1960 год. Было случайно обнаружено, что способностью ингибировать АКФ обладает яд южноамериканской змеи. Из этого яда удалось выделить действующее вещество (пептидной природы), получившее название тепротид.

1964 год. Блэк синтезировал первый неизбирательный в-адреноблокатор пропранолол, получивший применение в качестве лекарственного средства.

1965 год. А. Л. Мясников удостоен высокой международной награды кардиологов -- «золотой стетоскоп», доказав, что причиной гипертонической болезни является психо-эмоциональное перенапряжение, повторяющиеся стрессовые ситуации, которые часто испытывают люди современного общества [1].

1967 год. б- и в- адренорецепторы были разделены на подгруппы: б1 - и б2-адренорецепторы, в1- и в2- адренорецепторы [13].

1968 год. Синтезирован и изучен стимулятор б2-адренорецепторов клонидин (клофелин).

1970 год. Синтезирован и изучен первый избирательный («кардиоселективный») в-адреноблокатор практолол.

1971 год. Был осуществлен синтез тепротида, однако практического применения из-за сложности получения это вещество не получило, и начался поиск более доступных ингибиторов АКФ путем направленного создания синтетических соединений.

1972 год. Синтезирован первый «гибридный» адреноблокатор лабеталол, блокирующий одновременно б- и в- адренорецепторы.

1974 год. Синтезирован избирательный блокатор постсинаптических б - адренорецепторов -- празозин.

1970 1974 гг. Во время поиска ингибиторов АКФ было синтезировано и исследовано около 4000 соединений.

1975 год. Первым синтетическим препаратом принципиально новой группы лекарственных средств -- ингибиторов ангиотензин-конвертирующего фермента (АКФ), вошедшим в медицинскую практику как эффективное антигипертензивное средство, стал каптоприл.

80-е начало 90-х гг. Созданы оригинальные отечественные в- адреноблокаторы. Внедрен в медицинскую практику оригинальный «гибридный» адреноблокатор -- проксодолол.

Середина 1980-х гг. Были идентифицированы американскими и французскими исследователями имидазолиновые рецепторы [5].

Начало 90-х годов. Создан первый непептидный синтетический блокатор АТ_I-рецепторов -- препарат лозартан (козаар), получивший практическое применение в качестве антигипертензивного средства [13].

3. Классификация

Наиболее рациональным подходом к разделению гипотензивных средств на группы является их классификация по механизму фармакологического действия:

1. Препараты центрального действия (препараты, уменьшающие активность симпатической нервной системы) [14]

1.1. Центральные б2-агонисты и селективные агонисты имидазолиновых рецепторов

- Клонидина гидрохлорид (Клофелин-Дарница)

- Метилдофа (Допегит, Альдомет)

- Гуанфацина гидрохлорид (Эстулик)

1.2. Симпатолитики

- Резерпин (Серпазил)

- Раунатин

- Октадин

1.3. в1-адреноблокаторы и в1- + в2- адреноблокаторы

- Метипранолол (Тримепранол)

- Ацебутолол (Сектраль)

- Метопролол (Корвитол)

- Пропранолол (Индерал, Анаприлин)

- Пиндолол (Вискен)

- Атенолол

1.4. б1-адреноблокаторы и гибридные (б + в)- адреноблокаторы

- Празозин (Минипрес)

- Доксазозин (Кардура)

- Лабеталол (Лакардия)

2. Препараты периферического действия (периферические сосудорасширяющие средства)

2.1. Периферические вазодилятаторы и активаторы калиевых каналов

- Гидралазина гидрохлорид (Апрессин)

- Диазоксид (Гиперстат)

- Миноксидил

- Нитропруссид натрия (Нанипрусс, Ниприд)

- Дигидралазин

- Молсидомин

2.2. Ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента (АПФ) и антагонисты рецепторов ангиотензина ЙЙ

- Эналаприл (Эналаприл-Дарница)

- Каптоприл (Капотен)

2.3. Антагонисты ионов кальция и серотониновых рецепторов.Спазмолитические средства

- Нифедепин (НифедепинДарница)

- Амлодипин (АмлоприлДарница)

- Верапамил (Верапамила гидрохлоридДарница)

- Папаверина гидрохлорид (Папаверина гидрохлоридДарница)

- Бендазол (ДибазолДарница)

- ПапазолДарница (Папаверина гидрохлорид+бендазол)

3. Препараты, влияющие на водно-солевой обмен и уменьшающие объём циркулирующей крови (диуретики) [15]

- Гидрохлортиазид (Дихлотиазид)

- Клопамид (Бринальдикс)

- Хлорталидон (Оксодолин)

4. Препараты для комплексного лечения гипертонической болезни и комбинированные средства [11]

Табл. 3.1.

Название	Состав	Фармакологическая группа	Доза, мг
Адельфан, Алсидрекс-Г, Лазирос	Резерпин Гидралазин	Симпатолитик центрального действия Миотропный вазодилататор	0,1 10
Адельфан-эзидрекс, Лазирос-Н, Релсидрекс Г, Тринитон	Резерпин Гидралазин Гидрохлортиазид	Симпатолитик центрального действия Миотропный вазодилататор Диуретик	0,1 10 10
Аценозин, Бринердин, Норматенс	Резерпин Дигидроэргокристин Клопамид	Симпатолитик центрального действия Миотропный вазодилататор Диуретик	0,1 0,5 5
Вискальдикс	Пиндолол Клопамид	-адреноблокатор с внутренней симпатомиметической активностью Диуретик	10 5
Калбета	Атенолол Нифедипин	Кардиоселективный -адреноблокатор Антагонист кальция	50 20
Капозид-25	Каптоприл Гидрохлортиазид	Ингибитор АПФ Диуретик	25 25
Капозид-50	Каптоприл Гидрохлортиазид	Ингибитор АПФ Диуретик	50 50
Ко-ренитек, Энап-Н	Эналаприл Гидрохлортиазид	Ингибитор АПФ Диуретик	10 25
Кристепин	Резерпин Дигидроэргокристин Клопамид	Симпатолитик центрального действия Миотропный вазодилататор Диуретик	0,1 0,58 5
Метопресс	Метопролол Гидрохлортиазид	-адреноблокатор Диуретик	100 12,5
Синипресс	Резерпин Дигидроэрготоксин Гидрохлортиазид	Симпатолитик центрального действия Миотропный вазодилататор Диуретик	0,1 0,6 10
Слоу-тразитензин	Окспренолол Хлорталидон	-адреноблокатор Диуретик	160 20
Тенорик, Теноретик	Атенолол Хлорталидон	-адреноблокатор Диуретик	100 25
Трирезид-К	Резерпин Гидралазин Гидрохлортиазид Хлорид калия	Симпатолитик центрального действия Миотропный вазодилататор Диуретик Соль калия	0,1 10 10 350

4. Механизмы биологического действия

Нейрон способен иметь до нескольких десятков тысяч межклеточных контактов, большинство из которых обеспечивается определенными морфологическими структурами -- синапсами, состоящими из пресинаптического окончания и постсинаптической мембраны, разделенных синоптической щелью, которая заполнена рыхлым коллагеноподобным веществом. Клеточную поверхность нейронов можно рассматривать как приемник разнообразнейших сигналов. Основой восприятия нейроном химического сигнала в синапсе, а также ряда модулирующих влияний являются рецепторы [16].

