Теоретичне обґрунтування та розробка ліпосомальних лікарських препаратів у формі ін’єкційного розчину та спрею на основі нанобіотехнології

Прозорий розчин жовтого кольору, практично вільний від видимих суспендованих часток

Відповідає

Колір

Жовтий

Жовтий

Прозорість

Препарат повинен витримувати випробування у порівнянні із суспензією І

Відповідає

Кольоровість

Зеленувато-жовтого кольору. Має бути не інтенсивнішим за еталонний розчин GY

Відповідає

Механічні частки

Видимі частки

Невидимі частки

Частки ? 10 мкм - не більше 6000/ампула

Частки ? 25 мкм - не більше 600/ ампула

Відповідає

рН

7,5 - 9,5

8,76

Відносна густина

1,007- 1,012

1,008

Об'єм, що витягається

Не менше 5,0 мл

5,2 мл

У табл. 11 наведено порівняльні показники кількісного визначення, мікробіологічні та деякі фізико-хімічні характеристики препарату «Л'есфаль». Як видно, усі показники відповідають вимогам НД і препарату порівняння та адекватні один до одного.

Для встановлення факторів, які впливають на стабільність препарату, проведено вивчення його фізико-хімічних показників у процесі зберігання (табл. 12).

За допомогою спектроскопічних методів дослідження зразків препарату «Л'есфаль» виявлено, що у деяких випадках можлива деградація однієї з допоміжних сполук, а саме рибофлавіну. За інтенсивністю флуоресценції зразка 2012 р. можна зробити висновок, що концентрація рибофлавіну в ньому у 5,5-6 разів менша, ніж у зразку 2013 р. (рис. 7). Вимірювання фізико-хімічних характеристик розчинів препарату, зокрема рН і концентрації молекулярного кисню, дозволили зробити висновок, що деградація відбувається під дією надлишку розчиненого кисню у розчинах. Для збереження стабільності рибофлавіну в препараті «Л'есфаль» залишкова концентрація кисню повинна знаходитись у межах 2,0-2,3 мг/мл.

Таблиця 11 Фізико-хімічні та мікробіологічні показники якості препаратів «Л'есфаль» і «Ессенціалє Н / Essentiale N»

Показники якості	Вимоги НД	Результати досліджень
	Ессенціалє Н / Essentiale N	Л'есфаль	Л'есфаль
Кількісне визначення
3-sn-фосфатидилхолін, ВЕРХ	261,3-288,8 мг / 5 мл	52,26-57,76 мг/мл	54,96
3-sn-лізофосфатидилхолін, ВЕРХ, мг /5 мл	? 20,0 мг / 5 мл	Не більше 4,00 мг/мл	2,09
Спирт бензиловий, ВЕРХ	42,8-47,3 мг / 5 мл	8,55-9,45 мг/мл	9,03
Етанол, ГХ	? 25,1 мг/5 мл	Не більше 5,02 мг/мл	4,50
Бактеріальні ендотоксини (ЄФ)	? 35 МО/мл	Не більше 31 МО/мл	? 5 МО/мл
Вміст хлоридів	-	-	2,3 мг/мл
Вміст натрію	-	-	2,995 г/л
Осмоляльність	-	-	259 мОсмоль/кг
Йодне число	-	-	61,45
Індекс окиснення	-	-	0,4329
Стерильність	Відповідність Європейській фармакопеї	Відповідає

Рис. 7. Спектри флуоресценції зразків препарату «Л'есфаль»:

1, 3 - 2012 року; 2, 4 - 2013 року;

1, 2 - збудження при 450 нм;

3, 4 - збудження при 400 нм

Як видно з табл. 12, препарат «Л'есфаль» стабільний упродовж усього терміну придатності (2 роки) при зберіганні по 5 мл в ампулах із трубного боросилікатного скла коричневого кольору з кільцем злому.

Розділ 5. Теоретичне та експериментальне обґрунтування складу, розробка технології і методик контролю якості ЛП у формі спрею.

У цьому розділі описано технологію отримання препарату на основі низькомолекулярних пептидів, виділених зі шкіри свиней, включених у ліпосоми.

Для отримання концентрату депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней (КДДШШС) як екстрагент використовували воду, для депротеїнізації пептидів - кислоту хлористоводневу.

Таблиця 12 Показники якості препарату «Л'есфаль» при зберіганні (температура 5 ± 3 °С)

Показник	Вимоги	Результати визначення / термін зберігання
	2012	2013	2014
Опис	Прозорий розчин жовтого кольору	Відповідає	Відповідає	Відповідає
Відносна густина	Від 1,007 до 1,012	1,008	1,009	1,009
рН	Від 7,5 до 9,5	8,76	8,78	8,75
Об'єм, що витягається	Не менше 5,0 мл	Відповідає	Відповідає	Відповідає
Стерильність	Має бути стерильним	Відповідає	Відповідає	Відповідає
Бактеріальні ендотоксини	Не більше 31 МО/мл	Відповідає	Відповідає	Відповідає
Вміст спирту бензилового	8,55- 9,45 мг/мл	9,03	8,99	9,06
Вміст спирту етилового	Не більше 5,02 мг/мл	4,50	4,52	4,51
Кількісне визначення	Фосфатидилхолін 52,26-57,76 мг/мл Лізофосфатидилхолін: не більше 4,00 мг/мл	54,96 2,09	54,97 2,06	54,95 2,09

У результаті експериментальних досліджень було встановлено параметри екстракції: співвідношення сировини й екстрагенту, тривалість процесу, температуру та ін., які дозволили отримати і запатентувати біопродукт із ранозагоювальною і регенеруючою дією. Технологічний процес складається з 4-х стадій (рис. 8). Екстракцію проводили у реакторі, куди завантажували спочатку воду, вмикали мішалку і завантажували підготовлену заморожену свинячу шкіру, додавали розчин кислоти хлористоводневої до регламентованого значення рН. Отриману масу фільтрували крізь фільтри (Pall з діаметром 20 мкм) у проміжну ємність. За допомогою роторно-плівкового випарювача фільтрат концентрували і фасували у флакони, укупорювали і передавали на виморожування.

Хімічна структура КДДШШС була встановлена і стандартизована такими методами контролю: визначення сухого залишку, загального азоту, фосфору, загального білка, вуглеводів; визначення молекулярно-масового розподілу, електрофорез у поліакриламідному гелі; амінокислотний і жирнокислотний склад; мікроелементи.

