Изучение реакции специфической иммунной системы на вирусный гепатит В и С

Состав тест-системы:

1.Иммуносорбент - планшет полистироловый, в лунках которого србированны моноклональные антитела мыши к HCV.

2. Положительный контрольный образец (ПК).

3. Отрицательный контроль (ОК).

4.Конъюгат - антитела диагностические против Ig M и IgG человека с пероксидазой хрена.

5. Раствор для разведения конъюгата (РРК).

6. Раствор для разведения образцов.

7.ТМБ-3,3-тетрометилбензидин.

8.Цитратный буферный раствор с перекисью водорода (ЦБР).

9. Стоп-реагент.

Тест-система предназначена для серологической диагностики вирусного гепатита С - выявления суммарных антител к вирусному гепатиту С (total) у заболевших, либо перенесших гепатит пациентов. Используется для первичного (скринингового) исследования сывороток и плазмы крови пациентов с подозрением на вирусный гепатит С. Набор рассчитан на проведение 90 анализов, исключая контроли. Для исследования небольших партий проб возможны 12 независимых постановок ИФА по 4 анализа, исключая контроли.

Принцип действия

Основой тест-системы являются полипептиды, содержащие антигенные детерминанты белков, кодируемых структурой (сor) и неструктурной (NS3,NS4,NS5) областями генома С, сорбированные на поверхности лунок полистироловых планшетов. При наличии в образце, внесенном в лунку планшета, антител к H оно образуют комплекс антиген-антитело, который при внесении в лунку конъюгата-антител против иммуноглобулинов человека, меченных пероксидазой хрена, щбразует комплекс антитело-конъюгат, выявляемый по цветной реакции с ТМБ.

Ход исследования

В каждую лунку внести па 80 мкл раствора для разведения образцов. Затем внести по 20 мкл контрольных и исследуемых образцов согласно карте. Содержимое лунок изменяет свой цвет

Покрытый липкой лентой или крышкой планшет выдержать в инкубаторе в течение 60 минут при температуре 37,0°С.

По окончании инкубации промыть лунки планшета четыре раза. Полностью удалить влагу из лунок и внести в каждую лунку по 100 мкл рабочего раствора коньюгата. Планшет закрыть крышкой и инкубировать 30 минут при температуре 37,0°С. По окончании инкубации промыть лунки планшета пять раз. В каждую лунку внести по 100мкл хромогена, выдержать 30 минут при температуре от 18 до 25° С в защищенном от света месте, и промыть планшет 5 раз рабочим отмывающим раствором.

Реакцию остановить добавлением во все лунки по 150 мкл стоп-реагента и через 2-3 минуты провести учет результатов.

Учет результатов

Фотометрию проб проводят при следующих условиях: длина волны измерения-450 нм, фоновой волны-620-680 нм. Присутствие или отсутствие поверхностного антигена вируса гепатита HBs-Ag определяется отношением оптической плотности.

Результаты ИФА регистрировать спектрометрически, измеряя оптическую плотность при двух длинах волн- 450 нми 620-650 нм. Результаты учитывают при соблюдении следующих условий:

оптическая плотность в лунках с ОП_к+-не менее 1,0;

оптическая плотность в лунках с ОП_к-не более 0,25.

Рассчитать критическое значение оптической плотность по формуле: ОП_крит= ОПк- +0,200

Где 0,200 - коэффициент, определяемый методом статистической обработки результатов постановки ИФА на предприятии-изготовителе. Если значение оптической плотности с образцом выше или равно ОП _крит., образец должен быть исследован повторно в данном тесте не менее чем в двух лунках. Если при повторном исследовании величина ОП образца в обеих лунках меньше ОПкрит., то образец учитывается как отрицательный. Все повторно положительные образцы должны быть протестированы в подтверждающем конфирматорном - тесте [7,11].

Набор реагентов для подтверждения наличия поверхностного антигена вируса гепатита В в сыворотке или плазме крови человека методом иммуно-ферментного анализа - ИФА- анти HCV - П

Набор предназначен для подтверждения наличия антител к различным детерминантам вируса гепатита С в сыворотке крови или плазме крови человека «in vitro» методом непрямого и конкурентного твердофазного иммуноферментного анализа.

Состав тест-системы:

1. Иммуносорбент - планшет полистироловый, в лунках которого србированны моноклональные антитела мыши к HBs-Ag.

2. Отрицательный контроль коньюгат

3. Положительный контроль.

4. Раствор для разведения коньюгата.

5. Раствор для разведения сывороток.

6 Буферный раствор для субстрата.

7 Хромоген.

8. Субстратный буферный раствор.

9 Фосфотно-солевой твиносодержащий буферный раствор.

10. Стоп-реагент.

Ход исследования

I - внесение исследуемых образцов и контролей в планшет согласно карте (таблица 1).

II - инкубация образцов сыворотки (плазмы) крови человека с белками иммуносорбента и подтверждающим агентом при температуре (37±1) °С в течение 30 минут.

III - промывка планшета, внесение коньюгата, инкубация с конъюгатом при температуре (37±1) °Св течение 30 минут.

IV - промывка планшета, внесение рабочего раствора субстрата, инкубация в темном месте в течение 15 минут.

V - остановка реакции и учет результатов.

VI - обработка полученных результатов.

Таблица 1 - Схема внесения образцов в лунки планшета

Номер лунки	Номер стрипа	Вид антитела
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	К+	К+	3	7	11	15	19	23	27	31	35	39	core*
B	К+	К+	3	7	11	15	19	23	27	31	35	39	NK*
C	К-*	К-	4	8	12	16	20	24	28	32	36	40	core
D	К-	К-	4	8	12	16	20	24	28	32	36	40	NK
E	К-	К-	5	9	13	17	21	25	29	33	37	41	core
F	К-	К-	5	9	13	17	21	25	29	33	37	41	NK
G	1*	2	6	10	14	18	22	26	30	34	38	42	core
H	1	2	6	10	14	18	22	26	30	34	38	42	NK

Примечания: К+* - положительный контроль; К-* - отрицательный контроль; 1* - номер пробы; core* - это специфические антитела к отдельным структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С; NK* - неструктурные антителавыявляются на самых ранних этапах сероконверсии.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью компьютерной программы «Excel».

3. Результаты исследований и их обсуждение

Информация, полученная в результате изучения литературных источников, свидетельствует о том, что вирус гепатита при попадании в организм человека вызывает иммунную реакцию в виде специфического и неспецифического иммунного ответа. Диагностика вирусной инфекции осуществляется в несколько этапов, включающих первичный сбор данных и лабораторные исследования по определению антигенов вируса или антител в организме человека.

Скрининговому обследованию на наличие HBsAg и HCV(total) в периферической крови предшествовало первичное эпидемиологическое тестирование на базе учреждений здравоохранения, представленных в таблице 2.

Таблица 2 - Количество обследованных на ВГ в городе Светлогорске в IV квартале 2014 года

Учреждение или группа пациентов	Пол	Месяц	Всего
		октябрь	ноябрь	декабрь
Поликлиника (кабинет инфекционных заболеваний)	м	110	107	102	319
	ж	86	86	70	242
Кожно-венерологический диспансер	м	7	2	2	11
	ж	2	1	1	4
Наркологический диспансер	м	52	38	34	124
	ж	17	24	8	49
Медицинские работники	м	11	7	6	24
	ж	71	32	62	165
Всего	м	180	154	144	478
	ж	176	143	141	460
		356	297	285	938

Согласно Постановлению Санитарных норм и правил «Требования к организации и проведению санитарно-противоэпидемических мероприятий, направленных на предупреждение возникновения и распространения вирусных гепатитов» и признании утратившим силу постановления Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 14 ноября 2011 г. № 112. В группу повышенного риска инфицирования ПВГ входят следующие лица: потребляющие наркотические средства и их аналоги; имеющие беспорядочные половые связи; проживающие совместно с пациентами, инфицированными вирусами ПВГ; регулярно получающие кровь и ее компоненты, имеющие в анамнезе трансплантацию органов и (или) тканей, биологических материалов человека, другие инвазивные медицинские вмешательства; дети, рожденные от инфицированных матерей. В группу риска профессионального заражения входят: обучающиеся в учреждениях среднего специального образования, учреждениях высшего образования по профилю образования «Здравоохранение»; медицинские работники, работники других специальностей, которые в процессе своей деятельности имеют контакт с кровью и ее компонентами или другими биологическими материалами человека. При выявлении у пациентов двух и более критических анкетных признаков, например, контакт и др. их включали в группу риска.

