйствах №9 и №11 кожной формой некробактериоза болел также молодняк, заболеваемость которого составляла от 8 до 15% .

В результате применения неспецифических мероприятий по ликвидации некробактериоза в хозяйстве №9 показатели сыворотки крови животных по кальцию общему достигли нормы в декабре 2002 г. 2,50±0,08 ммоль/л, фосфора и щелочного резерва в феврале 2003 г., соответственно 1,62±0,04 ммоль/л и 55,0±1,2 Об%/СО₂, каротина в декабре 2003 г. 0,41±0,03 мг%. За четырехлетний период оздоровления заболеваемость коров снизилась с 15 до 0,2%, молодняка с 8 до 2 %, КСИ составил соответственно 98,67 и 75 %.

Экономическая эффективность при проведении оздоровительных мероприятий при некробактериозе крупного рогатого скота равнялась 8,8 руб., из расчета на 1 рубль затрат. В результате применения некрогеля и тетрацина для лечения некробактериоза крупного рогатого скота экономическая эффективность из расчета на 1 рубль затрат составила 3,58 руб. Лечебная эффективность некрогеля составила 86%, схемы: некрогель+ тетрацин 93%.

Таблица 7 - Зоотехнические и эпизоотические показатели в хозяйствах и результаты оздоровления от некробактериоза неспецифическими методами

Примечание: К* концентратный, П** полуконцентратный,

КСИ** * коэффициент снижения интенсивности проявления эпизоотического процесса

В результате проведения оздоровительных мероприятий неспецифическими методами в хозяйстве №10 лабораторными исследованиями сыворотки крови установлено нормализация обменных процессов в организме животных, что видно по содержанию кальция 2,90±0,12 ммол/л, щелочному резерву 48,0±0,67 об% СО₂, каротину 0,53±0,042 мг%. Проведенные мероприятия способствовали снижению заболеваемости животных некробактериозом с 15 до 3,0%, КСИ составил 80 %. При проведении оздоровительных мероприятий при некробактериозе крупного рогатого скота экономическая эффективность из расчета на 1 рубль затрат равнялась 4,04 руб.

У животных хозяйства №11 биохимические показатели сыворотки крови: кальций общий, щелочной резерв, фосфор неорганический пришли в норму в 2004 году и составили соответственно 2,51 ± 0,04 ммоль/л, 52,44 ± 1,5 об% СО₂ и 1,57 ± 0,06 ммоль/л. За двухлетний период оздоровления заболеваемость среди коров уменьшилась с 8 до 1,2%, среди молодняка с 15 до 3%, КСИ составил соответственно 85 и 80%.

В результате применения неспецифических мероприятий по ликвидации некробактериоза в хозяйстве №12 с 2001 года по март 2006 заболеваемость коров некробактериозом снизилась с 12 до 3,0%, при КСИ 75%.

В 20042006 гг. биохимические показатели сыворотки крови животных хозяйство №13 по каротину (0,78 ± 0,02 0,94 ± 0,44 мг%); кальцию (2,5 ± 0,03 ммоль/л), фосфору (1,7 ± 0,09 ммоль/л) и щелочному резерву (48,5 ± 0,6 Об% СО₂) пришли к норме. В результате проведения системы мероприятий по оздоровлению и профилактике некробактериоза с марта 2003 года по апрель 2006 заболеваемость коров некробактериозом уменьшилась с 19 до 2,7%, КСИ достиг 85,79%.

2.2.5 Разработка и испытание препаратов для лечения больных некробактериозом животных

На основании данных о том, что при гнойно-некротическом процессе в области дистальных отделов конечностей наряду с возбудителем некробактериоза присутствует сопутствующая микрофлора и, учитывая ее биологические свойства, антибиотико - и лекарственную устойчивость, заключили, что препарат для местного применения при некробактериозе животных должен быть многокомпонентным и многофункциональным.