Фізико-хімічні показники КДДШШС наведені в табл. 13.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 8. Технологічна схема виробництва КДДШШС

Таблиця 13 Фізико-хімічні показники КДДШШС

Номер зразка	Сухий залишок, %	Вуглеводи, мг/мл	Фосфор, мг/мл	Загальний азот, %	Загальний білок, мг/мл
1	5,6	0,98	0,8	0,269	3,5
2	5,6	0,90	0,7	0,251	3,5
3	5,5	0,93	0,9	0,275	3,8
Амінокислотний склад
ASP	SER	GLU	GLY	HIS	NH3	ARG	THR	ALA	PRO	CYS	TYR	VAL	MET	LYS	ILE	LEU	Phe
3,13 %	7,42%	4,88%	16,93%	6,58%	0,00%	9,71%	5,84%	11,87%	6,22%	0,13%	5,43%	4,30%	1,40%	4,33%	2,01%	5,35%	4,46%

Результати визначення молекулярно-масового розподілу КДДШШС із використанням методу ексклюзивної хроматографії (рис. 9) й електрофорезу в ПААГ підтвердили, що застосування ультрафільтрації з мембраною 15 кДа дозволяє отримувати комплекс фізіологічно активних речовин у діапазоні розподілу молекулярних мас, наведених у табл.14.

Рис. 9. Хроматограма пептидного картування АФІ «КДДШШС»

Таблиця 14 Молекулярно масовий розподіл КДДШШС

Більше 5000 Дал Більше 3000 Дал Більше 1000 Дал, менше 3000 Дал Менше 1000 Дал	Не більше 5 % Від 10 до 15 % Від 88 до 83 % Не більше 2 %

Отримані результати були використані при складанні МКЯ на КДДШШС. Показники якості концентрату наведені в табл. 15. Стандартизовану субстанцію далі використовували для створення ЛП у формі спрею, який розроблявся як оригінальний препарат фармакологічної групи тканиноспецифічних стимуляторів регенерації. Розробка ЛП із включенням діючої речовини - комплексу катіонних пептидів - у ліпосоми мала на меті збільшити біодоступність препарату, зменшити можливість побічної дії і вирішити завдання лікування ран різної етіології, що довго не загоюються.

При фармацевтичній розробці поєднували традиційні фармакопейні методи фізико-хімічного дослідження і нові для оцінки інкапсулювання (навантаження) ліпосом катіонними пептидами.

З метою збільшення біодоступності та стабільності готового препарату КДДШШС у кількості 0,12 мг/мл (у перерахунку на білок) включено до ліпосом (попередньо отриманих у формі дрібної суспензії з розміром часток 120-140 нм). Дозу діючої речовини було встановлено на підставі фармакологічних досліджень. Як фосфоліпіди для отримання ліпосом препарату використовували фосфатидилхолін із соєвих бобів - ліпоїд S 100 - у кількості 100 мг/мл.

Для отримання лікарської форми - спрею під умовною назвою «Ефіаль» експериментально було обрано допоміжні речовини: стабілізатор, антимікробний консервант, розчинник.

Пептидні препарати у водних розчинах стабілізують уведенням амінокислот, переважно найбільш чутливих до гідролізу в структурі білка, це зміщує рівновагу в реакції гідролізу в бік вихідної речовини. Позитивні результати було отримано при використанні як стабілізатора гліцину.

Для забезпечення мікробіологічних показників у процесі використання до складу препарату вводили антимікробні консерванти: пропілпарагідроксибензоат натрієву сіль і метилпарагідроксибензоат натрієву сіль. Як розчинник допоміжних речовин і дисперсійне середовище для ліпосом із КДДШШС використовували воду для ін'єкцій.

Таблиця 15 Показники якості концентрату депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней

Показник	Допустимі межі за МКЯ
Опис	Прозора рідина жовтуватого кольору
Ідентифікація Пептиди Вуглеводи Пептидне картування	Препарат має витримувати тест «Молекулярно масовий розподіл» Препарат має витримувати тест «Вміст вуглеводів» Хроматографічний профіль випробовуваного розчину повинен співпадати з хроматографічним профілем розчину порівняння
Відносна густина	Не менше 1,000 г/см3
Сухий залишок	Не менше 3 %
Важкі метали	Не більше 0,01 % (100 ррm)
Загальний азот	Не менше 0,08 %
рН	Від 4,0 до 5,5
Вміст вуглеводів	Не менше 0,3 мг/мл
Загальний білок	Не менше 1,5 мг/мл
Вміст фосфору	Не менше 0,2 мг/мл
Молекулярно-масовий розподіл Більше 5000 Дал Більше 3000Дал Більше 1000 Дал - менше 3000 Дал Менше 1000 Дал	Не більше 5 % Від 10 до 15 % Від 83 до 88 % Не більше 2 %
Мікробіологічна чистота	В 1 г препарату допускається не більше 100 мікроорганізмів (бактерій і грибів сумарно)
Зберігання	При температурі не вище (20,0 ± 2,0) _С
Термін придатності	2 роки

У процесі розробки були напрацьовані і проведені доклінічні дослідження препарату зі складом, що представлений в табл. 16.

Обґрунтування складу спрею проводилось також на підставі мікробіологічних досліджень. Для доказу того, що обрані консерванти дозволяють ефективно захистити лікарський засіб від мікробного забруднення протягом терміну його використання, вивчали зразки спрею (по 15 мл у флаконі) із вказаним вмістом консервантів. Інокульовані зразки витримували при температурі від 20 до 25 °С і від 2 до 8 °С. Доведено, що обрані консерванти забезпечують мікробіологічну чистоту препарату при зберіганні при температурі 2-8 °С.

Розробку технології ЛП у формі спрею проводили з урахуванням фізико-хімічних властивостей компонентів, що входять до складу лікарської форми. При виборі способу отримання ліпосом для обґрунтування стабільності гетерогенної дисперсної наносистеми використовували фізико-хімічні показники, а саме дзета-потенціал, який є дуже важливою характеристикою взаємодії колоїдних часток і дає можливість прогнозувати стійкість суспензій і емульсій. Знання дзета-потенціалу може скоротити час, необхідний для розробки технології лікарських препаратів на основі ліпосом із біологічної сировини.