При первичном скрининговом лабораторном обследовании на наличие специфических серологических маркеров ВГ было обследовано 938 человек, 478 мужчин и 460 женщин, представляющих пациентов кабинета инфекционных заболеваний (319 и 242), кожно-венерологического кабинета (11 и 4), наркологического диспансера (124 и 49 соответственно). Медицинские работники составили 189 человек, в том числе 24 мужчин и 165 женщин. Таким образом, обследовано примерно одинаковое количество мужчин и женщин, в то время как среди медицинских работников женщины составили 87 %, так в этой сфере деятельности они преобладают. Ежемесячно обследовано примерно одинаковое количество человек: 356, 297, 285 в октябре, ноябре и декабре, соответственно.

Экспериментальные исследования по изучению показателей специфической ИС на наличие или отсутствие антител к поверхностному антигену вируса гепатита В и антител ВГС (total) методом ИФА в сыворотке крови 938 пациентов были выполнены в лаборатории серодиагностики инфекционных заболеваний УЗ «Светлогорская ЦРБ» в IV квартале 2014 года.

В результате скринингового обследования получены данные оптической плотности образцов сыворотки крови пациентов на наличие поверхностного антигена к вирусам ВГ, представленные в виде протоколов №№ 1 - 10 (таблицы 3 57) по ВГВ

Результаты обследования по ВГВ

В таблице приведена оптическая плотность ? десятичный логарифм непрозрачности или взятый с обратным знаком логарифм коэффициента пропускания пучка света через исследуемый в разной степени окрашенный раствор в зависимости от наличия антигена (таблица).

Таблица 3 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 1

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,100	0,011	0,040	0,035	2,110	0,022	0,034	0,020	0,019	0,031	0,031	0,031
B	3,170	0,034	0,020	0,015	0,020	0,045	0,028	0,011	0,026	0,012	0,020	0,035
C	3,060	0,038	0,700	0,020	0,013	0,010	0,011	0,032	0,011	0,011	0,014	0,023
D	0,009	0,020	0,022	0,048	0,030	0,016	0,010	0,016	0,013	0,331	0,031	0,031
E	0,012	0,011	2,900	0,342	0,034	0,020	0,016	0,035	0,035	0,011	0,020	0,018
F	0,010	0,020	0,011	0,040	0,011	0,015	0,020	0,060	0,011	0,034	0,021	0,016
G	0,012	0,015	0,015	0,020	0,014	0,032	0,020	0,033	0,030	0,038	0,031	0,022
H	0,011	0,037	0,046	0,011	0,020	0,015	0,037	3,110	0,056	0,011	0,037	0,011
Примечания 1 красным отмечены лунки где внесен положительный контроль. 2 зеленым отмечены лунки где внесен отрицательный контроль. 3 исследуемые образцы ? G1 ? H12.

ОП критическая для данного исследования составила 0,070. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (0,700; 0,331; 2,900; 0,342; 2,110; 3,110) являются положительными и указанные 6 проб подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 4 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,060	3,111	3,170	0,060
Отрицательный контроль	0,009	0,010	0,012	0,001
Исследуемые образцы	0,011	0,164	3,100	0,259
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,012	0,024	0,060	0,010
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,331	1,582	3,110	1,124

Таблица 5? Серологический протокол скринингового обследования на Наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 2

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	2,988	0,012	0,040	0,015	0,020	2,020	0,034	0,030	0,015	0,010	0,011	0,015
B	3,004	0,014	0,028	0,015	0,020	0,027	0,015	0,009	0,026	0,012	0,015	0,025
C	3,034	0,018	0,022	0,020	0,008	0,440	0,035	0,032	0,034	0,035	0,014	0,043
D	0,015	0,020	0,022	0,032	0,020	0,008	0,010	0,016	0,009	1,050	0,020	0,015
E	0,013	0,024	0,014	0,012	0,034	0,020	0,016	0,038	0,035	0,011	0,009	0,009
F	0,018	0,020	0,024	0,010	0,510	0,035	0,020	0,035	0,008	0,034	0,021	0,016
G	0,012	0,015	0,015	0,009	0,014	0,032	0,010	0,033	0,030	0,038	0,031	0,027
H	0,043	0,014	0,036	0,012	0,020	0,008	0,037	0,019	2,056	0,028	0,017	0,026

ОП критическая для данного исследования составила 0,075. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (0,51; 0,44; 2,02; 2,056; 1,05) являются положительными и указанные 6 проб подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 6 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	2,988	3,008	3,034	0,016
Отрицательный контроль	0,013	0,015	0,018	0,001
Исследуемые образцы	0,008	0,089	2,056	0,127
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,008	0,021	0,043	0,008
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,440	1,215	2,056	1,124

Таблица 7 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 3

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
A	3,156	0,026	0,040	0,015	0,010	0,020	0,024	0,010	0,045	0,017	0,011
B	3,090	0,014	0,021	0,013	0,020	0,017	0,015	1,530	0,026	0,012	0,009
C	3,140	0,038	0,012	0,020	0,020	0,030	0,035	0,009	0,024	0,015	0,014
D	0,010	0, 013	0,022	0,019	0,021	0,035	0,010	2,120	0,033	0,010	0,010
E	0,012	0,018	0,014	0,009	0,014	0,020	0,016	0,010	0,009	0,011	0,016
F	0,010	0,010	0,024	0,010	0,010	0,009	0,020	0,035	0,010	0,014	0,021
G	0,012	0,013	0,015	0,010	0,016	0,032	0,020	0,033	0,010	0,018	0,009
H	0,223	0,014	0,009	0,012	0,020	0,009	0,017	0,019	0,016	0,028	0,037

ОП критическая для данного исследования составила 0,071. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (0,223; 1,53; 2,12) являются положительными и указанные 3 пробы подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Обработка результатов анализа:

Расчет для прямого и конкурентного ИФА средне значение ОП для лунок с К^- (не должно превышать 0,2 ОЕ), ОП_ср К^-, для лунок с К⁺ср( не должно быть меньше 1,0).

Таблица 8 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,090	3,128	3,156	0,025
Отрицательный контроль	0,010	0,011	0,018	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,089	2,056	0,127
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,021	0,043	0,006
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,223	1,291	2,120	0,712

Таблица 9 ? Серологический протокол ИФА конфирматорного теста №1

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
А	3,350	0,633	1,800	0,064	3,293	3,464	3,16	3,081	3,221	3,097	3,635	2,028
B	3,341	0,565	2,596	2,467	3,522	3,392	3,592	2,809	2,809	3,106	1,933	0,498
C	0,023	0,016	3,376	3,297	3,528	3,047	3,356	2,250	2,25	2,542	1,373	0,493
D	0,018	0,019	3,417	3,059	3,351	1,093	1,670	0,616	0,616	0,755	0,333	0,428
E	0,019	0,019	3,276	1,015	1,069	0,916	0,018	0,017	0,017	3,220	0,008	0,017
F	0,255	0,326	0,162	2,010	0,226	0,345	0,057	0,278	0,278	2.522	0,006	0,018
G	0,212	0,317	0,117	0,020	0,183	0,329	0,078	0,260	0,26	1,778	0,075	0,013
H	0,165	0,344	0,134	0,116	0,197	0,325	0,067	0,399	0,399	0,610	0,011	0,010

1 Положительные контроли ? А1, В1.