Исходя из этого положения, в состав препарата включили лекарственные вещества из групп антибиотиков, сульфаниламидов, местноанастезирующих, антисептических средств и формообразователей. Эта многокомпонентная смесь на водорастворимой основе, имеющая форму мази желто-коричневого цвета, со специфическим запахом чеснока, названа некрогель.

Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) некрогеля составила в отношении штамма Fusobacterium necrophorum “ИВ” - 1,0 мкг/мл, изолята Fusobacterium necrophorum - 1,0 мкг/мл, Escherichia coli (изолят) - 7,8 мкг/мл, Staphylococcus aureus (изолят) - 4,3 мкг/мл, Streptococcus (изолят) - 4,2 мкг/мл, Micrococcus (изолят) - 22,4 мкг/мл.

Приведенные данные свидетельствуют, что некрогель обладает высокой антимикробной активностью в отношении микроорганизмов, участвующих в гнойно-некротическом процессе при некробактериозе животных.

Лечебная эффективность некрогеля в научном опыте. Для научного опыта по принципу аналогов подобрали две группы по 9 животных: опытная и контрольная. Лечение больных неробактериозом животных проводили следующим образом. Первоначально у подопытных животных осуществляли хирургическую обработку раны. Затем в опытной группе рану животных обрабатывали некрогелем, а в контрольной мазью Конькова. После этого накладывали марлевую повязку, смену ее проводили через 4 дня. Наблюдение за животными продолжали в течение 20 дней.

В обеих группах животные имели среднюю стадию некробактериозного поражения. За это время в опытной группе из 9 животных выздоровело 9, или 100%. Количество обработок составило 2,560,18, (Р<0,01), продолжительность лечения 9,70,5 дня, (Р<0,01). В контрольной группе из 9 животных выздоровело 7 или 77,78%. Продолжительность лечения составила 14,40,7 дня, число обработок 3,40,2.

У всех больных животных исследовали лизоцимную, бактерицидную и фагоцитарную активности до лечения и через 30 дней после выздоровления. Данные показатели у животных после выздоровления повысились соответственно на 2,85%, 0,92% и 4,15% Однако эта разность при оценке методом математической статистики оказалась недостоверной (Р>0,05). В контрольной группе показатели естественной резистентности остались на одном уровне.

2.2.5.1.2 Токсичность некрогеля для лабораторных животных

В экспериментах определили токсикологические параметры некрогеля для белых мышей при введении в желудок: максимально переносимая доза (МПД) - 4000 мг/кг, LD₁₀₀ - 10000 мг/кг; расчетная LD₅₀ - 6600 мг/кг массы.

При изучении острой токсичности некрогеля на белых крысах за 10-дневный период наблюдений ни одна из подопытных и контрольных животных не пали, что указывает о безопасности этого препарата для белых крыс. Поэтому сочли не целесообразным проводить дальнейшие опыты по определению острой токсичности некрогеля для данного вида животных, а также субхронической токсичности для лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Изучение местно-раздражающего действия некрогеля проводили на кроликах и морских свинках. За животными наблюдали в течение 20 дней, определяя состояние кожи и измеряя толщину кожной складки. Ни в одном случае и ни у одного животного не отметили ее увеличения от исходного состояния. Не отмечали также гиперемии, отека и болезненности при пальпации. Применение некрогеля в виде аппликации на кожу не оказывало какого-либо влияния на гематологические показатели крови у кроликов.

2.2.5.1.3 Действие некрогеля на организм крупного рогатого скота

Исследования проведены на 5 коровах, у которых выстригали волосяной покров на участке средней трети шеи размером 2х3 см и измеряли толщину кожной складки. Затем на подготовленный участок кожи наносили некрогель в дозе 0,250,5 г дважды с интервалом 3 дня. Перед нанесением препарата, затем на 5-й и 10-й день брали пробы крови для гематологического исследования. Наблюдение за состоянием кожи и измерение толщины кожной складки проводили через 2 часа в течение 12 часов, а затем один раз в сутки в течение всего периода наблюдения (20 суток). Ни у одной из коров ни после первого, ни второго нанесения некрогеля на коже не обнаружили никаких изменений и утолщения кожной складки.