Рецепторы представляют собой надмолекулярные образования, состоящие из белков, а также гликолипидных компонентов. Они способны под действием медиатора либо непосредственно изменять потоки ионов через мембрану (ионотпропные рецепторы), либо индуцировать образование вторичных мессенджеров, которые, в свою очередь, меняют ряд свойста нейрона (метаботропные рецепторы).

Нейромедиатор Ї освобождающийся из пресинаптических окончаний при нервном импульсе химический посредник, который диффундирует через синоптическую щель и вступает во взаимодействие с белками-рецепторами постсинаптической мембраны.

Межнейрональные химические синапсы подразделяются на два типа: возбуждающие и тормозные, причем первые, как известно, способствуют генерации новых импульсов, а вторые приводят к снятию действия приходящих сигналов. Это деление определяется в значительной мере природой рецепторов.

4.1 Механизм действия препаратов, уменьшающих активность симпатической нервной системы

Одним из важнейших звеньев в регуляции артериального давления является симпатическая нервная система. Тонус симпатической нервной системы регулируется через центры, контролирующие работу сердечно-сосудистой системы. Наиболее важным из них является рострально-вентролатеральная область продолговатого мозга, где располагаются различные типы рецепторов, в том числе б2-адренорецепторы и имидазолиновые рецепторы. В последние годы показано, что имидазолиновые рецепторы принимают активное участие в контроле артериального давления, оказывая выраженное регулирующее воздействие на деятельность симпатической нервной системы [5].

4.1.1 Селективные агонисты имидазолиновых рецепторов

Имидазолиновые рецепторы принято подразделять на два основных типа, получивших названия I1 и I2. Их классификация, функциональные особенности и значение как мишеней фармакологической регуляции являются предметом интенсивных исследований [5].

I1-рецепторы локализованы в мембранах нейронов ствола головного мозга, клетках мозгового вещества надпочечников, почках, поджелудочной железе, тромбоцитах. Именно с преимущественным возбуждением рецепторов данного типа связано действие современных гипотензивных препаратов. Рецепторы типа I2 обнаружены в нейронах коры больших полушарий, клетках почек, печени, тромбоцитах; их роль как возможного объекта фармакологического воздействия пока изучена меньше.

Одним из эндогенных лигандов имидазолиновых рецепторов, очевидно, является агмантин -- продукт декарбоксилирования аргинина. Однако поиски в этом направлении еще не завершены. Примечательно, что эндотелиальный релаксирующий фактор (NO) тоже образуется из аргинина.

Основной мишенью для действия гипотензивных средств являются центральные имидазолиновые рецепторы типа I1, расположенные в ростральном вентролатеральном отделе продолговатого мозга. Их активация ведет к снижению тонуса сосудодвигательного центра, уменьшению активности симпатических нервов, вследствие чего ослабляется выброс норадреналина из адренергических нейронов. В дополнение к данному механизму уменьшается выделение адреналина из надпочечников, где также имеются имидазолиновые I1-рецепторы. Результатом этих влияний является снижение тонуса резистивных сосудов, брадикардия, повышение электрической стабильности миокарда.

Кроме того, имидазолиновые рецепторы локализуются в почках, на мембранах митохондрий канальцевого эпителия. Их стимуляция (по мнению большинства исследователей, эти рецепторы принадлежат к типу I1), приводящая к угнетению реабсорбции ионов натрия и диуретическому действию, также вовлечена в реализацию гипотензивного эффекта. Этому способствует и снижение продукции ренина, отчасти обусловленное уменьшением симпатических влияний.

Возбуждение I1-рецепторов в в-клетках островков Лангерганса поджелудочной железы вызывает усиленную секрецию инсулина в ответ на углеводную нагрузку и способствует гипогликемическому эффекту.

4.1.2 Стимуляторы и блокаторы б - адренорецепторов

б-Адренорецепторы содержатся в различных тканях, в большой мере они локализованы в кровеносных сосудах. Природным агонистом б- адренорецепторов является норадреналин. Воздействие на б-рецепторы в гладких мышцах приводит к увеличению проницаемости клеточной мембраны для неорганических ионов. Активация пресинаптических б-адренорецепторов вызывает сужение сосудов и прессорный эффект (повышение артериального давления). В настоящее время установлено, что б-рецепторы делятся на подгруппы: б1- и б2- рецепторы. б1-Адренорецепторы локализованы в основном постсинаптически, б2-адренорецепторы -- пресинаптически [9].

б1-Адреномиметики (стимуляторы) обладают сосудосуживающим действием, следовательно б1-адреноблокаторы характеризуются обратным действием -- расширяют периферические сосуды.

Стимуляция б2-адренорецепторов приводит к ингибированию аденилатциклазы, снижению уровня цАМФ (стимуляция б1-рецепторов не влияет на аденилатциклазу, но приводит к возникновению нервного импульса вследствие высвобождения ионов кальция).

При использовании препаратов данной группы сначала возникает кратковременный прессорный эффект и затем гипотензивный, определяющийся стимуляцией тормозных а2-рецепторов сосудодвигательных центров головного мозга, уменьшением импульсов от ЦНС к кровеносным сосудам и снижением количества выделяющегося из нервных окончаний норадреналина.

Артериальное давление снижается в основном за счет уменьшения периферического сосудистого сопротивления, незначительно Ї за счет снижения частоты сердечных сокращений и сердечного выброса. Привлекательной особенностью этих препаратов является своеобразное «нормализующее» действие на центральную гемодинамику, проявляющееся в снижении сердечного выброса у лиц с его исходно высоким значением и повышении при исходно низких величинах [11].