Таблиця 16 Склад спрею «Ефіаль»

Компонент	Кількість, г	Посилання на НД	Функціональне призначення
КДДШШС у перерахунку на білок	0,003	МКЯ ПАТ «Фармак»	Діюча речовина
Фосфатидилхолін із соєвих бобів (ліпоїд S 100)	2,5	МКЯ ПАТ «Фармак»	Діюча речовина
Гліцин кристалічний	0,0035	ЄФ	Стабілізатор
Пропілпарагідроксибензоат натрієва сіль	0,005	ЄФ	Консервант
Метилпарагідроксибензоат натрієва сіль	0,045	ЄФ	Консервант
Вода для ін'єкцій	До 25 мл	ЄФ	Розчинник

Ліпосоми розміром 150-190 нм отримували двома методами: ультразвукового диспергування і методом високого тиску. Кількість циклів диспергування варіювали так: 3, 5, 7. Дзета-потенціал вимірювали на приладі Zetasizer Nano, в якому поєднано лазерно-допплерівське вимірювання швидкості і фазового аналізу розсіювання світла. Якщо всі частки дисперсної системи мають великий негативний або позитивний дзета-потенціал, то вони будуть прагнути до відштовхування одна від одної, що буде перешкоджати їх злипанню. Однак, якщо частки мають низькі значення дзета-потенціалу, то вони будуть злипатися разом і флокулювати або осідати. Спільна межа між стійкими і нестійкими дисперсіями, як правило, приймається на рівні +30 або -30 мВ. Системи, в яких частки з позитивним дзета-потенціалом більш ніж +30 мВ або негативним більш ніж -30 мВ, як правило, вважаються стабільними.

У нашому випадку дзета-потенціал наносистеми ліпосом, отриманих методом високого тиску при кількості циклів диспергування 5 і 7, наведено на рис. 10, 11. При кількості циклів диспергування 3 препарат був нестабільний, тому для даної серії дзета-потенціал не вимірювали.

Результати досліджень показали, що стабільність препарату досягається при кількості циклів диспергування - 7. При цьому розмір часток у всьому діапазоні рН 4,0-6,5 не змінюється, а значення дзета-потенціалу складає більше -30 мВ. Ізоелектрична точка знаходиться в межах 2,9-3,05. У процесі зберігання не відбувається розшарування дисперсної системи і, як наслідок, вміст основних і допоміжних речовин в 1 мл препарату не змінюється.

При отриманні препарату методом ультразвукового диспергування варіювали значення «амплітуда / потужність»: 90/60, 50/50, 30/90 при заданому часі. В усіх випадках дзета-потенціал практично дорівнював 0 (рис. 11). При цьому препарат був неоднорідний і розшаровувався. Таким чином, було встановлено, що раціональним способом отримання ЛП є метод високого тиску.

Рис. 10. Суспензія ліпосом, отримана методом високого тиску: кількість циклів диспергування - 5 (а), 7 ( b); Ў - розмір часток; ? - дзета-потенціал

Дослідження процесу фільтрації отриманого препарату проводили за допомогою автоматичної установки ZERO T фірми «Sartorius». У роботі використовували фільтри Pall FLUORODYNE 0,2 мm, SARTOFLUOR 0,2 мm, SARTOPORE 2 0,45+0,2. Проведено теоретичний аналіз механізмів блокування мембранних фільтрів і масштабування процесу фільтрації спрею.

При розгляді динамічної залежності пор у режимі постійного тиску стає зрозумілим, що повна закупорка пор відбувається, коли розмір частки відповідає розміру пори. У цій моделі частки проникають у структуру мембрани і забивають окремі пори, перенаправляючи потік фільтрату крізь інші пори. Зрештою це призводить до зменшення ефективної площі фільтрації та збільшення опору мембрани. Встановлено, що домінуючою моделлю фільтрації для спрею є модель повного блокування пор.

Для встановлення параметрів ультрафільтрації розчинів КДДШШС вивчали фактори, що впливають на цей процес: тип мембрани, вміст білка у розчині, кількість циклів фільтрації. Фільтрацію зразків розчинів із різним вмістом білка здійснювали методом постійного тиску (1 мБар) при температурі (20,0 ± 2,0) °С.

Рис. 11. Суспензія ліпосом, отримана методом ультразвукового диспергування.

Амплітуда / потужність 90/60;

Ў - розмір часток;

? - дзета-потенціал

На рис. 12 наведено зниження продуктивності мембран залежно від часу фільтрації зразків досліджуваного препарату. Зниження продуктивності у перші 10 хв свідчить про те, що фільтрація проходить з утворенням гелевого шару на поверхні мембрани. За рахунок цього в усіх зразках підвищується в'язкість і швидкість фільтрації падає.

Рис. 12. Залежність швидкості фільтрації від часу

Результати досліджень (табл. 17) показали, що використання фільтра з одношаровою мембраною рейтингом 0,20 недоцільно, тому що збільшується час і площа фільтрації. Це призводить до збільшення технологічних втрат і домішок, на відміну від фільтра SARTOPORE 2 0,45+0,2 мm, який і був обраний як оптимальний.

На рис. 13 наведено залежність швидкості фільтрації від кількості циклів фільтрації. Видно, що зі збільшенням кількості фільтроциклів практично в усіх зразках продуктивність мембран падає. Це пов'язано з тим, що на поверхні мембран сорбуються продукти денатурації білків і їх неможливо змити, не пошкодивши структуру мембрани. Швидкість та якість очищення мембрани залежить від кількості осаду, його властивостей і кількості промивної води.

Таблиця 17 Параметри процесу фільтрації розчину КДДШШС

Параметри	Pall FLUORODYNE 0,2 мm	Sartorius SARTOFLUOR 0,2 мm	SARTOPORE 2 0,45+0,2 мm
Об'єм препарату	10	10	10
Площа фільтрації, м2	0,5	0,5	0,05
Час фільтрації, год	12	12	0,5
Втрати, %	15	15	1,2
Домішки перед фільтрацією, мг/мл	0,4	0,4	0,4
Домішки після фільтрації, мг/мл	3,8	4,1	0,67
Розмір часток, нм	120-160	120-160	120-160

Рис. 13. Залежність швидкості фільтрації від кількості циклів фільтрації

Було визначено оптимальні параметри регенерації, промивання і консервації мембран у процесі фільтрації досліджуваного білкового розчину. Продуктивність мембран після очищення залежить від площі фільтрації і кількості білка у розчині.

Отже, у результаті проведених досліджень розроблено технологію і визначено критичні параметри на всіх стадіях виробничого процесу ЛП у формі спрею для зовнішнього застосування (рис. 14).

Препарат було стерильно профільтровано по 15 мл у скляні флакони з темного скла 1-го гідролітичного класу. Далі, відповідно до вимог ДФУ, було проведено встановлення показників якості, які дозволяють характеризувати ефективність і безпечність спрею.