Применение некрогеля в виде аппликации на кожу не оказывало какого-либо влияния на гематологические показатели крови у коров.

Препарат стерилен, что подтверждено методом мембранной фильтрации.

Проведенные экспериментальные исследования на морских свинках показали, что мазь некрогель не обладает аллергизирующим действием.

Таким образом, на основании проведенных исследований можно сделать заключение, что в соответствии ГОСТ 12.1.00.776 “Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности” некрогель относится к препаратам 4-го класса опасности - вещества малоопасные.

2.2.5.1.4 Определение лечебной эффективности некрогеля в контролируемых производственных опытах

Проведенные доклинические исследования позволили перейти к испытанию препарата в контролируемых производственных опытах, результаты которых приведены табл. 8.

По данным таблицы 8, некрогель испытан в 8 неблагополучных по некробактериозу хозяйствах на общем поголовье 1989 животных. Лечебная эффективность некрогеля колебалась от 78 до 92,86 % и в среднем по хозяйствам составила 85,67±1,89%, (Р<0,01). В контроле при обработке 1037 больных животных общепринятыми препаратами (присыпка Плахотина, Островского, мазь Вишневсого) лечебная эффективность варьировала от 61,00 до 71,00% и в среднем равнялась 64,76±1,32%.

Препарат некрогель мы впервые испытали при некробактериозе северных оленей. Для производственного испытания некрогеля сформировали две группы оленей: опытная - 195 животных и контрольная - 136 голов. В опытной группе животных обрабатывали некрогелем, в контрольной мазью Вишневского. В опытной группе из 195 оленей выздоровело 152 головы(78%), (Х²=8,6; Р<0,01), в контрольной группе из 136 оленей 86 животных(63,2 %).

Таким образом, некрогель в производственных условиях при обработке больных животных оказался более эффективным препаратом, по сравнению с общепринятыми лечебными средствами. При использовании некрогеля для лечения некробактериоза крупного рогатого скота, экономическая эффективность из расчета на 1 рубль затрат составила 5,39 руб. В контрольной группе животных экономическая эффективность на 1 рубль затрат была в 2,18 раза ниже и составила 2,47 руб.

Таблица 8 - Лечебная эффективность некрогеля при некробактериозе животных в производственных условиях

Примечание:*- достоверный уровень значимости по отношению к контролю, Р<0,01

2.2.5.1.5 Производственное испытание препарата некрогель в ряде регионов страны

В течение 20022006 гг. препарат некрогель широко использовали в ряде регионов России, результаты которых отраженные в табл. 9.

Таблица 9 Лечебная эффективность некрогеля при некробактериозе крупного рогатого скота в разных регионах страны

По данным таблицы 9, мазь некрогель испытана в 65 неблагополучных хозяйствах на 16865 больных животных в 12 субъектах России. Лечебная эффективность мази колебалась от 84 до 90 % и в среднем составила 86,33±0,53%. Больше всего обработано больных животных в Новосибирской области, Республики Татарстан и Алтайском крае, соответственно 9936, 3440, 1920 голов.

Таким образом, на основании проведенный исследований можно сделать заключение, что разработанный препарат некрогель (патент РФ № 2204997 от 27 мая 2003 г.) для лечения больных некробактериозом животных обладает достаточно высокой лечебной эффективностью, составляющей в научных опытах 100%, в производственных условиях 7895,3 %.

2.2.5.2 Разработка препарата местного действия в форме присыпки

Составлено несколько прописей лечебного препарата в форме присыпки. В качестве наполнителя и адсорбента использовали бентонит, энтеросорбенты, тальк.

В состав прописей присыпок входили антисептические и противовоспалительные средства, отсутствовали антибиотики.