Наблюдаются такие побочные эффекты Ї заложенность носа, сухость во рту, седативный эффект.

Основой антигипертензивного действия б1-адреноблокаторов является уменьшение периферического сосудистого сопротивления. Селективные постсинаптические адреноблокаторы благоприятно воздействуют на липидный спектр крови, что создает предпосылки для широкого применения при длительной монотерапии гипертонической болезни. Опыт клинического использования селективных ₁-адреноблокаторов выявил ряд особенностей их применения. Во-первых, им присущ так называемый «эффект», или «феномен» первой дозы, проявляющийся в потере ортостатической устойчивости после первого приема ₁-адреноблокатора. В этой связи лечение рекомендуют начинать с минимальной дозы препарата, больного следует предупреждать о возможности возникновения постуральных реакций. Как правило, специальной медикаментозной коррекции ортостатических нарушений не требуется, они проходят в течение первых двух суток от начала терапии. Во-вторых, у ряда пациентов (5 10%) на протяжении первых трех недель терапии наблюдается «ускользание» гипотензивного эффекта, характеризующееся тем, что для сохранения достигнутого гипотензивного эффекта требуется увеличение дозы препарата.

4.1.3 Блокаторы в - адренорецепторов

В настоящее время по основному виду действия в-адреноблокаторы делят на две группы: препараты избирательного действия, влияющие в основном на в1-адренорецепторы и препараты неизбирательного действия, влияющие одновременно на в1- и в2- адренорецепторы. Важность такого деления связана с тем, что основное терапевтическое действие этих препаратов (антиангинальное, антиаритмическое, антигипертензивное) связано с блокадой в1-адренорецепторов сердца. Блокада же в2-адренорецепторов, локализующихся в бронхах, периферических сосудах и некоторых других органах, может сопровождаться нежелательными побочными эффектами, особенно у больных с обструктивными заболеваниями лёгких, при патологии периферических сосудов, при гиперсекреции адреналина, инсулиновой гипогликемии и некоторых других патологических состояниях, в этих случаях имеет преимущество применение избирательно действующих (кардиоселективных) препаратов [17].

Уменьшение сердечного выброса за счет урежения частоты сердечных сокращений является гемодинамической основой гипотензивного эффекта в- адреноблокаторов только в первые дни приема препаратов. Последующий гипотензивный эффект, вероятно, может быть обусловлен несколькими механизмами -- их центральным действием, подавлением выработки ренина, изменением активности цАМФ и рядом других. Методологические аспекты применения всех -адреноблокаторов идентичны. Увеличивая постепенно дозу препарата, можно понижать артериальное давление, однако это чревато развитием побочных явлений и требует перехода на комбинированное лечение. Одним из весьма нежелательных побочных эффектов -адреноблокаторов при их многомесячном приеме, с которым необходимо считаться, является ухудшение липидного спектра крови, что повышает риск развития атеросклероза [11].

Некоторые в-адреноблокаторы оказывают, наряду с в-адреноблокирующим действием, стимулирующее влияние на в-адренорецепторы, т. е. проявляют частичную агонистическую активность. Связано это с тем, что в той или иной мере они сохраняют структурное сходство с основным агонистом в-адренорецепторов -- изопропилнорадреналином (изадрином). Эта активность выражена у в-адреноблокаторов в значительно меньшей степени, чем у изадрина [17].

Наличие внутренней симпатомиметической активности у представителей этой группы препаратов необходимо расценивать как способность в наименьшей степени урежать частоту сердечных сокращений, а иногда и вызывать развитие тахикардии. В силу этих причин применение -адреноблокаторов с внутренней симпатомиметической активностью больным гипертонической болезнью должно быть ограничено. Среди всех гипотензивных средств -адреноблокаторы имеют наиболее «жесткие» противопоказания для назначения и так же, как диуретики, обладают способностью вызывать большое количество побочных эффектов при длительной терапии [11].

4.1.4 Симпатолитики

Симпатолитики -- вещества, тормозящие передачу адренергического возбуждения путем снижения количества медиатора, поступающего к симпатическим нервным окончаниям. Симпатолитики отличаются от адреноблокаторов тем, что сами непосредственно не взаимодействуют с адренорецепторами, а уменьшают депонированное количество норадреналина в везикулах, способствуют истощению его запасов и, соответственно, ослабляют или прерывают передачу нервного возбуждения [9].

Выведение препаратов через почки и желудочно-кишечный тракт происходит медленно, и метаболиты могут длительно циркулировать в организме. Начало отчетливого гипотензивного действия приходится на 4 5-й дни терапии, а максимум -- не ранее чем через 2 недели [11].

4.2 Механизм действия периферических сосудорасширяющих средств

4.2.1 Периферические вазодилататоры

Под периферическими вазодилататорами принято подразумевать препараты, действующие на самые отдаленные (дистальные) отделы сосудистой системы (артериолы и венулы), определяющие устойчивость периферических сосудов и депонирование крови в венозном русле [9].

Некоторые препараты оказывают влияние преимущественно на тонус вен, другие расширяют преимущественно артериолы. Получены также препараты, оказывающие одновременно вено - и артериолорасширяюшее действие [13].

Применение периферических вазодилятаторов основано на том, что влияя на венозный тонус и увеличивая этим емкость периферического сосудистого русла, они могут уменьшить приток крови к сердцу и снизить так называемую преднагрузку и кровенаполнение легких, а понижая тонус артерий, они могут уменьшить сопротивление сердечному выбросу и таким образом способствовать его увеличению. Улучшается также перфузия органов и тканей. Может уменьшиться потребность миокарда в кислороде и улучшиться кровоснабжение субэндокардиальных его отделов. Уменьшение гипоксии миокарда, улучшение его сократительной способности и гемодинамики может привести к ограничению зоны поражения при инфаркте миокарда.

Препараты данной группы могут вызывать задержку натрия и воды, вторичный альдостеронизм и нарушение внутрипочечной гемодинамики. Смешанные вазодилататоры помимо этого могут вызвать также уменьшение венозного возврата крови к сердцу. Комбинированное назначение вазодилататоров с диуретиками и особенно с адренергическими блокаторами предотвращает развитие большинства нежелательных эффектов [11].

4.2.2 Ингибиторы АПФ и антагонисты рецепторов ангиотензина II

Важную роль в регуляции артериального давления и водно-электролитного баланса играют ренин-ангиотензин-альдостероновая и симпатико-адреналовая системы [18].