2 Отрицательные контроли ? С1,D1, E1.

3 Исследуемые образцы ? F1 ? H12

4 Среднее значение отрицательных проб ? ОП в пр. анализе 0,020;

5 Среднее значение отрицательных проб ? ОП в кон. анализе 0,018;

6 Среднее значение положительных проб в пр. анализе - 3,345;

7 Среднее значение положительных проб в кон. анализе - 0,599;

8 Минимальное значение оптической плотности пробы ? 0,02;

9 Максимальное значение оптической плотности пробы ? 3,635;

10 Среднее значение оптической плотности пробы ? 1,3;

11 Стандартное отклонение ? 1,24.

Расчет проводим по формуле:

- для прямого ИФА ОП_крит.= ОП_ср К^-+0,06;

- для каждого образца исследуемой сыворотки в конкурентном ИФА

К_{подавления =} (ОП _{прям.ИФА} - Оп_конк._ИФА) / (ОП_{прям.ИФА} - ОП_ср К-)

Результаты расчёта представлены в таблице(10).

Таблица 10 - Результаты конфирматорного теста ИФА №1

Коэффициент подавления

Результат

Коэффициент подавления

Результат

Коэффициент подаления

Результат

Коэффициент подавления

Результат

Коэффициент подавления

Результат

Коэффициент подавления

Результат

0,82

пол

0,98

пол

-0,05

отр

0,03

неопр

-0,13

отр.

неопр

0,84

пол

0,05

неопр.

0,04

отр

0,22

неопр

0,31

неопр

отр

-

отр

0,02

неопр

0,14

неопр

0,33

неопр

0,39

неопр

отр

-

отр

0,11

неопр

0,68

пол

0,64

пол

0,48

неопр

отр

-

отр

0,69

пол

0,15

отр

-

отр

отр

отр

-0,30

отр

-13,04-

отр

-0,58

отр

отр

1,06

пол

отр

-0,55

отр

1,0-

пол

-0,90

отр

отр

0,77

пол

отр

-1,24

отр

0,16

отр

-0,72

отр

отр

1,02

пол

отр

При проведении конфирматорного теста 16 образцов сывороток крови человека в 5 было подтверждено наличие HBsAg.

Таблица 11 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 4

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	2,960	0,009	0,020	0,025	0,020	2,024	0,034	0,030	0,009	0,020	0,031	0,015
B	2,910	0,034	0,028	0,015	0,020	0,027	0,015	0,011	0,026	0,012	0,035	0,025
C	2,930	0,028	1,215	0,020	0,012	0,022	0,025	0,032	0,009	0,035	0,014	0,009
D	0,013	0,020	0,022	0,032	0,020	0,035	0,009	0,016	0,033	0,014	0,020	0,015
E	0,012	0,024	0,014	0,014	0,034	0,020	0,016	0,038	0,035	0,011	0,450	0,018
F	0,009	2,720	0,024	0,010	0,009	0,035	0,020	0,014	0,010	0,014	0,021	0,016
G	0,012	0,010	0,015	0,020	0,014	0,032	0,020	0,033	0,030	0,018	0,016	0,027
H	0,023	0,014	0,056	0,014	0,020	0,840	0,027	0,019	0,009	0,028	0,037	0,026

ОП критическая для данного исследования составила 0,071. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (2,72; 1,215; 2,024; 0,840; 0,450) являются положительными и указанные 5 проб подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 12 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	2,910	2,933	2,960	0,017
Отрицательный контроль	0,009	0,011	0,013	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,102	2,720	0,152
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,021	0,056	0,007
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,450	1,449	2,720	0,736

Таблица 13 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 5

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,210	0,009	0,020	0,035	0,012	1,821	0,034	0,030	0,009	0,010	0,022	0,014
B	3,195	0,012	0,028	0,015	0,020	0,017	0,015	0,011	0,026	0,012	0,035	0,019
C	3,230	0,028	0,014	0,020	0,012	0,020	0,035	0,032	0,009	0,035	0,014	0,009
D	0,012	0,020	0,022	0,022	3,120	0,035	0,009	0,016	0,033	0,014	0,020	0,015
E	0,012	0,024	0,014	0,014	0,034	0,012	0,016	0,038	0,014	0,011	0,009	0,014
F	0,010	0,020	0,024	0,010	0,009	0,035	0,020	0,014	0,040	0,024	0,021	0,016
G	0,012	0,015	0,015	0,008	0,014	0,032	0,020	0,033	0,030	0,012	0,016	0,027
H	0,019	0,014	0,056	0,014	0,020	0,009	0,037	0,014	0,009	0,028	0,037	0,016

ОП критическая для данного исследования составила 0,071. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (3,12; 1,821) являются положительными и указанные 2 пробы подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 14? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,195	3,117	3,230	0,012
Отрицательный контроль	0,010	0,011	0,012	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,076	3,120	0,109
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,020	0,051	0,008
Исследуемые образцы с > ОПкрит	1,821	2,470	3,120	0,650

Таблица 15 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 6

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
A	3,140	0,016	0,020	0,014	0,009	0,020	0,014	0,010	0,015	0,008	0,031
B	3,060	0,014	2,730	0,015	0,020	0,027	0,015	1,563	0,014	0,012	0,035
C	3,120	0,018	0,012	0,020	0,014	0,030	0,014	0,009	0,024	0,014	0,014
D	0,016	0, 008	0,022	0,019	0,021	0,015	0,010	0,316	0,033	0,010	0,020
E	0,014	0,028	0,014	0,012	0,014	1,420	0,016	0,010	0,035	0,011	0,016
F	0,014	0,020	0,024	0,010	0,010	0,035	0,020	0,035	0,940	0,014	0,021
G	0,012	0,008	0,015	0,010	0,019	0,032	0,020	0,033	0,030	0,018	0,021
H	0,013	0,014	0,016	0,042	0,020	0,040	0,017	0,019	0,016	0,008	0,027

ОП критическая для данного исследования составила 0,074. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (2,73; 1,42; 1,563; 0,316) являются положительными и указанные 4 пробы подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 16 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,060	3,117	3,140	0,031
Отрицательный контроль	0,014	0,014	0,016	0,001
Исследуемые образцы	0,008	0,093	2,730	0,139
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,008	0,019	0,052	0,007
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,316	1,494	2,73	0,623

Таблица 17 ? Серологический протокол ИФА конфирматорного теста №2

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
А	3,121	0,736	1,362	0,528	0,763	0,212	1,391	0,407	1,782	1,648
B	3,154	0,701	0,644	0,153	0,319	0,172	0,310	0,376	1,947	0,973
C	0,012	0,010	0,262	0,028	0,072	0,016	2,683	0,495	1,275	0,586
D	0,015	0,012	2,160	0,0517	2,985	2,869	1,713	0,378	0,749	0,215
E	0,015	0,011	1,092	0,286	3,467	3,281	0,958	0,219	0,280	0,244
F	3,065	3,004	0,338	0,089	3,268	1,088	1,603	1,584	0,063	0,159
G	2,581	2,181	0,326	0,381	1,073	0,302	1,384	1,486	0,057	0,171
H	1,338	0,913	0,208	0,267	1,987	0,541	1,007	1,068	0,048	0,163

1 Положительные контроли ? А1, В1.