Лечебная эффективность присыпок составила на основе бентонита 100%, энтеросорбента - 91,7%, талька - 83,3%.

Присыпку на основе бентонита мы назвали фузоцид. Препарат фузоцид испытали в 6 хозяйствах Новосибирской области, трех хозяйствах Алтайского края и одном хозяйстве Республики Хакасия на 380 больных некробактериозом животных без учета стадии болезни при лечебной эффективности 78,15±1,2%, (Р<0,01). В контрольной группе из 146 больных животных (присыпки Островского, Плахотина) выздоровело 65,34±1,1%.

Таким образом, при производственном испытании лечебная эффективность фузоцида составила 78,15±1,2% а общепринятых лечебных средств (присыпки Островского, Плахотина) была достоверно ниже 65,34± 1,1%.

2.2.5.3 Испытание лечебных препаратов разных фирм-производителей

Мазь профезима серии 191294, предложенная НИКТИ БАВ НПО “Вектор”. Профезим - бактериальный препарат протосубтилин, полученный из Bac. subtilis, иммобилизованный на аминоэтиленцеллюлозе, обладающий способностью быстро очищать гнойно-некротические раны за счет длительного гидролиза денатурированных белков. Лечебная эффективность мази составила 65%.

Процеол - препарат НИКТИ БАВ НПО “Вектор” применили для группового лечения и профилактики некробактериоза крупного рогатого скота в ножных ваннах. Лечебная эффективность в первоначальном контролируемом научном опыте равнялась 95,6%. Дальнейшее испытание процеола на разных группах в разных хозяйствах при терапии гнойных ран показало низкую терапевтическую эффективность (60-70%). Данный препарат, как и профезим при лечении гнойных ран необходимо применять с лечебными средствами, способствующими заживлению ран.

Новый антисептик - повиаргол изготовлен НИИКТИ БАВ НПО “Вектор”. Повиаргол - коллоидное серебро, стабилизированное синтетическим полимером. Лечебная эффективность в научном опыте была лишь 33,3%.

Учитывая полученный недостаточно высокий результат применения мази повиаргола, приготовили из порошкообразного повиаргола гель на водорастворимой основе с добавлением антибиотика тетрациклиновой группы и стабилизатора. Лечебная эффективность препарата составила 100%.

Однако, учитывая очень высокую цену при покупке повиаргола, мы вынуждены были отказаться от разработки препаратов на основе коллоидного серебра.

Оксигель-К - изготовитель ЗАО “Фармтехнология”. Оксигель - К представляет вязкую опалесцирующую массу от желтого до зеленевато-желтого цвета. Лечебная эффективность оксигеля-К составила 100%, присыпки Островского - 85%. Препарат оксигель-К испытали в 3 хозяйствах Новосибирской области на 184 больных некробактериозом животных, из которых выздоровело 76,3±2,3%.

Данный препарат, также как процеол и профезим при лечении гнойных ран необходимо применять с лечебными средствами, способствующими заживлению ран.

2.2.5.4 Разработка и испытание инъекционных лечебных препаратов

Для лечения больных некробактериозом животных предложено большое количество разных препаратов, эффективность которых не во всех случаях высокая. Это связано, по-видимому, с тем, что многие исследователи не учитывали или не указывали в своих работах степень некробактериозного поражения, что, на наш взгляд, может существенно влиять на результаты лечения. Большинство инъекционных препаратов готовят на основе окситетрациклина гидрохлорида. Однако, по данным И.В. Петрухина (1989), окситетрациклин при внутримышечном введении сильно раздражает окружающие ткани на месте введения и вызывает жжение и боль, а также появление инфильтратов. Практикующие ветеринарные врачи хозяйств, также сообщали о раздражающем действии в месте введения инъекционных лечебных средств, и о снижении лечебного эффекта при длительном их применении.

Учитывая вышеперечисленные недостатки лечебных препаратов, нами на основе известных субстанций и использовании соответствующих растворителей, приготовили и испытали два препарата.