Спектрофотометрично визначити кількість білка в ЛП неможливо через вплив матриці (ліпосомних мембран) і заважаючий вплив оптичного поглинання міцелярних комплексів ліпідів, тому необхідна розробка нових методик контролю кількісного вмісту білків. Підходящими методами визначення інкапсульованих речовин усередині або адсорбованих на ліпосомах є проведення процедури розділення (наприклад, гель-хроматографія, ультрацентрифугування, капілярний електрофорез або діаліз).

Порівняння різних методів визначення білків у складі ліпосом показало, що на практиці метод визначення пептидної фракції ліпосом SDS-електрофорезом у капілярах поступається методиці денситометричного визначення відбитків пептидів на нітроцелюлозних мембранах. В умовах виробництва більш підходящий спрощений варіант визначення пептидів ліпосом методом тонкошарової хроматографії дот-перенесених на нітроцелюлозну мембрану зразків препарату з подальшою фотометричною денситометрією. На рис. 15 наведено типові денситограми відбитків плям перенесених розчинів білків методом пасивного дот-блотингу.

За допомогою виконання паралельних експериментальних досліджень двома різним методами (SDS-електрофорез пептидів у капілярі та адсорбційна хроматографія на мембранах) оптимізовано методику визначення вмісту пептидів у ЛП «Ефіаль», яка ускладнена наявністю фосфоліпідів.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 14. Технологічна схема виробництва спрею «Ефіаль»

На представлених типових денситограмах випробовуваного розчину і розчину порівняння піки забарвлених білкових зон упевнено детектуються і дозволяють розрахувати відносні концентрації білків у складі ліпосомної фракції (вміст пептидів - не менше 0,12 мг/мл).

Розроблено методики ідентифікації і кількісного визначення компонентів спрею методом рідинної хроматографії і проведено їх валідацію. Вміст фосфатидилхоліну має бути від 90 до 110 мг/мл, лізофосфатидилхоліну - не більше 6,00 мг/мл, вміст пептидів - не менше 0,12 мг/мл, пропілпарагідроксибензоату натрієвої солі - від 0,18 до 0,22 мг/мл, метилпарагідроксибензоату натрієвої солі - від 1,62 до 1,98 мг/мл.

Рис. 15. Типові денситограми відбитків плям, перенесених на нітроцелюлозну мембрану розчинів білків методом пасивного дот-блотингу:

а) розчини порівняння (500 мкг/мл, 250 мкг/мл, 150 мкг/мл, 100 мкг/мл, 80 мкг/мл, 50 мкг/мл розведений розчин БСА відповідно );

b) типовий зразок випробовуваного спрею (6 паралелей);

с) ліпосомальна фракція спрею (6 паралелей)

Запропоновані методики контролю включено до МКЯ, на підставі яких було проведено вивчення стабільності препарату (табл. 18, 19).

Таблиця 18 Показники якості спрею в процесі зберігання при температурі (5,0 ± 3,0) °С

№ серії	Термін зберігання, міс.	Вміст
		Пептиди, мг/мл	Фосфатидилхолін, мг/мл	Лізофосфатидилхолін, мг/мл	Na-метилпарагідроксибензоат, мг/мл	Na-пропілпарагідроксибензоат, мг/мл
Нормування	Не менше 0,12	90,0-110,0	Не більше 6,00	1,62-1,98	0,18-0,22
010812	0 12 24 36	0,18 0,17 0,17 0,16	109,0 108,0 108,0 108,0	0,90 0,98 1,00 1,25	1,62 1,62 1,62 1,62	0,20 0,20 0,20 0,20
020812	0 12 24 36	0,16 0,16 0,15 0,14	100,0 99,0 98,0 98,0	3,40 3,45 3,50 3,50	1,64 1,62 1,62 1,62	0,19 0,19 0,19 0,19
030812	0 12 24 36	0,17 0,17 0,17 0,16	101,0 100,0 100,0 100,0	2,45 2,47 2,49 2,50	1,72 1,72 1,72 1,72	0,21 0,21 0,21 0,21

Рис. 16. Динаміка вмісту пептидів при зберіганні при температурі (5,0 ± 3,0) °С

Із табл. 18 і рис. 16 і 17 видно, що значення показників якості речовин при температурі (5,0 ± 3,0) °С є стабільними. При температурі (25,0 ± 2,0) °С (табл. 19) відбувається зниження вмісту пептидів унаслідок посилення мікробіологічного навантаження. Аналогічна картина спостерігається при дослідженні кількісного вмісту фосфатидилхоліну і лізофосфатидилхоліну: знижується вміст фосфатидилхоліну і збільшується вміст продукту його розпаду - лізофосфатидилхоліну. Тому оптимальними умовами зберігання, які забезпечують стабільність спрею «Ефіаль» у скляних флаконах у пачці, за всіма показниками якості МКЯ протягом 2 років є температура (5,0 ± 3,0) °С.

Таблиця 19 Показники якості спрею в процесі зберігання при (25,0 ± 2,0) °С

№ серії	Термін зберігання, міс.	Вміст
		Пептиди, мг/мл,	Фосфатидилхолін, мг/мл	Лізофосфатидилхолін, мг/мл	Na-метилпарагідроксибензоат, мг/мл	Na-пропілпарагідроксибензоат, мг/мл
Нормування	Не менше 0,12	90,0-110,0	Не більше 6,00	1,62-1,98	0,18-0,22
010812	0 12 24 36	0,18 0,17 0,16 0,12	109,00 99,10 90,30 89,12	2,90 5,28 7,45 8,12	1,62 1,61 1,52 1,54	0,20 0,18 0,16 0,17
020812	0 12 24 36	0,16 0,17 0,15 0,10	100,00 95,03 87,04 86,91	3,40 6,45 13,50 14,78	1,64 1,62 1,50 1,49	0,19 0,18 0,15 0,16
030812	0 12 24 36	0,17 0,16 0,14 0,09	101,00 100,20 95,30 89,17	2,45 4,57 7,89 6,95	1,72 1,62 1,60 1,58	0,21 0,19 0,17 0,18

Спостереження за стабільністю препарату в процесі його використання показало збереження всіх показників якості протягом 7 днів після першого розкриття упаковки в умовах зберігання при температурі (5,0 ± 3,0) °С.

Рис. 17. Динаміка вмісту фосфатидилхоліну при зберіганні при температурі (5,0 ± 3,0) °С

Розділ 6. Біологічні дослідження розроблених лікарських препаратів.

У цьому розділі проведено узагальнення результатів доклінічного вивчення специфічної фармакологічної активності та нешкідливості розроблених ЛП «Л'есфаль» і спрею під умовною назвою «Ефіаль».