2 Отрицательные контроли ? С1,D1, E1.

3 Исследуемые образцы ? F1 ? H12

4 Среднее значение отрицательных проб ? ОП в пр. анализе 0,014;

5 Среднее значение отрицательных проб ? ОП в кон. анализе 0,011;

6 Среднее значение положительных проб в пр. анализе - 3,137;

7 Среднее значение положительных проб в кон. анализе - 0,718;

8 Минимальное значение оптической плотности пробы ? 0,010;

9 Максимальное значение оптической плотности пробы ? 3,467;

10 Среднее значение оптической плотности пробы ? 0,986;

11 Стандартное отклонение - 0,827.

Из полученных данных произведены расчёты, результаты которых представлены в таблице(18).

Таблица 18 - Результаты конфирматорного теста ИФА № 2

Коэффициент подавления	Результат	Коэффициент подавления	Результат	Коэффициент подаления	Результат	Коэффициент подавления	Результат	Коэффициент подавления	Результат
0,81	пол	-0,22	отр	0,50	пол	1,10	пол	1,09	пол
0,78	пол	0,78	пол	0.47	отр		отр	1.0	пол
-	отр	0,94	пол		отр	0,82	пол	0,55	пол
-	отр	0,98	пол	0,04	отр	0,79	пол	0,73	пол
	отр	0,75	пол		отр		отр	0,14	отр
0,02	неопр.	0,77	пол	0,05	отр	0,78	пол		отр
0,16	неопр.	-0,18-	отр	0,67	пол	0,01	отр		отр
0,32	неопр.	-0,30	отр	0,73	пол	-0,06	отр		отр

При проведении конфирматорного теста 11 образцов сывороток крови человека в 4 было подтверждено наличие HBsAg.

Таблица 19 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 7

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,178	0,015	0,015	0,009	0,014	0,012	0,010	0,015	0,030	0,014	0,009	0,011
B	3,224	0,026	0,018	0,015	2,910	0,027	0,015	0,011	0,026	0,012	0,035	0,019
C	3,010	0,011	0,034	0,020	0,012	0,012	0,025	0,032	0,009	0,035	0,014	0,008
D	0,013	0,009	0,022	0,032	0,020	3,156	0,009	0,016	0,013	0,014	0,020	0,014
E	0,012	0,012	0,014	0,014	0,014	0,020	0,016	0,028	0,021	0,011	0,009	0,011
F	0,009	0,709	0,024	0,010	0,009	0,016	0,020	0,014	0,010	0,014	2,825	0,017
G	0,012	0,020	0,015	0,020	0,014	0,021	0,020	0,033	0,290	0,018	0,016	0,021
H	0,017	0,009	0,056	0,014	0,020	0,009	0,027	0,019	0,009	0,018	0,012	0,009

ОП критическая для данного исследования составила 0,07. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (0,709; 2,910; 3,156; 0,290; 2,825) являются положительными и указанные 5 проб подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 20 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,010	3,113	3,224	0,084
Отрицательный контроль	0,009	0,013	0,013	0,001
Исследуемые образцы	0,008	0,173	3,156	0,006
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,008	0,017	0,041	0,006
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,290	1,978	3,156	1,182

Таблица 21 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 8

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,050	0,010	0,030	0,031	0,019	0,025	0,014	0,019	0,035	0,012	0,025	0,017
B	3,065	0,014	0,018	0,015	0,020	0,027	0,015	0,020	0,026	0,012	0,035	0,019
C	3,113	0,038	0,012	0,020	0,020	0,030	0,035	0,009	0,024	0,025	0,014	0,033
D	0,010	0,01	0,022	0,019	0,009	0,008	0,010	0,016	0,033	0,010	0,009	0,015
E	0,011	0,028	1,578	0,019	0,014	0,020	0,016	0,010	0,035	0,011	0,016	0,018
F	0,009	0,020	0,024	0,010	0,010	0,035	0,020	0,019	0,040	0,019	0,009	0,016
G	0,012	0,013	0,015	0,010	0,016	0,032	0,020	0,033	0,030	0,018	0,031	0,017
H	1,850	0,014	0,036	0,022	0,020	0,040	0,017	0,019	0,016	0,028	0,037	0,026

ОП критическая для данного исследования составила 0,070. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (1,85; 1,578) являются положительными и указанные 2 пробы подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

ОП критическая для данного исследования составила 0,068. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (3,420; 1,040; 3,010; 0,120; 0,216) являются положительными и указанные 5 проб подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 22 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,050	3,076	3,113	0,024
Отрицательный контроль	0,009	0,010	0,011	0,001
Исследуемые образцы	0,008	0,057	1,850	0,073
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,008	0,020	0,040	0,007
Исследуемые образцы с > ОПкрит	1,578	1,714	1,850	0,136

Таблица 23 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 9

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	2,736	0,009	0,010	0,014	0,008	0,011	0,034	0,030	0,009	0,020	0,011	0,015
B	2,710	0,014	0,011	0,015	0,009	0,017	0,015	0,011	0,026	0,012	3,010	0,008
C	2,730	0,028	0,013	0,020	0,020	0,033	0,035	0,032	0,009	0,035	0,014	0,009
D	0,008	0,007	0,008	0,032	0,020	0,035	0,009	0,016	0,023	0,014	0,011	0,015
E	0,007	0,008	0,014	0,014	0,011	0,020	0,007	0,008	0,025	0,011	0,120	0,018
F	0,008	3,420	0,024	0,010	0,009	0,035	0,010	0,014	1,040	0,034	0,021	0,216
G	0,011	0,015	0,015	0,011	0,014	0,032	0,020	0,023	0,030	0,038	0,009	0,027
H	0,009	0,014	0,036	0,014	0,020	0,010	0,037	0,017	0,009	0,028	0,027	0,008

Таблица 24 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	2,710	3,725	2,736	0,010
Отрицательный контроль	0,007	0,008	0,008	0,001
Исследуемые образцы	0,008	0,108	3,420	0,168
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,008	0,018	0,038	0,007
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,120	1,561	3,420	1,323

Таблица 25 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 10

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
A	2,842	0,011	0,010	0,022	0,011	0,014	0,024	0,023	0,011	0,021
B	2,920	0,014	0,021	0,015	0,022	0,013	0,015	0,011	0,022	0,012
C	2,830	0,023	0,011	0,020	0,012	0,012	0,032	0,032	0,009	0,015
D	0,009	0,010	0,023	3,900	0,021	0,035	0,009	0,016	0,033	0,024
E	0,011	0,027	0,014	0,017	0,024	0,010	0,016	0,007	0,015	0,017
F	0,009	0,010	0,007	0,010	0,009	0,009	0,210	0,014	0,009	0,014
G	0,011	0,018	0,015	0,010	0,014	0,032	0,020	0,033	0,009	0,018
H	0,013	0,014	0,016	0,014	0,010	0,030	0,031	0,015	0,019	0,020

ОП критическая для данного исследования составила 0,070. Таким образом, по данным анализа 74 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (3,900; 0,210) являются положительными и указанные 2 пробы подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 26 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	2,830	2,864	2,920	0,110
Отрицательный контроль	0,009	0,010	0,011	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,074	3,900	0,110
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,017	0,038	0,006
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,210	1,561	3,900	1,845

Таблица 27 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 11

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9
A	3,080	0,018	0,015	0,020	0,011	0,014	0,024	0,011	0,021
B	2,997	0,014	0,011	0,015	0,022	0,025	0.009	0,011	0,027
C	3,030	0,023	0,021	0,020	0,012	0,017	0,034	0.009	0,009
D	0,009	2,110	0,023	0,011	0,021	0,016	0,011	0,016	0,023
E	0,011	0,021	0,014	0,017	0,926	0,010	0,016	0,028	0,024
F	0,011	0,189	0,024	0,010	0,009	0,011	0,011	0,014	0,010
G	0,017	0,018	0,015	0,030	0,014	0,012	0,020	0,027	0,022
H	0,025	0,013	0,015	0,014	0,010	0,013	0,011	0,016	0,018