Некросептин - комплексный препарат, представляющий собой композит антибиотиков, пролангаторов и анальгезирующих веществ.

Испытание некросептина в зависимости от стадии болезни (начальная, средняя) провели в одном из неблагополучных хозяйств Новосибирской области.

Для эксперимента по принципу аналогов подобрали две группы по 10 коров в каждой. Первая группа - животные с начальной стадией некробактериоза, вторая - со средней. Животным 1-й группы некросептин вводили внутримышечно двукратно с интервалом 4 дня. Коровам 2-й группы одновременно с инъекцией некросептина в такой же дозе и по той же схеме проводили хирургическую обработку раны. Пораженную область смазывали некрогелем и накладывали марлевую повязку. Смену повязок проводили двукратно через 34 дня. Наблюдение за животными продолжали в течение 1 месяца. За это время в группе 1 (начальная стадия некробактериоза) из 10 коров выздоровело 10 (100%). Продолжительность лечения составила 10 дней. В группе 2 (средняя стадия некробактериоза) из 10 коров выздоровело 9 (90,0%). Продолжительность лечения составила 16 дней.

Производственное испытание некросептина провели в трех неблагополучных хозяйствах на поголовье 317 животных. Лечебная эффективность препарата составила 84,7±0,56 %, (Р<0,01). В контрольной группе было 161 больных животных. Животных лечили инъекционным препаратом левотетрасульфин согласно наставлению. Эффективный лечебный результат достигнут 82,0±0,66%.

Однако, как некросептин, так и левотетрасульфин обладают раздражающим действием в месте введения больным животным. Учитывая это, нами разработан новый инъекционный препарат - тетрацин, который не вызывает побочной реакции при введении больным животным.

Тетрацин - комплексный препарат, представляющий собой композит антибиотиков нового поколения, пролангаторов и анальгезирующих веществ.

Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) тетрацина для Fusobacterium necrophorum оставила 0,70,8 мкг/мл.

Тетрацин испытали в неблагополучном по некробактериозу хозяйстве. Для эксперимента по принципу аналогов подобрали две группы по 12 коров в каждой. Первая группа животные с начальной стадией некробактериоза, вторая со средней. Животным первой группы вводили только тетрацин 23 раза. Коровам 2-й группы одновременно с инъекцией тетрацина в такой же дозе и по той же схеме проводили хирургическую обработку раны. Пораженную область смазывали некрогелем и накладывали марлевую повязку. Смену повязок проводили двукратно через 34 дня. Наблюдение за животными продолжали в течение 20 дней. За это время в группе 1 (начальная стадия некробактериоза) из 12 коров выздоровело 12 (100%). Продолжительность лечения равнялась 34 дням. В группе 2 (средняя стадия некробактериоза) из 12 коров выздоровело 11 (91,7%). Продолжительность лечения составила 810 дней.

Производственное испытание тетрацина без учета стадии некробактериоза проведено в 4 неблагополучннных хозяйствах на 394 больных животных, из которых выздоровело в среднем 92,7±0,46 %, (Р<0,01). В контрольной группе при обработке левотетрасульфином 162 животных лечебная эффективность составила 81,0±0,43 %.

Таким образом, один тетрацин или в комплексе с некрогелем показал высокую лечебную эффективность в начальной и средней стадиях некробактериоза крупного рогатого скота. Продолжительность лечения животных больных некробактериозом тетрацином в начальной стадии в 2,5 раза меньше, чем некросептином, средней стадии в комплексе с некрогелем в 2 раза. При производственном испытании лечебная эффективность тетрацина составила 92,7±0,46%, некросептина 84,7±0,56%, левотетрасульфина 81,0±0,43 82,0±0,66%. При внутримышечном введении животным тетрацин не обладал раздражающим действием по сравнению с некросептином и левотетрасульфином.

