Лабораторная диагностика трихоманиоза и хламидиоза

Размещено на http://www.allbest.ru/

1. Лабораторная диагностика трихомониаза

Трихомониаз - заболевание, возникшее вследствие поражения различных отделов моче - половой системы влагалищной трихомонадой, которая у взрослых передается исключительно половым путем из-за небольшой резистентности к условиям внешней среды при высушивании гибнут мгновенно.

Трихомониаз относится к специфическим воспалительным заболеваниям женских половых органов (на его долю приходится 15-20% всех инфекционных вагинитов). Реже его выявляю у мужчин и исключительно редко у детей.

У женщин влагалищные трихомонады обнаруживаются в основном в вульве и вагине, реже в уретре, шейки матки. У мужчин поражаются уретра, простата, семенные пузырьки.

Трихомонады совершают активные поступательно-колебательные (толчкообразные) движения. Пеликула натянута на клетке неплотно, поэтому при передвижении контур простейшего как бы прогибается при столкновении препятствием.

Материал для исследования.

- у женщин исследуется отделяемое, соскобы влагалища (материал берется из заднего свода), реже уретры, сыворотка крови.

- у мужчин обычно исследуется отделяемое, соскобы уретры; первую (10-15 мл) порцию мочи, а также отделяемое препуциальной складки в капле физиологического раствора, сыворотка крови. В осадок мочи трихомонады попадают в результате смыва с влагалища у женин, а у мужчин - из уретры.

При диагностировании трихомониаза следует избегать проведения местных вагинальных или уретральных процедур перед взятием материала из уретры, влагалища. У женщин наиболее эффективно исследование материала взятого после менструации, у мужчин после 3 - 5 часового воздержания от мочеиспускания.

Методы лабораторной диагностики.

I.цитологический: 1) микроскопия нагивных препаратов

2) микроскопия окрашенных мазков

II.бактериологический (культуральный посев на влагалищную трихомонаду)

III.серологический (ИФА)

IV.ПЦР

Микроскопическое исследование нагивных препаратов.

Свежие препараты желательно исследовать непосредственно после взятия материала. В живом состоянии трихомонады легко распознаются благодаря своим активным поступательно - колебательным движениям. Лучшие результаты дает просмотр нагивного препарата в микроскопе с темнопольным конденсатором, так как при этом обнаруживаются и единичные и слабоподвижные особи в скоплениях клеточных элементов за счет хорошо видимого движения жгутиков. При исследовании следует помнить о возможности обнаружения, особенно в моче, жгутиковых простейших семейства бодонидов. В отличии от трихомонад они обладают меньшими размерами, имеют 2 жгутика и совершают быстрое поступательное движение по прямой.

После потери подвижности трихомонады распознать нельзя.

Микроскопическое исследование окрашенных мазков.

Окрашенные мазки рекомендуется приготовлять наряду со свежими нагивными препаратами. Мазки окрашивают метиленовым синим 1%, по Романовскому - Гилуа, по Граму. Наиболее эффективным является метод Романовскому-Гилуа. В окрашенных мазках отделяемого встречаются клетки плоского эпителия, лейкоциты, разнообразная микрофлора и возможно трихомонады. Постоянные идентификационные морфологические признаки влагалищных трихомонад: характерное эксцентрично расположенное темнофиолетовое ядро, нежноячеистая голубая цитоплазма. На хорошо окрашенных мазках видны 4 жгутика и краевая нить ундулирующей мембраны, окрашенные в интенсивно красный цвет. Ядро трихомонад меньше ядер эпителиальных клеток.

В мазках, окрашенных метиленовым синим, трихомонады можно спутать с измененными эпителиальными клетками.

Микроскопия позволяет установить общее количество трихомонад и степень выраженности воспалительной реакции. Следует отметить, что не всегда при микроскопическом исследовании сразу удается выявить трихомонады. Поэтому брать материал для исследования повторно.

Бактериологическое исследование.

Культуральное исследование (посев на влагалищную трихомонаду отделяемого моче - половых органов) с использованием специальных сред позволяет выявить до 95% случаев трихомониаза, особенно в латентных случаях при хроническом течении инфекции. Посев позволяет определить сопутствующие неспецифические заболевания, видовую принадлежность, количество того или иного возбудителя и чувствительность к антибактериальным препаратам.