Ангиотензин (АТ II) -- вазоконстрикторный гормон, кроме того, он способствует задержке натрия и воды, а также увеличивает активность симпаггико-адреналовой системы и вызывает структурные изменения миокарда и гладкой мускулатуры сосудов.

Высокая активность ренина в плазме крови и гиперактивность ренин-ангиотензин-альдостероновой системы -- прогностически неблагоприятные показатели при гипертонической болезни; в этом случае увеличивается также вероятность развития острого инфаркта миокарда.

При изучении эндогенных превращений ангиотензиногена обнаружено, что первой ступенью его ферментативного расщепления (под влиянием ренина) является образование ангиотензина I -- декапептида, мало влияющего на сосудистое сопротивление и артериальное давление; в дальнейшем же ангиотензин I превращается под влиянием другого фермента (ангиотензин-конвертирующего -- АКФ) в ангиотензин II -- октапептид, обладающий сильной сосудосуживающей и прессорной активностью. Изучение свойств ангиотензина II показало, что это соединение связывается со специфическими ангиотензиновыми (АТ_I) рецепторами стенок кровеносных сосудов и вызывает быстрое и длительное повышение артериального давления. Кроме того, он стимулирует секрецию альдостерона, а в больших дозах -- и секрецию антидиуретического гормона гипофиза, что сопровождается увеличением реабсорбции ионов натрия и воды и развитием гиперволемии [13].

Принципиально существуют четыре возможности предотвратить влияние на артериальное давление ангиотензина II:

1. ингибирование образования ренина

2. ингибирование образования ангиотензиногена

3. ингибирование образования или активности АКФ

4. блокада ангиотензиновых АТ1-рецепторов

Антагонисты рецепторов АТ_IIЇ это современные антигипертензивные препараты, действие которых основано на торможении активности ренин-ангиотензин-альдостероновой системы на уровне ангиотензиновых рецепторов 1-го типа (АТ_I-рецепторы) [18].

Учитывая то, что артериальная гипертензия часто сочетается с сердечной недостаточностью, важно отметить, что ингибиторы АПФ находятся у «основания» «пирамиды» лечения двух этих заболеваний. Особенностью клинического применения этой группы препаратов является развитие отчетливого гипотензивного эффекта в течение первых двух-трех недель терапии [11].

4.3 Диуретики

Кроме случаев, при которых необходимо быстрое снижение артериального давления, для длительного лечения гипертензии наиболее подходящими остаются диуретики. Исходя из натрийуретического действия диуретиков как основного механизма обеспечения коррекции артериального давления, рекомендуется ежедневный прием препаратов, причем величина диуреза при этом не является адекватным показателем эффективности гипотензивной терапии диуретиками. Поэтому нецелесообразно стремиться к выведению значительных объемов жидкости у больных гипертонической болезнью [11].

5. Методы получения гипотензивных веществ

5.1 Получение клофелина

Клофелин (2- (2,6-дихлорфениламино) имидазолина гидрохлорид) -- высокоэффективный гипотензивный препарат с центральным механизмом действия, уменьшает тонус симпатической нервной системы и одновременно усиливает активность блуждающего нерва, в результате чего понижается артериальное давление и урежаются сердечные ексанаиях, оказывает седативное действие [19].

Синтез клофелина (I) из тетраметилтиурамдисульфида (II) разработан по схеме, состоящей из двух стадий:

1 стадия. Получение N, N- Диметил- N'- (2,6-дихлорфенил)- С- хлорформамидина гидрохлорида (V)

2 стадия. Получение 2- (2,6-Дихлорфениламино) имидазолина гидрохлорида (клофелина) (I)



Описание технологии

1 стадия. Получение N, N- Диметил- N'- (2,6-дихлорфенил)- С- хлорформамидина гидрохлорида (V)

Через раствор 96 г тетраметилтиурамдисульфида (II) в 1,2 л сухого СН2Сl2 в течение 30 40 мин пропускают 200 г сухого хлора (используется эквимолярное количество хлора, так как при избытке хлора образуется молекулярный комплекс N, N - диметил - N - дихлорметилениммоний хлорида (III) с хлором, который может быть разрушен с высвобождением III лишь при нагревании до 80 °С или при кристаллизации из ацетонитрила), поддерживая температуру 20 30 °С охлаждением массы холодной водой (хлорирование тиурама является экзотермическим процессом).

Смесь СН2С12 и SCl2 отгоняют (образовавшаяся при хлорировании тиурама двухлористая сера не позволяет получить V), приливают 0,6 л сухого СН2С12, снова отгоняют; операцию отгонки повторяют еще раз. К остатку дважды приливают по 400 мл сухого СН2С12, каждый раз смесь перемешивают и растворитель отсасывают через грибок с пористым стеклянным фильтром.

Поскольку III гигроскопичен, его без выделения превращают в V. К остатку приливают 330 мл сухого СН2Сl2, прибавляют при 5 10 °С раствор 98 г 2,6-дихлоранилина (IV) и 184 г N(C2H5)3 в 70 мл сухого СН2Сl2, перемешивают 2,5 часа при 20 23 °С и отфильтровывают (C2H5)3N*HC1. Раствор упаривают в вакууме, остаток растворяют в 0,5 л ацетона, прибавляют спиртовой раствор HCl и охлаждают во льду. Осадок V фильтруют, промывают 3 раза по 50 мл СН2С12, сушат в вакууме в течение 1 часа. Выход 150 г (85,7%).

Необходимый для первой стадии 2,6-дихлоранилин (IV) получают хлорированием сульфаниламида смесью соляной кислоты и перекиси водорода с последующим гидролизом образующегося 3,5-дихлорсульфаниламида водной и серной кислотой:

2 стадия. Получение 2-(2,6-Дихлорфениламино) имидазолина гидрохлорида (клофелина) (I)

При реакции V с этилендиамином в мягких условиях (18 23°С) образуется замещенный гуанидин VI, который можно выделить. Однако более удобно получать I без выделения VI -- ступенчатым нагреванием при 18 23 °С и 100 105 °С.

К 120 мл этиленгликоля, охлажденным до 5 °С, прибавляют 116,6 г V. К суспензии при 5 10 °С постепенно приливают 68 мл 72,8% этилендиамина, перемешивают при 18 23 °С в течение 3 ч, поддерживая температуру охлаждением массы холодной водой, нагревают при 100 105°С 3 ч, охлаждают до 40 50°С и в вакууме 10 20 мм рт. Ст. Отгоняют смесь этиленгликоля и IV. Остаток охлаждают до 40 50 °С, разбавляют 60 мл воды, перемешивают 15 20 мин, приливают конц. Соляную кислоту (~28 мл) до рН 4, перемешивают 1 ч при 18 23 °С, поддерживая рН 4 прибавлением HCl, фильтруют, осадок промывают 3 раза по 12 мл воды, затем 3 раза по 40 мл ацетона и сушат сначала на воздухе, а затем при 60 80 °С. Получают 71,9 г I, который кристаллизуют из 165 мл кипящей дистиллированной воды с обесцвечиванием углем. Выход 57 г (56,6%).