Тетрацин мы впервые испытали на больных некробактериозом северных оленях в неблагополучном хозяйстве Таймырского автономного округа. Для эксперимента по принципу аналогов подобрали две группы: опытная - 60 оленей, контрольная - 20 голов. Оленям опытной группы одновременно с инъекцией тетрацина проводили хирургическую обработку раны с последующим смазыванием пораженной области некрогелем и накладыванием марлевой повязки. Животным контрольной группы внутримышечно вводили взвесь антибиотиков (окситетрациклина гидрохлорид) на 0,15%-ом растворе агар-агара. Пораженную область конечности обрабатывали мазью Вишневского. В опытной группе из 60 оленей выздоровело 55 (91,6 %), (Х²=17,6; Р<0,01). В контрольной группе из 20 животных выздоровело 9 (45 %).

Таким образом, при производственном испытании на больных некробактериозом северных оленях лечебная эффективность тетрацина совместно с некрогелем оказалась в два раза выше (91,%) по сравнению с взвесью антибиотиков (окситетрациклина гидрохлорид) и на 0,15 % растворе агар-агара и мазью Вишневского.

ВЫВОДЫ

1. Некробактериоз крупного рогатого скота следует рассматривать как системное заболевание, проявляющееся гнойно-некротическим воспалением преимущественно кожных покровов разных участков тела (дистальный отдел конечностей, вымя, хвост), слизистых оболочек (ротовая полость, половые органы), внутренних органов (печень, легкие, почки), при септическом процессе - мышечной ткани. Вторичными движущими силами эпизоотического процесса выступают преимущественно условия кормления и содержания животных.

2. Интенсивность проявления инфекционного и эпизоотического процессов в неблагополучных хозяйствах зависит от состояния естественной резистентности организма, обусловленной питательной ценностью и структурой кормов, продуктивностью животных и условиями содержания. В обследуемых хозяйствах до оздоровления в структуре рациона для коров удельный вес сена составлял от 0 до 17,9 %, сочных кормов 37,3- 83,3%, концентратов от 6,7 до 24,40%, дробины - 37,3%. В хозяйствах при концентратном (40,00 - 52,85 %) типе кормления и продуктивности от 4250 кг до 7700 кг, заболеваемость коров кожной формой некробактериоза колебалась от 8 до 50%, абсцессы печени - от 2,3 до 7,80%, отмечены единичные случаи поражения мышечной ткани и сосков вымени. В хозяйствах при полуконцентратном (25,3 - 37,91%) типе кормления коров и удое на 1 фуражную корову от 2750 до 4000 кг, заболеваемость коров кожной формой некробактериоза колебалась от 8 до 24%, абсцессы печени - от 1,81 до 2,05%.

3. Показатели естественной резистентности организма у больных животных ниже по сравнению со здоровыми, как при стойловом, так и пастбищном содержании. Эта разница особенно заметна и имеет достоверную разность (P<0,05) по лизоцимной и бактерицидной активностям. Так, лизоцимная активность у больных животных в стойловый период составляет 8,61±1,19%, во время летнего пастбищного содержания она повышается до 16,93±1,56%. Динамика показателей естественной резистентности и заболеваемости имеют противоположный вектор, т.е. со снижением показателей естественной резистентности увеличивается заболеваемость и, наоборот, при повышении резистентности снижается заболеваемость, при коэффициенте корреляции: БА- r= 0,924, ЛА- r= 0,600, ФА- r= 0,656.

4. В неблагополучных по некробактериозу хозяйствах рационы кормления не сбалансированы по многим показателям: имеется дефицит витамина Д 40,54 80%, йода - 56,3578,0%, сахара - 7,3764,35%, кобальта - 6,537,4%, фосфора - 5,730,44%, цинка - 8,7446,14%, серы - 5,54-19,0%, меди - 5,28%, кальция - 10,5-14,2%, сырой клетчатки - 9,1-14,0%, каротина - 5,87%, марганца - 12,46%; нарушены обменные процессы организма животных с проявлением клинических признаков остеодистрофии: содержание каротина в сыворотке крови - 0,21±0,02 - 0,39±0,06 мг%, кальция общего - 1,83±0,07-2,40±0,03 ммоль/л, фосфора неорганического - 1,00±0,07-1,40±0,07 ммоль/л, щелочного резерва - 23,2±0,63-44,0±1,2 об%/СО₂. Ветеринарно-санитарное состояние животноводческих помещений не соответствуют комфортным условиям содержания.