ОП критическая для данного исследования составила 0,070. Таким образом, по данным анализа 66 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (2,11; 0,189; 0,926) являются положительными и указанные 3 пробы подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 28 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	2,997	3,035	3,080	0,029
Отрицательный контроль	0,009	0,011	0,011	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,066	2,110	0,094
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,016	0,034	0,005
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,189	1,075	2,110	0,690

Таблица 29 ? Серологический протокол ИФА конфирматорного теста №3

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,263	0,704	2,843	0,873	0,085	0,018	0,504	0,116	0,163	0,29	3,648	1,943
B	3,195	0,726	2,535	0,71	2,893	0,752	3,56	3,672	3,276	3,033	1,864	0,501
C	0,014	0,012	1,901	0,651	1,915	0,504	3,481	3,389	2,531	1,287	1,167	0,309
D	0,013	0,013	0,984	0,437	0,869	0,292	3,272	2,947	0,682	0,314	0,008	0,011
E	0,017	0,012	3,483	2,537	1,907	1,805	3,048	1,112	0,252	0,086	3,117	1,205
F	0,68	0,047	2,143	0,764	2,478	2,197	1,294	0,902	0,018	0,016	1,984	0,46
G	0,341	0,208	1,76	0,602	2,935	2,754	0,275	0,339	0,143	0,214	1,748	1,431
H	0,016	0,018	0,338	0,118	1,608	0,34	0,157	0,31	0,124	0,181	0,426	0,312

Расчет для прямого и конкурентного ИФА средне значение ОП для лунок с К^- ( не должно превышать 0,2 ОЕ), ОП_ср К^-, для лунок с К⁺ср( не должно быть меньше 1,0).

1 Положительные контроли ? А1, В1.

2 Отрицательные контроли ? С1,D1, E1.

3 Исследуемые образцы ? F1 ? H12

4 Среднее значение отрицательных проб ? ОП в пр. анализе 0,014;

5 Среднее значение отрицательных проб ? ОП в кон. анализе 0,012;

6 Среднее значение положительных проб в пр. анализе - 3,229;

7 Среднее значение положительных проб в кон. анализе - 0,715;

8 Минимальное значение оптической плотности пробы ? 0,08;

9 Максимальное значение оптической плотности пробы ? 3,672;

10 Среднее значение оптической плотности пробы ? 1,202;

11 Стандартное отклонение ? 1,040

Из полученных данных произведены расчёты, результаты которых представлены в таблице(30).

При проведении конфирматорного теста 17 образцов сывороток крови человека в 6 было подтверждено наличие HBsAg.

Таблица 30 - Результаты конфирматорного теста ИФА №3

Коэффициент подавления	Результат	Коэффициент подавления	Результат	Коэффициент подавления	Результат	Коэффициент подавления	Результат	Коэффициент подавления	Результат	Коэффициент подавления	Результат
0,74	пол	-0,03	неопр.	0,07	неопр.	0,74	пол	1,02	пол	1,02	пол
0,78	пол	0,72	пол
-	отр	0,66	пол	0,74	пол	0,03	неопр	0,49	неопр	0,54	пол
-	отр	0,56	пол	0,68	пол	0,10	неопр	0,55	пол		отр
-	отр	0,27	неопр.					0,70	пол	0,62	пол
	отр	0,65	пол	0,05	неопр.	0,64	пол		отр	0,77	пол
0,41	отр	0,66	пол	0,11	неопр.	0,31	неопр	-0,55	отр	0,36	отр
	отр	0,68	пол	0,80	пол	-1,07	отр	-0,52	отр	0,28	отр

Таблица 31 - Оптическая плотность первично положительных проб на HВs Ag

Оптические плотности первично положительных проб
№пробы	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
ОП	0,120	0,189	0,210	0,216	0,223	0,290	0,316	0,331	0,342	0,440
№пробы	11	12	13	14	15	16	17	18	19	20
ОП	0,450	0,510	0,700	0,709	0,840	0,926	1,040	1,050	1,215	1,420
№пробы	21	22	23	24	25	26	27	28	29	30
ОП	1,530	1,563	1,578	1,821	1,850	2,020	2,024	2,056	2,110	2,112
№пробы	31	32	33	34	35	36	37	38	39	40
ОП	2,120	2,700	2,730	2,825	2,900	3,010	3,110	3,120	3,156	3,420
№пробы	41
ОП	3,900

1

Размещено на http://www.allbest.ru/

Ось х количество исследуемых образцов.

Ось y оптическая плотность исследуемых образцов.

Рисунок 5 - Распределение оптических плотностей первично положительных проб на HВs Ag

Таблица 32 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Количество первично положительных проб	41(3,84%)
Количество подтвержденных на конфирматорном тесте	15 (1,4%)
Минимальное значение	0,120
Среднее значение	1,573
Максимальное значение	3,900
Стандартное отклонение	0,952
Учреждение или группа пациентов положительных на HBsAg	Поликлиника (кабинет инфекционных заболеваний)	8 мужчин, 4 женщины
	Кожно-венерологоческий диспансер	0
	Наркологический диспансер	2
	Медицинские работники	1

Анализируя частоту выявления маркеров вируса гепатита В среди групп пациентов, можно отметить высокий уровень заболеваемости вирусным гепатитом среди пациентов инфекционного отделения 12 человек (8 мужчин и 4 жнщины), наркологический диспансер 2 мужчины и медицинский работник 1 женщина.

Результаты обследования по anti-HCV

С целью скрининговой диагностики HCV применяют определение так называемых общих антител к HCV (Anti-HCV), поскольку положительных результатов данного исследования ограничена - наличие общих антител к HCV позволяет лишь констатировать факт контакта пациента с вирусом гепатита С и не позволяет судить о давности процесса, а также о его прогрессировании или о завершенности (не может служить показателем выздоровления больного). Также не отмечается и корреляции с выраженностью клинического течения HCV-инфекции. Таким образом, обнаружение только общих антител к HCV дает основание для дальнейшего комплексного, в том числе специфического лабораторного обследования. Общие антитела к вирусу гепатита С сохраняются в организме неограниченное время.

Таблица 33 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие anti-HCV №1

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,078	0,018	0,015	0,022	1,984	0,008	0,024	0,023	0,021	0,020	0,018	0,017
B	2,997	0,020	0,014	0,021	0,009	0,010	0,008	0,010	0,015	0,011	0,017	0,013
C	0,010	0,023	0,021	0,020	1,760	0,014	0,012	0,020	0,015	0,022	0,023	0,006
D	0,009	0,009	3,020	0,015	0,021	0,016	0,011	0,023	0,023	0,014	2,110	0,001
E	0,011	0,021	0,014	0,020	0,243	0,010	0,016	0,014	0,024	2,840	0,013	0,015
F	0,011	0,009	0,024	0,032	0,009	0,011	0,011	0,024	0,010	0,014	0,028	0,002
G	0,017	0,160	0,015	0,030	0,014	0,012	0,020	0,015	0,118	0,018	0,022	0,008
H	0,025	0,014	0,011	0,022	0,032	0,020	0,009	0,011	0,027	0,010	0,016	0,015

ОП критическая для данного исследования составила 0,109. Таким образом, по данным анализа 91 пробы и 5 контрольных проб все оптические плотности выше критической (3,020; 1,984; 1,760; 2,840) пробы подлежащие повторному исследованию в двух лунках, пробы подлежащие повторному исследованию на конфирматорном тесте (0,160; 0,243; 0,118), результаты приводятся ниже.