Біологічні дослідження ЛП проводили у ДУ «Інститут фармакології та токсикології АМН України» під керівництвом Коваленко В. М. та у Тернопільському державному медичному університеті ім. І. Я. Горбачевського під керівництвом Лісничук Н. Є.

Препарат «Л'есфаль», який уводили щурам повторно протягом 28 днів у терапевтичній або 5-кратній терапевтичній дозах, за даними клінічних спостережень, динамікою зростання маси тіла, біохімічними показниками сироватки крові, аналізом сечі та морфологічною картиною внутрішніх органів так само, як і референтний препарат, не виявляє токсичної дії стосовно щурів незалежно від статі тварин. За результатами порівняльного вивчення безпечності препарат «Л'есфаль» не поступається референтному лікарському засобу. На моделі токсичного ураження печінки тетрахлоретаном встановлено, що згідно з даними біохімічного аналізу маркерів пошкодження печінки та її морфологічних досліджень препарат за своєю ефективністю не поступається гепатопротекторній дії референтного лікарського засобу «Ессенціалє Н» фірми «A.Nattermann & CiE GmbH», Німеччина. лікарський препарат ліпосомальний печінка

Досліджуваний спрей «Ефіаль» і препарат порівняння «Солкосерил», желе виявляють регенеративну ранозагоювальну дію, на що вказувало ефективне зменшення площі ранової поверхні в усі терміни спостереження при місцевому застосуванні обох засобів.

При застосуванні спрею процес загоєння рани характеризувався відсутністю інфікування, правильною стадійністю, поступовою регенерацією епідермісу, колагенізацією дерми, появою придатків шкіри і гіперплазією капілярної сітки.

Спрей «Ефіаль» при повторних аплікаціях протягом 28 днів у різних дозах - терапевтичній (8 мг діючої речовини) і при дозовому навантаженні (5-кратне перевищення терапевтичної дози) не викликав загибелі тварин і порушень інтегральних показників їх стану. При повторних аплікаціях на скарифіковану шкіру не чинив негативного впливу на структурно-функціональний стан печінки, нирок, не призводив до порушень гематологічних показників периферичної крові тварин і не викликав патологічних змін у внутрішніх органах, головному мозку та шкірі.

Встановлено, що спрей не виявляв алергізувальних властивостей і місцевоподразнювальної дії на шкіру і слизові оболонки піддослідних тварин.

ВИСНОВКИ

1. Обґрунтовано методологію створення ліпосомальних препаратів на основі нанобіотехнології і запропоновано два ЛП на основі сировини тваринного походження у формі спрею «Ефіаль» для лікування ран, що довго не загоюються (третя фаза клінічних досліджень), й у формі ін'єкційного розчину есенціальних фосфоліпідів «Л'есфаль» для лікування захворювань печінки (дозволений до медичного застосування, реєстр. № UA/123117/01/01 зі змінами від 05.12.2014 р. № 939).

2. Розроблено національну загальну фармакопейну статтю «Ліпосомальні лікарські засоби», яка містить вимоги щодо розробки, виробництва і контролю якості ліпосом і ліпосомальних препаратів. Фармакопейна стаття внесена до ДФУ 2-го видання (лист ФЦ № 11/977-5 від 24.06.2015 р.), яка уведена в дію з 01.01.2016 р. наказом МОЗ України № 830 від 08.12.2015 р.

3. Запропоновано методологію використання методів фізики поверхні (динамічне розсіювання світла, калориметрія, осмоляльність, дзета-потенціал) для контролю технологічного процесу ЛП «Л'есфаль» і «Ефіаль». За цим напрямком розроблено і затверджено ПК «Фармація» МОЗ України методичні рекомендації (пр. № 93 від 28.10.2015 р.), які впроваджено в роботу ПАТ «Фармак» (акт впровадження від 30.11.2015 р.). Розроблено експрес-методику визначення етанолу в парентеральних розчинах (патент України на корисну модель № 75076 від 26.11.2012 р., Бюл. № 22 ).

4. На підставі фізико-хімічних і мікробіологічних досліджень обґрунтовано технологію препарату «Л'есфаль», розчин для ін'єкцій в ампулах по 5,0 мл (патент України на винахід № 97742 від 12.03.2012 р.). Встановлено, що критичними параметрами контролю технологічного процесу отримання ліпідної плівки є вміст домішок лізофосфатидилхоліну і спирту етилового. Визначено фактори, що унеможливлюють утворення домішок: час (45 хв), температура (43 °С), величина вакууму (не менше 14 гПа), швидкість обертання колби (50 об/хв), кількість циклів азоту (4).

5. На підставі експериментальних даних встановлено доцільність застосування моделюючих рівнянь методу лінійної регресії для ідентифікації домінуючого механізму блокування фільтра у розроблюваних ЛП. Визначена домінуюча модель (механізм повного блокування пор) і параметри фільтрації розчину для ін'єкцій «Л'есфаль»: фільтр DEMICAR PROPOR PES 0,45 і 0,2 мікрона, тип мембрани (поліефірсульфон), температура (20,0 ± 2,0) °С.

6. Проведено дослідження з розробки методик кількісного визначення фосфатидилхоліну і лізофосфатидилхоліну в препараті «Л'есфаль». Запропонований аналітичний метод визначення вмісту фосфатидилхоліну специфічний, лінійній, точний і правильний у діапазоні концентрацій діючої речовини 76-126 %. Межа виявлення лізофосфатидилхоліну складає 0,01167 мг/мл, межа кількісного визначення - 0,03534 мг/мл. Розроблено МКЯ і встановлено термін придатності препарату - 2 роки при температурі (5,0 ± 3,0) °С.

7. На підставі фізико-хімічних і мікробіологічних досліджень розроблено технологію КДДШШС і проведено його стандартизацію (патент України на корисну модель № 66570 від 10.01.2012 р.). Розроблено спектрофотометричну методику визначення вмісту вуглеводів сумарного біопрепарату та процедуру її валідації.

8. Обґрунтовано склад спрею «Ефіаль», який містить як діючі речовини концентрат ДДШШС і фосфатидилхолін, як допоміжні - гліцин (стабілізатор), пропілпарагідроксибензоат і метилпарагідроксибензоат натрієві солі (антимікробні консерванти) і воду для ін'єкцій (патент України на винахід № UA 101235 від 11.03.2013 р.).

9. Експериментально обґрунтовано спосіб отримання препарату «Ефіаль» - метод високого тиску. Доведено його стабільність у діапазоні рН 4,0-6,5. Ізоелектрична точка знаходиться в межах 2,9-3,05. Значення дзета-потенціалу складає більше +30 мВ, що прогнозує його стабільність. Проведено теоретичний аналіз механізмів блокування мембранних фільтрів у процесі фільтрації біопрепаратів та масштабування процесу фільтрації спрею «Ефіаль». Встановлено параметри фільтрації: фільтр SARTOPORE 2 (0,45 + 0,2) micron з двошаровою мембраною, постійний тиск 1 мБар, температура (20,0 ± 2,0) °С.

10. Розроблено методики ідентифікації та кількісного визначення компонентів препарату «Ефіаль» методом рідинної хроматографії та проведено їх валідацію (вміст фосфатидилхоліну має бути 90-110 %; вміст пептидів - не менше 0,12 мг/мл; вміст пропілпарагідроксибензоату натрієвої солі - від 0,18 до 0,22 мг/мл, метилпарагідроксибензоату натрієвої солі - від 1,62 до 1,98 мг/мл). Методики контролю включено до МКЯ. Встановлено стабільність препарату при температурі (5,0 ± 3,0) °С протягом терміну придатності 2 роки. Після відкриття первинного пакування препарат необхідно зберігати 7 діб при температурі від 2 до 8 °С.

11. На підставі комплексу фармакотехнологічних, фізичних, фізико-хімічних, хімічних, мікробіологічних досліджень розроблено промислові технології та відповідну документацію на запропоновані препарати (технологічні інструкції / протоколи виготовлення серій, виробничу рецептуру, інструкції з пакування). Розчин для ін'єкцій «Л'есфаль» упроваджений у промислове виробництво ПАТ «Фармак», технологія спрею «Ефіаль» апробована (лист № 26/7891 від 18.09.2015 р.). Фрагменти наукових досліджень упроваджено в навчальний процес фармацевтичних ВНЗ і факультетів.

12. Узагальнено результати біологічних досліджень, за якими встановлено гепатопротекторну дію розчину для ін'єкцій «Л'есфаль»; регенеративну і ранозагоювальну дію препарату «Концентрат депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней та фосфатидилхоліну із соєвих бобів» під умовною назвою «Ефіаль».

СПИСОК ОПУБЛІКОВАНИХ ПРАЦЬ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ

Статті у наукових фахових виданнях

1. Гризодуб, А. И. Стандартизованная процедура валидации методик атомно-абсорбционного количественного определения лекарственных средств в варианте калибровочного графика / А. И. Гризодуб, О. Л. Левашова, Г. И. Борщевский // Фармаком. - 2011. - № 4. - С. 5-26. (Особистий внесок: планування досліджень, участь у виконанні й узагальненні даних, написання статті).

2. Стандартизация липосомальных лекарственных средств / Г. И. Борщевский, Е. К. Товмасян, Ю. М Краснопольский, А. И. Гризодуб // Фармаком. - 2013. - № 2. - С. 5-11. (Особистий внесок: дослідження нормативної бази щодо методів стандартизації ліпосомальних препаратів, участь у систематизації матеріалу, написанні та оформленні статті до друку).

3. Вороніна, А. К. Гепатопротекторна ефективність препарату Лесфаль за експериментального гепатиту в щурів / А. К. Вороніна, Г. І. Борщевський // Фармакологія та лікарська токсикологія. - 2013. - № 2 (33). - С. 37-41. (Особистий внесок: участь у зборі та обробці первинного матеріалу, написанні статті).

4. Борщевский, Г. И. Стандартизованная процедура валидации методик количественного определения суммарных препаратов в варианте калибровочного графика / Г. И. Борщевский, А. И. Гризодуб, В. Л. Шевина // Фармаком. - 2013. - № 3. - С. 24-33. (Особистий внесок: планування та виконання досліджень, участь в аналізі результатів, написання статті).

5. Ранозагоювальна дія препарату «Ефіаль» / Г. І. Борщевський, Н. Є. Лісничук, К. С. Волков, М. І. Борщевська // Фармац. часопис. - 2013. - № 3 (27). - С. 29-34. (Особистий внесок: приготування зразків препарату, участь в обговоренні експериментального матеріалу, оформлення статті до друку).

6. Borschevsky, G. I. Physical and chemical substantiation of the method for obtaining a multicomponent liposomal medicine / G. I. Borschevsky, Т. G. Yarnykh // Вісник фармації. - 2013. - № 3 (75). - С. 5-7. (Особистий внесок: планування досліджень, виконання, аналіз та узагальнення експериментальних даних, участь у написанні та оформленні статті до друку).

7. Борщевський, Г. І. Застосування методу диференційної сканувальної калориметрії для визначення якості фільтрації на прикладі препарату «Лесфаль» / Г. І. Борщевський // Фармац. журн. - 2013. - № 4.- С. 72-80.

8. Борщевський, Г. І. Можливість створення органопрепаратів на основі пептидних комплексів / Г. І. Борщевский, Н. М. Серединська // Фармац. журн. - 2013. - № 5. - С. 58-67. (Особистий внесок: участь у зборі та обробці первинного матеріалу, написанні статті).

9. Коваленко, В. М. Безпечність препарату «Ефіаль», спрей, виробництва ВАТ «Фармак» / В. М. Коваленко, Г. І. Борщевський, А. К. Вороніна // Український біофармацевтичний журнал. - 2013. - № 6 (29). - С. 31-36. (Особистий внесок: приготування зразків препарату, участь в обговоренні експериментального матеріалу, оформлення статті до друку).

10. Борщевський, Г. І. Фактори, які впливають на стабільність препарату Лесфаль / Г. І. Борщевський, І. В. Комаров, А. В. Кулініч // Управління, економіка та забезпечення якості в фармації. - 2013. - № 6 (32). - С. 10-14. (Особистий внесок: планування досліджень, участь у виконанні, аналізі та узагальненні експериментальних даних, написанні статті).

11. Вплив препарату «Ефіаль» на функціональний стан хондроцитів / Н. О. Волкова, А. М. Гольцев, Г. І. Борщевський, М. І. Борщевська // Актуальные вопросы фармацевтической и медицинской науки и практики. - 2014. - № 3 (16). - С. 52-55. (Особистий внесок: приготування зразків препарату, участь в обговоренні експериментального матеріалу, оформлення статті до друку).

12. Вивчення впливу спрею на основі концентрату депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней та фосфатидилхоліну на проліферативні характеристики хондроцитів / Н. О. Волкова, А. М. Гольцев, Г. І. Борщевський, М. І. Борщевська // Ліки України. - 2014. - № 3 (20) - С. 33-37. (Особистий внесок: приготування зразків препарату, участь в обговоренні експериментального матеріалу, оформлення статті до друку).

13. Борщевський, Г. І. Застосування методів фізики поверхні у фармацевтичній розробці препарату на основі ессенціальних фосфоліпідів / Г. І. Борщевський, Т. Г. Ярних // Фармац. журн. - 2014. - № 5. - С. 93-98. (Особистий внесок: планування досліджень, виконання, аналіз та узагальнення експериментальних даних, участь у написанні та оформленні статті до друку).

14. Борщевський, Г. І. Розробка методики кількісного визначення діючих речовин ліпосомального спрея для зовнішнього застосування Ефіаль / Г. І. Борщевський, Т. Г. Ярних, В. Н. Чабаний // Управління, економіка та забезпечення якості в фармації. - 2014. - № 6 (38). - С. 15-23. (Особистий внесок: планування досліджень, приготування зразків препарату, виконання, аналіз та узагальнення експериментальних даних, участь у написанні та оформленні статті до друку).

15. Борщевський, Г. І. Випробування ефективності антимікробних консервантів препарату «Ефіаль» / Г. І. Борщевський, З. О. Раілко, В. П. Рейда // Анали Мечниківського інституту. - 2015. - № 1. - С. 44-48. (Особистий внесок: приготування зразків препарату, участь в обговоренні експериментального матеріалу, оформлення статті до друку).

16. Розробка методик контролю якості препарату Лесфаль розчин для ін'єкцій / Г. І. Борщевський, Т. Г. Ярних, В. А. Коноваленко, В. Л. Гавриленко // Фармац. часопис. - 2015. - № 1 (33). - С. 31-36. (Особистий внесок: планування досліджень, приготування зразків препарату, виконання, аналіз та узагальнення експериментальних даних, участь у написанні та оформленні статті до друку).

17. Borschevsky, G. І. Determination of critical parameters of production technology for Lesfal / G. І. Borschevsky // Вісник фармації. - 2015. - № 3 . - С. 36-39.

18. Борщевський, Г. І. Розробка технології ліпосомального препарату у формі ін'єкційного розчину / Г. І. Борщевський // Актуальні питання фармацевтичної і медичної науки та практики. - 2015. - №3 (19). - С. 98-100.

19. Борщевский, Г. И. Изучение физико-химических свойств липосомальних препаратов / Г. И. Борщевский, И. Б. Янчук, Т. Г. Ярных // Український біофармацевтичний журнал. - 2015. - № 6(41). - С. 4-17. (Особистий внесок: планування досліджень, виконання, аналіз та узагальнення експериментальних даних, участь у написанні та оформленні статті до друку).

Статті в іноземних журналах

20. Борщевский, Г. И. Определение оптимальных параметров процесса ультрафильтрации белковых растворов / Г. И. Борщевский, И. А. Омельченко, Т. Г. Ярных // Фармация Казахстана. - 2013. - № 6. - С. 51-53. (Особистий внесок: планування досліджень, виконання, аналіз та узагальнення експериментальних даних, участь у написанні та оформленні статті до друку).

21. Определение доминирующей модели фильтрации на примере препарата Лесфаль / Г. И. Борщевский, И. О. Омельченко, В. С. Скрынский, В. Л. Шевина // Вестник фармации. - 2014. - № 1 (63). - С. 39-44. (Особистий внесок: планування досліджень, виконання, аналіз та узагальнення експериментальних даних, участь у написанні та оформленні статті до друку).

22. Development of quality indicators of liposomal preparations «EFIAL» / G. I. Borshchevskiy, T. G. Yarnykh, V. A. Konovalenko, V. N. Chabaniy // Research Journal of Pharmacy and Technology. - 2014. - Vol. 7, № 8. - P. 864-870. (Особистий внесок: планування досліджень, приготування зразків препарату, аналіз та узагальнення експериментальних даних, участь у написанні та оформленні статті до друку).

23. Борщевский, Г. И. Разработка технологии липосомального препарата в форме спрея для наружного применения / Г. И. Борщевский, Т. Г. Ярных // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Медицина. Фармация. - 2014. - № 11 (182), вып. 26. - С. 247-250. (Особистий внесок: планування досліджень, виконання, аналіз та узагальнення експериментальних даних, участь у написанні та оформленні статті до друку).

24. Борщевский, Г. И. Исследования по масштабированию процесса фильтрации спрея на основе концентрата депротеинизированного дермального слоя шкуры свиней для наружного применения / Г. И. Борщевский // Рецепт. - 2015. - № 3. - С. 60-65.

25. Borshevski, G. I. Studies on the stability of liposomal spray «Efial» for external use / G. I. Borshevski, V. A. Konovalenko, T. G. Yarnych // Nauka i studia. - 2014. - Vol. 118, № 8. - Р. 21-28. (Особистий внесок: планування досліджень, виконання, аналіз та узагальнення експериментальних даних, участь у написанні та оформленні статті до друку).

Патенти

26. Пат. № 75076 Україна, G01N 33/15 (2006. 01) Експрес-метод визначення етанолу / Борщевський Г. І., Ремез О. С., Шевіна В. Л., Круглов Є. М. - № u 2012 03813 ; заявл. 29.03.12 ; опубл. 26.11.12, Бюл. № 22. (Особистий внесок: патентний пошук, розробка методики, підготовка формули корисної моделі та опису до патенту).

27. Пат. № 97742 Україна, А 61К 9/00 Ін'єкційний препарат на основі фосфатидилхоліну та спосіб його одержання / Жебровська Ф. І., Борщевський Г. І., Борщевська М. І., Костюк Г. В. - № а 201013341 ; заявл. 10.11.10 ; опубл. 12.03.12, Бюл. № 5. (Особистий внесок:патентний пошук, розробка технології препарату, участь в обробці одержаних результатів, оформлення патенту).

28. Пат. № 101235 Україна, А 61 К 9/127, А 61 К 31/56, А 61 Р 17/06 Спосіб отримання фармацевтичної композиції ранозагоюючої та регенеруючої дії на основі пептидів дермального шару шкіри свіней / Жебровська Ф. І., Костюк Г. В., Борщевський Г. І., Борщевська М. І., Бігуняк В. В. - № а 201107335 ; заявл. 10.06.11 ; опубл. 11.03.13, Бюл. № 5. (Особистий внесок: патентний пошук, розробка технології препарату, участь в обробці одержаних результатів, оформлення патенту).

29. Пат. № 66570 Україна, А 61 К 9/127, А 61 К 31/56 Спосіб одержання фармацевтичної композиції ранозагоюючої та регенеруючої дії на основі пептидних біорегуляторів / Жебровська Ф. І., Костюк Г. В., Борщевський Г. І., Борщевська М. І., Бігуняк В. В. - № u 201107336; заявл. 10.06.11; опубл. 10.01.12, Бюл. № 1. (Особистий внесок: патентний пошук, розробка технології препарату, участь в обробці одержаних результатів, оформлення патенту).

Методичні рекомендації

30. Борщевський, Г. І. Використання методів фізики поверхні для експрес-контролю технологічного процесу і стандартизації якості ліпосомальних препаратів : метод. рек. / Г. І. Борщевський, І. О. Омельченко, І. Б. Янчук - Х. : НФаУ, 2015. - 48 с. (Особистий внесок: пошук, обробка та узагальнення первинного матеріалу, написання методичних рекомендацій, участь в оформленні та їх виданні).

Фармакопейні статті

31. Державна Фармакопея України: Ліпосомальні лікарські засоби / Держ. п-во «Науково-експертний фармакопейний центр». - 2 вид. - Х. : РІРЕГ, 2014. - С. 1036-1038. (Особистий внесок: пошук, обробка, аналіз та узагальнення первинного матеріалу, участь у розробці й оформленні фармакопейної статті).

Тези доповідей

32. Борщевский, Г. И. Оптимизация процесов фильтрации / Г. И. Борщевский, В. С. Скрынский // Сучасні досягнення фармацевтичної технології : матеріали І наук.-практ. конф. з міжнар. участю, Харків, 17-18 листоп. 2011. - Х. : Вид-во НФаУ, 2011. - С. 451.

33. Борщевський, Г. І. Препарат ранозагоюючої лії на основі фізіологічно активногокомплексу, отриманого з дермального шару шкіри свиней / Бігуняк В.В., Борщевська М.І., Ліснічук Н.Є., Борщевський Г.І., Шевіна В.Л //Науково-технічний прогрес і оптимізація технологічних процесів створення лікарських препаратів : матеріали 4-ої науково-практичної конференції з міжнародною участю - Укрмедкнига, 2011-Тернопіль ТДМУ - С. 195.

34. Борщевский, Г. И. Технологические аспекты создания инъекционного препарата на основе эссенциальных фосфолипидов / Г. И. Борщевский, Т. Г. Ярных // Новината за напреднали наука : материалы 9-ой междунар. науч.-практ. конф. - София : «Бял ГРАД-БГ» ООД, 2013. - Т. 51. Химия и химически технологии. - С. 28-30.

35. Борщевський, Г. І. Перспективи використання диференційної скануючої колориметрії для вивчення якості фільтрації лікарських препаратів / Г. І. Борщевський, Т. Г. Ярних // Управління якістю в фармації : матеріали VІІ наук.-практ. конф., Харків, 17 трав. 2013 р. / М-во охорони здоров'я України; Нац. фармац. ун-т. - Х., 2013. - С. 20.

36. Борщевский, Г. И. Перспективы создания инъекционного липосомального препарата гепатопротекторного действия / Г. И. Борщевский, Т. Г. Ярных // Пріоритети розвитку медичних наук у ХХІ столітті: матеріали міжнар. наук.-практ. конф., Одеса, 18-19 квіт. 2014 р. - Одеса : ГО «Південна фундація медицини», 2014. - С. 9-11.

37. Борщевський, Г. И. Физико-химические исследования при стандартизации препарата «Лесфаль» / Г. И. Борщевский, Т. Г. Ярных // Управління якістю в фармації : матер. VІІІ наук.-практ. конф., Харків, 23 трав. 2014 р. - Х. : Вид-во НФаУ, 2014. - С. 18.

38. Борщевський, Г. І. До питання стандартизації ліпосомальних лікарських препаратів / Г. І. Борщевський // Актуальні проблеми фармацевтичної науки і практики. - 2014.: Медична наука та практика на сучасному історичному етапі : зб. тез наук. робіт учасників міжнар. наук.-практ. конф., Київ, 9-10 трав. 2014 р. - С. 100-102.

39. Борщевський, Г. І. Вивчення процесу ультрафільтрації білкових розчинів / Г. І. Борщевський, Т. Г. Ярних // Фармацевтичні та медичні науки: актуальні питання : зб. матеріалів міжнар. наук.-практ. конф., Дніпропетровськ, 16-17 трав. 2014 р. - Дніпропетровськ : Організація наукових медичних досліджень «Salutem», 2014. - С. 130-131.

40. Динаміка контракції опікових ран за умов експериментального термічного пошкодження шкіри на тлі цукрового діабету / Г. І. Борщевський, Н. Є. Лісничук, І. Я. Демків, М. І. Борщевська // Динамика научных исследований: материалы междунар. науч.-практ. конф., Przemysl, 07-15 июля 2015. - Przemysl , Польша : Sp. z o.o. “Nauka I studia”, 2015. - С. 46-48.

41. Борщевский, Г. И. Определение индекса окисленности липосомальных наночастиц / Г. И. Борщевский // Современная европейская наука : материалы конф., Sheffield, 30.06 - 07.07.2015. - Sheffield: Science and education LTD, 2015. - С. 68-70.

42. Зміни про- та антиоксидантного балансу в організмі білих щурів за умов термічного опіку на тлі цукрового діабету та при корекції препаратом «Ефіаль»/ Г. І. Борщевський, Н. Є. Лісничук, І. Я. Демків, М. І. Борщевська // Прикладные научные разработки: материалы междунар. науч.-практ. конф., Прага, 22-30 июля 2015. - Прага : Publishing House “Education and Science”, 2015. - С. 59-61.

43. Borschevskiy, G. I. Investigation of the chemical and structural properties of the liposome medicines obtained from various lipids / G. I. Borschevskiy, I. B. Yanchuk, Т. G. Yarnykh // Scientific horizons : материалы междунар. науч.-практ. конф., Великобритания, 30.09-07.10.2015. - Sheffield, 2015. - С. 68- 69.

44. Борщевський, Г. І. Перспективи створення лікарських засобів на основі нанобіотехнології / Г. І. Борщевський, М. І. Борщевська, Т. Г. Ярних // Технологічні та біофармецевтичні аспекти створення лікарських препаратів різної направленості дії : матеріали 2-ої Міжнар. наук.-практ. інтернет-конф., Харків, 2015. - Х., 2015. - С. 49-50.

Размещено на Allbest.ru