5. Оздоровление животных от некробактериоза возможно только после стабилизации обменных процессов за счет нормированного сбалансированного кормления и условий содержания, контролируемых по основным биохимическим показателям сыворотки крови. В оздоравливаемых хозяйствах они повысились до нормы. Заболеваемость коров снизилась с 8-19 до 0,2-3%, КСИ - 75- 98,7%, молодняка с 8-15 до 2-3%, КСИ 75-80%.

6. Применение вакцин для профилактики и ликвидации некробактериоза животных способствует достоверному снижению заболеваемости крупного рогатого скота (P<0,01), КСИ составляет от 41,1 до 59,78 %. Вакцинация животных с одновременным улучшением ветеринарно-санитарного состояния хозяйств способствует снижению заболеваемости: коров с 14-50% до 0-9%, КСИ 70- 100%; молодняка - с 10-15% до 3- 4%, КСИ- 60- 80%.

7. Разработаны и предложены для ветеринарной практики лечебные препараты:

- комплексный лечебный препарат для местного применения - некрогель, обладающий высокой антимикробной активностью в отношении Fusobacterium necrophorum и сопутствующей микрофлоры. При производственном испытании на поголовье 1989 животных лечебная эффективность составила 85,67±1,89%, (Р<0,01), экономический эффект на 1 рубль затрат - 3,58-5,39 руб.;

- препарат для местного применения в виде присыпки - фузоцид, показавший при производственном испытании на 380 больных некробактериозом крупном рогатом скоте без учета интенсивности инфекционного процесса - 78,15±1,2%, (Р<0,01);

- инъекционные препараты тетрацин и некросептин для применения при осложненной стадии болезни. При производственном испытании на крупном рогатом скоте лечебная эффективность составила: тетрацина - 92,7±0,46%, (Р<0,01), некросептина - 84,7±0,56%, (Р<0,01), в контроле (левотетрасульфин) - 81,0±0,43%; на северных оленях совместное применение тетрацина с некрогелем давало положительный результат в 91,7%, (Х²=17,6; Р<0,01), взвеси антибиотиков (окситетрациклина гидрохлорид) на 0,15 % растворе агар-агара с мазью Вишневского - 45,0%.

8. Усовершенствованный метод механического расчленения биоматериала из пораженной конечности увеличивает эффективность диагностики некробактериоза на 33,3% и может быть рекомендован для ветеринарных диагностических лабораторий. Диагностическая тест-система полимеразной цепной реакции с гнездовыми праймерами обладает строгой специфичностью и позволяет выявлять в биологических образцах патогенный биотип АВ F. necrophorum subsp. necrophorum и может быть использована в качестве экспресс-метода для диагностики кожной формы некробактериоза.

9. По морфологическим, протеолитическим, биохимическим, патогенным и гемагглютинирующим свойствам одна культура F. necrophorum из 10 изученных идентифицирована как штамм (зарегистрированный при депонировании под номером B-845).

10. Внедрение оптимизированной системы контроля эпизоотического процесса некробактериоза крупного рогатого скота, основанной на организационно-хозяйственных, ветеринарно-санитарных и лечебно-профилактических мероприятиях, воздействующих на все звенья эпизоотического процесса - восприимчивое животное, возбудителя инфекции и факторы передачи возбудителя, способствует оздоровлению хозяйств или стабилизации эпизоотического процесса на низком уровне. Экономическая эффективность системы мероприятий из расчета на 1 рубль затрат составила от 4,63 до 8,8 руб.