5.2 Получение аналогов клофелина

При поиске новых лекарственных средств с улучшенными фармакологическими свойствами были синтезированы содержащие дифторметоксильную группу аналоги клофелина, которые можно рассматривать как потенциальные противогипертензивные средства. Доказано, что при их внутримышечном введении снижение артериального давления менее выражено, чем при введении клофелина, однако есть и положительный момент, заключающийся в том, что продолжительность действия этих веществ значительно больше, а токсичность меньше [20].

Аналоги клофелина, содержащие дифторметоксильную группу, синезированы по состоящей из пяти стадий схеме:

1 стадия. Получение 2-хлор-6-дифторметоксинитробензола (II а)

2 стадия. Получение 2-хлор-6-дифторметоксианилина (III а)

3 стадия. Получение N-(2-хлор-6-дифторметоксифенил) тиомочевины (IV а)

4 стадия. Получение 2-(2-хлор-6-дифторметоксифениламино) имидазолина (V а)



5 стадия. Получение гидрохлорида 2-(2-хлор-6-дифторметоксифениламино) имидазолина (I а)

X = Cl (а), Br (б)

Описание технологии

1 стадия. Получение 2-хлор-6-дифторметоксинитробензола (II а)

Дифторметилирование 2-нитро-3-хлорфенолов и 2-нитро-бромфенолов с помощью хладона - 22 проводят в щелочной среде.

В раствор 34,7 г (0,2 моль) 2-нитро-3-хлорфенола в 60 мл изопропанола и 40 мл диоксана при температуре 35 40 єС и интенсивном размешивании подают через барботёр ток дифторхлорметана и за 10 минут прибавляют раствор 50 г (1,2 моль) гидроксида натрия в 60 мл воды. Нагревают образовавшуюся окрашенную в темно-красный цвет суспензию кристаллов нитрохлорфенолята натрия до температуры 65 70 єС и пропускают дифторхлорметан втечение 3 часов. Прибавляют 10 мл 50% водного раствора гидроксида натрия ипродолжают подачу дифторхлорметана еще 1 час. Охлаждают до 20 25 єС и отфильтровывают осадок неорганических солей, который промывают эфиром (2 Ч50 мл). Фильтрат разбавляют 500 мл воды и извлекают эфиры (4 Ч 150 мл). Соединенные эфировые промывки и экстракты отмывают водой до нейтральной реакции и сушат сульфатом магния. После отгонки эфира продукт перегоняют в вакууме.

2 стадия. Получение 2-хлор-6-дифторметоксианилина (III а)

Восстановление 2-хлор (2-бром)-6-дифторметоксинитрилов (II а, б) проводят железным порошком в воде в присутствии хлористого аммония.

К интенсивно размешиваемой суспензии 18 г (0,32 моль)железного порошка марки ПЖР 3.200.28 или 3.200.30 в растворе 3 г хлорида аммония в 70 мл воды при 95 єС за 30 минут прибавляют 18 г (0,08 моль) нитропроизводного (II а), размешивают на кипящей водяной бане 2,5 часа, а затем при слабом кипении реакционной смеси еще 1 час. Прибавляют 10 г гидроокиси натрия, 5 мл воды и отгоняют образовавшийся амин с водяным паром в охлаждаемый приемник, куда помещают 100 г хлорида натрия для облегчения экстракции амина. Его извлекают из отгона эфиром или бензолом (3 Ч 100 мл). Объединенные экстракты промывают водой до нейтральной реакции, сушат сернокислым магнием, растворитель отгоняют и остаток перегоняют в вакууме.

3 стадия. Получение N-(2-хлор-6-дифторметоксифенил) тиомочевины (IV а)

Из-за значительных пространственных трудностей, создаваемых объёмистой дифторметоксильной группой, и малой основности анилинов превратить их в соответствующие производные N-фенилтиомочевины непосредственным действием роданидов калия или аммония не удалось. N- [2-Хлор (2-Бром) - 6 - дифторметоксифенил] тиомочевины (IV а, б) получены щелочным гидролизом их N' - бензоильных производных, образующихся в результате взаимодействия анилинов (III а, б) с более активным реагентом -- бензоилизотиоцианатом.

К раствору бензоилизотиоцианата, полученного из 2,51 г (33 ммоль) безводного роданистого аммония и 4,22 г (30 ммоль) бензоилхлорида в 20 мл сухого ацетона, прибавляют 5,81 г (30 ммоль) замещенного анилина (III а) и кипятят при размешивании 10 12 минут. Охлаждают, выливают смесь на 200 мл ледяной воды, выпавший вязкий осадок N'- бензоильного производного размешивают до тех пор, пока он не превратится в порошок кремового цвета, который отфильтровывают, промывают холодной водой и отжимают. Полученный осадок суспендируют в растворе 4,4 г (0,11 моль) гидроокиси натрия в 40 мл воды и кипятят при размешивании 10 минут. Охлаждают, отфильтровывают от илистого осадка, а фильтрат на холоду подкисляют концентрированной соляной кислотой. К смеси постепенно прибавляют 10% водный аммиак до устойчивой щелочной реакции, размешивают 30 минут и продукт извлекают смесью эфир бензол (1:1, 3 Ч 70 мл). Экстракты промывают водой, сушат сульфатом магния. Отгоняют эфир и часть бензола так, чтобы осталось 40 50 мл растворителя и оставляют на ночь в холодильнике. Выпавшие кристаллы отфильтровывают и промывают холодным бензолом.

4 стадия. Получение 2-(2-хлор-6-дифторметоксифениламино) имидазолина (V а)

Галогендифторметоксипроизводные N-фенилтиомочевин (IV а, б) кипячением с йодистым метилом в метаноле превращены в изотиоурониевые соли, из которых конденсацией с безводным этилендиамином синтезированы 2-[2-хлор (2-бром)-6-дифторметоксифениламино] имидазолины (V а, б).