Таблица 34 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	2,997	3,037	3,078	0,040
Отрицательный контроль	0,009	0,010	0,011	0,001
Исследуемые образцы	0,010	0,205	3,078	0,341
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,016	0,032	0,005
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,118	1,529	3,020	1,016

Таблица 35? Серологический протокол скринингового обследования на наличие anti - HCV №2

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,454	0,012	3,115	0,015	0,009	0,014	0,032	0,010	0,033	0,030	0,038	0,010
B	3,310	0,020	3,022	0,020	1,620	0,009	0,009	0,011	0,011	0,035	0,014	0,020
C	0,013	0,020	1,612	0,020	0,008	0,009	0,009	0,020	0,011	0,035	0,020	0,008
D	0,010	0,023	1,687	0,032	0,020	0,008	0,010	2,771	0,009	0,009	0,032	0,020
E	0,011	0,131	2,846	0,012	0,034	0,020	0,016	0,009	0,008	0,011	0,012	0,034
F	0,013	0,020	2,890	0,183	0,009	0,035	3,276	0,020	0,192	0,034	0.009	0,009
G	0,022	0,015	0,015	0,009	0,014	0,032	2,590	0,015	0,030	0,038	0,009	0,014
H	0,009	0,014	0,036	0,012	0,020	0,008	0,037	0,014	0,116	0,028	0,012	0,020

ОП критическая для данного исследования составила 0,109. Таким образом, по данным анализа 91 пробы и 5 контрольных проб все оптические плотности выше критической (1,620; 3,276; 2,590; 2,771) пробы подлежащие повторному исследованию в двух лунках, пробы подлежащие повторному исследованию на конфирматорном тесте (0,131; 0,183; 0,1920;116), результаты приводятся ниже. При повторном исследовании в 3 пробах подтверждено наличие anti-HCV (totol).

Таблица 36 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,310	3,382	3,454	0,072
Отрицательный контроль	0,010	0,011	0,013	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,311	3,276	0,507
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,018	0,038	0,008
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,116	1,860	3,276	1,069

Таблица 37 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие anti-HCV №3

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,120	0,015	0,009	0,012	0,009	0,014	2,986	0,010	0,008	0,007	0,012	0,009
B	3,167	0,009	0,012	0,009	0,007	0,009	2,620	0,011	0,011	0,008	0,014	3,670
C	0,011	1,084	0,008	0,009	0,008	2,986	3,320	0,020	0,011	0,014	0,020	0,008
D	0,012	0,010	0,020	0,010	0,020	3,851	3,418	0,013	0,009	0,009	0,013	0,012
E	0,011	0,014	2,504	0,016	0,021	0,020	2,670	0,009	0,008	0,011	0,012	0,016
F	0,011	0,010	0,009	0,020	0,009	0,015	2,714	0,008	0,008	0,034	0.009	0,009
G	0,012	0,015	0,014	0,010	0,014	0,012	2,582	0,015	0,010	0,018	0,009	0,014
H	0,008	0,016	0,017	0,012	0,020	0,008	2,763	0,014	0,009	0,028	0,012	0,011

ОП критическая для данного исследования составила 0,111. Таким образом, по данным анализа 91 пробы и 5 контрольных проб все оптические плотности выше критической (1,084; 2,504; 2,986; 3,851; 3,670 ) пробы подлежащие повторному исследованию в двух лунках, пробы подлежащие повторному исследованию на конфирматорном тесте (0,563), результаты приводятся ниже. При повторном исследовании в 4 пробах подтверждено наличие anti-HCV.

Таблица 38 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,120	3,143	3,167	0,023
Отрицательный контроль	0,011	0,011	0,012	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,433	3,851	0,716
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,012	0,037	0,004
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,116	2,859	3,276	0,473

Таблица 39 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие anti-HCV №4

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	2,890	0,016	0,018	3,910	0,020	0,008	0,027	0,014	0,009	0,280	0,012	0,195
B	3,024	0,014	0,015	3,855	0,010	0,027	0,015	0,009	0,026	0,012	0,015	0,020
C	0,008	0,020	2,323	0,012	0,021	0,009	0,009	0,011	0,011	0,008	0,014	0,008
D	0,008	3,342	2,172	0,008	0,010	0,008	1,572	0,016	0,009	0,074	0,008	0,012
E	0,009	0,009	3,114	0,012	0,140	0,020	0,016	0,038	0,008	0,011	0,009	0,016
F	0,008	0,008	3,080	0.009	0,009	0,035	0,020	0,357	2,657	0,034	0,021	0,009
G	2,112	0,015	3,716	0,009	0,014	0,032	0,010	0,033	0,030	0,038	0,031	0,014
H	0,008	0,014	3,634	0,012	0,021	0,020	0,016	0,009	0,008	0,011	0,012	0,009

ОП критическая для данного исследования составила 0,108. Таким образом, по данным анализа 91 пробы и 5 контрольных проб все оптические плотности выше критической (2,112; 3,342; 1,572; 2,657) пробы подлежащие повторному исследованию в двух лунках, пробы подлежащие повторному исследованию на конфирматорном тесте (0,140; 0,357;0,195), результаты приводятся ниже.

Таблица 40 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	2,890	2,957	3,024	0,067
Отрицательный контроль	0,008	0,008	0,009	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,405	3,910	0,656
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,012	0,074	0,007
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,140	2,278	3,910	1,140

Таблица 41 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие anti-HCV №5

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,407	0,013	0,016	0,012	0,010	0,008	0,010	2,054	2,274	0,009	0,008	0,010
B	3,484	0,011	0,011	0,009	0,007	0,009	0,009	2,036	2,338	0,008	0,014	0,020
C	0,009	0,009	0,020	0,011	0,837	0,009	3,242	3,380	0,010	0,014	0,936	0,008
D	0,009	0,015	0,010	0,015	0,009	0,014	0,012	3,363	0,008	0,007	0,012	0,009
E	0,008	0,014	0,009	0,012	0,011	0,011	0,016	1,587	0,008	0,011	0,012	0,016
F	0,008	0,010	0,008	0.009	0,009	0,015	1,938	1,516	0,011	0,034	0.009	0,009
G	0,012	0,015	0,015	0,009	0,014	0,012	0,010	2,587	0,010	0,018	0,009	0,014
H	0,009	0,014	0,016	0,012	0,021	0,020	0,016	2,517	0,176	0,011	0,012	0,016

ОП критическая для данного исследования составила 0,109. Таким образом, по данным анализа 91 пробы и 5 контрольных проб все оптические плотности выше критической (3,242; 1,938) пробы подлежащие повторному исследованию в двух лунках, пробы подлежащие повторному исследованию на конфирматорном тесте (0,837; 0,176; 0,936), результаты приводятся ниже. При повторном исследовании в 5 пробах подтверждено наличие anti-HCV (totol).

Таблица 42 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,407	3,445	3,484	0,038
Отрицательный контроль	0,008	0,008	0,009	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,393	3,380	0,628
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,012	0,044	0,003
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,176	2,080	3,380	0,732

При выявлении антител к определенным антигенам вируса гепатита С обнаруживались антитела к core антигену. Этот антиген выявляется на самых ранних этапах инфекции и является надежным маркером вирусной репликации. Выявление антител к core антигену может использоваться в качестве подтверждающего теста при тестировании образцов с «неопределенными» результатами. Также при исследовании сывороток были выявлены антитела к NS белку. Это неструктурный белок вируса и он не включается в вирион [14].