Серологический метод.

Определение иммуноглобулинов класса Q к Trichomonas vaginalis. Количественный иммуноферментный метод. Исследуется сыворотка.

ПЦР - диагностика.

Выявление ДНК Trichomonas vaginalis в режиме реального времени. Качественный метод. Чувствительность метода 95%. Исследуя соскоб уретры или влагалища.

Культуральное, ИФА, ПЦР исследования - самые точные и современные методы диагностики трихомониаза.

2. Лабораторная диагностика хламидиоза

Хламидиоз - инфекционное заболевание, передающееся половым путем, вызываемое Chlamydia trachomatis. Является одним из самых распространенных ЗППП. Хламидиоз очень часто протекает бессимптомно и нередко сопровождается осложнениями, приводящими к инвалидности при болезни Рейтера; бесплодию или внутриутробному инфицированию, обуславливая врожденную патологию плода и новорожденного.

Хламидии представляют большую группу облигатных внутриклеточных паразитов, очень близких к грамотрицательным бактериям. Их можно рассматривать как грамотрицательные бактерии, управляющие способность синтезировать АТФ, гуанозинтрифосфат (ГТФ) и ряд других ферментных систем, иными словами утратившие способность выработки метаболической энергии. Этот дефект обусловливает их внутриклеточный рост, благодаря которому они имеют доступ к богатым энергией промежуточным продуктам метаболизма клеток хозяина. В семействе Chlamydiaceae выделено два рода - Chlamydia и Chlamydophila.

Род Chlamydia включает три вида: Chlamydia trachomatis, Chlamydia muridarum и Chlamydia suis. Chlamydia trachomatis - исключительно паразит человека, вызывает трахому, урогенитальные заболевания, некоторые формы артрита, конъюнктивит и пневмонию новорожденных. Другие виды Chlamydia заболеваний у человека не вызывают.

Род Chlamydophila составляют шесть видов: Chlamydophila psittaci, Chlamydophila pneumoniae, Chlamydophila pecorum, Chlamydophila abortus, Chlamydophila caviae и Chlamydophila felis.

Chlamydophila pneumoniae - возбудитель заболеваний респираторного тракта у человека, вызывает преимущественно острые и хронические бронхиты и пневмонии.

Chlamydophila psittaci - от птиц могут передаваться человеку, вызывая пситтакоз.

Спорадические аборты, вызванные Chlamydophila abortus, зарегистрированы у женщин, работающих с овцами, они получили название «гестационный пситтакоз».

Отмечены зоонозные инфекции, вызванные Chlamydophila felis, у людей, проявлявшиеся в виде конъюнктивита.

Chlamydophila caviae впервые выделена из конъюнктивы морской свинки.

Хорошо изучены 4 вида: 1. Chlamydia trachomatis

2. Chlamydophila pneumonia

3. Chlamydophila psittaci

4. Chlamydophila pecorum

Описаны 2 основные формы существования хламидий:

1) элементарные тела (ЭТ, внеклеточное существование, инфекционная форма)

2) ретикулярные тельца (РТ, вегетативная форма, внутриклеточное существование, предназначена для размножения)

Методы исследования.

1. цитологический (обнаружение хламидий в материале)

2. ПИФ (обнаружение хламидий в материале)

3. ИФА (А.обнаружение антител к хламидиям; Б.выявление Аг Chlamydia trachomatis)

4. ПЦР (ДНК - диагностика)

5. культуральный (посев на Chlamydia trachomatis)

1. Цитологический или микроскопический метод.

Хламидийная инфекция характеризуется поражением цилиндрического эпителия мочеполовой системы. Поэтому материалом для исследования является соскоб со слизистой шейки матки, цервикального канала на глубине ~1,5 см у женщин; уретры на глубине ~ 2,5 - 4 см у мужчин специальным стерильным зондом. Если есть отделяемое, оно убирается ватным тампоном, как и слизистая пробка из шейки матки. Перед взятием материала обследуемым не следует принимать антибиотики больше 2- х недель, мочиться в течении 1 - 2 часов.

Соскоб переносится аккуратно и очень тонко на предметное стекло. Окраска по Романовскому - Гимза. Окрашенный мазок смотрится под иммерсией для обнаружения цитоплазматических клеток - включений Провачека - Гальбершедтера (макроколоний хламидий) с «шапкой кардинала» (поджатое ядро пораженной клетки). Цитоплазматические включения четко ограничены от других элементов крови. Метод широкого доступен, но эффективен лишь при острых формах заболевания. Частота обнаружения хламидий < или = 10 - 12%.

2. Метод прямой иммунофлуоресценции (ПИФ) (прямое выявление антигенов хламидий)

Chlamydia trachomatis в материале из мочеполовых органов в норме отсутствуют. Принцип метода заключается в использовании моноклональных АТ, меченых флюоресцирующих изотиоцианатом против главного белка внешней мембраны хламидий, присутствующего во всех сероварах Chlamydia trachomatis, а также у элементарных и ретикулярных телец. Чувствительность метода достигает 90 - 95%, а применение моноклональных АТ обусловливает высокую специфичность - более 90% при наличии клинических проявлений урогенитального хламидиоза.

Материал для исследования: см. цитологический метод.

Сущность метода заключается в соединении антител, меченных флюорохромом, с антигенными субстанциями хламидий, находящимися на поверхности клетки, и последующей детекцией с помощью моминесцентного микроскопа на определенной длине волны.

В правильно приготовленном препарате цитоплазма клеток цилиндрического эпителия должна быть ярко - красного цвета (маркер правильного окрашивания), хламидийные тельца светятся изумрудно - зеленым цветом, имеют округлую форму. Результат считают положительным при наличии 10 элементных телец (ЭТ) в поле зрения или хотя бы одного внутриклеточного включения.

Достоинством метода является относительная быстрота получения результата (около 60 мин.), простота выполнения и возможность оценки клеточного состава исследуемого материала. Однако при его использовании можно получить как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты. Ложноположительные - за счет низкого качества используемых тест - систем и субъективной трактовки получаемых результатов свечения (артефактов). Ложноотрицательные - за счет неправильного взятия соскоба (отсутствие цилиндрического эпителия) или особенностей хронических форм инфекции, которые не распознаются ПИФ.

3. Метод иммуноферментного анализа (ИФА)

А. Серологический метод определения в сыворотке крови иммуноглобулинов классов M, Q, A к Chlamydia trachomatis и их титра.

Диагностический АТ титр к Chlamydia trachomatis в крови: для IgM - 1:200 и выше, для IgG - 1:10 и выше.

Во время острой хламидийной инфекции и вскоре после нее происходит повышение титра АТ IgA, IgM и IgG к Chlamydia trachomatis в крови. Инфицированный Chlamydia trachomatis организм синтезирует АТ, однако эти АТ имеют слабое защитное действие: обычно хламидии персистируют даже при наличии высоких титров АТ.

АТ IgM выявляют в острый период инфекции (уже через 5 дней после ее начала). Пик АТ IgM приходится на 1 - 2-ю неделю, затем происходит постепенное снижение их титра (как правило, они исчезают через 2-3 мес даже без лечения)

Их наличие указывает на заражение (в том числе внутриутробное) и свидетельствует об активном процессе. Титр IgM - АТ может повышаться при реактивации, реинфицировании или суперинфицировании.

АТ класса IgA выявляют в сыворотке крови через 10-14 дней после начала заболевания, их титр обычно снижается к 2-4-му месяцу в результате успешного лечения. При реинфекции титра AT IgA вновь возрастает. Если после курса лечения титр AT IgA не снижается, это указывает на хроническую или персистирующую формы инфекции. Выявление высокого титра АТ класса IgA нередко свидетельствует о выраженном аутоиммунном процессе у больного, наиболее часто встречают у больных с симптомом Райтера. У таких больных наличие АТ класса IgA говорит о тяжелом лечении заболевания.

АТ класса IgA проявляются через 15-20 дней после начала заболевания и могут сохраняться многие годы. Реинфекция сопровождается увеличением имеющегося титра АТ класса IgA. Определение титра АТ к хламидиям в крови необходимо проводить в динамике, оценка результатов исследований, основанная на однократном исследовании, ненадежна. Диагностическую ценность имеет исследование парных сывороток (через 10-12 дней кровь исследуется повторно).

Для установления диагноза необходимо одновременно определять АТ класса IgA и IgG, при неясном результате IgA - дополнительно исследовать АТ IgM.

Новорожденных и их матерей обследуют в 1-3-и сутки после родов, в случае отрицательного результата при наличии клинической картины заболевания - повторно на 5-7-е и 10-14-е сутки. Наличие АТ класса IgM при повторном исследовании, свидетельствует о врожденной инфекции (материнские АТ класса IgM через плаценту не проникают). Отсутствие у новорожденных антихламидийных АТ не означает отсутствия хламидийной инфекции.

Определение титра АТ к Chlamydia trachomatis в крови - вспомогательный тест диагностики хламидиоза, так как из - за низкой иммуногенности у 50% больных хламидиозом АТ не обнаруживают.

Определение АТ классов IgA, IgM и IgG к Chlamydia trachomatis в крови используют для диагностики хламидиозной инфекции при следующих заболеваниях:

· Уретриты, простатиты, цервициты, аднекситы;

· Пневмония, воспалительные заболевания легких;

· Болезнь Райтера, синдром Бехчета, инфекционные артропатии.

Б. Экспресс-диагностика урогенитального хламидиоза:

Chlamydia trachomatis в материале из мочеполовых органов в норме отсутствуют.

Метод основан на выявлении Ar Chlamydia trachomatis в соскобах из уретры, цервикального канала и конъюнктивы методом ИФА с визуальной оценкой результата (чувствительность - более 79%, специфичность - более 95%). Этот метод основан на наличии у хламидий родоспецифического липополисахаридного Ar.он позволяет проводить быстрый скрининг возбудителя, однако окончательный диагноз устанавливают при помощи метода флюоресцирующих АТ или ПЦР. Результаты исследования выражают виде положительного или отрицательного ответа. Чтобы получить удовлетворительные результаты исследования, необходимо соблюдать определенные правила: материал (соскоб) должен быть правильно взят и своевременно доставлен в лабораторию (в течение 2 ч.).

Экспресс - диагностику урогенитального хламидиоза применяют при уретритах, простатитах, цервицитах, аднекситах.

ПЦР (полимеразная цепная реакция)

Один из методов ДНК - диагностики, позволяющий увеличить количество копий детектируемого генома (ДНК) хламидий в миллионы раз с использованием фермента ДНК - полимеразы. Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, т.е. одной хламидии. У взрослых ДНК хламидий из сыворотки крови не выделяется, поэтому нецелесообразно направлять кровь взрослых для проведения ПЦР - анализа на хламидиоз. У них исследуется слюна и соскобы из глаз, уретры, цервикального канала.

Chlamydia trachomatis в материале из уретры в норме отсутствуют.

Диагностика хламидиоза с помощью ПЦР - наиболее чувствительный и специфичный метод из всех, используемых в лабораториях в настоящее время. Чувствительность метода составляет 95 - 97%, а специфичность - 95 -98%. Обнаружение Chlamydia trachomatis в материале из уретры с помощью ПЦР используется в следующих случаях:

· Скрининг в популяции с высоким риском инфицирования;

· Обнаружение Chlamydia trachomatis в моче;

· Разрушение сомнительных результатов других методов исследования;

· Контроль эффективности проводимого лечения.

При урогенитальных инфекциях Chlamydia trachomatis в материале из уретры методом ПЦР обнаруживают в 15 - 40% случаев. Chlamydia trachomatis играют важную роль в развитии хронического простатита. Наибольший интерес в этом плане представляют случаи абактериального хронического простатита. Материалом для исследования могут служить секрет предстательной железы, полученный после ее массажа, эякулят, биоптат.

Для получения правильных результатов ПЦР - анализа весьма важна организация забора образцов, их хранение и транспортировка.

Культуральный метод.

Посев на хламидии является референсным методом, но наиболее трудоемким, длительным в исполнении (7 дней) и дорогим. Его можно использовать для оценки эффективности антибактериальной терапии; как критерий излеченности; при выявлении резистентности к антибиотикам. Одновременно с выделением возбудителя инфекции идет определение его чувствительности к антибиотикам.

Заключение: для эффективной диагностики хламидиоза, определении стадии инфекционного процесса, назначения адекватной терапии и оценки ее эффективности необходимо применять весь комплекс современных лабораторных исследований.

Заболевания, вызываемые Chlamydophila pneumoniae.

Chlamydophila pneumonia вызывает у человека поражение респираторного тракта. В большинстве случаев (у 70% инфицированных) инфекция протекает бессимптомно, в других случаях - по варианту назофарингеальной и пневмонической форм поражений. Бессимптомное носительство может продолжаться до 1 года и более, что в части случаев приводит к появлению рецидивов и обострений хронического астматического бронхита, бронхиальной астмы, хронической обструктивной болезни легких. После исчезновения климатических признаков острого заболевания Chlamydophila pneumonia можно выделить культуральным методом из носоглоточных смывов даже через12 мес.

Диагностика инфекции, обусловленных Chlamydophila pneumonia, вызывает определенные трудности, в первую очередь связанные с отсутствием простых и надежных лабораторных методов обнаружения внутриклеточных паразитов и особенностями иммунного ответа организма больного на патоген.

Любая инфекция, вызванная паразитами рода Chlamydophila, сопровождается быстрым образованием АТ к родоспецифическому для всех паразитов липополисахаридному Аг, их можно выявить методами микроиммунофлюоресценции и ИФА.

АТ класса IgM к Chlamydophila pneumonia, образующиеся при первичном инфицировании и подтверждающие этиологический диагноз заболевания даже при однократном исследовании, можно обнаружить в реакции непрямой иммунофолюресценции или ИФА (чувствительность - 97%, специфичность - 90%). Однако рациональная антибактериальная терапия может препятствовать образованию АТ и приводить к отрицательным результатам анализа. При реинфекции титра АТ класса IgM к Chlamydophila pneumonia увеличивается незначительно, поэтому оценка результатов исследования спорна. АТ классов IgG и IgA при использовании ИФА выявляют позже АТ IgM при первичном инфицировании. Их совместное обнаружение в крови больного указывает на острую и / или манифестную хроническую инфекцию. АТ класса IgA служат маркёрами реинфицирования, так как присутствуют в крови на протяжении короткого периода времени. АТ класса IgG имеют диагностическую ценность только при исследовании парных сывороток. Нарастание титра АТ даёт возможность предполагать наличие острой или манифестной инфекции. Диагностическая чувствительность обнаружения АТ IgA -95%, для АТ IgA - 95% и 93% соответственно.

Для выявления Ar Chlamydophila pneumonia в смывах из ротоглотки или бронхиальном смыве используют метод ИФА, непрямой иммунофлюоресценции и ПЦР. Оптимальный культуральный метод выделения Chlamydophila pneumonia ещё не разработан.

Любое серологическое исследование, проводимое без одновременного использование ПЦР, а также при отсутствии парных сывороток, носит ретроспективный, а не диагностический характер.

трихомониаз хламидиоз диагностирование заболевание

Литература

1) «Руководство по лабораторным методам диагностики», Кишкун А.А., 2007 г.

2) «Лаборатория» - журнал для врачей, №4, 2002 г.

3) «Хламидийная инфекция у новорожденных детей» Е.М. Малкова, 2005 г.

4) «Современные возможности лабораторной диагностики инфекционных заболеваний» Т.И. Долгих, 2005 г.

5) «Мочеполовой трихомониаз» Дмитриев Г.А., Сюч Н.И., Москва, 2005 г.

6) «Урогениальный трихомониаз» Ермоленко Д.К., Исаков В.А., 2007 г.

7) «Лабораторная диагностика хламидийной инфекции», Бочкарев Е.Г., 2000 г.

8) «Хламидиозы», Гранитов В.М., 2000 г.

9) «Лабораторная диагностика хламидийной инфекции», Савичева А.М.2009 г.

10) «Инфекционные заболевания: ПЦР и ИФА - диагностика» Минск, 2007 г.

11) «Руководства по клиническим лабораторным исследованиям», Е.А. Кост, 1964 г.

12) «Атлас осадков мочи», И.И. Миронова, Л.А. Романова, 2002 г.

Размещено на Allbest.ru