Смесь 2 г (7,9 ммоль) тиомочевины (IV а) и 0,8 мл (13ммоль) йодистого метила в 20 мл метанола кипятят 3 часа и оставляют на 12 часов. Метанол полностью отгоняют в вакууме при температуре не выше 40 єС. К образовавшейся изотиурониевой соли прибавляют 0,8 мл (12 ммоль) безводного этилендиамина и размешивают 1,5 часа при температуре 140 145 єС. Охлаждают, растворяют в 14 мл теплой 60% уксусной кислоты, раствор фильтруют и на холоду прибавляют при размешивании к фильтрату 8% раствор гидроокиси натрия до щелочной реакции. Выпавшее вещество извлекают смесью эфир бензол (1:1, 3.Ч 50 мл), экстракты фильтруют, промывают водой и сушат сульфатом магния. Растворитель отгоняют, остаток растворяют в 25 мл безводного бензола и фильтруют через колонку с силикагелем для отделения от смолистых примесей. Бензол отгоняют, остаток кристаллизуют из смеси гексан бензол (1:1).

5 стадия. Получение гидрохлорида 2-(2-хлор-6-дифторметоксифениламино) имидазолина (I а)

Гидрохлориды 2- [2- хлор (2- бром)- 6- дифторметоксифениламино] имидазолинов (I а, б) получены пропусканием сухого хлористого водорода в бензольные растворы оснований.

Растворяют 0,52 г (2ммоль) имидазолина (V а) в 15 мл безводного бензола и при охлаждении ледяной водой и интенсивном размешивании 1 час пропускают ток сухого хлористого водорода. Перемешивают еще 30 минут, выпавший гидрохлорид растворяют, отфильтровывают, тщательно промывают безводным бензолом и гексаном и высушивают в вакууме.

Бромпроизводные I б V б получены аналогично соответствующим хлорсодержащим соединениям I а V а, исходя из 2-нитро-3-бромфенола.

5.3 Получение в - адреноблокаторов

сосуд артериальный гипертензия фармакопейный

Синтез гидрохлорида 1-(4'-метокси-карбонилфенокси) - 3- (2'', 6'' - диметилпиперидино) пропанола-2 (I)

При поиске веществ, обладающих в-адреноблокирующей активностью, было найдено соединение (I), являющееся производным 1-фенокси-3-аминопропанола, которое не уступает по эффективности неселективному в - адреноблокатору пропранололу [21].

Синтез соединения I осуществлен реакцией натриевой соли фенола с эпихлоргидрином и последующим взаимодействием образующегося эпоксида с амином по схеме:



Описание технологии получения гидрохлорида 1 - (4' - метокси-карбонилфенокси) - 3 - (2'', 6'' - диметилпиперидино) пропанола - 2 (I)

К смеси 6,2 г (0,04 моль) метилового эфира п - оксибензойной кислоты и 11,1 г (0,12 моль) эпихлоргидрина приливают в течение 1,5 часа и при перемешивании 50 мл 1 н. NaOH, перемешивают в течение 1 часа и выдерживают при 20 єС около 16 часов. Реакционную массу экстрагируют хлороформом, экстракт высушивают безводным Na2SO4, упаривают в вакууме, под конец с добавлением толуола. Остаток растворяют в метаноле, добавляют 5,7 г (0,05 моль) 2,6-диметилпиперидина и кипятят в течение 6 часов, после чего упаривают в вакууме. Твердый остаток кристаллизуют из петролейного эфира, растворяют в абсолютном эфире, добавляют эфирный раствор хлористого водорода и получают 6,7 г гидрохлорида I.

Синтез гидрохлоридов 4 - [2 - окси - 3- трет - бутил (4 - нитробензил) аминопропокси] скатола (I а, б)

В медицине широко применяются в-адреноблокаторы бопиндолол, характеризующийся значительной длительностью действия, и пиндолол, действие которого непродолжительно [22].

Были синтезированы пара-нитро- и пара-фторбензильные производные 4-оксискатола (I а, б), превосходящие пиндолол и бопиндолол по длительности действия. Синтез осуществлен из эпоксида (IV) действием на него соответствующих аминов (III а, б) по схеме:

R=NO2 (а), F (б)

Описание технологии получения гидрохлорида 4 - [2- окси - 3 - трет - бутил (4 - нитробензил) аминопропокси] скатола (I а)

Смесь 8,72 г (0,043 моль) 4-(2,3-эпоксипропокси) скатола (IV) и 8,5 г (0,04 моль) 4-нитробензил-трет-бутиламина (III а) нагревают в течение 20 часов при температуре 110 120 єС, плав охлаждают, смешивают с 20 мл спирта, осадок отфильтровывают, кристаллы промывают 10 мл этилацетата и получают 10,1 г основания II а. Основание растворяют при нагревании в 125 мл ацетона, охлаждают и подкисляют раствором соляной кислоты в спирте до pH 4,55,0. Оставляют на 12 часов при 5 єС, осадок отфильтровывают, промывают 10 мл ацетона и получают 8,92 г оранжевых кристаллов с температурой плавления 204 єС. Из маточного раствора выделяют дополнительно 2,65 г продукта. Общий выход составляет 63 %.

Гидрохлорид 4- [2 - окси - 3 - трет - бутил (4 - фторбензил) аминопропокси] скатола (I б) получают аналогичным образом из 4-(2,3-эпоксипропокси) скатола (IV) и 4-фторбензил-трет-бутиламина (III б).

6. Фармакопейный анализ препаратов

Согласно Закону Украины "О Лекарственных средствах", статья 2, Государственная Фармакопея Украины Ї это правовой акт, который содержит общие требования, предъявляемые к лекарственным средствам, фармакопейные статьи (монографии), а также методики контроля их качества [23].

Соответствие лекарственных веществ требованиям Фармакопеи проверяют физическими, химическими, физико-химическими и биологическими методами.

Физические методы анализа предусматривают изучение физических свойств вещества, не прибегая к химическим реакциям. К ним относятся: определение растворимости, прозрачности или степени мутности, цветности; влажности, температуры плавления, кипения [12].

Химические методы исследования основаны на химических реакциях. К ним относятся: определение зольности, реакции среды (рН), характерных числовых показателей масел и жиров (кислотное число, йодное число, число омыления и т. д.).

Для целей идентификации лекарственных веществ используют только такие реакции, которые сопровождаются наглядным внешним эффектом, например изменением окраски раствора, выделением газов, выпадением или растворением осадков и т. п.

К химическим методам исследования относятся также весовые и объемные методы количественного анализа, принятые в аналитической химии (метод нейтрализации, осаждения, окислительно-восстановительные методы и др.).

Качественный и количественный анализ органических лекарственных веществ, как правило, проводят по характеру функциональных групп в их молекулах.

С помощью физико-химических методов изучают физические явления, которые происходят в результате химических реакций (измерение интенсивности окраски в зависимости от концентрации вещества в колориметрическом методе и т.д.). К физико-химическим методам относятся: оптические (фотометрия, включающая фотоколориметрию и спектрофотомерию, и т.д.), электро-химические (потенциометрический и полярографический методы), хроматографические методы.

Для определения прозрачности и цветности используют одинаковые пробирки из бесцветного прозрачного нейтрального стекла с плоским дном. Сравнивают равные слои исследуемой жидкости и свежеприготовленного эталона. Сравнение проводят в рассеянном дневном свете через 5 минут после приготовления эталона при определении прозрачности, просматривая образцы вдоль вертикальной оси пробирок на чёрном фоне, а при определении цветностиЇ вдоль вертикальной оси либо перпендикулярно оси (горизонтально) на белом фоне. Исследуемая жидкость считается прозрачной и бесцветной, если она выдерживает сравнение с водой или растворителем, который использовался для приготовления исследуемой жидкости, а также, если её опалесценция не превышает опалесценцию эталона и окраска не более интенсивная, чем эталона, соответственно [23].

Измерение с помощью поляриметра оптической активности используется в фармакопейных целях главным образом для установления подлинности вещества и испытания на чистоту (отсутствие оптически неактивных посторонних веществ). Оптической активностью называется свойство отклонять плоскость поляризации при прохождении через них прямолинейно поляризованного света [24].

Оптическое вращение -- это угол, на который отклоняется плоскость поляризации при прохождении поляризованного света через слой жидкости. Вещества считаются правовращающими или левовращающими в зависимости от того, вращается ли плоскость поляризации по часовой стрелке или против нее, что устанавливается наблюдением в направлении источника света. Вращение вправо обозначается (+), а вращение влево (-). В Международной фармакопее оптическое вращение (б) выражается в угловых градусах. В системе единиц СИ угол оптического вращения выражается в радианах (рад).

Удельное оптическое вращение [б]DІє жидкости представляет собой угол вращения б, выраженный в градусах, площади поляризации при длине волны линии D спектра натрия (л=589,3 нм), измеренный при 20 єC, рассчитанный для толщины слоя исследуемого вещества 1 дециметр и разделенный на плотность, выраженную в граммах на кубический сантиметр [23].

Удельное оптическое вращение [б]DІє вещества в растворе представляет собой угол вращения б, выраженный в градусах, площади поляризации при длине волны линии D спектра натрия (л=589.3 нм), измеренный при 20 єC и рассчитанный для толщины слоя 1 дециметр в пересчете на содержание 1 грамма вещества в 1 миллилитре раствора. Для удельного оптического вращения в растворе всегда указывают растворитель и концентрацию раствора.

Для того чтобы определить кислотность раствора, находят его pH -- число, которое условно характеризует концентрацию ионов водорода в водных растворах. Обычно для определения pH используют потенциометрический метод, основанный на измерении разницы потенциалов между двумя соответствующими электродами, которые опущены в исследуемый раствор: один из электродов чувствителен к ионам водорода (чаще всего стеклянный электрод), другой -- электрод сравнения (например, насыщенный каломельный электрод).

Определение температур плавления используется в фармакопейных спецификациях главным образом для установления подлинности данного вещества, так как наличие примесей в веществе приводит к более или менее заметному снижению его температуры плавления [24].

Самым распространённым способом определения температуры плавления лекарственных веществ является капиллярный метод, позволяющий установить температуру, при которой последняя твёрдая частица сгущенного вещества в капиллярной трубке переходит в жидкую фазу [23].

Чтобы рассчитать потерю массы вещества при сушке, которая выражается в процентах (масса/масса), определенное количество исследуемого вещества загружают во взвешенный бюкс, который заранее высушен, и сушат до постоянной массы или втечение рекомендуемого отдельной фармакопейной статьёй времени.

Для нахождения количества сульфатной золы обычно применяется следующая методика: точно взвешивают около 1 грамма вещества или такое количество, которое указано в частной статье, в подходящем тигле (обычно платиновом) и смачивают серной кислотой (~1760 грамм на литр); слегка нагревают для удаления избытка кислоты и прокаливают при температуре около 800° С до удаления всех черных частиц; снова смачивают серной кислотой (~1760 г/л) и вновь прокаливают; прибавляют небольшое количество карбоната аммония и прокаливают до постоянной массы [24].

Метод тонкослойной хроматографии используется в фармакопейном анализе для идентификации как самих лекарственных веществ, так и их примесей. Адсорбентом служит тонкий, равномерный слой сухого мелкоизмельченного материала, нанесенного на подходящую подложку, например, на стеклянную пластинку, алюминиевую фольгу или пластмассовую пленку. Подвижная фаза движется по поверхности пластинки (обычно под действием капиллярных сил); хроматографический процесс может зависеть от адсорбции, распределения или комбинации обоих явлений, что в свою очередь зависит от адсорбента, его обработки и природы используемых растворителей. Во время хроматографирования пластинка находится в хроматографической камере, которая обычно насыщена парами растворителя. В испытаниях на подлинность тонкослойная хроматография служит для сравнения поведения идентифицируемого материала и стандартного образца, обычно аутентичного исследуемому веществу. Если оба вещества продвигаются во время хроматографического процесса на одинаковое расстояние, можно предположить, что эти вещества идентичны.

Для установления подлинности удобно определять отношение расстояния, пройденного неизвестным веществом, к расстоянию, пройденному либо фронтом растворителя, либо стандартным образцом. На полученной хроматограмме отношение расстояния, пройденного на адсорбенте данным веществом, к расстоянию, пройденному передним краем растворителя или подвижной фазы (оба расстояния измеряют от точки нанесения испытуемого вещества), есть величина Rf, характерная для данного вещества в данной хроматографии ческой системе. Отношение расстояний, пройденных испытуемым веществом и стандартным образцом, принимают за величину Rr. На практике величины Rf могут значительно варьировать в зависимости от конкретных экспериментальных условий, поэтому величина Rr, определенная по отношению к стандартному образцу, подвергнутому хроматографированию на той же пластинке, имеет более достоверное числовое значение. Еще более надежные результаты дает сравнение с аутентичным образцом, как описано выше, и именно эта методика используется для фармакопейных целей.

Для определения положения неокрашенного вещества на полученной хроматограмме обычно необходимо обрабатывать хроматограмму реактивом, который либо обугливает разделенные вещества, либо переводит их в окрашенные или флуоресцирующие производные. Часто применяют и другой удобный метод: проводят хроматографию на пластинке, пропитанной веществом, сильно флуоресцирующим под воздействием коротковолнового ультрафиолетового света. Площади на пластинке, занятые веществами, поглощающими при той же длине волны, выглядят как темные пятна на флуоресцирующем фоне.

Наиболее ценные результаты дает применение тонкослойной хроматографии в качестве метода оценки низких уровней примесей в медицинских веществах. Для этой цели вещество наносят на хроматографическую пластинку и после хроматографирования любые вторичные пятна, которые могут быть видны на хроматограмме после соответствующего проявления, сравнивают по размеру и интенсивности с пятнами, которые дают небольшие количества ожидаемых примесей при одновременном хроматографировании на той же пластинке. Для этой методики нужно иметь в наличии ожидаемые примеси, поэтому в некоторых статьях предписывается использование аутентичных образцов примесей.

Абсорбционная спектрофотомерия -- измерение количества поглощенной веществами электромагнитной радиации определенной и узкой волновой области приближенного монохроматического излучения.

Спектральная область, используемая в фармакопейных измерениях, распространяется от коротковолновой ультрафиолетовой (190 380 нм) до видимой (380780 нм) области спектра.

Спектрофотомерия в видимой области (ранее обычно использовался термин колориметрия) -- измерение количества поглощенного излучения в видимой области спектра, обычно немонохроматического, но ограниченного применением окрашенных или интерференционных фильтров.

Ультрафиолетовые и видимые спектры вещества обычно не отличаются высокой степенью избирательности. Тем не менее, они чрезвычайно удобны для количественных определений, а для многих веществ служат дополнительным средством установления подлинности.

Применение абсорбционной спектрофотомерии в видимой и ультрафиолетовой областях спектра для методик количественного определения основано на том факте, что поглощаемость вещества обычно является константой, независимой от интенсивности падающего излучения, длины кюветы и концентрации, вследствие чего концентрация может быть определена фотометрически.

Инфракрасная область электромагнитного спектра, используемая в фармацевтическом анализе, охватывает интервал 2,5--40мкм.

Спектрофотометрические измерения в инфракрасной области спектра используются в основном как испытания на подлинность. Инфракрасный спектр уникален для каждого данного химического соединения.

Для определения подлинности исследуемого вещества сравнивают полученное значение поглощения раствора со значением величины поглощения эталонного раствора.

Поглощение (А) -- десятичный логарифм обратной величины пропускаемости (Т).

Пропускаемость (Т) -- частное от деления интенсивности света, прошедшего через вещество, на интенсивность света, падающего на вещество.

Поглощаемость (б) -- частное от деления поглощения (А) на концентрацию вещества (с), выраженную в граммах на литр, и длину слоя поглощения в сантиметрах (b).

Спектр поглощения -- часто выражаемое графически отношение поглощения или любой функции поглощения к длине волны или любой функции длины волны.

Многие нерастворимые в воде соединения проявляют кислотные или основные свойства при растворении в органических растворителях. Таким образом, выбор подходящего растворителя позволяет определять многие такие соединения с помощью неводного титрования. Далее, в зависимости от того, какая часть соединения является физиологически активной, можно титровать эту часть путем правильного выбора растворителя и титранта. Чистые вещества можно титровать непосредственно, но часто бывает необходимо отделить активный ингредиент лекарственных форм от мешающих наполнителей и носителей. Конец титрования можно определять визуально по изменению окраски или потенциометрически.

К соединениям, которые можно титровать как кислоты, относятся кислотные галогениды, ангидриды кислот, карбоновые кислоты, аминокислоты, энолы, такие, как барбитураты и ксантины, имиды, фенолы, пирролы, сульфаниламиды. К соединениям, которые можно титровать как основания, относятся амины, азотсодержащие гетероциклические соединения, четвертичные аммониевые соединения, щелочные соли органических кислот, щелочные соли неорганических кислот и некоторые соли аминов. Многие соли галоидоводородных кислот можно титровать в уксусной кислоте или уксусном ангидриде после прибавления ацетата ртути, который удаляет ион галоида переведением в неионизированный комплекс галогенида ртути. Гидрохлориды слабых оснований, не содержащие группировок, способных ацетилироваться, можно также титровать в уксусном ангидриде без добавления ацетата ртути, используя в качестве индикатора малахитовый зеленый или кристаллический фиолетовый. Титрования, проводимые при избытке уксусного ангидрида, следует применять с осторожностью, так как любая реакция ангидрида с титруемым веществом может привести к заниженным результатам.

При титровании основных соединений обычно используют объемный раствор хлорной кислоты в ледяной уксусной кислоте, хотя в особых случаях удобнее использовать раствор хлорной кислоты в диоксане. При титровании кислых соединений часто применяют объемный раствор метилата лития в растворе метанол -- толуол. Для многих случаев удобно использовать раствор гидроокиси тетрабутиламмония в толуоле; метилат натрия, ранее широко применявшийся, часто может давать вызывающий затруднения желатинообразный осадок.

Титриметрическое определение воды методом Карла Фишера основано на количественной реакции между водой и реактивом, состоящим из двуокиси серы и йода в безводном пиридине и обычно метанола. Реакцию проводят в подходящем растворителе, таком, как метанол или уксусная кислота. Конец титрования определяют при помощи электрической цепи, состоящей из микроамперметра, платиновых электродов и батареи напряжением 1,5 2 В, соединенной через переменное сопротивление порядка 2000 Ом. Сопротивление устанавливают таким образом, чтобы начальный ток проходил последовательно через платиновые электроды и микроамперметр. После каждого прибавления реактива стрелка микроамперметра отклоняется, но быстро возвращается в исходное положение. Когда титрование окончено, стрелка остается в отклоненном положении 10 15 секунд. Кроме того, конец титрования может быть определен вольтаметрическим методом. К платиновым электродам прилагают разность потенциалов порядка 30 50 мВ для обеспечения постоянного поляризационного тока и раствор титруют реактивом. Разность потенциалов определяют при помощи микровольтметра. Конечную точку считают достигнутой, когда вольтметр показывает устойчивое падение напряжения. При вольтаметрическом методе конечная точка может быть установлена графически путем построения зависимости напряжения от объема реактива и определения начала падения напряжения.