Таблица 43 ? Серологический протокол ИФА anti-HCV конфирматорного теста №1

№стрипа №ряда	1	2	результат	3	результат	4	результат	5	результат
А	3,47	0,13	отр	0,14	отр	0,05	отр	0,19	отр
B	3,26	0,11	отр	0,12	отр	0,04	отр	0,27	пол
C	0,18	0,08	отр	0,11	отр	0,10	отр	0,08	отр
D	0,04	0,06	отр	0,05	отр	0,12	отр	0,12	отр
E	0,15	0,06	отр	0,13	отр	0,08	отр	0,63	пол
F	0,05	0,13	отр	0,12	отр	0,11	отр	0,23	пол
G	0,12	0,10	отр	0,21	отр	0,07	отр	0,58	пол
H	0,04	0,04	отр	0,48	пол	0,10	отр	0,24	пол

На конфирматорном тесте исследовались те образцы сыворотак оптическая плотность которых в скрининговом тесте была меньше 1,0.

Обработка результатов анализа:

При соблюдении условий (значение ОПср К^- ? не более 0,20 ОЕ; значение ОПср К⁺ ? не менее 1,0 ОЕ; значение ОП в лунке с ККг ? не более 0,15 ОЕ) производим расчет по формулам:

ОП_{Крит.core} = ОП_ср К^- _core+ 0,2;

ОП_Крит.NS= ОП_ср К^- _NC+ 0,2.

1 Положительные контроли: А1 core ОП ? 3,47, В1 NS ОП ? 3,26;

2 Отрицательные контроли core ? С1 ОП ? 0,18,E1 ОП ? 0,15;

3 Отрицательные контроли NS ? D 1 ОП ? 0,04, F1 ОП ? 0,05;

4 Контроль коньюгата core G1 ОП - 0,12, H1 NS ОП - 0,04;

5 Исследуемые образцы ? А1 - H5;

6 Минимальное значение оптической плотности пробы ? 0,04;

9 Максимальное значение оптической плотности пробы - 0,63;

10 Среднее значение оптической плотности пробы ? 0,15;

11 Стандартное отклонение ? 0,093.

Расчет

ОП_{Крит.core} = 0,16 + 0,2;

ОПКрит.core =0,216 ОЕ.

ОП_Крит.NS = 0,05 + 0,2;

ОПКрит.NS=0,25.

При исследовании 16 сывороток крови на конфирматорном тесте 3 пробы дали положительный результат анти-HCV core,что может говорить о начале инфекции т.к. из антител первыми появляются IgM. Это происходит большей частью спустя 15-20 недель после заражения.

Таблица 44 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие anti-HCV №6

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,240	0,016	0,017	0,012	0,020	0,008	0,027	0,030	0,009	0,028	0,012	3,570
B	3,133	0,012	0,011	0,007	0,010	0,007	0,009	0,009	0,051	0,011	0,008	3,106
C	0,007	0,020	3,174	0,012	0,012	0,009	0,009	0,009	0,011	0,012	0,014	0,008
D	0,008	0,013	3,236	0,007	0,008	0,008	0,012	0,016	0,009	0,009	0,008	0,010
E	0,007	0,009	1,793	0,012	0,007	0,020	0,347	0,028	0,018	0,011	0,009	0,016
F	0,007	0,008	1,841	0.009	0,024	0,035	0,020	0,015	0,008	0,024	0,021	0,009
G	0,010	0,115	0,015	0,009	0,009	0,032	0,010	0,008	0,030	0,062	0,031	0,014
H	0,016	0,014	0,034	0,012	0,014	3,220	0,016	0,009	0,008	0,011	0,012	0,008

ОП критическая для данного исследования составила 0,107. Таким образом, по данным анализа 91 пробы и 5 контрольных проб все оптические плотности выше критической (3,220; 3,570; 3,106 ) пробы подлежащие повторному исследованию в двух лунках, пробы подлежащие повторному исследованию на конфирматорном тесте (0,115; 0,347), результаты приводятся ниже.

Таблица 43 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,133	3,186	3,240	0,023
Отрицательный контроль	0,007	0,007	0,008	0,001
Исследуемые образцы	0,007	0,358	3,822	0,605
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,015	0,062	0,007
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,115	2,266	3,822	1,104

Таблица 44 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие anti -HCV №7

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,478	0,015	0,015	0,009	0,014	0,012	0,010	3,015	0,030	0,014	0,009	0,011
B	3,524	0,026	0,018	0,015	0,018	0,027	0,015	3,101	0,026	0,012	0,035	0,019
C	0,013	0,011	0,034	0,020	0,012	0,012	0,226	3,432	0,009	0,035	0,014	0,008
D	0,013	0,009	3,822	0,032	0,020	0,041	0,009	3,503	0,213	0,014	0,020	0,014
E	0,012	0,008	0,014	0,014	0,014	0,020	0,016	2,958	0,021	0,171	0,009	0,011
F	0,009	0,008	0,024	0,010	3,109	0,016	0,020	2,919	0,010	3,750	0,021	0,017
G	0,012	0,020	0,015	0,020	0,014	0,021	0,020	0,033	0,015	0,018	0,016	0,021
H	0,017	0,009	0,147	0,014	0,020	0,009	0,027	0,019	0,009	0,619	0,012	0,009

Таблица 45 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,478	3,501	3,524	0,023
Отрицательный контроль	0,012	0,012	0,013	0,001
Исследуемые образцы	0,008	0,339	3,822	0,607
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,008	0,017	0,056	0,006
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,147	2,518	3,822	1,157

ОП критическая для данного исследования составила 0,113. Таким образом, по данным анализа 91 пробы и 5 контрольных проб все оптические плотности выше критической (3,822; 3,109; 3,75) пробы подлежащие повторному исследованию в двух лунках, пробы подлежащие повторному исследованию на конфирматорном тесте (0,147; 0,226; 0,213; 0,171;0,619), результаты приводятся ниже. При повторном исследовании в 3 пробах подтверждено наличие anti- HCV (totol).

Таблица 46 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие anti-HCV №8

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,315	0,008	0,014	0,014	3.757	0,020	0,016	0,958	0,021	0,015	0,009	0,011
B	3,144	0,011	0,018	0,016	3,724	0,017	0,015	0,009	0,014	0,034	0,015	0,025
C	0,012	0,010	3,959	0,009	3,058	0,009	0,009	0,011	0,010	0,028	0,014	0,009
D	0,010	0,019	0,022	0,009	3,020	0,008	0,010	0,016	0,009	0,020	0,010	0,015
E	0,009	0,010	3,894	0,015	3,526	0,017	0,015	1,609	0,016	0,034	0,015	0,007
F	0,015	2,310	0,021	0,014	3,583	0,009	0,020	0,035	0,008	0,068	0,021	0.014
G	0,010	0,013	0,015	0,010	0,014	0,008	0,010	0,033	0,030	0,010	0,007	1,036
H	0,007	0,112	0,015	0,012	0,020	0,008	0,037	0,019	0,009	0,014	0,017	0,026

Таблица 47 ? Результаты статистической обработки оптической плотнос

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,144	3,229	3,315	0,085
Отрицательный контроль	0,009	0,010	0,012	0,001
Исследуемые образцы	0,007	0,406	3,959	0,671
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,007	0,016	0,061	0,006
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,112	2,656	3,959	1,118

ОП критическая для данного исследования составила 0,110. Таким образом, по данным анализа 91 пробы и 5 контрольных проб все оптические плотности выше критической (2,310; 3,959; 3,894; 1,609; 1,026) пробы подлежащие повторному исследованию в двух лунках, пробы подлежащие повторному исследованию на конфирматорном тесте (0,112; 0,958; 0,182), результаты приводятся ниже. При повторном исследовании в 3 пробах подтверждено наличие anti-HCV (totol).

Таблица 48 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие anti-HCV №9

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,817	0,015	2,213	0,960	0,024	0,017	0,015	0,019	0,018	0,012	0,014	0,017
B	3,854	0,012	2,238	0,977	0,010	0,007	0,017	0,015	0,011	0,011	0,017	0,015
C	0,012	0,020	3,878	0,017	0,015	0,411	0,018	0,014	0,010	0,010	0,164	0,008
D	0,014	0,013	3,859	0,008	0,008	3,590	0,012	0,012	0,011	0,014	0,017	0,010
E	0,014	0,009	3,897	0,012	0,007	0,017	0,012	0,015	0,008	0,011	0,015	0,016
F	0,009	0,132	3,898	0,038	0,018	0,016	0,016	0,015	0,208	0,024	0,024	0,009
G	0,011	0,115	1,718	0,009	0,009	0,012	0,010	0,008	0,025	0,012	0,031	0,014
H	0,019	0,014	1,757	0,012	0,014	0,220	0,016	0,009	0,008	0,011	0,012	0,046

Таблица 49 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,817	3,229	3,854	0,085
Отрицательный контроль	0,012	0,013	0,014	0,001
Исследуемые образцы	0,007	0,355	3,898	0,605
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,007	0,013	0,046	0,004
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,114	1,781	3,898	1,306

ОП критическая для данного исследования составила 0,113. Таким образом, по данным анализа 91 пробы и 5 контрольных проб все оптические плотности выше критической (3,590) проба подлежащая повторному исследованию в двух лунках, пробы подлежащие повторному исследованию на конфирматорном тесте (0,132; 0,114; 0,411; 0,22; 0,208; 0,164), результаты приводятся ниже. При повторном исследовании в 5 пробах подтверждено наличие anti-HCV (totol).

На конфирматорном тесте исследовались те образцы сыворотак оптическая плотность которых в скрининговом тесте была меньше 1,0.

1 Положительные контроли: А1 core ОП ? 3,51, В1 NS ОП ? 3,32;

2 Отрицательные контроли core ? С1 ОП ? 0,17,E1 ОП ? 0,15;

Таблица 50 ? Серологический протокол ИФА anti-HCV конфирматорного теста №2

№стрипа №ряда	1	2	результат	3	результат	4	результат	5	результат
А	3,51	0,05	отр	0,11	отр	0,27	пол	0,12	отр
B	3,32	0,04	отр	0,10	отр	0,46	пол	0,11	отр
C	0,17	0,19	отр	0,13	отр	0,04	отр	0,07	отр
D	0,05	0,11	отр	0,12	отр	0,05	отр	0,10	отр
E	0,15	0,05	отр	0,16	пол	0,10	отр	0,12	отр
F	0,05	0,06	отр	0,37	отр	0,08	отр	0,11	отр
G	0,10	0,10	отр	0,05	пол	0,06	отр	0,05	отр
H	0,04	0,06	отр	0,04	отр	0,05	отр	0,05	отр

3 Отрицательные контроли NS ? D 1 ОП ? 0,05, F1 ОП ? 0,05;

4 Контроль коньюгата core G1 ОП - 0,10, H1 NS ОП - 0,04;

5 Исследуемые образцы ? А1 - H5;

6 Минимальное значение оптической плотности пробы ? 0,04;

9 Максимальное значение оптической плотности пробы - 0,47;

10 Среднее значение оптической плотности пробы ? 0,143;

11 Стандартное отклонение ? 0,06.

По полученным результатам произведен расчёт, из 16 образцов крови в 2 пробах подтверждено наличие анти- HCV(totol).

Таблица 51 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие anti-HCV №10

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,315	0,014	0,013	3,483	0,077	0,020	0,012	0,019	0,021	0,015	0,009	0,231
B	3,144	0,012	0,007	3,562	0,015	0,017	0,011	0,015	0,014	0,034	0,015	0,024
C	0,012	0,015	0,009	0,009	0,008	0,009	0,010	0,014	0,010	0,026	0,014	0,009
D	0,012	0,014	0,022

Подобные документы

• Характеристика и прогноз хронического вирусного гепатита В в зависимости от генотипа вируса

  Географическое распределение генотипов вируса гепатита В. Мутантные формы вируса. Методы современной диагностики инфекции. Выявление клинико-биохимических, иммунологических особенностей хронического вирусного гепатита В у детей с различными генотипами.
  
  магистерская работа [121,5 K], добавлен 31.07.2015
  

• Распространение, развитие и течение гепатита В

  Изучение особенностей распространения вируса гепатита В, его устойчивости во внешней среде. Исследование механизма развития инфекции, обусловленной вирусом гепатита. Характеристика общих симптомов заболевания, методов профилактики и защиты от вируса.
  
  презентация [1022,5 K], добавлен 22.05.2012
  

• Вирусный гепатит С

  Определение вирусного гепатита. Его возбудитель. Источник инфекции и механизм ее передачи. Распространенность заболевания в популяции. Роль половых контактов в передаче вируса. Клиническое течение и симптомы развивающегося гепатита. Диагностика и лечение.
  
  презентация [2,1 M], добавлен 26.10.2014
  

• Возбудители вирусных гепатитов

  История открытия вирусного гепатита. Резистентность к физическим и химическим факторам. Культивирование и механизм передачи возбудителя. Патогенез, диагностика, методы лечения и профилактики гепатита. Характерные особенности вируса гепатита В, С, Д, Е.
  
  курсовая работа [51,0 K], добавлен 24.06.2011
  

• Вирусный гепатит С

  Проблема вирусного гепатита C, ее актуальность для Абхазии. Строение и свойства вируса, его жизненный цикл. Источник возбудителя и заражения. Условия вирусного гепатита С. Иммунная система микроорганизма. Клиническая картина хронического заболевания.
  
  курсовая работа [1,5 M], добавлен 03.05.2013
  

• Вирусный гепатит А, типичный, легкой формы

  Этиология, эпидемиология, патогенез и источник инфекции гепатита А. Особенности лечения больного. Дифференциальная диагностика вирусного гепатита с лептоспирозом и псевдотуберкулезом. Исследование органов дыхания, кровообращения и пищеварения больного.
  
  история болезни [26,6 K], добавлен 24.09.2012
  

• Фармакотерапия вирусного гепатита B и C

  Описания воспалительного заболевания печени, возбудителем которого является вирус гепатита C. Исследование источников вируса, инкубационного периода. Клинические особенности гепатита. Лабораторная диагностика. Лечение и профилактика вирусных гепатитов.
  
  презентация [61,8 K], добавлен 19.11.2014
  

• Невосприимчивость к болезням (иммунитет)

  Основные группы факторов, обеспечивающие невосприимчивость человека к возбудителям инфекции. Неспецифическая физическая резистентность, специфическая невосприимчивость (иммунитет). Неспецифические защитные механизмы. Гуморальный и клеточный иммунитет.
  
  контрольная работа [26,2 K], добавлен 18.02.2013
  

• Система гуморального иммунитета. Роль системы комплемента в иммунном ответе

  Гуморальный иммунитет как один из механизмов реализации защитных свойств организма в жидкой среде. Неспецифические и специфические факторы гуморального иммунитета. Формирование антител. Иммунный ответ. Система комплемента, ее роль в заболеваниях.
  
  презентация [1,2 M], добавлен 08.10.2017
  

• Противовирусный иммунитет

  Врожденный антивирусный иммунитет. Типы интерферонов и механизмы антивирусного действия интерферонов. Способность антител и комплементов ограничить распространение вируса и предотвратить повторную инфекцию. Обход вирусами иммунологического контроля.
  
  реферат [17,4 K], добавлен 27.09.2009
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам